全 文 ：照溶液。分别吸取供试品溶液 、空白对照溶液及对照品溶液
各 5μL ,分别点于同一硅胶 G 薄层板上 , 以三氯甲烷-丙酮
-甲酸(12∶1∶0.6)为展开剂 , 展开 , 取出 , 晾干 , 喷以新鲜
配制的 5%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中 , 在与对照品
色谱相应的位置上 , 显相同颜色的斑点。空白对照无干扰 ,
结果见图 2。
1缺丹参阴性 、2 、6原儿茶醛对照品 、3～ 5供试品溶液
图 2　原儿茶醛 T LC图
3　讨论
3.1 活血活络颗粒原制剂标准仅仅是用丹参对照药材作为
衡量指标 ,而且采用药典方法 , 跑出的斑点并不好 , 因此 , 我
们对此进行改进。鉴于该样品中丹参为水提 ,因此在对此进
行薄层鉴别时我们选用水溶性的丹酚酸 B 和原儿茶醛作为
指标 ,以此来制定其标准。
3.2 提取方法的考察　在供试品的处理方法选择中 , 采用甲
醇超声 、75%甲醇回流 、75%甲醇超声等方法 ,由于制剂中含
有大量的糖类物质 ,得到的丹酚酸 B 和原儿茶醛斑点均不明
显 , 且杂质较多 ,干扰十分严重;试验发现采用水提并加入盐
酸进行酸化得到的斑点清晰 , 且无干扰 ,能有效的除去杂质。
3.3 丹酚酸 B的鉴别　关于丹酚酸 B 的薄层鉴别方法有很
多文献均有报道[ 1 ～ 4] ,但我们参照文献方法如:三氯甲烷-
丙酮-甲酸(8∶1∶1)等展开系统进行多次试验 , 得到的斑
点拖尾严重 , 且 Rf 值较低。而选用展开系统三氯甲烷-丙
酮-甲酸(6∶3∶1.8), 则得到的斑点清晰 , Rf 值为 0.55。
3.4 原儿茶醛的鉴别　原儿茶醛的薄层色谱鉴别方法参照
文献[ 5～ 6]方法进行多次试验 , 结果选用展开系统三氯甲烷-
丙酮-甲酸(12∶1∶0.6)斑点清晰 , Rf值为 0.6。
根据该颗粒剂制备工艺的特点 , 考虑到原质量标准的不
足 ,选择丹参中水溶性成分丹参素和原儿茶醛作为定性控制
指标并进行了薄层色谱考察 , 结果该薄层色谱特征明显 , 简
便可靠 、专属性强 、重现性好。能较全面地反映活血活络颗
粒的内在质量 , 可用于该制剂的质量控制。
参考文献
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HPLC法测定单叶细辛中马兜铃酸 A的含量
刘晋仙 ,印成霞
(东营市药品检验所 , 山东 东营 257091)
摘要:目的　HPLC 法测定单叶细辛中马兜铃酸 A 的含量。方法　采用 Sunfir e C18柱(150mm×4.6mm , 5μm);流动相:
甲醇-水-醋酸(60∶36∶4);检测波长 316nm。结果　线性范围为 6.60 ～ 39.60μg · mL-1(r =0.9995), 平均回收率为
95.8%, RSD 为 0.8%(n =6)。结论　该方法简便 、准确 , 可用于单叶细辛中马兜铃酸 A的质量控制。
关键词:单叶细辛;马兜铃酸 A;高效液相色谱法
中图分类号:R927.2　文献标识码:A　文章编号:1672-7738(2010)10-0593-03
Determination of aristolochic acid A in Asarum himalaicum by HPLC
LIU Jin-xian ,YIN Cheng-xia
(Dongy ing Institute fo r D rug Contro l , Dongy ing 257091)
ABSTRACT:OBJECTIVE 　 To establish a method fo r determina tion of aristo lo chic acid A in Asarum himalai-
cum.METHODS　The conditions of H PLC w ere Sunfir e C18 colum n(150mm×4.6mm , 5μm),methano l-w ater-acetic(60∶36
∶4)as mobile pha se.The detection wavelength was 316nm.RESULTS　The linear range w as 6.60 ～ 39.60μg · mL-1(r =
·593·齐鲁药事·Qilu Pharmaceutical Af f airs 2010 Vol.29 , No.10
0.9995), the ave rage recovery w as 95.8%, and the RSD was 0.8%(n =6).CONCLUSION　The medthod w as sim ple , accur ate
and can be used to contr ol qua lity of a ristolochic acid A in Asarum himalaicum.
KEY WORDS:Asarum himalaicum ;Aristolo chic acid A;HPLC
　　单叶细 辛系 马兜 铃科 植物盆 草细 辛(Asarum
himalaicum HOOK.f.et.Thoms.)的带根全草 , 其柄细长 、
叶片单生[ 1] 。《神农本草经》谓细辛“味辛温 ,主咳逆 、头痛 、
脑动 、百节拘挛 、风湿痹痛 、死肌。久服明目 、利九窍 、轻身长
年。”现代中药学认为其功效为祛风散寒 、通窍止痛 、温肺化
饮 ,适用于风寒感冒 、阳虚外感 、头痛 、牙痛 、痹痛 、鼻渊 、寒饮
伏肺等证。该品种在甘肃各地及其周边多个省区普遍作为
细辛代用品广泛使用 ,西北地区除甘肃外 , 陕西 、宁夏等省区
也有分布 ,西南地区的四川 、云南 、贵州 、西藏以及湖北 、河南
等省也有分布 ,且均有临床使用。其在各地的名称则有毛细
辛 、水细辛 、土细辛 、土癞蜘蛛香等俗名 , 因云 、贵 、川 、藏并有
出产和应用 ,又称西南细辛[ 2] 。本实验采用高效液相色谱法
对单叶细辛中马兜铃酸 A 的含量进行测定。 该方法简便 、
准确 ,可用于单叶细辛中马兜铃酸 A 的质量控制依据。
1　仪器与试药
美国Wate rs600 型高效液相色谱仪;Water s2487 型紫
外—可见检测器;Empowe r色谱工作站。甲醇为色谱醇(天
津光复),娃哈哈纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司), 其余试
剂均为分析纯。
对照品马兜铃酸 A(批号:110746-200406)由中国生物
制品检定所提供。
单叶细辛采自甘肃省岷县 , 购于兰州黄河药市 , 药材样
品由甘肃中医学院李成义教授鉴定为 Asarum himalaicum
HOOK.f.et.Thoms.的带根全草。
2　方法与结果
2.1 色谱条件 　Waters 公司的 Sunfire C18 柱(150mm ×
4.6mm , 5μm), 保护柱为 Waters Symmetry C18 保护柱
(10mm×4.6mm , 5μm)。流动相:甲醇-水-乙酸(60 ∶36
∶4),流速:1m L· min-1 ,检测波长 316nm ,柱温为 30℃, 进
样量为 20μL。分别取对照品溶液和供试品溶液各 20μL 注
入液相色谱仪中 ,马兜铃酸 A 分离度大于 1.5。
2.2 供试品溶液的制备　取单叶细辛药材细粉约 6g , 精密称
定, 置 100mL锥形瓶中 ,加甲醇 100mL , 精密称重 , 密塞 ,超声
处理 40min(10∶10∶10∶10min)、取出 , 冷却至室温 , 精密称
重, 补足损失的甲醇量, 摇匀 , 滤过 ,弃去初滤液约 15mL ,精密
吸取续滤液 75mL ,水浴蒸干 , 残渣加 0.1mo l· L-1氢氧化钠
溶液 25mL分次溶解 , 转入分液漏斗中, 加三氯甲烷萃取 3
次, 每次15mL弃去三氯甲烷溶液 、碱水溶液加 5mol· L-1盐
酸溶液调 pH=2 ,加三氯甲烷萃取 4 次, 每次 15mL ,合并三氯
甲烷溶液 ,水浴蒸干 , 残渣加甲醇分次溶解 , 转入 10mL 容量
瓶中 , 加甲醇至刻度 ,摇匀。作为供试品溶液。
2.3 对照品溶液的制备　取干燥至恒重的马兜铃酸 A 对照
品 6.60mg , 精密称定 , 置 5m L 容量瓶中 , 加甲醇约 5mL 超
声处理 10min 使溶解 ,放冷 , 加甲醇至刻度 ,摇匀 。
2.4 线性关系考察　精密吸取 1.32mg · mL-1的马兜铃酸
A 对照品溶液 5 、10、15 、20 、25、30μL 注人高效液相色谱仪 ,
测定峰面积 , 以浓度为横坐标 ,峰面积为纵坐标 , 绘制标准曲
线 , 回归方程为:Y =4.29E+004 X +2.67E+004 , r =
0.9995。结果表明马兜铃酸 A 进样量在 6.60 ～ 39.60μg 范
围内有良好线性的关系。
2.5 精密度试验　按样品制备方法制备供试品溶液 , 连续进
样 5 次 ,结果马兜铃酸 A 成分峰的 RSD 为 0.31%, 表明精
密度良好。
2.6 稳定性试验　按样品制备方法制备供试品溶液 ,在 0 , 2 ,
4 , 8 , 10h 进样分析 ,测定 HPLC 色谱图 , 结果马兜铃酸 A 的
RSD 为 0.96%,表明样品在 10h 内稳定。
2.7 重现性试验　取同一批单叶细辛供试品 , 按样品制备方
法制备供试品溶液 5 份 , 测定 HPLC 色谱图 , 结果马兜铃酸
A 的 RSD 为 0.63%, 表明方法重现性良好。
2.8 加样回收率试验　取同一批样品 ,共 5 份 , 每份约 1.0g ,
精密称定 , 分别加入 10.2mg 马兜铃酸 A(精密称取马兜铃
酸 A 对照品 , 加甲醇制成 1.02mg ·mL -1的溶液 , 精密吸取
10.0mL 加入样品), 按以上方法制备 , 精密量取 20μL 注入
液相色谱仪 , 根据色谱图 ,用标准曲线法测定各成分含量 , 结
果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果
序号 已知量(mg) 加样量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) x(%) RSD(%)
1 11.4576 13.20 24.0768 95.8
2 11.6431 13.20 24.2755 95.7
3 11.9856 13.20 24.6312 95.8 95.8 0.8
4 11.3643 13.20 24.0099 95.8
5 11.7845 13.20 24.4301 95.8
2.9 样品的含量测定　按样品供试液制备方法制得样品 5
批 , 每批样品进样20μL , 用标准曲线法计算马兜铃酸 A 的含
量 , 结果见表 2。
表 2 单叶细辛含量测定结果(mg· g -1)
成分
样品
1 2 3 4 5 平均值
马兜铃酸 A 11.474 11.964 11.577 11.381 11.475 11.574
3　讨论
3.1 本实验考察了中科院大连物化所 Kromasil C18色谱柱
(150mm×4.6mm , 5μm)和 Waters 公司的 Sunfire C18色谱
柱(150mm×4.6mm , 5μm)的分离效果 , 按拟定的色谱条件
使用两种色谱柱对同一样品进行分析 ,结果以 Sunfire C18色
谱柱分离的峰数较多 , 峰形较好 , 基线平整 , 故选用 Wate rs
公司的 Sunfire C18柱 , 保护柱为 Waters Symmetry C18 。 流
动相考察了乙腈-水 、乙腈-磷酸水溶液 、甲醇-水 、甲醇-
醋酸溶液等不同溶剂系统 , 结果表明甲醇-水-乙酸(60∶
·594· 齐鲁药事·Qilu Phar maceu tical Af f ai rs 2010 Vol.29 , No.10
36∶4)条件下 ,色谱图基线平稳 ,色谱峰分离度好且保留时
间适宜。在前述色谱条件下进行测定 , 选择了 230nm 、
280nm 、316nm 和 340nm 波长 , 结果以 316nm 色谱图峰形
好 ,出峰数目适中 , 各色谱峰相互之间分离度好 ,故检测波长
定为 316nm [3] 。
3.2 单叶细辛在甘肃及周边省区 、西南地区有着长期使用的
历史 ,且迄至今日仍是甘肃省临床所用细辛的主干品种。但
目前气缺乏对该种细辛的药效及毒性研究 ,考虑临床实际应
用主要以煎剂为主 , 因此应结合混用挥发油的方式进行研
究 , 方可有可靠的临床参考价值。
参考文献
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量[ J].中国药学杂志 , 2005 , 40(20):1579～ 1580.
RP-HPLC法测定马来酸氟吡汀胶囊的含量
汪海洋1 , 2 ,张延岭1 ,聂磊1
(1.山东大学药学院 ,山东 济南 250012;2.山东省医学科学院药物研究所 , 山东 济南 250062)
摘要:目的　建立反相高效液相色谱法测定马来酸氟吡汀胶囊中马来酸氟吡汀含量的方法。 方法 　采用 phenomenex
C18柱(250mm×4.6mm , 5μm), 流动相组成为甲醇-水-甲酸(50∶50∶1),流速 0.5m L· min -1 ,检测波长为 347nm , 进样量
为 20μL , 。结果　马来酸氟吡汀的浓度在 36.36 ～ 84.84μg ·mL-1范围内线性关系良好 , 相关系数 r =1.0000。平均回收率
为 99.86%, RSD 为 0.74%。结论　本法简便 、快捷 、准确 ,可用于马来酸氟吡汀胶囊中马来酸氟吡汀的含量测定。
关键词:高效液相色谱法;马来酸氟吡汀;含量测定
中图分类号:R927.2　文献标识码:A　文章编号:1672-7738(2010)10-0595-03
Determination of Flupirtine Maleate Capsules by RP-HPLC
WANG Hai-yang1 , 2 ,ZHANG Yan-ling1 , NIE Lei1
(1.School of Pha rmaceutica l Sciences , Shandong Univer sity , Jinan 250012;
2.Institute o f Materia Medica , Shandong Academy of Medical Sciences , Jinan 250062)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To establish a method fo r determina tion of flupir tine malea te in Flupirtine Maleate Capsules by
RP-HPLC.METHODS　The RP-HPLC analy sis used phenomenex C18(250mm ×4.6mm , 5μm)a s analy sis column and the
mobile phase w as methano l-w ater-fo rmic acid (50∶50∶1)with the flow rate of 0.5mL· min -1.The detection w aveleng th
was 347nm.The sample size wa s 20μL.RESULTS　The linear range of flupir tine maleate w as 36.36 ～ 84.84μg ·mL -1 , r =
1.0000.The aver age recovery wa s 99.86%, The RSD w as 0.74%.CONCLUSION　The method was simple , rapid , accur ate and
can be used to de te rmine the f lupirtine malea te in F lupir tine Maleate Capsules.
KEY WORDS:RP-HPLC;F lupir tine Maleate;Determination
　　马来酸氟吡汀(F Iupirtine)是一种非阿片类中枢性镇痛
药物。由 Bebenburg 等人合成成功 , 商品名为科达得龙
(Katado lon),德国 AWD公司生产上市[ 1] , 目前尚未见国内
企业申报注册。国外已有文献报道[2] ,采用高效液相色谱—
串联质谱法测定马来酸氟吡汀的含量方法。质谱检测器灵
敏度高 ,但价格昂贵。一般高效液相色谱仪都配有紫外检测
器。本文基于 H PLC-UV 建立马来酸氟吡汀胶囊中马来
酸氟吡汀含量的测定方法 ,该方法简便 、快速 、准确 , 可用于
马来酸氟吡汀胶囊中马来酸氟吡汀含量的测定 ,同时也为该
药物质量标准的建立及原料药的国内注册提供技术支持和
依据。
1　仪器与试剂
1.1 仪器　Agilent 1100 高效液相色谱仪及色谱工作站;Ag-
ilent 紫外检测器;分析天平;岛津 UV-2401PC 紫外可见分
光光度计。
1.2 试剂　马来酸氟吡汀对照品(批号:090921;自制),马来
酸氟吡汀胶囊(规格:0.1g;批号:091123;自制), 甲醇(色谱
纯 , 天津四友精细化学品有限公司), 超纯水 , 甲酸(色谱纯 ,
天津科密欧化学试剂有限公司)。
2　色谱条件
采用 Phenomenex C18柱(250mm×4.6mm , 5μm), 以甲
醇-水-甲酸(50 ∶50 ∶1)为流动相 , 流速为 0.5mL ·
·595·齐鲁药事·Qilu Pharmaceutical Af f airs 2010 Vol.29 , No.10