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第 32卷第 3期 湖南农业大学学报(自然科学版) Vol.32 No.3
2006年 6月 Journal of Hunan Agricultural University (Natural Sciences) Jun．2006
文章编号：1007-1032(2006)03-0313-03
巴拉圭茶多酚的提取纯化及其对
唾液淀粉酶活性的影响
熊建华 1，2，刘仲华 1*
(1.湖南农业大学 天然产物研究中心，湖南 长沙 410128；2.江西农业大学 食品科学系，江西 南昌 330045)
摘 要：以多酚质量分数为评判指标，对巴拉圭茶多酚的乙醇回流提取工艺、粗多酚的纯化工艺进行了研究，
并采用碘－淀粉比色法比较不同质量浓度多酚对唾液淀粉酶活性的影响．结果显示，乙醇的体积分数为 70%，回
流时间 60 min，回流温度 80 ℃，料液比 1∶30为巴拉圭茶多酚的最佳提取工艺条件；乙酸乙酯是多酚最好的纯
化试剂，纯化后多酚的质量分数为 80.04%；纯化后的多酚对唾液淀粉酶的活性有抑制作用．
关 键 词：巴拉圭茶多酚；提取；纯化；唾液淀粉酶活性
中图分类号：S571.101 文献标识码：A

Extraction and Purification of Polyphenols from Ilex paraguarensis and
Its Effects on Activity of Ptyalin
XIONG Jian-hua1，2，LIU Zhong-hua1*
(1.Natural Products Research Center，HNAU，Changsha 410128，China；2.Department of Food Science，Jiangxi
Agricultural University，Nanchang 330045，China)
Abstract：To detemine the optimum extraction and purification process of polyphenols from Ilex paraguarensis，then
to estimate the pure polyphenols effects on activity of ptyalin，the refluence extraction and purification process of
polyphenols from Ilex paraguarensis were investigated with the content of polyphenols as index；effects of the
different content pure polyphenols on activity of ptyalin were compared using idodine-starch spectrophotometrical
method．The results showed that the optimum extraction conditions were 30 fold of 70% ethanol，dip in 80 ℃ water，
refluxing 60 min；EtoAc was the best reagent for purification，the content of polyphenols was 80.04% after
purification；The pure polyphenols could restrain activity of ptyalin．
Key words：polyphenols from Ilex paraguarensis；extraction；purification；activity of ptyalin

巴拉圭茶(Ilex paraguarensis)属冬青科冬青属，
原产于南美，是热带或亚热带多年生常绿灌木．野
生巴拉圭茶广泛分布在阿根廷、智利、秘鲁和巴
西．现在许多热带国家都种植巴拉圭茶树，每年在
巴拉圭茶树叶片生长最茂盛的 5 月至 10 月采收茶
叶[1]，采收后鲜叶在火上加热，灭活鲜叶中的酶，
再经干燥，加工成碎茶．饮用巴拉圭茶时，取一定
量碎茶叶放入杯中，兑入 70 ℃的热水，然后用一
支底端带有滤网的吸管吸取．作为一种传统饮品，
巴拉圭茶在一些拉丁美洲国家如巴西南部、阿根
廷、乌拉圭、巴拉圭广为流行．
巴拉圭茶具有较好的清除自由基[2，3]、治疗炎
症[4]、消化不良[5]、肥胖[6]、癌症[7]等药理作用，在
许多国家与地区都受到关注．中华人民共和国卫生
部公告(2004年第 6号)也已将巴拉圭茶净油或提取
物列入食品用香料名单．多酚是巴拉圭茶的主要药
用成分，Chandra 等[8]通过 HPLC 法测定显示巴拉
圭茶的多酚成分主要是绿原酸类物质，包括绿原
酸，咖啡酸，异绿原酸 A，异绿原酸 B，异绿原酸
C，以及少量的槲皮素、芦丁、三奈酚等类黄酮类
物质．笔者研究了巴拉圭茶多酚的制取方法及其对
收稿日期：2006-02-28
基金项目：国家科技部科技型中小企业技术创新基金
((2001) 010418)
作者简介：熊建华(1969-)，女，江西南昌人，博士研究
生，江西农业大学副教授．*通讯作者．
DOI:10.13331/j.cnki.jhau.2006.03.022


314 湖南农业大学学报(自然科学版) 2006年 6月
巴拉圭茶 石油醚浸提 过滤 滤渣 氯仿浸提
过滤 滤渣 一定浓度的乙醇调节料液比在不同的
温度下回流提取 过滤 滤液 浓缩 浓缩液纯化纯化液
浓缩 巴拉圭茶多酚． 冷冻干燥
唾液淀粉酶活性的影响，以期为深入了解和利用巴
拉圭茶提供依据．
1 材料与方法
1.1 材 料
巴拉圭茶(购自阿根廷)，绿原酸标准品(中国药
品生物制品检定所提供)，所有化学试剂除提取用乙
醇外均为分析纯．
主要仪器包括UV-754型分光光度计，KQ-3200
型超声波清洗器，98-I-B 型电子调温电热套，
Büchi-R200型旋转蒸发仪，Heto CBN18-30型冷却
水器，CHRIST冷冻干燥机，SHZ-95型循环水式多
用真空泵．
1.2 方 法
1.2.1 巴拉圭茶多酚的制备流程







1.2.2 多酚的醇提工艺
巴拉圭茶多酚的乙醇回流提取最优工艺采用
正交试验确定，以对巴拉圭茶多酚提取率最有影响
的 4 因素：乙醇体积分数(A)，回流时间(B)，回流
温度(C)，料液比(D)作为考察对象，进行正交试验
设计，选用 L9(34)正交表，每个因素 3个水平，共 9
次试验．见表 1．
表 1 因素水平表
Table 1 The factors and levels for the orthogonal test
因 素
水平 乙醇体积分数
/%
回流时间
/min
回流温度
/℃ 料液比
1 60 60 70 10
2 70 90 80 20
3 80 120 90 30
1.2.3 多酚的纯化工艺
将提取液浓缩至一定体积，得到浓缩液即为巴
拉圭茶多酚的粗提液，比较极性不同的试剂乙酸乙
酯、正丁醇、异戊醇[9]对巴拉圭茶多酚粗提液的纯
化效果．
1.2.4 巴拉圭茶多酚的测定
巴拉圭茶多酚测定采用Folin-Ciocalteu比色法，
因巴拉圭茶多酚主要为绿原酸类物质，故选用绿原
酸作为多酚测定的对照品．将绿原酸用甲醇配成质
量浓度为0，0.2，0.4，0.8，1.5，3.0 mg/mL的标准
溶液，分别取标准溶液1 mL于 100 mL容量瓶中，
加入50 mL蒸馏水，再加5 mL Folin-C试剂，摇匀后
加入15 mL Na2CO3，于30 ℃反应2 h，在波长760 nm
处测定吸光值，得出绿原酸质量浓度与吸光度之间
的回归方程：y=1.004 302x+0.010 25，r =0.999 8．
精密称取各提取物干燥粉末20～100 mg，用甲
醇溶解并定容于50 mL容量瓶，取1 mL于100 mL容
量瓶中，如前进行显色反应，测定吸光度并用回归
方程计算多酚的质量分数．
1.2.5 巴拉圭茶多酚对唾液淀粉酶活性的测定
根据文献[10]方法，精确称取纯化以后的巴拉
圭茶多酚，配成质量浓度为 0.1，0.5，1.0，1.5，2.0
mg/mL的溶液，在 10 mL的测定管中依次加入 0.01
mL/L唾液 40 µL，巴拉圭茶多酚 20 µL(另设不加唾
液和多酚的对照管与不加多酚的空白管)，37 ℃的
0.4 g/L缓冲淀粉溶液 1 mL，充分混匀，然后将试
管置 37 ℃水浴保持 7.5 min，取出，加入 0.01 mol/L
碘应用液 1 mL，蒸馏水 5 mL，然后于 660 nm处测
定吸光值 A．
淀粉酶活力单位：100 mL唾液在 37 ℃ 15 min
水解 5 mg淀粉为 1个单位．
2 结果与分析
2.1 醇提试验结果
巴拉圭茶多酚醇提结果见表 2．从表 2 极差分
析可以看出，影响多酚含量的因素主次顺序分别为
乙醇体积分数、回流温度、料液比、回流时间，最
佳浸提条件为 A2B1C2D3，即乙醇的体积分数为
70%，回流时间 60 min，回流温度 80 ℃，料液比
1∶30．乙醇体积分数为 70%时，提取的多酚质量
分数高于乙醇体积分数，为 60%和 80%，可能是乙
醇体积分数低时，多酚不能充分溶出，体积分数高
时会将杂质带出，纯度反而下降．


第 32卷第 3期 熊建华等 巴拉圭茶多酚的提取纯化及其对唾液淀粉酶活性的影响 315
表 2 巴拉圭茶多酚回流提取正交试验结果
Table 2 Result of orthogonal experiment on the refluence extraction
of polyphenols from Ilex paraguarensis
试验号 A B C D 多酚质量分数/%
1 1 1 1 1 31.74
2 1 2 2 2 33.09
3 1 3 3 3 33.79
4 2 1 2 3 37.35
5 2 2 3 1 36.13
6 2 3 1 2 36.71
7 3 1 3 2 31.36
8 3 2 1 3 31.05
9 3 3 2 1 30.22
K1 32.87 33.48 31.17 32.16
K2 36.73 33.42 33.55 32.61
K3 30.88 33.57 33.76 33.86
R 5.85 0.15 2.59 1.70

2.2 有机溶剂对巴拉圭茶多酚纯化效果的影响
乙酸乙酯、正丁醇、异戊醇 3种溶剂对巴拉圭
茶多酚均有一定效果，乙酸乙酯的萃取效果较佳，
纯化后多酚的质量分数为 80.04%，正丁醇的效果其
次，多酚的质量分数为 58.38%，异戊醇的效果较差，
多酚的质量分数为 50.87%．这可能是由于巴拉圭茶
多酚的主要成分为绿原酸类物质，它们的极性较
大，更易溶于乙酸乙酯．
2.3 巴拉圭茶多酚对唾液淀粉酶活性的影响
巴拉圭茶多酚对唾液淀粉酶活性的影响见表 3，
巴拉圭茶多酚质量浓度低于1.0 mg/mL时，对唾液淀
粉酶活性没有影响；高于1.0 mg/mL时开始对唾液淀
粉酶活性产生抑制作用，其抑制率随多酚质量浓度
的升高而升高，在质量浓度为 2.0 mg/mL 时，可抑
制唾液淀粉酶 10%的活性．可能是由于巴拉圭茶多
表 3 巴拉圭茶多酚对唾液淀粉酶活性的影响
Table 3 Effects of polyphenols from Ilex paraguarensis on activity
of ptyalin
多酚质量浓度/( mg·mL－1) 吸光度 酶活性/u 抑制率/%
CK 0.405
0.1 0.032 736 0
0.5 0.032 736 0
1.0 0.052 696 5
1.5 0.059 680 8
2.0 0.067 664 10
0 0.032 736
酚的绿原酸类物质分子中含有多个羟基，羟基中的
氧具有一对孤对电子，易对缺电子原子或原子团发
生亲核攻击，发生共价键合，当巴拉圭茶多酚溶液
与唾液混合在一起时，产生绿原酸类酶复合物，改
变唾液淀粉酶的构象，从而抑制其活性．
参考文献：
[1] Eibl B，Fernandez R A，Kozarik J C，et al．Agroforestry
systems with Ilex paraguariensis (American holly or yerba
mate) and native timber trees on small farms in Misiones
[J]．Argentina Agroforestry Systems，2000，48：1-8．
[2] Rosana Filip M S，Silvina B，Lotito M S，et al．Antioxidant
activity of Ilex paraguarensis and related species[J]．
Nutrition Research，2000，20( 10)：1437-1446．
[3] Schinella G R，Troiani G，Dávila V，et al．Antioxidant
effects of an aqueous extract of Ilex paraguarensis[J]．
Biochemical and Biophysical Research Communications，
2000，269：357-360．
[4] Ferriola P C，Cody V，Middleton E．Protein kinase
Cinhibition by plant flavonoids kinetic mechanisms and
structure-activity relationships[J]．Biochemical Pharmacology，
1989，38：1617-1624．
[5] Susana Gorzalczany，Rosana Filip，María del Rosario
Alonso，et al．Choleretic effect and intestinal propulsion of
‘mate’(Ilex paraguariensis) and its substitutes or adulterants
[J]．Ethnopharmacology，2001，75：291-294．
[6] Andersen T，Fogh J．Weight loss and delayed gastric
emptying following a South American herbal preparation in
overweight patients[J]．Hum Nutr Dietet，2001，14：243-250．
[7] Marco Vinicio Ramirez-Mares，Sonia Chandra，Elvira
Gonzalez de Mejia．In vitro chemopreventive activity of
Camellia sinensis，Ilex paraguarensis and Ardisia compressa
tea extracts and selected polyphenols [J]．Mutation Research，
2004，554：53-65．
[8] Chandra S，De Mejia，Gonzalez E．Polyphenolic compounds，
antioxidant capacity，and quinone reductase activity of an
aqueous extract of Ardisia compressa in comparison to mate
(Ilex paraguariensis) and green (Camellia sinensis) teas
[J]．Agric Food Chem，2004，252 (11)：3583-3589．
[9] 张震南，周振惠．薄层色谱分析及其最新进展[M]．昆
明：云南科学技术出版社，1989：65-66．
[10] 叶应妩．全国临床检验操作规程．第2版[M]．南京：
东南大学出版社，1997：221．

责任编辑：罗慧敏
英文编辑：胡东平