全 文 ：UPLC法测定复方南星止痛膏中马兜铃酸A的含量
殷书梅1 ,王宓1 ,林新艳1 ,李吉峰1 , 2 ,谢红兵1 　(1 江苏南星药业有限责任公司 ,江苏 南京　210046;2南京
中医药大学产业处 ,江苏　南京　210046)
摘要:目的　对复方南星止痛膏中马兜铃酸 A 进行检测 ,验证产品的临床安全性。方法　通过固相萃取小柱对制剂中的
马兜铃酸A 进行富集 ,应用 UPLC对其进行检测 。结果　 在Waters UPLC 的高灵敏度色谱条件下 , 信噪比为 3∶1 时马兜
铃酸A 的最低检出限为 0.1μg;3批制剂成品及中间体中均未检出马兜铃酸 A;3 批细辛药材中检出微量马兜铃酸 A , 平
均含量为 1.96μg/g , 推算至每克制剂中含马兜铃酸A 约为0.05μg ,远低于口服制剂药品中马兜铃酸A含量不得高于 0.5
μg/g 的标准。结论　以处方中细辛所含马兜铃酸 A的研究数据说明 , 复方南星止痛膏临床应用是安全可靠的。
关键词:复方南星止痛膏;马兜铃酸 A;固相萃取小柱;超高效液相色谱法
中图号:R284.2　　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-5005(2009)05-0396-02
　　复方南星止痛膏临床应用于治疗寒湿瘀阻所
引起的骨性关节炎及类风湿性关节炎 ,包括关节
疼痛 、肌肉肿胀等 ,疗效确切。本品处方中中含有
细辛这味药材 ,而细辛中所含的马兜铃酸在口服
制剂中所体现出的肾毒性已广为国内外文献所报
道。复方南星止痛膏为外用制剂 ,处方中所用细
辛为北细辛的地下部分 ,根据文献资料显示 ,北细
辛中的马兜铃酸含量在所有细辛品种中为最低 ,
且细辛中的马兜铃酸 A主要存在于地上部分[ 1] ,
地下根茎部分含量甚微。为保证其临床用药的安
全性 ,我们对制剂中的马兜铃酸进行检测方法的
摸索 。
1　材料
1.1　仪器
Waters超高效液相色谱仪 (Waters ACQUITY
UPLC)Acquity PDA 检测器;色谱柱:Waters AC-
QUITY UPLC HSS T3(1.8μm 2.1 mm×100 mm)序
列号 01093818515745;Cleanert固相萃取小柱(型
号:PAX ,规格:60 mg/3 mL)。
1.2　试药
马兜铃酸A对照品(中国药品生物制品检定
所 ,供含量测定用 ,批号:110746-200406);复方南
星止痛膏(江苏南星药业有限责任公司生产 ,批
号:081201 、090201 、090301);乙腈为色谱纯 ,其余
所用试剂为分析纯。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
Waters ACQUITY UPLC HSS T3 色谱柱(1.8
μm , 2.1 mm ×100 mm);检测波长 250 nm ;流动
相:乙腈-0.1%甲酸(35∶65);流速 0.4 mL/min ,
柱温:45℃。
2.2　溶液的制备
(1)对照品溶液的配制:精密称取马兜铃酸A
对照品适量 ,加甲醇制成每 mL 含 5.42 μg 的溶
液;
(2)制剂供试品溶液的制备[ 2] :取本品 6片 ,
刮取药膏 ,称定质量 ,以 80 mL 甲醇回流 1 h ,滤
过 ,取滤液9 mL ,加 8mol/L的NaOH溶液 1 mL调
节溶液 pH值到10以上 ,精密移取 2 mL 溶液 ,加
到用甲醇 、水预洗平衡过的 PAX固相萃取小柱
上 ,分别以甲醇 2 mL ,水-甲醇(4∶6)2 mL清洗 ,再
以2%甲酸-乙腈-甲醇(1∶4∶5)洗脱液4 mL 洗脱 ,
收集洗脱液于 5 mL 量瓶中 ,用洗脱液补足并混
匀 ,作为制剂供试品溶液 。
收稿日期:2009-04-11;修稿日期:2009-05-09
作者简介:殷书梅(1966-)女 ,江苏如皋人 ,江苏省南星药业有限责任公司高级工程师 ,副主任中药师。
—396— 南京中医药大学学报 2009 年 9月第 25卷第 5 期JOURNAL OF NANJINGUNIVERSITY OF TCMVol.25 No.5 Sept.2009
DOI :10.14148/j.issn.1672-0482.2009.05.011
　　(3)中间体供试品溶液的制备:取中间体混合
药粉 4 g ,加甲醇 50 mL ,回流提取 1 h ,滤过 ,滤液
以0.45 μm的微孔滤膜过滤 ,作为中间体供试品
溶液 。(本品工艺为生药原粉入药 ,中间体即为除
基质以外的混合药材原粉)。
(4)药材供试品溶液的制备:取细辛药材粉末
2 g ,加甲醇 25 mL ,回流提取 1 h ,滤过 ,滤液以
0.45μm 的微孔滤膜过滤 ,作为药材供试品溶液 。
(5)阴性供试品溶液的备:按处方组成 ,取除
细辛以外的其余药材 ,按照制备工艺要求制成不
含细辛的阴性制剂 ,再按照制剂供试品溶液制备
方法制成阴性供试品溶液 。
2.3　标准曲线
取马兜铃酸 A 对照品贮备液 ,用甲醇稀释制
成2.168 、4.336 、6.504 、8.672 和 10.84 μg/mL 系
列对照品溶液 ,各进样 1 μL ,测定马兜铃酸 A的
峰面积值 ,回归处理所得数据 ,所得回归方程为:
A=10 795.39C-245.8 , r=0.999 9。
2.4　方法学考察
(1)空白干扰试验:取对照品溶液 、药材供试
品溶液及阴性供试品溶液 ,按照拟定色谱条件测
定 ,结果药材供试品色谱中 ,在与对照品色谱相应
的位置上 ,有相同保留时间的色谱峰 ,而阴性供试
品溶液在此保留时间无干扰(由于制剂供试品色
谱中未见马兜铃酸 A色谱峰 ,故用药材供试品进
行对照)。
(2)精密度试验:取马兜铃酸 A对照品溶液 1
μL(2.168 μg/mL),重复进样 6次 ,马兜铃酸 A峰
面积平均值为 23 233 , RSD=0.23%。
(3)检测限试验:在上述色谱条件下 ,取对照
品溶液进行逐步稀释 ,进样测定其中的马兜铃酸
A ,结果在信噪比 3∶1时 ,马兜铃酸的最低检出限
为0.1 ng 。
(4)重复性试验:取同一批号的样品平行 6
份 ,照“制剂供试品溶液的制备”项下制备供试品 ,
按照上述色谱条件各进样 5 μL 测定 ,结果均未检
出马兜铃酸A色谱峰。
(5)加样回收率试验:取同一批号的样品 3
片 ,刮取药膏 ,精密称定 ,平行 6份 ,分别加入马兜
铃酸A对照品 2.168 μg ,按照“制剂供试品溶液的
制备”项下制备供试品溶液 ,各进样 5 μL ,测定其
含量 ,计算回收率均值为 93.2% ,RSD 为 2.4%。
2.5　含量测定
分别用 3批细辛药材 、中间体及制剂按照上
述药材 、中间体及制剂供试品处理方法处理后进
样 ,结果 3批中间体及制剂中均未测出马兜铃酸
A ,3批药材中检出微量马兜铃酸A ,见表1 ～ 3。
表 1　3 批细辛药材中马兜铃酸 A含量
批号 马兜铃酸A含量/μg·g-1
平均含量
/μg·g-1
080501 1.21
080801 1.70 1.96
081201 2.96
表 2　3批中间体中马兜铃酸 A 含量
中间体批号 马兜铃酸A 含量/μg·g-1
081201 未检出
090201 未检出
090301 未检出
表 3　3 批制剂成品中马兜铃酸 A含量
成品批号 马兜铃酸A 含量/μg·g-1
081201 未检出
090201 未检出
090301 未检出
3　讨论
细辛原药材中马兜铃酸 A 的平均含量为
1.96 μg/g 。在复方南星止痛膏中间体及制剂中
均未能检出马兜铃酸 A。如果按照原药材中马兜
铃酸 A的平均含量进行折算 ,每克制剂中含马兜
铃酸A约为 0.05 μg ,远低于口服制剂药品中马兜
铃酸 A含量不得高于 0.5 μg/g的标准(香港特别
行政区卫生署药品注册要求)。复方南星止痛膏
为外用制剂 ,以处方中细辛所含马兜铃酸 A的研
究数据说明 ,本产品临床应用是安全可靠的 。
笔者在研究制剂供试品处理方法时 ,曾经尝
试多种提取方法 ,但由于本制剂中药味及基质成
分较多 ,且均为原药材生粉入药 ,而马兜铃酸 A
为其中所含的微量成分 ,因此预试中杂质峰干扰
比较严重 ,最终选用了适于富集酸性化合物的
PAX固相萃取小柱 ,富集供试品中的马兜铃酸 A ,
处理后的样品杂质峰明显减少 。
参考文献:
[ 1] 谢昭明 ,李顺祥 , 刘杰.细辛不同部位马兜铃酸 A 的含
量测定[ J] .中成药 , 2007 , 29(12):1808-1810.
[ 2] 薛燕.UPLC-UV测定细辛地上和地下部位中的马兜铃
酸A [ J] .药学学报 , 2008 , 43(2):221-22.
(编辑:李伟东)
—397—殷书梅 , 等:UPLC 法测定复方南星止痛膏中马兜铃酸 A 的含量　第 5期