全 文 ：[ 收稿日期] 2007-03-27
[ 基金项目] 上海市卫生局科研基金资助课题(课题编号:
044111)
[ 作者简介] 金周慧(1969- ),上海人 ,医学硕士 ,主要从事肾病
研究。
中药园地
反相高效液相色谱法测定寻骨风中马兜铃酸 A 的含量
金周慧 ,周雯静
(上海市普陀区利群医院 ,上海 200333)
　　[ 摘要] 目的:应用高效液相色谱法测定寻骨风中马兜铃酸 A 的含量。方法:以 Diamonsil C18为色谱柱(250 mm ×
4. 6 mm , 5 μm)。流动相:甲醇∶水(4∶1);流速:1. 0 ml /min;柱温:35 ℃;检测波长:315 nm。结果:该方法的线性范围为
0. 005 ～ 0. 1 mg ,进样量与其峰面积之间呈良好的线性关系 , r=0. 9998 , RSD为 0. 94%( n =4),表明进样精密度良好。结论:
本方法操作简便 ,结果准确 , 专属性强 ,适用于寻骨风中马兜铃酸 A 的含量测定和质量控制。
[ 关键词] 高效液相色谱法;寻骨风;马兜铃酸 A
[ 中图分类号] 284. 1　　　[ 文献标识码] A　　　[文章编号] 0257-358X(2007)08-0567-02
　　1993年 ,比利时医生首先发现服用含有广防己
的苗条丸后发生急性肾衰竭的病例 , 于是提出了
“CHINESE HERBS NEPHROPATHY , CHN ”[ 1] 。
1999年 ,英国报道了 2例因服用含关木通的草药茶
治疗湿疹而导致晚期肾衰竭的病例[ 2] 。2000 年 7
月 ,美国 FDA下令禁止马兜铃属草药进口 ,并决定
收回市场上销售的含马兜铃酸的中成药。随后法
国 、加拿大 、德国 、西班牙等国也作出禁令。2001年
1月 ,马来西亚全面禁止销售含有马兜铃酸 A 成分
的中药 ,取消龙胆解毒片 、百咳灵片 、气管炎咳喘片 、
甘露消毒丹 、排石汤等 17种成药的注册 。一系列事
件使中草药肾病这个概念为国内外学者所接受 ,但
此概念并不确切 ,因为上述病例只是少数中草药中
的主要毒性成分马兜铃酸所致 ,故国内大多数学者
称之为马兜铃酸肾病(Aristo lochic Acid Nephropa-
thy ,AAN)[ 3] 。我们认为这样命名其实还不够确
切 ,因为肾病的发生还与药物使用的剂量 、用药时间
以及配伍有关。应该讲 ,与西药一样 ,中药同样存在
着一定的不良反应 ,有必要对中药的毒性成分和含
量加以研究。有鉴于此 ,我们应用反相高效液相色
谱法测定马兜铃科植物棉毛马兜铃的干燥根茎寻骨
风中的马兜铃酸 A 的含量 ,以便为控制药物质量 、
评价用药剂量提供依据。
1　试剂和仪器
高效液相色谱仪(日本岛津 LC-4A),数据处理
机(日本岛津 C-R2AX), 紫外检测器(日本岛津
S PD-2AS), Cary 2390 型分光光度计(美国),CSF-
A 超声波清洗器(上海超声波仪器厂)。马兜铃酸
A对照品 ,由 W&Z 对照品发展公司提供 ,批号为
050170。中药样品:寻骨风(批号:HY2005071502),
由上海市普陀区利群医院提供。水为双蒸馏水 ,甲
醇等试剂均为 A R级 。
2　方法和结果
2. 1　色谱操作条件　色谱柱为 Diamonsil C18色谱
柱(250 mm ×4. 6 mm , 5 μm)。流动相:甲醇 ∶水
(4∶1);流速:1. 0 ml /m in;压力:11. 6 mPa;检测波
长:315 nm ,柱温:35 ℃。
2. 2　对照品溶液的配制　精密称取马兜铃酸 A 对
照品约 5 mg(精确至 0. 0002 g),置 20 ml 容量瓶
中 ,加流动相溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,即得对照品
储备液 ,浓度为 0. 25 mg /m l。
2. 3　供试品溶液的配制　取寻骨风药材 ,粉碎 ,过
60目筛 ,精密称取 0. 5 g ,置 20 m l量瓶中 ,加甲醇
约 18 ml , 超声处理(功率 250 W , 频率 20 kHz)
20 min使溶解取出 , 加甲醇至刻度 , 摇匀 , 用
0. 45 μm微孔膜滤过 ,即得。
2. 4　系统适应性试验　精密吸取对照品溶液 、供试
品溶液 ,按上述色谱条件进样 ,记录色谱(见图 1)。
由此可见供试品色谱中 ,在与对照品色谱相应位置
上有相同保留时间的色谱峰。马兜铃酸 A 保留时
间约为 15 min ,理论塔板数不低于 2 000。
A　　　　　　　　　　B　　
图 1　马兜铃酸 A和寻骨风溶液反相高效液相色谱图
A:马兜铃酸 A 对照品　　　B:供试品
2. 5　线性相关性的测定　精密吸取马兜铃酸 A 对
照品储备液 0. 2 , 1. 0 , 2. 0 , 4. 0 m l ,分别置于 10 m l
量瓶中 ,加流动相稀释至刻度 ,摇匀。按上述色谱条
件 ,依次进样 20 μl测定 ,以对照品的进样量(X)对
峰面积的积分值(Y)进行线性回归 ,得回归方程为
Y=10. 485X-0. 0018 , r =0. 9998( n =4),结果表
明 ,马兜铃酸 A 在 0. 005 ～ 0. 1 mg 范围内 ,进样量
567 山东中医杂志 2007年 8月第 26卷第 8期
与其峰面积之间呈良好的线性关系(见图 2)。
图 2　马兜铃酸 A 对照品进样量与其峰面积之间的线性关系
2. 6　方法的精密度　精密吸取供试品溶液 10 μl ,
按上述色谱条件 ,连续进样测定 4次。结果以峰面
积积分值计算 ,相对标准偏差为0. 94 %( n =4),进
样精密度良好。
2. 7　重复性考察　取同一批号寻骨风粉末 4份 ,按
“2. 3”项的方法制成供试品溶液 ,注入液相色谱仪测
定马兜铃酸 A 的含量 ,平均回收率为 99. 7%, RSD
为 0. 91%,重复性较好(见表 1)。
表 1　寻骨风供试品加样回收率实验
编号 取样量( m /μg)
峰面积
(×107)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
1 100 0. 06 99. 6
2 500 0. 25 99. 3
99. 7 0. 91
3 1000 0. 52 101. 0
4 2000 1. 05 98. 8
2. 8　稳定性试验　取供试品溶液 , 每隔 2 h 进样
20 μl ,记录峰面积。结果表明 ,样品溶液在8 h内基
本稳定 ,溶液中马兜铃酸 A峰面积 RSD 为 1. 26 %
( n =4),稳定性较好。
2. 9　有关物质检测条件的方法及验证
2. 9. 1　最低检出量　将马兜铃酸 A 对照品溶液 ,
逐步稀释 ,在上述色谱条件下 ,以信噪比等于 3∶1
为标准 ,测得马兜铃酸 A 的最小检测量为 8. 25×
10-4 μg 。
2. 9. 2　拖尾因子及分离度实验　取马兜铃酸 A 原
料 ,制成 0. 4 mg /ml的溶液 ,并加入已知杂质 ,在上
述色谱条件下测定 ,记录色谱图 ,计算拖尾因子及分
离度 ,拖尾因子为 0. 99 ,马兜铃酸 A 主峰和各杂质
峰之间的分离度为 8. 73(>5),均符合《中国药典》
(2000年)的规定。
2. 10　样品的测定　在上述操作条件下 ,待仪器基
线稳定后 ,连续注入数针标样溶液 ,计算相对响应值
变化小于 1. 0 %,依法测得寻骨风中的马兜铃酸 A
含量为 0. 07 %。
3　讨论
3. 1　样品前处理方法的选择　考察提取溶媒 、提取
方法及提取时间对含量测定的影响的实验过程中 ,
精密称取马兜铃酸 A 对照品 , 加流动相制成约
25 mg /m l的溶液 ,在 250 ～ 400 nm 的波长范围内进
行扫描 ,马兜铃酸 A 在 315 nm 波长处有最大吸收 ,
故波长确定 315 nm 为最佳。
3. 2　测定方法的选择　测定药物含量的方法有比
色法 、紫外分光光度法 、薄层扫描法 、高效液相色谱
法等 ,为了减少不同实验过程造成的误差 ,本实验选
择高效液相色谱法测定寻骨风中马兜铃酸 A 的含
量最低检出量 ,精密度良好 ,方法简便 、准确 、灵敏 ,
拖尾因子与分离度实验 ,均符合《中国药典》(2000
年)的规定 ,可为寻骨风的质量控制和评价用药剂量
提供依据。
[参考文献]
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肾病”到“马兜铃酸肾病” [ J]. 中国实用内科杂志 , 2004 , (1):
56.
Determination of aristolochic acide A in herba aristolochiae
mollissimae by HPLC
J IN Zhou-hui ,ZHOU Wen-jing
(Shanghai Liqun Hospi tal ,Shanghai 200333 ,China)[ Abstract] Objective:To determine the content of aristo lochic acide A in herba aristolochiae mollissimae by
high pe rfo rmance liquid chromatog raphy(HPLC).Methods:The determination w as conducted by HPLC u-
sing a Dia monsil-C18 column(250 mm×4. 6 mm , 5μm) and a mobile phase of methanol-water(4∶1). The
flow rate w as 1. 0 m l/min and co lumn temperature w as 35 ℃. The UV detection w aveleng th w as 315 nm.
Result:A good relationship be tw een peak area and a sample mount w as no ted at 0. 005 ～ 0. 1 mg( r =
0. 9998).RSD was 0. 94%and(n =4).Conclusion:A simple , accurate , selective and suitable method fo r de-
termination of herba aristolochiae mo lli ssimae w as established and the method w as also used fo r quality
cont rol.[ Key words] HPLC;herba aristolo chiae mollissimae;aristo lochic acide A
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