全 文 ：·生物技术· 北方园艺２０１２（０６）：１１８～１２１
第一作者简介：董社琴（１９５８－），女，硕士，教授，硕士生导师，研究
方向为植物基因和细胞工程。Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｈｅｑｉｎｄｏｎｇ＠１６３．ｃｏｍ。
责任作者：田志宏（１９６６－），男，博士，教授，硕士生导师，研究方向
为植物基因和细胞工程。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｔｉａｎ＠ｙａｎｇｔｚｅｕ．ｅｄｕ．ｃｎ。
基金项目：湖北省教育厅重大资助项目（９９Ｚ００７）。
收稿日期：２０１１－１１－１６
紫龙角愈伤组织诱导与植株再生的研究
董 社 琴，杨 亚 珍，杨 德 良，叶 开 温，田 志 宏
（长江大学 生命科学学院，湖北 荆州４３４０２５）
　　摘　要：以紫龙角的不同器官为试材，研究不同植物生长调节剂浓度及组合、培养基、光照、
外植体等因素对其愈伤组织诱导和植株再生的影响。结果表明：愈伤组织诱导的最佳外植体是
不带腋芽茎块，在麦基１号＋ＣＨ＋６－ＢＡ　１．０～１．８ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ　０．５～２．０ｍｇ／Ｌ的培养基上，暗
培养６ｄ时诱导率高达９０％以上；质地紧密，有一定疏松度，是建立细胞无性系的优良材料。带腋
芽茎块是直接诱导丛生芽的理想外植体，Ｈ＋ＴＤＺ　４ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．４ｍｇ／Ｌ培养基适合丛生芽
生长、增殖诱导率达到９１％。复壮增殖不定芽的培养基为改良的 Ｈ＋ＴＤＺ　４ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．４
ｍｇ／Ｌ；１／２ＭＳ＋ＮＡＡ　２．５ｍｇ／Ｌ是最佳生根培养基，每个不定芽平均有效根数最高为６．１７个。
关键词：紫龙角；愈伤组织；植株再生；外植体
中图分类号：Ｓ　６８２．１＋９　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１２）０６－０１１８－０４
　　紫龙角（Ｃａｒａｌｕｍａ　ｈｅｓｐｅｒｉｄｕｍ）是萝摩科水牛掌属
中的一种多年生草本肉质植物，开着五星状黑紫色小
花，有极高观赏价值。由于生理特殊，也是珍贵的药用
植物，具有极大的商业开发价值。紫龙角用常规繁殖方
法繁殖效率低，而且国内外还未曾有紫龙角组织培养的
研究报道。该试验研究涉及到外植体的选择、愈伤组织
的诱导、继代增殖、直接诱导丛生芽、丛生芽的继代增
殖、再生根的诱导等诸多方面，目的是建立高效稳定的
再生体系，为紫龙角快速繁殖及育种提供一条快捷有效
的途径［１］，为新甾类药物的开发与生产提供离体培养技
术平台［２］，为以后通过基因工程改良紫龙角的药用成分
奠定基础。
１　材料与方法
１．１　试验材料
试材取自长江大学特种植物园。取带有紫褐色斑
纹和不带紫褐色斑纹的植株上带腋芽茎块、不带腋芽茎
块、刺突共６种外植体。
１．２　试验方法
１．２．１　培养基筛选　选用 ＭＳ、Ｈ、Ｗｈｉｔｅ为基本培养
基［３］，细胞分裂素为ＴＤＺ　２．０ｍｇ／Ｌ，生长素ＮＡＡ　０．４
ｍｇ／Ｌ，培养条件为：ｐＨ为６，温度（２３±２）℃，光周期为
１４ｈ，光照强度为２　０００ｌｘ，光质为日光灯。３次重复，确
定带腋芽茎块植株再生的最佳培养基。
１．２．２　供试材料及细胞分裂素的筛选　将带有紫褐色
斑纹和不带紫褐色斑纹的植株，以腋芽为中心，横切茎
干，切下约０．５ｃｍ厚的茎段即为带腋芽茎块外植体，接
种于Ｈ培养基上，细胞分裂素为６－ＢＡ、ＴＤＺ、２ｉＰ，生长素
ＮＡＡ［４］各设４个水平，弱散射光培养５ｄ后，转入光下正
常培养，３０ｄ后统计不定芽数。
１．２．３　不定芽的增殖复壮及再生根培养　再生的不定
芽转至改良的 Ｈ（降低 Ｈ培养基中ＮＨ４ＮＯ３ 浓度，用
Ｃａ（ＮＯ３）２·４Ｈ２Ｏ代替ＣａＣｌ２·４Ｈ２Ｏ，硝态氮的总量基
本不变，铵态氮的总量降低）培养基上，添加 ＴＤＺ
４ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．４ｍｇ／Ｌ和６－ＢＡ　６ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．４
ｍｇ／Ｌ，３０ｄ后统计增殖不定芽数，再生的不定芽经增殖
复壮后切割分离再转接到１／２ＭＳ＋不同浓度的ＮＡＡ培
养基上［５］，３０ｄ后统计生根率和有效根数量。
１．２．４　暗培养和培养基对其愈伤组织生长的影响　将
不带腋芽茎段的外植体接种于 ＭＳ、Ｈ、麦基１号＋ＣＨ
培养基上，（２５±２）℃暗培养２、４、６、８、１０、１２ｄ后，转入正
常光下培养，３０ｄ后统计出愈率。
１．２．５　不同外植体对其愈伤组织培养的影响　取已处
理的植株茎干，去其两端，沿茎干表面纵横垂直切下刺
突，即为刺突外植体，再横切茎干，切下约０．５ｃｍ厚的不
带腋芽茎段的外植体，接种于不同生长调节剂组合的麦
基１号＋ＣＨ培养基上。先暗培养６ｄ再转入光下培
养，３０ｄ后统计出愈率。
１．２．６　生长调节剂组合水平对其愈伤组织生长影响　
８１１
北方园艺２０１２（０６）：１１８～１２１ ·生物技术·
将不带腋芽茎段的外植体接种于不同浓度组合的愈伤
组织培养基中，３０ｄ后统计出愈率。
１．３　数据处理
按照试验设计，随时记录不定芽的生长状态以及愈
伤组织的形态，质地，再生不定芽率（％）＝（再生不定芽
外植体数／接种外植体数）×１００。出愈率（％）＝（出愈外
植体数／接种外植体数）×１００。数据处理采用ＳＡＳ　８．１
统计分析软件进行。
２　结果与分析
２．１　带腋芽茎块植株再生
２．１．１　不同培养基的影响　将２种腋芽茎块分别接种
至ＭＳ、Ｈ、Ｗｈｉｔｅ培养基上，培养条件同上，３０ｄ后统计
不定芽数，计算再生率。由表１、２可知，不论所加的细胞
分裂素是ＴＤＺ还是６－ＢＡ，在３种培养基中，Ｈ培养基上
再生不定芽率均为最高，Ｗｈｉｔｅ培养基上最低，说明 Ｈ
为紫龙角腋芽茎块再生植株的较适宜培养基。
表１　腋芽块茎培养中不同培养基对再生芽的影响
　　Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｍｅｄｉｕｍ　ｉｎ　ｓｔｅｍ　ｔｕｂｅｒ　ｏｆ　ａｘｉｌａｒｙ
　　ｂｕｄ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
培养基
Ｍｅｄｉｕｍ
ＴＤＺ
／ｍｇ·Ｌ－１
ＮＡＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
紫褐色斑纹的腋芽茎块
Ｐｕｒｐｌｅ　ｂｒｏｗｎ　ｓｔｒｉｐ　ｂａｓｅ
ｏｆ　ａｘｉｌａｒｙ　ｂｕｄ
不带紫褐色斑纹的
腋芽茎块
Ｓｔｒｉｐ　ｂａｓｅ　ｏｆ　ａｘｉｌａｒｙ　ｂｕｄ
ＭＳ　 ２　 ０．４　 ２６．１３±３．８８ｂ ２１．１１±５．２２ｂ
Ｈ　 ２　 ０．４　 ５３．００±３．１２ａ ５１．１２±２．７１ａ
Ｗｈｉｔｅ　 ２　 ０．４　 ７．５６±３．１４ｃ ９．４６±４．１１ｃ
　　注：同一列中不同字母表示邓肯氏转复极差测验在Ｐ＜０．０５水平下差异显著。
下同。
Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｍｅａｎ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ａｔ　Ｐ＜０．０５ｌｅｖｅｌ　ｂｙ
Ｄｕｎｃａｎ’ｓ　ＳＳＲｔｅｓｔ．Ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｂｅｌｏｗ．
表２　腋芽茎块培养中不同培养基对再生率的影响
　　Ｔａｂｌｅ　２　Ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｍｅｄｉｕｍ　ｉｎ　ｓｔｅｍ　ｔｕｂｅｒ　ｏｆ　ａｒｉｌａｒｙ
　　　ｂｕｄ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
培养基
Ｍｅｄｉｕｍ
６－ＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
ＮＡＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
紫褐色斑纹的腋芽茎块
Ｐｕｒｐｌｅ　ｂｒｏｗｎ　ｓｔｒｉｐ　ｂａｓｅ
ｏｆ　ａｘｉｌａｒｙ　ｂｕｄ
不带紫褐色斑纹的
腋芽茎块
Ｓｔｒｉｐ　ｂａｓｅ　ｏｆ　ａｘｉｌａｒｙ　ｂｕｄ
ＭＳ　 ４　 ０．４　 ２０．１０±１．５６ｂ ２１．３３±１．２２ｂ
Ｈ　 ４　 ０．４　 ５０．１１±４．２３ａ ４９．９６±３．８８ａ
Ｗｈｉｔｅ　 ４　 ０．４　 ６．４９±２．９８ｃ ６．１１±１．９６ｃ
２．１．２　不同外植体及细胞分裂素的影响　由表３可知，
带有紫褐色斑纹和不带有紫褐色斑纹植株带腋芽茎块
的外植体，再生不定芽能力差异不大，只是带有紫褐色
斑纹的腋芽茎块启动时间晚１～３ｄ，３０ｄ后，统计不定
芽的形态和数量，几乎没有差异，再生率均为８９％。细
胞分裂素ＴＤＺ对腋芽再生作用明显高于６－ＢＡ、２ｉＰ，
ＴＤＺ为４ｍｇ／Ｌ时，２种腋芽的再生率都达到９０％以上，
再生不定芽最高可达６个（图１－１），但是随着用量的加
大，再生不定芽的质量和数量越来越差；６－ＢＡ次之，随着
用量的加大，再生不定芽数量逐渐增多，在６ｍｇ／Ｌ时，
再生率可达到８５％以上，再生不定芽最高也达６个（图
１－２）；２ｉＰ效果最差。
表３ 带腋芽茎块培养中细胞分裂素
对再生率的影响
　　Ｔａｂｌｅ　３　Ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｙｔｏｋｉｎｉｎｓ　ｉｎ　ｓｔｅｍ　ｔｕｂｅｒ　ｏｆ
ａｘｉｌａｒｙ　ｂｕｄ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｎ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
细胞分裂素 紫褐色斑纹的腋芽茎块 不带紫褐色斑纹的腋芽茎块
Ｃｙｔｏｋｎｉｎ／ｍｇ·Ｌ－１　Ｐｕｒｐｌｅ　ｂｒｏｗｎ　ｓｔｒｉｐ　ｂａｓｅ　ｏｆ　ａｘｉｌａｒｙ　ｂｕｄ　Ｓｔｒｉｐ　ｂａｓｅ　ｏｆ　ａｘｉｌａｒｙ　ｂｕｄ
６－ＢＡ　 ２　 ７．８９±２．１１ｅ ８．９０±１．５６ｅ
４　 ４９．６８±５．１０ｃ ５０．１９±４．１１ｃ
６　 ８５．７７±３．９２ａ ８８．７６±５．３２ａ
８　 ６８．３０±１．０１ｂ ６７．１４±４．２２ｂ
ＴＤＺ　 ２　 ７０．００±１．１２ｂ ７０．１７±４．３３ｂ
４　 ９０．７５±３．１０ａ ９１．００±１．２８ａ
６　 ６６．３３±２．１７ｂ ６８．１２±１．４０ｂ
８　 ４１．００±２．９４ｃ ４０．０１±３．１７ｃ
２ｉＰ　 ２　 ０　 ０
４　 ０　 ０
６　 ４．３６±２．１１ｆ ３．１１±１．０６ｆ
８　 ２２．３６±１．９５ｄ ２０．１９±３．１１ｄ
２．１．３　不定芽增殖复壮与生根培养　再生的不定芽转
至增殖培养基 Ｈ、改良的 Ｈ 后，再分别添加 ＴＤＺ
４ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．４ｍｇ／Ｌ和６－ＢＡ　６ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．４
ｍｇ／Ｌ。由表４可知，改良 Ｈ培养基中不论是加ＴＤＺ
４ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．４ｍｇ／Ｌ还是６－ＢＡ　６ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ
０．４ｍｇ／Ｌ，茎相对粗些，这说明氮源的不同对不定芽复
状有影响，铵态氮的相对浓度低有利于不定芽的茎增
粗，这与紫龙角所处的生长环境和条件以及与其内生激
素水平变动有关［６］。不定芽在改良的Ｈ＋ＴＤＺ　４ｍｇ／Ｌ
＋ＮＡＡ　０．４ｍｇ／Ｌ培养基上增殖效果最好，平均每个不
定芽可增殖３～６个，且色鲜绿，部分高达２～４．５ｃｍ左
右（图１－３），改良的 Ｈ添加６－ＢＡ　６ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．４
ｍｇ／Ｌ效果次之。从试验过程来看，可用６－ＢＡ代替
ＴＤＺ。将增殖复壮得到的不定芽接种至生根培养基上
（表５）生根率可达９０％以上。ＮＡＡ浓度为２．５ｍｇ／Ｌ
时，每个不定芽平均有效根数最高为６．１７个（图１－４、５），
与ＮＡＡ　０．５和１．５ｍｇ／Ｌ处理差异极显著。ＮＡＡ浓度
表４ 不同氮源对不定芽复壮的影响
　　Ｔａｂｌｅ　４ Ｔｈｅ　ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｎｉｔｒｏｇｅｎ　ｓｏｕｒｃｅ　ｏｎ
ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄ　ｓｔｒｏｎｇ
培养基
Ｍｅｄｉｕｍ
ＴＤＺ　４ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．４ｍｇ／Ｌ　 ６－ＢＡ　６ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．４ｍｇ／Ｌ
平均不定芽数
Ｍｅａｎｓ　ｏｆ　ｎｕｍｂｅｒ
ｏｆａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ
ｂｕｄ／个
平均茎粗
Ｍｅａｎｓ　ｏｆ
ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ　ｏｆ
ｓｔｅｍ／ｃｍ
平均不定芽数
Ｍｅａｎｓ　ｏｆ　ｎｕｍｂｅｒ
ｏｆ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ
ｂｕｄ／个
平均茎粗
Ｍｅａｎｓ　ｏｆ
ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ　ｏｆ
ｓｔｅｍ／ｃｍ
Ｈ　 ２．５　 ０．２８　 １．９　 ０．２５
改良Ｈ　 ５．３　 ０．４５　 ５．０　 ０．４６
　　注：各处理取３０个样本，取其平均数。
Ｎｏｔｅ：Ａｌ　ａｂｏｖｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ　ａｒｅ　ｍｅａｎｓ　ｏｆ　３０ｓｐｅｃｉｍｅｎ．
９１１
·生物技术· 北方园艺２０１２（０６）：１１８～１２１
为３．０ｍｇ／Ｌ时，每个不定芽平均有效根数也达到６．０９
个，但是根特别脆。
表５　不同浓度ＮＡＡ对不定芽生根的影响
　　Ｔａｂｌｅ　５　Ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ＮＡＡ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｏｆ　ｓｈｏｏｔｓ
培养基
Ｍｅｄｉｕｍ
ＮＡＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
平均生根数
Ｍｅａｎｓ　ｏｆ　ｒｏｏｔ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｓｈｏｏｔ
生根率
Ｒａｔｅ　ｏｆ　ｒｏｏｔｉｎｇ／％
１／２ＭＳ　 ０．５　 ３．４２±０．５０Ｃ ９１．５
１／２ＭＳ　 １．０　 ５．８８±０．４９ＣＢＡ　 ９１．９
１／２ＭＳ　 １．５　 ４．１７±０．２１Ｃ ９５．４
１／２ＭＳ　 ２．０　 ５．６７±０．３９ＣＢＡ　 ９２．５
１／２ＭＳ　 ２．５　 ６．１７±０．３４Ａ １００
１／２ＭＳ　 ３．０　 ６．０９±０．３１ＡＢ　 １００
　　注：表中平均值后不同字母表示邓肯氏转复极差测验差异极显著（Ｐ＜０．０１）。
Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｍｅａｎ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ａｔ　Ｐ＜０．０１ｌｅｖｅｌ　ｂｙ
Ｄｕｎｃａｎ’ｓ　ＳＳＲ　ｔｅｓｔ．．
２．２　愈伤组织形成的条件
２．２．１　不同培养基的影响　将不带腋芽茎块分别接种
至ＭＳ、Ｈ、麦基１号＋ＣＨ培养基上，培养条件为：温度
（２５±２）℃，光周期为１４ｈ，光强为２　０００ｌｘ，光质为日光
灯。３０ｄ后统计发生愈伤组织的外植体数，计算出愈
率。由表６可知，在３种培养基中，麦基１号＋ＣＨ培养
基上出愈率最高，Ｈ培养基上最低，说明麦基１号＋ＣＨ
为培养愈伤组织比较适合的培养基。
表６ 不带腋芽茎块培养中不同培养基
对出愈率的影响
　　Ｔａｂｌｅ　６ Ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｍｅｄｉｕｍ　ｉｎ　ｓｔｅｍ　ｔｕｂｅｒ　ｏｆ
ｎｏｎ－ａｘｉｌａｒｙ　ｂｕｄ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｎ　ｃａｌｉ　ｒａｔｅ
培养基
Ｍｅｄｉｕｍ
６－ＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
２．４－Ｄ
／ｍｇ·Ｌ－１
不带腋芽茎块
ｓｔｅｍ　ｔｕｂｅｒ　ｏｆ　ｎｏｎ－ａｘｉｌａｒｙ　ｂｕｄ
ＭＳ　 ４　 ２　 ２８．１５±３．１１ｂ
麦基１号＋ＣＨ　 ４　 ２　 ６５．００±５．１１ａ
Ｈ　 ４　 ２　 ２５．３３±４．１０ｂ
２．２．２　紫龙角的不同部位形成愈伤组织能力的差异　
在麦基１号＋ＣＨ的培养基中，４种外植体的诱导率都
较高，在９０％～１００％，１００％的诱导率居多，愈伤组织发
生时间在４～７ｄ，６ｄ居多，生长都较快，刺突外植体的
愈伤组织发生时间最早（４ｄ），诱导率达１００％，但愈伤组
织为黄褐色，结构致密，出愈１０～１２ｄ时开始老化、衰败
（图１－６），这部分愈伤组织可早期收获，用来做有效成分
分析［７－８］。紫褐色斑纹和不带紫褐色斑纹植株茎块，诱
导愈伤组织的生长状况基本一致。愈伤组织刚开始为
淡黄色，之后渐渐转至淡绿加点黄色，结构较紧密，增殖
很快，没有老化现象（图１－７、８），这部分愈伤组织继代培
养后，可用来选择建立优良的细胞无性系。
２．２．３　不同暗培养时间的影响　将不带腋芽茎块接种
于麦基１号＋ＣＨ培养基上，暗培养２ｄ时，茎块基部仅
仅变黄，稍膨大，暗培养到４ｄ时划伤处出现明显膨大，
先出愈，至６ｄ时外植体出愈越来越多，而且黄白带点
绿，增殖很快，７、８ｄ时基本维持原状，到１０ｄ和１２ｄ时
又有新愈出现，但长势不好，说明暗培养时间过长也不
利于愈伤组织生长，因此暗培养时间初步确定为６ｄ。
图１　愈伤组织诱导与植株再生
注：１．ＴＤＺ　４ｍｇ／Ｌ诱导丛生芽。２．６－ＢＡ　６ｍｇ／Ｌ诱导丛生芽。３．改良
的Ｈ＋ＴＤＺ　４ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．４ｍｇ／Ｌ不定芽增殖。４、５．１／２ＭＳ＋
２．５ｍｇ／Ｌ培养基上的生根。６．刺突外植体的愈伤组织生长情况。７．
紫褐色斑纹植株茎块的愈伤组织生长情况。８．不带紫褐色斑纹植株茎
块的愈伤组织生长情况。９、１０、１１．浓度组合为６－ＢＡ　１．０～１．８ｍｇ／Ｌ＋
２，４－Ｄ　０．５～２．０ｍｇ／Ｌ愈伤组织生长情况。１２．气生根生长情况。
Ｆｉｇ．１　Ｉｎｄｕｃｅｄ　ｃａｌｉ　ａｎｄ　ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
Ｎｏｔｅ：１．ＴＤＺ　４ｍｇ／Ｌ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｕｎｄｌｅ　ｇｅｍｍｕｌａｔｉｏｎ．２．６－ＢＡ　６ｍｇ／Ｌ
ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｕｎｄｌｅ　ｇｅｍｍｕｌａｔｉｏｎ．３．Ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ
ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　Ｈ＋ＴＤＺ　４ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．４ｍｇ／Ｌ．４，５．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ
ｒｏｏｔａｇｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　１／２ＭＳ＋２．５ｍｇ／Ｌ．６．Ｃａｌｕｓ　ｇｒｏｗｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｓｐｉｋｅ　ｅｘｐｌａｎｔ．７．Ｃａｌｕｓ　ｇｒｏｗｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｕｒｐｌｅ　ｂｒｏｗｎ　ｓｔｒｉｐｅ　ｂａｓｅ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｐｌａｎｔ．８．Ｃａｌｕｓ　ｇｒｏｗｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｔｒｉｐｅ　ｂａｓｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｌａｎｔ．９，１０，１１．Ｃａｌｕｓ
ｇｒｏｗｉｎｇ　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｎｇｅ　６－ＢＡ　１．０～１．８ｍｇ／Ｌ
＋２，４－Ｄ　０．５～２．０ｍｇ／Ｌ．１２．Ｇｒｏｗｉｎｇ　ｏｆ　ａｅｒｉａｌ　ｒｏｏｔ．
２．２．４　生长调节剂组合对愈伤组织生长的影响　６－ＢＡ
浓度设定为０、０．５、１．５、２．０、３．０、４．０、４．５ｍｇ／Ｌ，２，４－Ｄ浓
度设定为０、０．１、０．５、１．０、１．５、２．０、３．０ｍｇ／Ｌ，共８个处
理，３次重复，之后对理想的生长调节剂组合进一步验
证，从试验结果来看，除２，４－Ｄ浓度为０的组合没有产生
愈伤组织以外，其它组合都诱导出了愈伤组织，诱导率
在８０％～１００％，以１００％的诱导率居多。６－ＢＡ浓度为０
时，２，４－Ｄ浓度只要不为０都可以诱导出愈伤组织，只是
６－ＢＡ浓度为０的组合产生愈伤组织时间比较晚（１８～
２０ｄ），其它组合都在５～８ｄ后产生了愈伤组织。说明
生长素对愈伤组织的诱导是主因子。６－ＢＡ有协同效用，
在６－ＢＡ浓度不变的情况下，随着２，４－Ｄ的浓度增大愈
０２１
北方园艺２０１２（０６）：１１８～１２１ ·生物技术·
伤组织的生长速度增快，颜色由黄褐色→黄色→黄绿色
转变，愈伤组织结构由蓬松向紧密转变，但当２，４－Ｄ浓度
大于２．０ｍｇ／Ｌ后结构反向转变。由紧密转向蓬松，说
明２，４－Ｄ浓度过高及较低都不能使愈伤组织结构和质
地达到理想的状态，在２，４－Ｄ浓度不变的情况下，随着
６－ＢＡ浓度的增大，愈伤组织的结构先变紧密，然后再由
紧密转向蓬松，也说明６－ＢＡ浓度过高及较低时不能使
愈伤组织的结构和质地达到理想的状态，植物激素有抑
制和促进的“二重性”，二者比值适中时，才能促进愈伤
组织生长［９］，综合考虑理想的浓度组合范围应为６－ＢＡ
１．０～１．８ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ　０．５～２．０ｍｇ／Ｌ（图１－９、１０、１１）。
在整个诱导过程中，出愈时间无明显规律。
３　结论与讨论
该研究表明，愈伤组织诱导的最佳外植体是不带腋
芽茎块，在麦基１号＋ＣＨ＋６－ＢＡ　１．０～１．８ｍｇ／Ｌ＋
２，４－Ｄ　０．５～２．０ｍｇ／Ｌ的培养基上，暗培养６ｄ时诱导率
高达９０％以上。而且质地紧密，有一定疏松度，是建立
细胞无性系的优良材料；带腋芽茎块是直接诱导丛生芽
的理想外植体，Ｈ＋ＴＤＺ　４ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．４ｍｇ／Ｌ培养
基适合丛生芽生长，增殖诱导率达到９１％；复壮增殖不
定芽的培养基为改良的 Ｈ＋ＴＤＺ　４ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ
０．４ｍｇ／Ｌ；１／２ＭＳ＋ＮＡＡ　２．５ｍｇ／Ｌ是最佳生根培养
基，每个不定芽平均有效根数最高为６．１７个。
在直接诱导丛生芽的过程中，先是从基部膨大长出
愈伤组织，然后才有丛生芽的产生。最多生产３～６个
不定芽，这里产生的愈伤组织呈绿色，结构致密，生长较
快，但一直未见分化出芽，这种现象可能是由于产生的
再生芽抑制了下面的愈伤组织分化。丛生芽复壮试验
时，有一部分培养瓶内，在再生芽的中下部极易从空中
直接长出根，根细长，生长较快，如气生根一般（图１－１２）。
这种现象说明湿度、温度、光照强度、光照时间均对再生
根的发生产生较大的影响，这部分培养瓶内由于湿度较
大，温差也大，光照强度又比较弱，光照时间短，容易长
出这种根，镜检时绝大多数没有形成维管束，既使有维
管束也不发达，这种不是由腋芽处发生的，又在无菌条
件下空中生长的，是很好的无菌材料，可用来做其它方
面的诱导和转化研究。生长调节剂组合是影响愈伤组
织诱导、增殖的主因子，所有组合的愈伤组织长势良好，
但生长速度差别较明显，２，４－Ｄ对促进愈伤组织的增殖
效用明显，对其质地和颜色改变也有效；６－ＢＡ对愈伤组
织的质地效用显著，对其生长效用不明显，对愈伤组织
颜色和结构基本不起作用。
参考文献
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ｆａｃｔｏｒｓ　ａｆｅｃｔｉｎｇ　ｔｈｅｉｒ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃａｌｉ，ｓｕｃｈ　ａｓ　ｄｅｎｓｉｔｙ　ａｎｄ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒ，ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ，
ｄａｙｓ　ｏｆ　ｄａｒｋ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｅｘｐｌａｎｔ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｅｘｐｌａｎｔ　ｔｏ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｃａｌｉ　ｗａｓ　ｎｏｎ－ａｘｉｌａｒｙ　ｂｕｄ　ｏｆ　ａｓｔｅｍ
ｔｕｂｅｒ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃａｌｉ　ｒａｔｏ　ｗａｓ　９０％ ｗｈｅｎ　ｔｈｅｙ　ｗｅｒｅ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｎｏ．１．Ｍａｉｊｉｎ＋ＣＨ＋６－ＢＡ　１．０～１．８ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ
０．５～２．０ｍｇ／Ｌ　ａｎｄ　６ｄｏｆ　ｄａｙｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄａｒｋ，ｂｅｓｉｄｅｓ，ｃｏｍｐａｃｔ　ｑｕａｌｉｔｙ　ａｎｄ　ａ　ｃｅｒｔａｉｎ　ｅｘｔｅｎｔ　ｌｏｏｅｓ，ｗｅｒｅ　ｂｕｉｌｔ　ｕｐ　ｂｅｓｔ
ｍａｔｅｒｉａｌ　ｏｆ　ｃｅｌ　ａｓｅｘｕａｌ　ｌｉｎｅ．Ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｅｘｐｌａｎｔ　ｔｏ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｃｌｕｍｐｅｄ　ｂｕｄ　ｗａｓ　ａｘｉｌａｒｙ　ｂｕｄ　ｏｆ　ａ　ｓｔｅｍ　ｔｕｂｅｒ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｂｕｄ　ｒａｔｏ
ｗａｓ　９１％ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ａｘｉｌａｒｙ　ｂｕｄ　ｏｆ　ａｓｔｅｍ　ｔｕｂｅｒ　ｗｅｒｅ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｈ＋ＴＤＺ　４ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．４ｍｇ／Ｌ．Ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｃｕｌｔｕｒｅ
ｍｅｄｉｕｍ　ｏｆ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄ　ｓｔｒｏｎｇ　ｗａｓ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　Ｈ＋ＴＤＺ　４ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．４ｍｇ／Ｌ．Ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｒｏｏｔｉｎｇ
ｗａｓ　１／２ＭＳ＋ＮＡＡ　０．５ｍｇ／Ｌ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｃａｒａｌｕｍａ　ｈｅｓｐｅｒｉｄｕｍ；ｃａｌｉ；ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ；ｅｘｐｌａｎｔ
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