全 文 ：ScienceandTechnologyofFoodIndustry
2007年第07期
张 雪 1,丁长河 2
(1.郑州牧业工程高等专科学校食品工程系,河南郑州450008;
2.河南工业大学粮油食品学院,河南郑州450000)
摘 要:以芦丁为标准品,根据现有条件对硝酸铝显色-分光光度
法进行改进,利用果胶酶将山楂果肉中的果胶分解后,再
进行黄酮的含量分析,减少果胶对检测黄酮的影响,建立
起更加精确的紫外分光光度法山楂总黄酮分析系统,旨在
为山楂总黄酮的定量及生物功能评价提供检测方法。
关键词:芦丁,山楂总黄酮,紫外分光光度法
Abstract:Accordingtotheexistingconditions,themethodof
aluminum nitrateandspectrophotometerhasbeen
improvedon.Thesystemicexperimentshavebeen
donewithrutinasastandardmaterial.Themethod
canprovidetheaccuratedeterminationofflavone
contentinHawthornwithspectrophotometry.
Keywords:rutin;flavoneofhawthorn;spectrophotometry
中图分类号:TS207.3 文献标识码:A
文 章 编 号 :1002-0306(2007)07-0200-03
收稿日期:2006-12-18
作者简介:张雪(1974-),女,讲师,工学硕士,研究方向:功能性食品。
基金项目:河南省科技厅科技攻关项目(0624290003)。
山楂中含有多种黄酮类化合物[1]。近年来的许多
研究证明,山楂对心血管系统有降压、增加冠脉血流
量、改善心肌供血供氧等功效,对高血压、高血脂、冠
心病、心绞痛等症均有较好的疗效,是防治心血管疾
病较好的天然植物资源,其重要有效成分——山楂
总黄酮,据分析主要为牡荆碱鼠李糖苷(vitexin
rhamnoside)、单乙酰牡荆碱鼠李糖苷(monoacetyl
vitexinrhamnoside)、金丝桃苷(hyperside)及山楂酸
(crataegicacid)等[2]。山楂中黄酮类化合物是防治心
血管疾病及降血脂的有效成分,由于各类黄酮物质
的理化性质差别很大,因而检测手段也不可能统一。
有关总黄酮的测定方法有:戴维斯法[3]、薄层层析-比
色法[4]、微分脉冲极谱法[5]、硝酸铝显色法[6]、紫外分光
光度法[7]等。鲜山楂果胶含量达3.0%以上,但上述方
法均忽略了山楂果胶对总黄酮含量的影响。本实验
针对上述检测方法存在的问题,根据现有条件对硝
酸铝显色-分光光度法进行改进,以芦丁为标准品,
利用果胶酶将山楂果肉中的果胶分解后,再进行黄
酮的含量分析,减少果胶对检测黄酮的影响,建立起
更加精确的山楂总黄酮分析系统,旨在为山楂总黄
酮的定量及生物功能评价提供检测方法。
1材料与方法
1.1材料与仪器
芦丁对照品 (Quercetin3β-D-rutinoside)中国
药品生物制品检定所;山楂鲜果 北京市密云县产,
色泽鲜红,无病虫害;果胶酶 活力:20000u/g,天津市
利华酶制剂厂;1NNaOH溶液,5%NaNO2溶液,10%
Al(NO3)3溶液。
YP1200电子天平,手持糖度计,电热恒温水浴
锅,722S分光光度计,TGL-16C离心机,PHS-25酸
度计,裹包式榨汁机,自动电位滴定计,Biorad
SmartspecTM3000Spectrophotometer紫外分光光度计
(美国伯乐公司),FA1004万分之一分析天平 (上海
精密仪器厂),GL-20B冷冻离心机(上海安亭科学仪
器厂)。
1.2实验方法
1.2.1实验原理 山楂含有黄酮类化合物,它们具有
许多重要的生理活性和药效。黄酮化合物的母核(图A)
由C6-C3-C6即A-C-B三个环组成,A环和B环具有
芳香化合物的性质,C环具有黄酮化合物的独特性
质。母核中某些位置如 C3和 C5上含有羟基时能与
铝、铅等金属离子形成稳定的络合物,这些络合物在
光谱上产生明显变化。黄酮与金属离子的这种作用不
仅可以用于鉴别这类成分中羟基的位置,还可以作为
进行定量分析的基础。本实验就是采用这种原理,通
过Al3+与黄酮形成鲜黄色的络合物(图 B,图 C)在最
大吸收波长处有一吸收峰然后比色测定而进行定量
的。
1.2.2标准溶液配制 精密称取芦丁对照品10.03mg,
加60%甲醇适量,置水浴中加热溶解,放冷,以60%
紫外分光光度法
检测山楂总黄酮方法的建立
分析 检 测
200
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2007.07.059
Vol.28,No.07,2007
2007年第07期
甲醇定容于100mL容量瓶中,摇匀备用,配成芦丁含
量为0.103mg/mL的工作液,备用。
1.2.3标准曲线建立
1.2.3.1最佳检测波长选择 取芦丁标准溶液于400～
600nm范围内进行扫描,确定黄酮的最大吸收波长。
1.2.3.2标准曲线建立 精确吸取浓度为0.103mg/mL
的 芦 丁 标 液 0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL, 置 于
25mL容量瓶中,准确加入 5%NaNO2溶液 1mL摇
匀,放置 5min,再准确加入 10%Al(NO3)3溶液 1mL
摇匀,放置6min,然后加入4mL1NNaOH溶液,最后
用30%乙醇稀释到刻度,于温水浴中加热10min取
出,用 1cm玻璃比色皿在 510nm处测定吸光度 A,
同时以未加标准芦丁的溶液作空白参比。以吸光度
对标样含量毫克数作图。
1.2.4样品测定
1.2.4.1样品液制备方法 称取山楂鲜果约 50g八
份,拣选、清洗后加蒸馏水 125mL,浸泡 0.5h后加热
软化至90℃,用组织捣碎机打碎成匀浆,冷却恒温至
45℃后,其中四份直接榨汁,然后离心、过滤后定容至
150mL备用;取另外四份加0.07%的果胶酶,45℃恒
温酶解4h,将已经过酶解处理的样品90℃、15min加
热灭酶,然后榨汁,离心、过滤后定容至150mL待用。
比较酶处理与非酶处理的结果。
1.2.4.2样品液测定方法 精确吸取样液5mL两份于
2支25mL容量瓶中,加5%NaNO2溶液1mL摇匀,
放置 5min,再准确加入 10%Al(NO3)3溶液 1mL摇
匀,放置6min,然后加入4mL1NNaOH溶液,最后用
30%乙醇稀释到刻度,于温水浴中加热 10min,取出,
同时作试剂空白,以试剂空白为对照,于芦丁最大吸
光值处测定吸光度 A,查标准曲线,即得所取样液中
黄酮含量。
1.2.4.3样品中黄酮含量计算方法 样品中黄酮含量
(以芦丁计)(%)=CV1/WV2;式中:C-样液含黄酮量
(mg),V1-定容体积(mL),V2-显色反应测定取用样液
体积(mL),W-称样量(g)。
2结果与分析
2.1最佳检测波长的选择及标准曲线线性关系考察
紫外扫描结果表明,芦丁在510nm处的吸收值
最大,即510nm为芦丁的特征吸收峰值,故检测波长
确定为510nm。经线性回归表明,芦丁在0～0.618mg
范围内呈良好的线性关系,达到显著水平。典型的标
准曲线如图1所示。回归方程为Y=1.2389X+0.0039
(r=0.9998,α=0.01)。
2.2显色稳定性实验
取芦丁标准溶液和酶解处理的山楂样品液,随
着放置时间的推移,于 1.2.4样品液测定条件下每
20min测定其吸光度,共6次,分析测定总黄酮含量,
并计算标准偏差、相对标准偏差,结果见表1。标准液
与样品液中总黄酮含量的RSD均在5%以下,表明芦
丁标准溶液与山楂样液2h显色很稳定。
2.3精密度和准确度验证
精密吸取芦丁标准溶液和酶处理的山楂样品
液,重复测定 6次,分析总黄酮含量,六次测定结果
平均值分别为:0.011%、0.3%,相对标准偏差为:
2.16%、3.2%,标准溶液与样液黄酮含量的 RSD均在
5%以下,表明本实验具有良好的重现性,条件合理。
2.4加样回收率实验
称取以上样品各数份,分别添加适量标准,按前
述操作进行处理,测定,以加样测得量减去原样含
量,除以加样量,计算回收率,结果见表2。
2.5测定结果
比较酶与非酶处理后的测定结果见图2。由图2
可以看出,每一组酶处理的山楂总黄酮含量都要比
非酶处理的高出 2%～3%,表明酶处理后再进行榨
汁,山楂总黄酮含量有明显的提高,同时也说明果胶
的存在有碍于总黄酮的充分释放。Pitifer,L.A.等人[8]
认为,果胶酶作用于果胶含量高的水果能提高果蔬
汁的营养物质的含量。这一结论与本实验结果一致。
山楂果实中的果胶含量一般为3%～4%,而且果胶是
图1芦丁标准曲线
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
含标量(mg/25mL)
吸
光
度
0 0.2 0.4 0.6 0.8
样品 回收的量(mg/g) 回收率(%) 平均回收率(%) 相对标准差(RSD)(%)
山楂样品 8.24
山楂样品+0.11mg标准品 8.349 99.09 98.84 0.23
山楂样品+0.22mg标准品 8.457 98.64
山楂样品+0.33mg标准品 8.566 98.79
项目 标准样品 山楂样液
测定平均值(mg/mL) 0.10 3.06
标准差(%) 0.043 0.007
相对标准差(%) 4.26 2.3
表1标准液和山楂样液中总黄酮2h的稳定性(n=6)
表2样品加样回收率实验结果(n=3)
分 析 检 测
201
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3.1温室鳖、池塘鳖和野生鳖在体组成上存在显著
差异。空壳比和背甲比,温室鳖显著(p<0.05)低于池
塘鳖和野生鳖;脏体比、肝体比和肢脂比,温室鳖显
著(p<0.05)高于池塘鳖和野生鳖。
3.2温室鳖和池塘鳖肌肉和裙边的基本成分分析结
果:温室鳖、池塘鳖和野生鳖,肌肉、裙边的水分含量
差异不大;温室鳖、池塘鳖和野生鳖,裙边粗蛋白含
量均高于肌肉的粗蛋白含量;肌肉和裙边的脂肪含
量均较低,野生鳖肌肉脂肪含量显著(p<0.05)高于温
室鳖和池塘鳖。
3.3温室鳖、池塘鳖和野生鳖肌肉、裙边分别共检测
出17种酸解氨基酸。肌肉氨基酸总量分别为16.30、
16.98、17.39g/100g;必需氨基酸总量分别为 6.72、
6.78、6.95g/100g;呈味氨基酸总量分别为 7.48、7.78、
7.96g/100g,其中以谷氨酸含量最高。裙边氨基酸总
量分别为 25.69、27.97、30.17g/100g;必需氨基酸总量
分别为5.77、5.45、5.9g/100g;呈味氨基酸总量分别为
16.98、18.79、20.27g/100g,其中以甘氨酸含量最高,
其次是谷氨酸。
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(上接第196页)
多糖类物质,是构成山楂细胞壁的主要成分,山楂的
有效成分和营养物质就被包裹在细胞内。果胶是由
α-D-半乳糖醛酸结构单位以(1→4)键连接而成的链
状聚合物,采用酶解法,在酶的作用下果胶的糖苷键
发生断裂,有效成分得以释放出来,而且果胶酶分解
山楂浸提汁中悬浮的果肉颗粒,使其进一步液化,降
低了汁液粘度,提高了营养物质在介质中的扩散速
率,因而使果肉中的黄酮类物质充分地释放出来。由
此可见,酶解法对山楂总黄酮的含量分析具有重要
的意义。
3小结
本实验根据现有条件对硝酸铝显色-分光光度
法进行了改进,以芦丁为标准品,作了系统实验,结
果表明:山楂原料中总黄酮含量为 0.92%,回归方程
为 Y=1.2389X+0.0039(r=0.9998,α=0.01),精密度(重
复测定样品的RSD)<5%,平均回收率98.4%,达到了
准确测定山楂中黄酮含量的要求。
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50
40
30
20
10
0
黄
酮
含
量
( m
g/
g)
样品
1 2 3 4
酶处理山楂总黄酮
含量
非酶处理山楂总黄
酮含量
图2酶处理对总黄酮含量的影响
分 析 检 测
更正:本刊2007年第六期“金线兰提取液清除NO2·作用的实验研究”一文中NO2·应为NO2,特此更正。
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