全 文 :HPLC法测定蒲葵药材中 6 种组分含量*
陈艳,姚宏,李少光,李光文,罗红斌,林新华**
(福建医科大学药学院,福州 350004)
摘要 目的:建立 HPLC法同时测定蒲葵中荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷、异鼠李素 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷、苜蓿素
含量,并比较不同产地不同部位蒲葵中 6 种组分的含量。方法:采用 Agilent TC - C18(4. 6 mm × 250 mm,5 μm)色谱柱;以甲醇
(B)- 0. 05%醋酸溶液(A)为流动相,梯度洗脱(0 ~ 25 min,B:33%→45%;25 ~ 40 min,B:45%→80%;40 ~ 45 min,B:80%→
95%;45 ~ 50 min,B:95%→95%;50 ~ 60 min,B:95%→33%) ;流速 0. 800 mL·min -1;检测波长 340 nm,柱温 30 ℃。结果:6
个成分的检测范围分别为荭草苷:8. 59 ~ 550. 0 μg·mL -1(r = 0. 9997)、异荭草苷:9. 37 ~ 600. 0 μg·mL -1(r = 0. 9999)、牡荆
苷:8. 59 ~ 550. 0 μg·mL -1(r = 0. 9998)、异牡荆苷:8. 59 ~ 550. 0 μg·mL -1(r = 0. 9995)、异鼠李素 - 3 - O - β - D -葡萄糖
苷:7. 81 ~ 500. 0 μg·mL -1(r = 0. 9999) ,苜蓿素:8. 59 ~ 550. 0 μg·mL -1(r = 0. 9999) ;平均回收率(n = 3)分别为 102. 9%
(RSD = 4. 6%) ,102. 3%(RSD = 2. 3%) ,93. 3%(RSD = 2. 1%) ,95. 8%(RSD = 2. 7%) ,101. 7%(RSD = 1. 8%) ,99. 2%(RSD
= 2. 5%)。结论:本方法具有良好的重复性,为评价蒲葵药材的质量提供了分析方法。不同产地不同部位的含量存在显著性
差异。
关键词:蒲葵;高效液相色谱;荭草苷;异荭草苷;牡荆苷;异牡荆苷;异鼠李素 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷;苜蓿素
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254 - 1793(2011)04 - 0645 - 06
HPLC determination of the six components in Livistona chinensis*
CHEN Yan,YAO Hong,LI Shao - guang,LI Guang - wen,LUO Hong - bin,LIN Xin - hua**
(Faculty of Pharmacy,Fujian Medical University,Fuzhou 350004,China)
Abstract Objective:To develop an HPLC method to determinate the proportion of orientin,isoorientin,vitexin,
isovitexin,isorhamnetin - 3 - O - β - D - glucoside,tricin of different parts in Livistona chinensis from different ori-
gins.Method:The separation was performed on an Agilent TC - C18(4. 6 mm ×250 mm,5 μm)with a gradient e-
lution(0 - 25 min,B:33%→45%;25 - 40 min,B:45%→80%;40 - 45 min,B:80%→95%;45 - 50 min,B:
95%→95%)composed of methanol(B)and 0. 05% acetic acid(A). The column temperature was set at 30 ℃
with flow rate of 0. 8 mL·min -1 . The detective wavelength was set at 340 nm. Results:The calibration curve was
linear over the concentration of 8. 59 - 550. 0 μg·mL -1 for orientin(r = 0. 9997) ;9. 37 - 600. 0 μg·mL -1 for
isoorientin(r = 0. 9999) ;8. 59 - 550. 0 μg·mL -1 for vitexin(r = 0. 9998) ;8. 59 - 550. 0 μg·mL -1 for isovitexin
(r = 0. 9995) ;7. 81 - 500. 0 μg·mL -1 for isorhamnetin - 3 - O - β - D - glucoside(r = 0. 9999) ;8. 59 - 550. 0
μg·mL -1 for tricin(r = 0. 9999). The average recovery of six components were 102. 9%,102. 3%,93. 3%,
95. 8%,101. 7%,99. 2% and the RSDs were 4. 6%,2. 3%,2. 1%,2. 7%,1. 8% and 2. 5%,respectively. Con-
clusion:The method is reproducible,and can be used for the quality control of Livistona chinensis. The yields of the
six components in different parts of different origins exhibite significant differences.
Key words:Livistona chinensis;HPLC;orient;inisoorientin;vitexin;isovitexin;isorhamnetin - 3 - O - β - D - gluco-
side;tricin
蒲葵(Livistona chinensis R. Br.)属于棕榈科 (Trachycar Pus Fortinei)常绿乔木,蒲葵子为该植物
—546—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2011,31(4)
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陈可冀中西医结合发展基金·福建省高校中药学重点实验室(福建中医学院)开放课题基金资助(CKJ2007032ZYX200710) ;福建省卫
生厅科研基金项目(2008 - 1 - 20) ;福建省教育厅科研基金项目(JA07101)和福建省自然科学基金(2009J01157)
通讯作者 Tel:(0591)22862016;E - mail:xhlin1963@ sina. com
种子,其性味平、淡,具有败毒抗癌、消瘀止血之功
效。民间常用其治疗白血病、鼻咽癌、绒毛膜癌、食
管癌,效果显著[1,2]。国外文献也报道,蒲葵子提取
物对肿瘤血管发生和肿瘤细胞具有较强的抑制作
用[3,4]。据文献报道[2,5 ~ 7],蒲葵的成分主要含鞣
质,酚类、糖、黄酮等。目前,仅见文献报道了蒲葵单
一组分苜蓿素的含量测定方法[8]。本文建立了蒲
葵药材中荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷、异鼠
李素 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷、苜蓿素 6 种组分
(结构式见图 1)同时测定的方法,并比较了不同产
地不同部位蒲葵药材中 6 种组分的含量,为评价蒲
葵药材的质量提供了可靠的分析方法,同时为蒲葵
在深加工过程中正确选择原料以及蒲葵的综合开发
利用提供科学依据。
1 仪器与材料
日本岛津 LC - 10AT 高效液相色谱仪,SPD -
10A紫外检测器(日本岛津) ,N - 2000 双通道色谱
工作站(浙江大学智能信息工程研究所)。RE -
3000 型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂) ,KQ -
250DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限
公司)。
对照品荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷、异鼠
李素 -3 - O - β - D -葡萄糖苷和苜蓿素(自制,经
HPLC测定,色谱条件见“2. 3项”,面积归一化法检测,
各化合物的质量分数依次为 99. 1%,99. 5%,99. 0%,
99. 3%,99. 1%,99. 0%)。鉴定结果见“2. 1项”。
图 1 6 种组分的结构
Fig 1 Structures of six components
药材为采自福建 3 个地区的蒲葵,并经福建医
科大学天然药物学系张永红教授鉴定为棕搁科植物
蒲葵的叶、枝、树皮及种子,标本现存于福建医科大
学药学院。甲醇、冰醋酸为色谱纯,水为双蒸水并经
0. 45 μm水系滤膜过滤,其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 结构鉴定
化合物 1:黄色粉末,盐酸 - 镁粉反应阳性。
ESI - MS m / z:447[M - H]ˉ。IR(KBr)cm -1:3450 ~
3200(OH) ;1651(C = O) ,1622,1488,1455(Ar)。13 C
- NMR(500 MHz,DMSO - d6)δ:164. 36(C - 2) ,
102. 66(C - 3) ,182. 29(C - 4) ,160. 65(C - 5) ,
98. 43(C - 6) ,162. 82(C - 7) ,104. 81(C - 8) ,
156. 27(C - 9) ,104. 30(C - 10) ,122. 28(C - 1) ,
—646— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2011,31(4)
114. 35(C - 2) ,146. 07(C - 3) ,149. 86(C - 4) ,
115. 92(C - 5) ,119. 63(C - 6) ,73. 68(C - 1″) ,
71. 09(C - 2″) ,79. 08(C - 3″) ,71. 07(C - 4″) ,
82. 29(C - 5″) ,61. 94(C - 6″)。1 H - NMR(500
MHz,DMSO - d6)δ:13. 17(1H,s,5 - OH) ,10. 86
(1H,s,7 - OH) ,10. 12(1H,s,3 - OH) ,9. 12(1H,
s,4 - OH) ,6. 65(1H,s,H - 6) ,7. 48(1H,d,J =
8. 5 Hz,H -2) ,6. 27(1H,s,H - 5) ,7. 54(1H,d,J
= 8. 5 Hz,H - 2) ,6. 85(1H,d,J = 8. 0 Hz,H - 3) ,
6. 27(1H,s,H - 6) ,4. 68(1H,d,J = 9. 8 Hz,H -
1″) ,3. 24 ~ 3. 84(m,H - 2″ ~ H - 6″)。上述数据与
文献报道[9]的荭草苷数据基本一致,故确定化合物
11 为荭草苷(orientin)。
化合物 2:黄色粉末。AlCl3显亮黄色,盐酸 -镁
粉反应阳性。ESI - MS m/z:447[M - H]ˉ。 IR
(KBr)cm -1:3450 ~ 3200(OH) ;1649(C = O) ;1626,
1567,1517,1451(Ar)。13 CNMR(500 MHz,DMSO -
d6)δ:163. 92(C - 2) ,103. 06(C - 3) ,182. 14(C -
4) ,160. 96(C - 5) ,99. 80(C - 6) ,163. 49(C - 7) ,
109. 13(C - 8) ,156. 44(C - 9) ,103. 67(C - 10) ,
121. 68(C - 1) ,113. 56(C - 2) ,146. 00(C - 3) ,
149. 94(C - 4) ,116. 30(C - 5) ,119. 24(C - 6) ,
73. 34(C - 1″) ,70. 90(C - 2″) ,79. 23(C - 3″) ,
70. 51(C -4″) ,81. 88(C -5″) ,61. 77(C - 6″)。1H -
NMR(500 MHz,DMSO - d6)δ:13. 57(1H,s,OH -
5) ,10. 60(1H,s,OH - 7) ,9. 93(1H,s,OH - 4 ') ,
9. 42(1H,s,OH - 3') ,7. 40(1H,dd,J = 8. 4 Hz,2. 0
Hz,H - 6) ,7. 39(1H,d,J = 2. 2 Hz,H - 2) ,6. 88
(1H,d,J = 8. 3 Hz,H - 5) ,6. 68(1H,s,H - 3) ,
6. 68(1H,s,H - 3) ,6. 47(1H,s,H - 8) ,4. 58(1H,
d,J = 9. 7 Hz,H - 1″) ,3. 17 ~ 4. 03(m,H - 2″ ~ H -
6″)。以上数据与文献报道[10]的异荭草苷的数据一
致,故鉴定该化合物为异荭草苷(isoorientin)。
化合物 3:黄色粉末,盐酸 - 镁粉反应阳性。
ESI - MS m/z:431[M - H]-。IR(KBr)cm -1:3450
~ 3200 (OH) ;1651 (C = O) ;1622,1488,1455
(Ar)。13CNMR(500 MHz,DMSO - d6)δ:182. 37(C -
4) ,164. 23(C -2) ,162. 82(C -7) ,161. 40(C - 5) ,
160. 67(C -4) ,156. 28(C -9) ,129. 28(C - 2,C -
6) ,121. 90(C -1) ,l16. 13(C - 3,C - 5) ,104. 91
(C - 8) ,104. 32(C - 10) ,102. 75(C - 3) ,98. 44(C
-6) ,73. 68(C - 1″) ,71. 15(C - 2″) ,78. 98(C -
3″) ,70. 86(C - 4″) ,82. 13(C - 5″) ,61. 60(C -
6″)。1H - NMR(500 MHz,DMSO - d6)δ:13. 17(1H,
s,5 - OH) ,10. 85(1H,s,7 - OH) ,10. 36(1H,s,4'-
OH) ,8. 03(2H,d,J = 8. 5 Hz,H - 2,6) ,6. 88(2H,
d,J = 8. 9 Hz,H - 3,H - 5) ,6. 79(1H,s,H - 3) ,
6. 27(1H,s,H - 6) ,4. 69(1H,d,J = 10. 4 Hz,H -
1″) ,3. 25 ~ 3. 83(m,H - 2″ ~ H - 6″)。以上数据与
文献中[11]的牡荆苷与对照一致,故鉴定该化合物为
牡荆苷(vitexin)。
化合物 4:橙黄色结晶(甲醇) ,盐酸 -镁粉反应
阳性。ESI - MS m / z:431[M - H]-。 IR(KBr)
cm -1:3450 ~ 3200(OH) ;1648(C = O) ;1617,1570,
1508(Ar)。13CNMR(500 MHz,DMSO - d6)δ:182. 23
(C - 4) ,163. 81(C - 2) ,163. 51(C - 7) ,160. 93(C
-5) ,161. 44(C - 4) ,156. 49(C - 9) ,128. 73(C -
2,C -6) ,121. 39(C -1) ,116. 25(C -3,C - 5) ,
93. 64(C - 8) ,103. 06(C - 10) ,103. 72(C - 3) ,
109. 17(C - 6) ,73. 35(C - 1″) ,70. 89(C - 2″) ,
79. 22(C - 3″) ,70. 54(C - 4″) ,81. 84(C - 5″) ,
61. 76(C - 6″)。1H - NMR(500 MHz,DMSO - d6)δ:
13. 56(1H,s,5 - OH) ,10. 59(1H,s,7 - OH) ,10. 37
(1H,s,4 ' - OH) ,7. 94(2H,d,J = 8. 9 Hz,H - 2,
6) ,6. 93(2H,d,J = 8. 9 Hz,H - 3,H - 5) ,6. 79
(1H,s,H -3) ,6. 51(1H,s,H - 8) ,4. 59(1H,d,J =
9. 8 Hz,H - 1″) ,3. 13 - 4. 05(m,H - 2″ ~ H - 6″)。
波谱数据与文献中[10 - 11]的异牡荆苷相对照一致,故
鉴定该化合物为异牡荆苷(isovitexin)。
化合物 5:黄色粉末,盐酸 - 镁粉反应阳性。
ESI - MS m / z:461[M - H]ˉ。IR(KBr)cm -1:3450 ~
3200(OH) ;1654(C = O) ;1623,1561,1517,1458
(Ar)。1H - NMR(500 MHz,CH3 OH - d4)δ:6. 21
(1H,s,H -6) ,6. 41(1H,s,H -8) ,7. 94(1H,s,H -
2') ,6. 92(1H,d,J = 8. 2 Hz,H -5') ,7. 59(1H,d,J =
9. 6 Hz,H - 6 ') ,5. 44(1H,d,J = 7. 3 Hz,H - 1) ,
3. 95(3H,s,- OCH3) ,3. 00 ~ 6. 00(m,H - 2″ ~ H -
6″)。13C - NMR(500 MHz,CH3OH - d4)δ:177. 85(C
-4) ,153. 39(C - 2) ,164. 41(C - 7) ,161. 52(C -
5) ,149. 26(C - 4) ,157. 09(C - 9) ,112. 78(C -
2) ,122. 22(C - 6) ,127. 22(C - 1) ,146. 80(C -
3) ,114. 40(C - 5) ,93. 13(C - 8) ,104. 77(C -
10) ,133. 01(C - 3) ,98. 30(C - 6) ,102. 40(C -
1″) ,74. 33(C - 2″) ,76. 96(C - 3″) ,69. 92(C - 4″) ,
76. 50(C - 5″) ,60. 98(C - 6″) ,55. 20(- OCH3)。
参考文献[12],鉴定该化合物为异鼠李素 - 3 - O -
β - D -吡喃葡萄糖苷(isorhamnetin - 3 - O - β - D
- glucoside)。
—746—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2011,31(4)
化合物 6:黄色针状结晶(甲醇) ,盐酸 -镁粉反
应阳性。ESI - MS m/z:331(M + H)。 IR(KBr)
cm -1:3367(OH) ;1654(C = O) ;1611,1507(苯
环)。1H - NMR(DMSO - d6,500 MHz)δ:7. 32(2H,
s,H -2 ',6 ') ,6. 98(1H,s,H - 3) ,6. 56(1H,d,J =
2. 0 Hz,H - 8) ,6. 21(1H,d,J = 2. 0 Hz,H - 6) ,
3. 88(6H,s,3',5'- OCH3)。13 C - NMR(DMSO - d6,
500 MHz)δ:182. 43(C - 4) ,164. 82,164. 31(C -
7) ,163. 31(C -2) ,162. 00(C -9) ,157. 98(C - 5) ,
148. 79(C -3',5') ,140. 41(C - 4') ,121. 02(C - 1') ,
104. 91(C -2',6') ,104. 32(C -10) ,104. 20(C - 3) ,
99. 47(C - 2,6) ,94. 86(C - 8) ,56. 97(OCH3)。上
述数据与文献报道[13]的小麦黄素一致,故确定化合
物 1 为 5,7,4'-三羟基 - 3',5'-二甲氧基黄酮,即苜
蓿素(tricin)。
2. 2 溶液制备
对照品储备液:分别精密称取对照品荭草苷、异
荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷、异鼠李素 - 3 - O - β - D
-葡萄糖苷和苜蓿素适量,用甲醇溶解并稀释成每
1 mL中分别含有 550. 0 μg(荭草苷)、600. 0 μg(异
荭草苷)、550. 0 μg(牡荆苷)、550. 0 μg(异牡荆
苷)、500. 0 μg(异鼠李素 - 3 - O - β - D -葡萄糖
苷)、550. 0 μg(苜蓿素)的混合溶液,作为对照储备
液,避光保存。
供试品溶液:分别取不同产地蒲葵的枝、叶、皮、
仁、果皮、全果,于 60 ℃烘箱下烘干。取烘干品,粉
碎,过 40 目筛,分别精密称取 2. 0 g,置于 50 mL 锥
形瓶中,加入石油醚 25 mL超声提取 30 min,过滤除
去滤液,重复此操作三次。再用 25 mL 甲醇超声提
取 1 h,重复两次,合并甲醇提取液,并将其减压浓
缩,然后用甲醇复溶残渣,并定容到 10 mL 量瓶中,
作为供试品溶液,进样分析前用 0. 45 μm 微孔滤膜
过滤,取续滤液,即为供试品溶液。
2. 3 色谱条件的选择 色谱柱:Agilent TC - C18
(250 mm × 4. 6 mm,5 μm) ;流动相:甲醇(B)-
0. 05%醋酸溶液(A) ,梯度洗脱(0 ~ 25 min,B:33%
→45%;25 ~ 40 min,B:45%→80%;40 ~ 45 min,B:
80%→95%;45 ~ 50 min,B:95% →95%;50 ~ 60
min,B:95%→33%) ;流速:0. 800 mL·min -1;检测
波长:340 nm;柱温:30 ℃。
2. 4 系统适用性试验 在上述色谱条件下,各相邻
色谱峰之间的分离度均大于1 . 5,拖尾因子均
在 0. 95 ~ 1. 05 之间;理论塔板数均大于 9000,满足
定量要求。色谱图见图 2。
图 2 6 种对照品(A)与蒲葵样品(果皮)色谱图(B)
Fig 2 Chromatograms of standard (A)and Livistona chinensis sample
(pericarp) (B)
1. 荭草苷(orientin) 2. 异荭草苷(isoorientin) 3. 牡荆苷(vitexin)
4. 异牡荆苷(isovitexin) 5. 异鼠李素 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷
(isorhamnetin - 3 - O - β - D - glucoside) 6. 苜蓿素(tricin)
2. 5 标准曲线 在上述色谱条件下,取对照品储备
液用甲醇稀释成系列混合对照品溶液,分别进样 20
μL分析。以对照品浓度(μg·mL -1)为横坐标
(X) ,色谱峰面积为纵坐标(Y) ,进行线性回归,绘
制标准曲线,得到 6 个组分的回归方程、相关系数和
谱峰参数,见表 1。所有的标准曲线都具有很好的
线性(r > 0. 999) ,可见该方法在检测范围内线性关
系良好。
2. 6 精密度试验 取一定浓度的混合对照品溶液,
按上述色谱条件,连续进样 5 次,分别记录 6 种组分
的峰面积,计算得荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、异牡荆
苷、异鼠李素 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷、苜蓿素的
RSD 分别为 1. 2%,0. 5%,0. 7%,0. 3%,0. 7%,
0. 6%。
2. 7 重复性考察 分别取同一产地蒲葵药材粉末
2. 0 g,按“2. 2”项下方法平行制备供试品溶液 5 份,
照“2. 3”项色谱条件,进样分析,分别求得荭草苷、
异荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷、异鼠李素 - 3 - O - β
- D -葡萄糖苷、苜蓿素含量平均值的 RSD 分别为
2. 2%,2. 7%,1. 1%,1. 3%,1. 6%,3. 5%。
—846— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2011,31(4)
表 1 标准曲线,检测限以及定量限(n =5)
Tab 1 Calibration curves,detection limits,quantification limits
组分
(component)
标准曲线
(calibration curve)
线性范围(linear
ange )/μg·mL -1
r
LOD
/ng·mL -1
LOQ
/ng·mL -1
荭草苷(orientin) Y =2. 312 × 104X -3. 915 × 104 8. 59 ~ 550. 0 0. 9997 4. 2 8. 4
异荭草苷(isoorientin) Y =2. 848 × 104X -4. 802 × 104 9. 37 ~ 600. 0 0. 9999 2. 8 11. 3
牡荆苷(vitexin) Y =4. 827 × 104X -7. 369 × 104 8. 59 ~ 550. 0 0. 9998 3. 6 7. 2
异牡荆苷(isovitexin) Y =5. 363 × 104X -4. 789 × 104 8. 59 ~ 550. 0 0. 9995 3. 1 12. 5
异鼠李素 -3 - O - β - D -葡萄糖苷
(isorhamnetin - 3 - O - β - D - glucoside)
Y =2. 099 × 104X -2. 028 × 104 7. 81 ~ 500. 0 0. 9999 1. 8 7. 5
苜蓿素(tricin) Y =5. 795 × 104X -6. 179 × 104 8. 59 ~ 550. 0 0. 9999 2. 1 7. 9
2. 8 稳定性试验 取“2. 2”项下供试品溶液,室温
放置,连续 5 d,每天进样 1 次,照“2. 3”项色谱条
件,进样分析,分别求得荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、
异牡荆苷、异鼠李素 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷、苜
蓿素的 RSD 分别为 1. 5%,1. 5%,1. 8%,1. 1%,
1. 3%,0. 9%,结果表明供试品溶液在 5 d内稳定。
2. 9 加样回收率试验 取已知含量的同一产地蒲
葵药材粉末 3 份,每份 2. 0 g,精密称定,分别精密加
入混合对照品储备液适量,按“2. 2”项下方法制备
供试溶液,照“2. 3”项色谱条件,进样分析,计算加
样回收率,结果见表 2。6 个组分的回收率在
93. 3% ~102. 9%,RSD均小于 4. 6%。
2. 10 样品测定 取蒲葵的枝、叶、树皮、仁、果皮、
全果,按“2. 2”项制备供试品溶液,按“2. 3”项色谱
条件,进样分析,分别计算各个产地各个部位 6 种组
分的含量,结果见表 3。
表 2 加样回收率实验结果
Tab 2 Recovery results by standard addition method (n =3)
组分
(component)
已知含量
(original)
/mg
加入量
(added)
/mg
测得量
(found)
/mg
回收率
(recovery)
/%
RSD
/%
荭草苷(orientin) 0. 051 0. 035 0. 087 102. 9 4. 6
异荭草苷(isoorientin) 0. 040 0. 042 0. 083 102. 3 2. 3
牡荆苷(vitexin) 0. 030 0. 015 0. 044 93. 3 2. 1
异牡荆苷(isovitexin) 0. 033 0. 024 0. 056 95. 8 2. 7
异鼠李素 - 3 - O - β - D -
葡萄糖苷(isorhamnetin - 3
- O - β - D - glucoside)
0. 029 0. 060 0. 090 101. 7 1. 8
苜蓿素(tricin) 0. 193 0. 124 0. 316 99. 2 2. 5
表 3 不同产地不同部位蒲葵中 6 种组分的含量(mg·g -1,n =3)
Tab 3 Contents of six components in different parts of Livistona chinensis from different origins
产地
(origins)
部位
(parts)
荭草苷
(orientin)
异荭草苷
(isoorientin)
牡荆苷
(vitexin)
异牡荆苷
(isovitexin)
异鼠李素 -3 - O -
β - D -葡萄糖苷
(isorhamnetin - 3 -
O - β - D - glucoside)
苜蓿素
(tricin)
福建福州(Fuzhou,Fujian) 叶(lesf) 0. 2733 ±1. 05** 0. 1665 ±1. 97* 0. 1399 ±1. 69* 0. 1686 ±1. 35** 0. 1483 ±1. 42* 0. 0172 ±1. 16
福建莆田(Putian,Fujian) 叶(lesf) 0. 2170 ±1. 84** 0. 1564 ±0. 89* 0. 1473 ±1. 68* 0. 1380 ±1. 10** 0. 1355 ±1. 77* 0. 0093 ±1. 11
福建厦门(Xiamen,Fujian) 叶(lesf) 0. 1846 ±1. 49** 0. 1122 ±1. 73* 0. 0968 ±1. 68* 0. 1149 ±1. 65** 0. 0978 ±1. 20* 0. 0093 ±1. 00
福建福州(Fuzhou,Fujian) 枝(branch) 0. 1332 ±3. 60 0. 1811 ±1. 85* 0. 0543 ±1. 18 0. 0188 ±1. 29 0. 0218 ±1. 74 0. 0489 ±1. 63
福建莆田(Putian,Fujian) 枝(branch) 0. 1794 ±1. 74 0. 0522 ±1. 26* 0. 0451 ±1. 26 0. 0165 ±0. 79 0. 0325 ±1. 32 0. 0078 ±0. 86
福建厦门(Xiamen,Fujian) 枝(branch) 0. 1962 ±1. 90 0. 1748 ±2. 93* 0. 0678 ±2. 07 0. 0345 ±1. 89 0. 0455 ±2. 57 0. 0551 ±3. 33
福建福州(Fuzhou,Fujian) 树皮(bark) — 0. 0124 ±1. 11 — — — —
福建莆田(Putian,Fujian) 树皮(bark) — 0. 0098 ±1. 01 — — — —
福建厦门(Xiamen,Fujian) 树皮(bark) — 0. 0111 ±1. 64 — — — —
福建福州(Fuzhou,Fujian) 仁(kernel) — — — — 0. 0095 ±1. 01 —
福建莆田(Putian,Fujian) 仁(kernel) — — — — 0. 0138 ±1. 07 —
福建厦门(Xiamen,Fujian) 仁(kernel) — — — — 0. 0176 ±1. 84 —
福建福州(Fuzhou,Fujian) 果皮(pericarp) 0. 0136 ±0. 69 0. 0121 ±1. 12 0. 0114 ±1. 23 0. 0084 ±0. 66 0. 0462 ±1. 39* 0. 0330 ±1. 21
福建莆田(Putian,Fujian) 果皮(pericarp) 0. 0210 ±1. 99 0. 0235 ±2. 22 0. 0137 ±1. 20 0. 0132 ±0. 94 0. 0771 ±1. 90* 0. 0426 ±1. 53
福建厦门(Xiamen,Fujian) 果皮(pericarp) 0. 0132 ±0. 91 0. 0128 ±1. 57 0. 0113 ±1. 11 0. 0089 ±1. 15 0. 0310 ±1. 08* 0. 0649 ±2. 22
福建福州(Fuzhou,Fujian) 全果(fruit) 0. 0096 ±0. 86 0. 0112 ±0. 80 0. 0132 ±1. 11 0. 0068 ±0. 78 0. 0234 ±1. 10 0. 0252 ±1. 74
福建莆田(Putian,Fujian) 全果(fruit) 0. 0134 ±1. 18 0. 0157 ±1. 16 0. 0140 ±1. 17 0. 0114 ±1. 08 0. 0186 ±1. 53 0. 0240 ±2. 61
福建厦门(Xiamen,Fujian) 全果(fruit) 0. 0142 ±1. 00 0. 0163 ±2. 02 0. 0126 ±1. 05 0. 0068 ±0. 81 0. 0266 ±1. 48 0. 0437 ±3. 55
“ -”未检出(is representative no detected) ;* :P <0. 05;**:P <0. 01. F test
—946—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2011,31(4)
3 讨论与结论
3. 1 供试品溶液制备方法的考察 根据前期研究,
蒲葵子含有较多的油脂以及色素成分,本实验先采
用石油醚提取以除去这些干扰成分,进样分析,以不
损失 6 种组分的含量为标准。采用单因素循环的方
法,分别考察了提取溶剂(不同浓度乙醇、甲醇) ;提
取方法(热回流、冷浸、超声提取) ;提取次数(1,2,3
次) ;提取时间(15,30,60 min)。进样分析,以 6 种
组分的含量进行比较,确定了本文样品提取条件。
3. 2 色谱条件的优化 分别比较了 203,254,280,
340 nm 4 种波长的峰数量和分离度。结果显示,254
nm色谱图峰数量最多,但峰分离度较差;203,280
nm色谱图,基线波动和噪音大,且峰没得到很好的
分离;340 nm色谱图峰形最好,出峰数目较多,各色
谱峰相互之间分离度较好,因此检测波长定为 340
nm,实现了 6 组分含量的同时测定,获得了满意结
果。在建立 HPLC 方法时,对流动相的选择和优化
进行了系统考察,最终选择了本实验甲醇 - 0. 05%
醋酸溶液的梯度洗脱条件,经实验证实所选的色谱
系统适用性好,结果可靠。
3. 3 小结 本实验首次采用梯度洗脱法,对不同产
地蒲葵的各个部位的 6 个组分进行含量测定。由表
3 可知蒲葵的叶、枝、全果、果皮同时含有这 6 种组
分,且叶和枝中的含量较高;树皮及仁均只含有其中
的 1 种组分,分别是异荭草苷和异鼠李素 - 3 - O -
β - D -葡萄糖苷。同时通过比较不同产地的蒲葵
样品,结果表明 6 种组分的含量均有明显差别,由于
收集样品的地区较为集中,代表性不强,不能完全推
断蒲葵药材中这 6 种组分的含量是否与产地有关,
课题组将在随后的实验中收集更多的样品进一步研
究其关系。通过实验可以确定蒲葵中 6 种组分主要
分布在叶以及枝中,为后续的提取分离、抗肿瘤活性
以及蒲葵药材的质量研究奠定基础。总之,该方法
简单、快速,精密度高,重现性好,能达到蒲葵药材的
质量控制的要求,并为其他中草药的质量控制提供
方法学参考。
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