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不同产地苕叶细辛中马兜铃酸A的HPLC测定



全 文 :湖 北 农 业 科 学 2015 年
收稿日期:2014-11-05
基金项目:贵州省科技厅自然科学基金项目[黔科合 J 字 LKZS(2012)15];遵义市科技局项目[(2011)11 号]
作者简介:高智席(1969-),男,重庆万州人,教授,主要从事药物和食品分析研究,(电话)0852-8950730(电子信箱)wyhgzx@163.com。
第 54 卷第 12期
2015年 6 月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol. 54 No.12
Jun.,2015
苕叶细辛(Asarum insigne Diels)为马兜铃科细
辛属植物,常作中草药使用,以全草入药,具有祛风
散寒、止咳祛痰、活血解毒、止痛之功效,临床上用
于治疗风寒感冒、风湿性关节疼痛、咳嗽、跌打损
伤等。马兜铃酸 A 为硝基菲酸类化合物,可作用肾
小管上皮细胞、肾间质成纤维细胞,降低肾小球滤
过率,使血、尿肌酐增加,引起肾衰竭,急性马兜铃
酸肾病、肾小管功能障碍型马兜铃酸肾病、慢性马
兜铃酸肾病及癌症等[1,2]。因此分析苕叶细辛中的马
兜铃酸 A 对指导苕叶细辛的用药量具有重要意
义。 目前分析马兜铃酸 A 的方法包括高效液相色
谱法 [3,4]、薄层色谱法[5]。 本试验建立了反相高效液
相色谱法测定马兜铃酸 A 含量方法, 其灵敏度高,
分离效果好,为细辛属植物中马兜铃酸 A 的含量分
析提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料
马兜铃酸 A 标准品(110746-200507)购于中国
药品生物制品检定所,分析纯甲醇购于成都市科龙
化工试剂厂,去离子水。 所有溶液使用前均由 0.45
μm 孔径的滤膜过滤。 市售 5 批苕叶细辛样品由遵
义医学院黎刚老师鉴定,0~5 ℃保藏待用。
1.2 仪器
2010AT型高效液相色谱仪,LC solution工作站,
CBM-20A 控制器,SPD-M20A 二极管阵列检测器,
不同产地苕叶细辛中马兜铃酸 A的 HPLC测定
高智席 1,2,黎 司 1,江忠远 1,胡海军 2,韩 畅 2,吕朝燕 2
(1.贵州省黔北特色资源应用研究实验室,贵州 遵义 563002;2.遵义师范学院农业科技学院,贵州 遵义 563002)
摘要:建立了反相高效液相色谱法测定苕叶细辛(Asarum Insigne Diels)中马兜铃酸 A 含量的方法。 色谱
柱为 Shim-pack VP-ODS(150 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇 ∶0.1%冰乙酸=70∶30(V / V)为流动相,检测波长
为 225 nm。 结果表明,马兜铃酸 A 在 0.087 4~8.098 0 μg / mL(R2=0.999 7)范围内与峰面积呈良好线性关
系,平均回收率为 96.95%~99.42%,相对标准偏差为 2.63%~3.72%,检测限为 0.003 μg / mL。 该方法灵敏
度高、操作简便、结果准确、重复性好,可用于苕叶细辛中马兜铃酸 A 的测定。
关键词:苕叶细辛(Asarum Insigne Diels);马兜铃酸 A;反相高效液相色谱法
中图分类号:O657.7+2 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2015)12-3008-02
DOI:10.14088 / j.cnki.issn0439-8114.2015.12.054
Determination of Aristolochic acid A in Asarum Insigne Diels
from Different Places by HPLC
GAO Zhi-xi1,2, LI Si1, JIANG Zhong-yuan1, HU Hai-jun2, HAN Chang2, L譈 Chao-yan2
(1. Laboratory of Utilization Research on Characteristic Resources in Qianbei, Zunyi 563002, Guizhou, China;
2.institute of Agricultural science and Technology, Zunyi Normal College,Zunyi 563002, Guizhou, China)
Abstract: Aristolochic acid A in Asarum insigne Diels was determined by reversed-phase high performance liquid chromatog-
raphy (HPLC). The analysis was performed with Shim-pack VP-ODS column(150 mm × 4.6 mm,5 μm) with the mobile phase
of MeOH∶0.1%acetic acid=70∶30 (V / V) at 225 nm. The results showed that the Aristolo chicacid A had a good linear rela-
tionship in the range of 0.087 4~8.098 0 μg / mL (R2=0.999 7). The average recoveries were 96.95%~99.42% with RSD of
2.63%~3.72%, and the detection limit was 0.003 μg / mL. This method is sensitive, convenient, accurate and reproducible for
determining aristolochic acid A in Asarum insigne Diels.
Key words: Asarum insigne Diels; aristolochic acid A; RP-HPLC
第 12 期
SIL-20A自动进样器 (日本岛津公司生产),SY3200
超声波清洗器(上海声源超声波仪器设备有限公司生
产),电子天平(上海越平科学仪器有限公司)。
1.3 方法
1.3.1 色谱条件 色谱柱 Shim-pack VP-ODS(150
mm×4.6 mm,5 μm); 流动相甲醇:0.1%冰乙酸水溶
液 (70∶30,V / V); 紫外检测波长 225 nm; 流速 0.6
mL / min;进样量 20 μL。
1.3.2 标准溶液的配制 称取干燥至恒重的马兜
铃酸 A对照品 13.6 mg 于 25 mL 容量瓶中, 加甲醇
25 mL,超声处理 25 min,溶解放冷,加甲醇至刻度,
摇匀,即为 544 μg / mL 马兜铃酸 A 储备液,冷藏备
用。 取配好的标准溶液 1.0 mL 于 25 mL 容量瓶中,
甲醇定容,摇匀,同法按该比例稀释获得梯度溶液,
冷藏备用。
1.3.3 样品前处理 称取干燥的苕叶细辛药材粉
末约 1 g 于 25 mL 容量瓶中, 加入含 10%(V / V)甲
酸的丙酮溶液 20 mL,浸泡 7 d,超声提取 45 min,放
冷,定容至刻度,摇匀,经微孔滤膜(0.45 μm)过滤,
冷藏待测。
2 结果与分析
2.1 检测波长的选择
通过二极管阵列检测器在线扫描马兜铃酸 A
标准溶液,其紫外-可见吸收光谱见图 1,其 3 个吸
收峰的最大吸收波长分别为 206、225 和 250 nm。
考虑溶剂基体干扰、灵敏度、分离度等因素,选定
225 nm为检测波长。 该条件下,对样品测定无影响,
且色谱峰形较好。
2.2 流速的选择
以甲醇和 0.1%冰乙酸 (V / V=70∶30) 为试剂空
白,测定不同流速(0.5~1.2 mL / min)对标准品保留
时间的影响, 结果表明当流速为 0.6 mL / min 时,马
兜铃酸 A 的出峰时间较早,分离效果较好,故选择
流速为 0.6 mL / min。
2.3 流动相的选择
分析不同体积比例的甲醇与 0.1%冰乙酸流动
相,由 50∶50(V / V)增至 95∶5(V / V),结果表明,马兜
铃酸 A 的保留时间随甲醇比例升高而减少,峰面积
也逐渐增大, 故选择甲醇∶0.1%冰乙酸水溶液为 70∶
30 (V / V)作为流动相。
2.4 线性范围及检出限
将系列梯度浓度的标准液进样分析,绘制峰面
积 A 对浓度 C 的标准曲线, 得线性方程为 Y=178
503X+51 470,R2=0.999 7,线性范围为 0.087 4~8.098
0 μg / mL;马兜铃酸 A 保留时间为 15 min(图 2 和图
3)。按上述色谱条件测定 5 次,求出其标准偏差,方
法检出限为 0.003 μg / mL。
2.5 方法评价
取同一批苕叶细辛药材粉末 6 份,平行测定马
兜铃酸 A 的含量,其 RSD 为 2.26%,表明方法重复
性良好; 取样品溶液分别于 0、2、4、8、12、24 h 测定
马兜铃酸 A,其峰面积 RSD 为 1.78%,表明样品溶
液在 24 h内稳定性良好。
在贵州苕叶细辛样品分别添加 0.01、0.05、0.10
mg / kg 3 个水平的马兜铃酸 A,经上述方法分析,计
算回收率在 96.95%~99.42%之间 ,RSD (n=3)为
2.63%~3.72%,该法灵敏度、精密度、重复性以及回
收率符合相关标准要求,适用于苕叶细辛样品中马
兜铃酸 A的测定。
2.6 样品测定
测定不同产地苕叶细辛样品中的马兜铃酸 A
200 300 400 500 600
波长//nm
2.00
1.75
1.50
1.25
1.00
0.75
0.50
0.25
0.00



//a
.u
.
图 1 马兜铃酸 A 的紫外扫描图
225
250
320
392
图 2 标准品马兜铃酸 A 的色谱图
0 5 10 15 20
时间//min
1
图 3 贵州苕叶细辛中马兜铃酸 A 的色谱谱图
0 5 10 15 20
时间//min
1
高智席等:对不同产地苕叶细辛中马兜铃酸 A 的 HPLC 测定 3009
湖 北 农 业 科 学 2015 年
表 1 不同产地苕叶细辛中的马兜铃酸 A 测定结果
产地
贵州
广西
广东
湖北
新疆
平均含量//mg/g
0.029
0.027
0.028
0.025
0.026
含量,结果见表 1。
3 小结
本试验建立了苕叶细辛中马兜铃酸 A 的 RP-
HPLC的测定方法。 结果表明,来源于贵州、广西、广
东和新疆的苕叶细辛中的马兜铃酸 A 含量均高于
0.025 mg / g。 该方法检出限低、重现性好、精密度高,
并且操作简便、快速,适用于苕叶细辛样品中马兜
铃酸 A的测定。
参考文献:
[1] 杨 莉,庄 洁,李东梅.含马兜铃酸成分药物的安全应用[J].首
都医药,2005(5):38-40.
[2] 鲁 静 . 马兜铃相关中药材的探讨 [J]. 中国药品标准,2002,
3(2):49-51.
[3] 曹 蕊,张春红,王 铮,等.RP-HPLC 法测定不同方法炮制关
木通中马兜铃酸的含量[J].现代农业科技,2009(10):14-15,17.
[4] 韩 娜,路金才,毕开顺,等.RP-HPLC 法测定 14 种中药材中马
兜铃酸 A的含量[J].沈阳药科大学学报,2008,25(2):115-118.
[5] 黄顺旺.北细辛中不含马兜铃酸的薄层色谱法鉴别[J].安徽医
药,2003,7(4):299-300.
(责任编辑 周有祥)
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收稿日期:2015-03-25
基金项目:海南省自然科学基金项目(314060)
作者简介:王驭陌(1994-),男,安徽安庆人,在读本科生,研究方向为机械设计,(电子信箱)498014906@qq.com;通信作者,张 燕(1978-),女,
湖北鄂州人,副教授,硕士,主要从事机电一体化研究,(电话)13976928893(电子信箱)z_yhs@163.com。
第 54 卷第 12期
2015年 6月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol. 54 No.12
Jun.,2015
天然橡胶是经济建设和国防工业的重要原料,
是四大基础工业原料中惟一的可再生资源[1]。 世界
上部分或完全使用天然橡胶制成的物品已达 7 万
余种,天然橡胶产业已成为许多热带国家和地区经
济的主要组成部分[2]。目前,获取橡胶产量的惟一途
径是割胶[3],但是农垦老龄胶工面临退休,而年青人
又由于经验不足无法进行割胶,且大多不愿从事这
一工作,出现了胶工群体年龄断层现象[4]。割胶是一
项需要较高技术的手工工作,胶工的割胶技术和割
胶工具的自动化程度不仅会影响橡胶产量,还会影
基于 TRIZ理论的智能割胶刀设计
王驭陌,张 燕
(海南大学机电工程学院,海口 570228)
摘要:运用 TRIZ 理论的冲突矩阵和创新原理,对传统割胶刀进行了改进。 结果表明,该割胶刀实现了同
时测量已割树皮厚度和树皮总厚度,大大减少了测量时间,并提高了测量的准确性。
关键词:TRIZ 理论;容栅技术;树皮厚度;量化
中图分类号:TH16 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2015)12-3010-05
DOI:10.14088 / j.cnki.issn0439-8114.2015.12.055
Design of Intelligent Tapping Knife Based on TRIZ Theory
WANG Yu-mo, ZHANG Yan
(College of Mechanical And Electrical Engineering, Hainan University, Haikou 570228, China)
Abstract: The conflict matrix and innovation principles of TRIZ theory was used, the traditional tapping knife was improved
and realized the visual experience. The results showed that the tapping knife could measure thinkness of the cut bark and the
total bark at the same time, gkatly measrue time, and improve measrue realuce accuracy.
Key words: TRIZ theory; capacitive technology; bark thickness; quantify