全 文 ：第３１卷第３期
２０１３年６月
上 海 交 通 大 学 学 报 （农 业 科 学 版）
ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＳＨＡＮＧＨＡＩ　ＪＩＡＯＴＯＮＧ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（ＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＡＬ　ＳＣＩＥＮＣＥ）
Ｖｏｌ．３１Ｎｏ．３
　Ｊｕｎ．２０１３
文章编号：１６７１－９９６４（２０１３）０３－０００９－０７　 ＤＯＩ：１０．３９６９／Ｊ．ＩＳＳＮ．１６７１－９９６４．２０１３．０３．００２
收稿日期：２０１２－１０－０２
基金项目：上海市基础重点项目（０９ＪＣ１４０５１００）
作者简介：方　琪（１９８９－），女，硕士生，研究方向：植物发育与分子生物学，Ｅ－ｍａｉｌ：５１１０１３００００６＠ｅｃｎｕ．ｃｎ；
张雪平（１９８８－）为本文共同第一作者，女，硕士生，研究方向：植物发育与分子生物学，Ｅ－ｍａｉｌ：５１０９１３０００１６＠ｅｃｎｕ．ｃｎ；
李小方（１９７１－）为本文通讯作者，女，博士后，副教授，研究方向：植物发育生物学，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｆｌｉ＠ｂｉｏ．ｅｃｎｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
ＮＡＡ、２，４－Ｄ对崇明水仙（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ　ｔａｚｅｔａ　ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）
愈伤组织的诱导及再生的不同影响
方　琪，张雪平，张　伟，贾林燕，许　静，李小方
（华东师范大学 生命科学学院，上海２０００６２）
摘　要：目前水仙组织培养过程中愈伤组织的诱导是一大难题。本文以带鳞片的鳞茎盘为外植
体，研究了２，４－Ｄ、ＮＡＡ　２种类型的生长素对水仙组织培养中愈伤组织诱导的影响。结果表明，高
浓度的２，４－Ｄ（３．０～４．０ｍｇ／Ｌ）结合６－ＢＡ能诱导无色瘤状愈伤组织，中等浓度的２，４－Ｄ（０．５ｍｇ／
Ｌ）有利于芽点的诱导和瘤状愈伤组织的增殖，而较低浓度的２，４－Ｄ（０．１ｍｇ／Ｌ）有利于诱导出小鳞
茎，也能促使瘤状愈伤组织再生成苗。而ＮＡＡ结合６－ＢＡ不能诱导愈伤组织的形成。高浓度的
ＮＡＡ不仅诱导未分化的分生组织细胞分裂，也能促进分化的细胞进行分裂，从而使形成白色凸起
状结构。另外，培养基中这２种激素互换可以使组织培养过程中形成的愈伤组织或白色突起发生
相互转换。这些结果说明，水仙组织培养过程中愈伤组织的诱导和不同形态的器官发生与培养基
中生长素种类和浓度关系密切。
关键词：中国水仙；愈伤组织；器官发生；２，４－Ｄ；ＮＡＡ；鳞茎
中图分类号：Ｓ６８２．２１　　　　文献标识码：Ａ
Ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ＮＡＡ　ａｎｄ　２，４－Ｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃａｌｉ　ａｎｄ　Ｏｒｇａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ
ｉｎ　Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ　ｔａｚｅｔａ　ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ
ＦＡＮＧ　Ｑｉ，ＺＨＡＮＧ　Ｘｕｅ－ｐｉｎｇ，ＺＨＡＮＧ　Ｗｅｉ，ＪＩＡ　Ｌｉｎ－ｙａｎ，ＸＵ　Ｊｉｎｇ，ＬＩ　Ｘｉａｏ－ｆａｎｇ
（Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｅａｓｔ　Ｃｈｉｎａ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　２０００６２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｔ　ｉｓ　ｓｔｉｌ　ａ　ｃｈａｌｅｎｇｉｎｇ　ｉｓｓｕｅ　ｔｏ　ｉｎｄｕｃｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｃａｌｉ　ｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ．Ｈｅｒｅ，ｗｅ
ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　２，４－Ｄ　ａｎｄ　ＮＡＡ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｌｉ　ｕｓｉｎｇ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｆ　ｂｕｌｂ　ｓｃａｌｅｓ　ｏｆ　Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ
ｔａｚｅｔｔａｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ａｕｘｉｎｓ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ．Ｈｉｇｈｅｒ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　２，４－Ｄ （３．０～４．０ｍｇ／Ｌ），ｉｎ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　６－ＢＡ，ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ　ｔｈｅ
ｃａｐａｃｉｔｙ　ｔｏ　ｉｎｄｕｃｅ　ｃｏｌｏｒｌｅｓｓ　ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ　ｃａｌｉ．Ｔｈｉｓ　ｋｉｎｄ　ｏｆ　ｃａｌｕｓ　ｃａｎ　ｂｅ　ｅａｓｉｌｙ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ａｎｄ
ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｅｄ．Ｍｏｄｅｒａｔｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　２，４－Ｄ （０．５～１ｍｇ／Ｌ）ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｔｈｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｈｏｏｔ　ｂｕｄｓ
ｆｒｏｍ　ｓｃａｌｅ　ｅｘｐｌａｎｔｓ．Ａｄｄｉｔｉｏｎａｌｙ，ｓｕｃｈ　ｍｏｄｅｒａｔｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ａｌｓｏ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ
ｓｏｍａｔｉｃ　ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ　ｃａｌｉ．Ｌｏｗ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　２，４－Ｄ（０．１ｍｇ／Ｌ）ｗａｓ　ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ
ｐｌａｎｔｌｅｔｓ　ｆｒｏｍ　ｃｏｌｏｒｌｅｓｓ　ｃａｌｉ．ＮＡＡ　ｉｎ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　６－ＢＡ　ｄｉｄ　ｎｏｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈｅ　ｃａｐａｃｉｔｙ　ｏｆ　ｉｎｄｕｃｉｎｇ
ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ　ｃａｌｉ　ｆｒｏｍ　ｓｃａｌｅｓ．Ｈｉｇｈ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＮＡＡ　ｐｒｏｍｏｔｅｄ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｗｈｉｔｅ　ｂｕｌｇｅｓ，ｗｈｉｃｈ
ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ｆｒｏｍ　ａｃｔｉｖｅ　ｃｅｌ　ｄｉｖｉｓｉｏｎ　ｏｆ　ｂｏｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ　ｃｅｌｓ　ａｎｄ　ｍｅｒｉｓｔｅｍ　ｃｅｌｓ．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ｔｈｅ
上 海 交 通 大 学 学 报 （农 业 科 学 版） 第３１卷
ｅｘｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｙｐｅ　ｏｆ　ａｕｘｉｎ　ａｌｓｏ　ａｌｔｅｒｅｄ　ｔｈｅ　ｔｙｐｅ　ｏｆ　ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｆｅａｔｕｒｅｓ，ｉ．ｅ．ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ　ｏｆ
ＮＡＡ　ｂｙ　２，４－Ｄ　ａｌｔｅｒｅｄ　ｔｈｅ　ｔｙｐｅ　ｏｆ　ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｆｅａｔｕｒｅｓ　ｆｒｏｍ　ｗｈｉｔｅ　ｂｕｌｇｅｓ　ｔｏ　ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ　ｃａｌｉ，ａｎｄ　ｖｉｃｅ
ｖｅｒｓａ．Ｔｈｅｓｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃａｌｉ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｏｒｇａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｏｎ　ｔｈｅ　ａｕｘｉｎ
ｔｙｐｅ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ．Ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ　ｐｒｏｖｉｄｅｓ　ｔｈｅ　ｔｈｅｏｒｅｔｉｃ　ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｒａｐｉｄ
ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ　ｔａｚｅｔｔａ　ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ　ｔａｚｅｔｔａ　ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ；ｃａｌｕｓ；ｏｒｇａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ；２，４－Ｄ；ＮＡＡ；ｂｕｌｂｓ
　　 水仙是石蒜科植物，中国水仙 （Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ
ｔａｚｅｔｔａ　ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）是一种具有很高文化价值和
观赏价值的名花。但中国水仙是三倍体植物，主要
通过营养繁殖方式进行增殖，生长周期长，在一定程
度上影响了水仙的品种更新和品质提高。组织培养
是脱毒、品质更新的重要手段，而愈伤组织的诱导和
再生是植物组织培养过程中的重要过程，也是植物
遗传转化的基础［１－４］。目前，水仙组织培养过程中愈
伤组织的诱导是一大难题。带鳞片的鳞茎盘是水仙
组织培养最常用和最成功的外植体［５－６］，但除了白水
仙（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ　ｐａｐｙｒａｃｅｕｓ），以鳞片为外植体诱导胚
性愈伤组织并再生的报道很少［７］。尽管以幼胚［８，１０］
和花药［１１］为外植体有成功诱导胚性愈伤的报道，但
这些外植体所需材料的获得往往受季节影响较大，
而水仙鳞茎不受季节限制。因此，以水仙鳞茎盘为
外植体诱导愈伤组织的形成，建立水仙稳定而高效
的再生系统是非常必要的。中国水仙组织培养中以
鳞茎盘为外植体诱导愈伤组织的报道为数很
少［１２－１３］，且重复性不高。由于很多报道中生长素对
水仙属植物不定芽和愈伤组织的形成有很重要的作
用［５，９，１３－１５］，因此阐明不同种类以及不同浓度的生长
素对中国水仙组织培养的影响对水仙品质改良至关
重要。崇明水仙是中国水仙的２大品系之一，本文
探究了２，４－Ｄ、ＮＡＡ结合６－ＢＡ的不同浓度配比对
崇明水仙组织培养的影响。对不同激素培养条件
下，组织培养过程中的形态变化及器官发生进行了
详细观察，为中国水仙组织培养中愈伤组织的诱导
和再生的培养条件进行了有效探索。
１　材料与方法
１．１　植物材料和培养条件
以上海崇明的一年生水仙（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ　ｔａｚｅｔｔａ
ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）鳞茎为材料，材料在４℃处理６～８
周，后在流水下冲洗２ｈ，切去鳞茎上端的一半，留
下的带鳞茎盘的部分用７０％的酒精消毒３０ｓ，然后
用０．１％ ＨｇＣｌ２ 消毒１２ｍｉｎ，最后用无菌水冲洗
５～６次。接种的外植体都包含鳞茎盘和鳞茎片部
分，大小约３ｍｍ ×２ｍｍ（长与宽）。以１／２ＭＳ培
养基为基本培养基并加有不同植物激素，所有培养
基均附加３％蔗糖、０．５５％琼脂粉，ｐＨ值５．８，在２５
℃的温度，１６ｈ光照［约１２０μｍｏｌ／（ｍ
２·ｓ）］下培
养，每４周继代１次。
１．２　２，４－Ｄ、６－ＢＡ和ＮＡＡ对水仙组织培养的影响
为了分析２，４－Ｄ、６－ＢＡ和ＮＡＡ对水仙组织培
养的影响，进行了３因素３水平的正交试验（表１，
Ｎｏ．１～９）。为了分析不同浓度２，４－Ｄ对体细胞胚
胎发生的影响，将鳞茎外植体置于１．０ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ
和不同浓度２，４－Ｄ（０、０．５、１．０、２．０、３．０、４．０ｍｇ／
Ｌ）的培养基上（图３Ａ，Ｎｏ．１９～２４）生长，每周观察
组织形态的变化，培养１２周时统计各种形态发生的
数目。通常带有球形鳞茎部分的小植株叫做小鳞
茎，鳞茎部位不明显，但可观察到淡黄色突起的称为
芽点；根据颜色和透明度将不规则的细胞增生部分
分为白色凸起和无色透明瘤状愈伤组织，白色凸起
是不透明的。
１．３　愈伤的增殖与分化
选择透明的愈伤组织在含０．５ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ和
１．０ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ的培养基上继续生长和增殖（培养
基编号Ｎｏ．２０见图３Ａ），每４周继代１次；用于小
植株的分化培养基是含０．１ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ和１．０
ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ（培养基编号Ｎｏ．１９见图３Ａ）。
１．４　光学显微镜观察
愈伤组织固定于 ＦＡＡ （５０％乙醇，５％甲醛，
６％冰醋酸），４℃过夜，梯度酒精脱水。石蜡切片（７
μｍ厚度）用１％甲苯胺蓝染色，显微镜下观察拍照。
用Ｉ２－ＫＩ溶液染色检测细胞中是否含有淀粉。
１．５　统计分析
所有实验外植体数目都大于３０，不同处理对组
织培养效果的数据采用统计学分析软件 ＳＰＳＳ
Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ１７．０进行卡方检验、方差分析、多因素方
差分析。
０１
第３期 方　琪，等：ＮＡＡ、２，４－Ｄ对崇明水仙（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ　ｔａｚｅｔｔａ　ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）愈伤组织的诱导及再生的不同影响
２　结果与分析
２．１　２，４－Ｄ、６－ＢＡ和ＮＡＡ对水仙组织培养的影响
带鳞片的鳞茎盘在含不同植物激素的培养基上培
养，有不同的形态发生。在所有培养基上培养６周时，
位于鳞片间的部位都开始隆起。１２周时，不同处理的
隆起部位有了不同的发育方向（表１），不加激素的Ｎｏ．
１培养基上隆起部位形成了小鳞茎；加有１ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ
和６－ＢＡ的Ｎｏ．２培养基上既有形成小鳞茎的外植体，
也有依然保持隆起状的外植体，隆起部位是白色不透
明（图１Ａ，１Ｃ）；加有４ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ和６－ＢＡ的Ｎｏ．３培
养基（表１）上培养的鳞茎盘形成白色致密愈伤组织和
芽点（图１Ｂ）；而在加有２，４－Ｄ和６－ＢＡ的Ｎｏ．４、５，和７
培养基（表１）培养的大多数外植体形成无色透明的瘤
状愈伤组织（图１Ｄ）；高浓度２，４－Ｄ、ＮＡＡ和１ｍｇ／Ｌ　６－
ＢＡ的Ｎｏ．９培养基（表１）培养的外植体既有无色透明
愈伤组织又有白色致密愈伤组织；外植体在不含６－ＢＡ、
只含２，４－Ｄ和ＮＡＡ的Ｎｏ．６、８培养基上培养出现高度
玻璃化，这表明细胞分裂素６－ＢＡ是鳞茎分化和细胞增
殖所必须的。植物生长素抑制小鳞茎的形成，而且通
过比较Ｎｏ．２培养基和Ｎｏ．４培养基发现，含有１ｍｇ／Ｌ
ＮＡＡ的Ｎｏ．２培养基培养的外植体有一半长出，而在
含有１ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ的Ｎｏ．５培养基上形成小鳞茎的外
植体不足１０％，这说明２，４－Ｄ比ＮＡＡ更有效抑制小鳞
茎的形成。以上结果表明，生长素种类与浓度可以决
定愈伤组织的形态与类型，合适浓度的６－ＢＡ和２，４－Ｄ
的配比能有效诱导无色透明愈伤组织的形成。白色愈
伤组织和无色透明愈伤组织的增长速度不同，白色愈
伤组织增殖很慢，而透明愈伤组织增殖很快。显微观
察发现白色瘤状愈伤组织和无色透明愈伤组织的细胞
构成也有所不同，白色愈伤组织由不致密大细胞组成
（图２Ａ～Ｃ），且Ｉ２－ＫＩ染色发现细胞内含大量淀粉（图
２Ｃ），而透明愈伤组织由致密活细胞组成（图２Ｄ、Ｅ箭头
所示）。
表１　２，４－Ｄ、６－ＢＡ和ＮＡＡ对水仙组织培养的影响（１２周时）
Ｔａｂ．１　Ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　２，４－Ｄ，６－ＢＡ　ａｎｄ　ＮＡＡ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ｓｃａｌｅｓ　ａｆｔｅｒ　１２ｗｅｅｋｓ　ｏｆ　ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ
编号
Ｎｏ．
植物生长调节剂含量／（ｍｇ·Ｌ－１）
Ｇｒｏｗｔｈ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ
外植体诱导百分率／％
Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ　ｏｆ　ｅｘｐｌａｎｔｓ
２，４－Ｄ　 ＮＡＡ　 ６－ＢＡ
小鳞茎
Ｂｕｌｂｌｅｔｓ
芽点
Ｂｕｄｓ
白色凸起
Ｗｈｉｔｅ　ｂｕｌｇｅ
无色愈伤组织
Ｃａｌｉ
１　 ０　 ０　 ０　 ８０．０ａ ０　 ０　 ０ｄ
２　 ０　 １．０　 １．０　 ５０．０ｂ ０　 ５０．０ａ ０ｄ
３　 ０　 ４．０　 ４．０　 ０ｃ ２６．７　 ５６．６ａ １６．７ｃ
４　 １．０　 ０　 １．０　 ７．７ｃ ０　 １１．５ｃ ６１．５ｂ
５　 １．０　 １．０　 ４．０　 ０ｃ ０　 ８．０ｃ ５８．３ｂ
６　 １．０　 ４．０　 ０　 １２．１ｃ ０　 ０ｃ ０ｄ
７　 ４．０　 ０　 ４．０　 ０ｃ ０　 ０ｃ ８８．９ａ
８　 ４．０　 １．０　 ０　 ０ｃ ０　 ０ｃ ０ｄ
９　 ４．０　 ４．０　 １．０　 ０ｃ ０　 ２１．２ｂ ５４．７ｂ
　注：不同小写字母代表不同处理之间的显著性差异（Ｐ ＜０．０５，卡方检验）。
　Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｌｏｗｅｒ－ｃａｓｅ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｍｅｄｉａ（Ｐ＜０．０５，Ｐｅａｒｓｏｎ’ｓ　Ｃｈｉ－ｓｑｕａｒｅ　ｔｅｓｔ）．
图１　外植体在含不同激素的培养基上培养１２周时的形态结构
（Ａ）鳞茎盘间的白色不透明凸起（＊所示）；（Ｂ）鳞茎盘间的白色不透明凸起（＊所示）和凸起中心的芽点（弯曲箭头所示）；（Ｃ）白色不透明
愈伤组织（方框所示）和小鳞茎（箭头所示）；（Ｄ）无色透明、瘤状愈伤组织（箭头所示）。标尺＝３ｍｍ。
Ｆｉｇ．１　Ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ｔｏ　ｃｅｌ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｒ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｓｅｅｎ　ｉｎ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｆ　ｓｃａｌｅｓ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ
ｏｎ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｍｅｄｉａ　ｆｏｒ　ｔｗｅｌｖｅ　ｗｅｅｋｓ
（Ａ）Ｗｈｉｔｅ　ｏｐａｑｕｅ　ｂｕｌｇｅｓ（ｍａｒｋｅｄ　ｂｙ＊）ｆｏｒｍｅｄ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｓｃａｌｅｓ；（Ｂ）Ｗｈｉｔｅ　ｏｐａｑｕｅ　ｂｕｌｇｅｓ（ｍａｒｋｅｄ　ｂｙ＊）ｆｏｒｍｅｄ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｓｃａｌｅｓ，ａｎｄ　ｓｈｏｏｔ　ｂｕｄｓ
（ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｂｙ　ｓｑｕｉｇｇｌｙ　ａｒｒｏｗｓ）ｆｏｒｍｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｉｄｄｌｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｕｌｇｅｓ；（Ｃ）Ｗｈｉｔｅ　ｏｐａｑｕｅ　ｃａｌｉ（ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｂｙ　ａ　ｒｅｃｔａｎｇｕｌａｒ　ｂｏｘ）ａｎｄ　ｂｕｌｂｌｅｔｓ（ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｂｙ　ａｒｒｏｗｓ）
ｆｏｒｍｅｄ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｓｃａｌｅｓ；（Ｄ）Ｃｏｌｏｒｌｅｓｓ　ａｎｄ　ｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔ　ｔｕｍｏｒ－ｌｉｋｅ　ｃａｌｉ（ｓｈｏｗｅｄ　ｂｙ　ａｎ　ａｒｒｏｗ）ｆｏｒｍｅｄ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｓｃａｌｅｓ．Ｓｃａｌｅ　ｂａｒｓ＝３ｍｍ．
１１
上 海 交 通 大 学 学 报 （农 业 科 学 版） 第３１卷
图２　白色不透明膨大肿胀结构和无色透明愈伤组织的细胞形态比较
（Ａ）一白色膨大肿胀结构的纵切观察，其中间有芽点（图中圈圆圈部分）；（Ｂ）图Ａ方框部分放大显示细胞中有深色颗粒（箭头所示）；（Ｃ）
白色组织以Ｉ２－ＫＩ染色照片，箭头所示部分为淀粉粒；（Ｄ～Ｅ）无色透明愈伤组织纵切，箭头所示为包裹着愈伤组织的一层大小均匀的外层细
胞。标尺（Ａ）、（Ｄ）＝１００μｍ，（Ｂ）、（Ｃ）＝２０μｍ，（Ｅ）＝４０μｍ。
Ｆｉｇ．２　Ｃｅｌｕｌａｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｗｈｉｔｅ　ｏｐａｑｕｅ　ｃａｌｉ　ａｎｄ　ｃｏｌｏｒｌｅｓｓ　ｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔ　ｃａｌｉ
（Ａ）Ａ　ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ　ｖｉｅｗ　ｏｆ　ｏｎｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｗｈｉｔｅ　ｃａｌｉ　ｉｎ　ｗｈｉｃｈ　ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ａ　ｓｈｏｏｔ　ｍｅｒｉｓｔｅｍ（ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｂｙ　ａ　ｃｉｒｃｌｅ）；（Ｂ）Ａ　ｍａｇｎｉｆｉｅｄ　ｖｉｅｗ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｐａｒｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｂｏｘ　ｉｎ（Ａ）．Ｓｔｒｏｎｇｌｙ　ｓｔａｉｎｅｄ　ｇｒａｎｕｌｅｓ　ａｒｅ　ｍａｒｋｅｄ　ｂｙ　ａｒｒｏｗｓ；（Ｃ）Ａ　ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ　ｖｉｅｗ　ｏｆ　ｏｎｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｗｈｉｔｅ　ｃａｌｉ　ｓｔａｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｉ２－ＫＩ．
Ｔｈｅ　ｇｒａｎｕｌｅｓ　ａｒｅ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｂｙ　ａｒｒｏｗｓ；（Ｄ～Ｅ）Ａ　ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ　ｖｉｅｗ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔ　ｃａｌｉ．Ｔｈｅ　ｃｅｌ　ｌａｙｅｒ　ａｒｏｕｎｄ　ｔｈｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｉｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｂｙ
ａｒｒｏｗｓ．Ｂａｒｓ＝１００μｍ　ｉｎ（Ａ）ａｎｄ（Ｄ），２０μｍ　ｉｎ（Ｂ）ａｎｄ（Ｃ），ａｎｄ　４０μｍ　ｉｎ（Ｅ）．
２．２　不同浓度的２，４－Ｄ对水仙组织培养的影响
以上结果表明，２，４－Ｄ比 ＮＡＡ能更有效的诱
导无色透明的愈伤组织的形成。为此我们进一步分
析了在添加１ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ的条件下，不同浓度２，４－
Ｄ对水仙愈伤组织诱导的影响。结果发现，在０．１
ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ（Ｎｏ．１９培养基，图３）上培养，９０％的
外植体形成小鳞茎，而在０．５ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ（Ｎｏ．２０
培养基，图３）上培养，没有小鳞茎的形成，其中１６％
的外植体形成芽点，６５％形成白色凸起，１６％形成无
色瘤状愈伤组织。随着２，４－Ｄ浓度的继续增加，形
成无色瘤状愈伤组织的比率逐渐提升，而形成白色
凸起的比率开始逐渐下降（图３），在４ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ
（Ｎｏ．２４培养基，图３）上，９１％的外植体形成无色瘤
状愈伤组织。卡方检验结果显示：３和４ｍｇ／Ｌ　２，４－
Ｄ（Ｎｏ．２３、２４，图３Ｂ）处理下无色瘤状愈伤组织的
形成率没有显著性差异（χ
２＝０．７３２，Ｐ＝０．３９２，ｎ＝
２４）；但是２和４ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ（Ｎｏ．２２、２４，图３Ｂ）处
理下无色瘤状愈伤组织的形成存在极显著性差异
（χ
２＝８．８１４，Ｐ＝０．００３，ｎ＝２４）。这表明当２，４－Ｄ
的浓度低于３．０ｍｇ／Ｌ时，有利于形成白色凸起，这
些凸起状结构随着培养时间的延长最终形成小鳞茎
或者芽点；而当２，４－Ｄ的浓度高于３．０ｍｇ／Ｌ时，则
形成无色瘤状愈伤组织。
２．３　愈伤组织的增殖和分化
高浓度２，４－Ｄ诱导形成的无色愈伤组织是表面
光滑、质地坚硬的球状体（图４Ａ、Ｂ），将这些愈伤组织
转接于含０．５ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ和１ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ的Ｎｏ．２０
培养基上继代培养，每４～６周继代１次，愈伤组织迅
速增长形成球型颗粒和不规则的愈伤组织（图４Ｃ、
图３　不同浓度的２，４－Ｄ对水仙组织培养的影响
（Ａ）所用培养基中激素的配比；（Ｂ）不同浓度２，４－Ｄ处理下无色
愈伤的结构。不同小写字母表示的是１２周内不同处理间的显著性差
异（卡方检验）：Ｐ＜０．０５，ｎ＝２４～４５）。
Ｆｉｇ．３　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　２，４－Ｄ
ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｎａｒｃｉｓｓｕｓ
（Ａ）Ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｍｅｄｉａ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｏｕｒ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ；（Ｂ）
Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏｌｏｒｌｅｓｓ　ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ　ｃａｌｉ　ｉｓ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｄｏｓａｇｅ　ｏｆ　２，
４－Ｄ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｌｏｗｅｒ　ｃａｓｅ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ
ｂｅｔｗｅｅｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｍｅｄｉａ　ａｆｔｅｒ　１２ｗｅｅｋｓ　ｉｎ　ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｐｅａｒｓｏｎ’ｓ　Ｃｈｉ－ｓｑｕａｒｅ
ｔｅｓｔ：Ｐ＜０．０５，ｎ＝２４ｔｏ　４５）．
５Ｃ），在增殖期间，球形颗粒具有多个分生组织区域，
这些区域的细胞有明显的细胞核（图５Ａ、Ｂ），分生组
织区域的细胞快速分裂形成突起，最后形成次生愈伤
组织颗粒，不规则愈伤组织也包裹着一些分生组织
（图５Ｃ）。如果愈伤组织继续在高浓度２，４－Ｄ上长时
间培养，玻璃化程度增强，并且在培养４个月左右，部
分愈伤组织会形成不定芽（图４Ｄ），当将愈伤组织转
移到再生培养基（Ｎｏ．１９）后，无色透明愈伤组织逐渐
转变成白色，４周后形成白色凸起（图６Ａ）。之后白色
凸起逐渐形成芽点或小鳞茎（图６Ｂ、Ｃ），培养１０周后
形成大量不定芽（图６Ｄ）。
２１
第３期 方　琪，等：ＮＡＡ、２，４－Ｄ对崇明水仙（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ　ｔａｚｅｔｔａ　ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）愈伤组织的诱导及再生的不同影响
图４　在高浓度２，４－Ｄ与１ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ培养基上愈伤组织的形成和发育过程
（Ａ）培养６周时，在鳞片间的鳞茎盘基部细胞开始脱分化和增殖；（Ｂ）培养１０周鳞片间透明愈伤组织增大；（Ｃ）培养１２周时的透明愈伤组
织；（Ｄ）４个月后透明愈伤组织上形成丛生芽。标尺＝３ｍｍ。
Ｆｉｇ．４　Ｔｈｅ　ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｃａｌｉ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｈｉｇｈ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　２，４－Ｄ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　１ｍｇ／Ｌ　ｏｆ　６－ＢＡ
（Ａ）Ｔｈｅ　ｄｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｌｉ　ａｔ　ｔｈｅ　ｅｎｄ　ｏｆ　ｂｕｌｂ　ｓｃａｌｅｓ　ａｎｄ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｓｃａｌｅｓ　ｃｌｏｓｅ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｐｌａｔｅ　ｉｎｉｔｉａｔｅｄ　ａｆｔｅｒ　６ｗｅｅｋｓ　ｉｎ　ｃｕｌｔｕｒｅ；（Ｂ）
Ｔｈｅ　ｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔ　ｃａｌｉ　ｅｎｌａｒｇｅｄ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｓｃａｌｅｓ　ａｆｔｅｒ　１０ｗｅｅｋｓ　ｉｎ　ｃｕｌｔｕｒｅ；（Ｃ）Ｔｈｅ　ｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔ　ｃａｌｉ　ａｆｔｅｒ　１２ｗｅｅｋｓ　ｉｎ　ｃｕｌｔｕｒｅ；（Ｄ）Ｔｈｅ　ｓｈｏｏｔ
ｃｌｕｍｐｓ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔ　ｃａｌｉ　ａｆｔｅｒ　ｔｈｅ　ｃａｌｉ　ｗｅｒｅ　ｍａｉｎｔａｉｎｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　４ｍｏｎｔｈｓ．Ｂａｒｓ＝３ｍｍ．
图５　无色透明愈伤组织在增殖培养基上的增殖
（Ａ）增殖的愈伤组织颗粒含有多个分生组织区域（数字所示）；（Ｂ）图Ａ中部位３的分生组织的放大照片；（Ｃ）分生组织部位观察到不规则
增殖愈伤（箭头所示）。标尺（Ａ）＝１００μｍ，（Ｂ）＝７０μｍ，（Ｃ）＝１００μｍ．
Ｆｉｇ．５　Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔ　ｓｏｍａｔｉｃ　ｃａｌｉ　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｓｅｃｏｎｄ　ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ
（Ａ）Ｏｎｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｃａｌｉ　ｇｒａｎｕｌｅｓ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｓｅｖｅｒａｌ　ｍｅｒｉｓｔｅｍａｔｉｃ　ｒｅｇｉｏｎｓ（ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｂｙ　ｎｕｍｂｅｒｓ）；（Ｂ）Ａ　ｍａｇｎｉｆｉｅｄ　ｖｉｅｗ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｍｅｒｉｓｔｅｍａｔｉｃ　ｒｅｇｉｏｎ　ｍａｒｋｅｄ　Ｎｏ．３ｉｎ（Ａ）；（Ｃ）Ａｍｏｒｐｈｏｕｓ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇ　ｃａｌｕｓ　ｉｎ　ｗｈｉｃｈ　ｓｅｖｅｒａｌ　ｍｅｒｉｓｔｅｍａｔｉｃ　ｒｅｇｉｏｎｓ　ｃａｎ　ｂｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ（ｉｎｄｉｃａｔｅｄ
ｂｙ　ａｒｒｏｗｈｅａｄｓ）．Ｂａｒ＝１００μｍ　ｉｎ（Ａ），７０μｍ　ｉｎ（Ｂ）ａｎｄ　１００μｍ　ｉｎ（Ｃ）．
图６　水仙愈伤组织的分化与植株再生
（Ａ）在含０．１ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ再生培养基上培养４周，愈伤组织开始出现白色凸起；（Ｂ～Ｃ）培养８周后出现芽点；（Ｄ）培养１０周后形成不定
芽。标尺（Ａ）、（Ｃ）、（Ｄ）＝４ｍｍ，（Ｂ）＝２ｍｍ。
Ｆｉｇ．６　Ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｓｏｍａｔｉｃ　ｃａｌｉ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｆｒｏｍｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｓｃａｌｅｓ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｎａｒｃｉｓｓｕｓ
（Ａ）Ｗｈｉｔｅ　ｐｒｏｔｒｕｓｉｏｎｓ　ｂｅｇａｎ　ｔｏ　ａｐｐｅａｒ　ｆｒｏｍ　ｃａｌｉ　ａｆｔｅｒ　４ｗｅｅｋｓ　ｏｎ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗｉｔｈ　０．１ｍｇ／Ｌ　ｏｆ　２，４－Ｄ；（Ｂ～Ｃ）Ｓｈｏｏｔ　ｂｕｄｓ
ａｐｐｅａｒｅｄ　ｆｒｏｍ　ｃａｌｉ　ａｆｔｅｒ　８ｗｅｅｋｓ　ｏｆ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｎ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ；（Ｄ）Ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｓｈｏｏｔｓ　ｆｏｒｍｅｄ　ｆｒｏｍ　ｃａｌｉ　ａｆｔｅｒ　１０ｗｅｅｋｓ　ｏｆ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｎ
ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ．Ｂａｒｓ＝４ｍｍ　ｉｎ（Ａ），（Ｃ）ａｎｄ（Ｄ），ａｎｄ　２ｍｍ　ｉｎ（Ｂ）．
２．４　组织培养中植株再生的效率
以上数据表明，再生植株可以从外植体直接形
成，也可以从白色凸起（或芽点）或无色透明愈伤组
织间接形成。我们对３种培养基上植株再生的效率
进行了进一步分析（表２），直接形成小鳞茎的方式
可以在不含激素的培养基上（Ｎｏ．１），也可以在含激
素的培养基上（Ｎｏ．１９），这种方式中８５％的外植体
都能直接形成小鳞茎，添加植物激素时，每个外植体
诱导形成的再生苗数目是平均３．２个，要多于无激
素处理的１．９个（表２，Ｎｏ．１９和Ｎｏ．１）。通过无色
３１
上 海 交 通 大 学 学 报 （农 业 科 学 版） 第３１卷
愈伤组织间接诱导再生出植株的方式中，也即从
Ｎｏ．２４培养基上原代形成愈伤组织，然后转接于
Ｎｏ．２０上继代增生，最后转接于 Ｎｏ．１９上分化再
生，９１％的外植体能再生出植株，且每个外植体平均
再生苗数目达９．２个，是几种方式中最高的，与直接
诱导途径有显著性差异（表２）。
表２　不同途径获得再生苗的效率
Ｔａｂ．２　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　ｐｌａｎｔｌｅｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
培养基编号
Ｍｅｄｉｕｍ　Ｎｏ．
再生方式
Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
ｗａｙ
分化率／％
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ
每个分化外植体平均再生苗数目
Ａｖｅｒａｇｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｐｅｒ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ　ｅｘｐｌａｎｔ
每个外植体平均再生苗数目
Ａｖｅｒａｇｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｐｅｒ
ｔｏｔａｌ　ｅｘｐｌａｎｔ
１ 直接Ｄｉｒｅｃｔ　 ８５　 １．９±０．９ｄ １．６±１．０ｃ
１９ 直接Ｄｉｒｅｃｔ　 ８６　 ３．２±１．０ｃ ２．８±１．５ｂ
２４
间接（通过愈伤组织）
Ｉｎｄｉｒｅｃｔ（ｔｈｒｏｕｇｈ　ｃａｌｉ）
９１　 ９．２±３．２ａ ８．３±４．３ａ
　注：不同小写字母表示不同处理间存在显著性差异（Ｐ＜０．０５）。
　Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｌｏｗｅｒ－ｃａｓｅ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｍｅｄｉａ（Ｐ＜０．０５）．
３　讨论
３．１　不同生长素在组织培养形态发生中的效果
不同
尽管ＮＡＡ和２，４－Ｄ都常被用作水仙组织培
养中的生长素，但它们在愈伤组织诱导和组织形
态建成方面有着不同的作用。低浓度 ＮＡＡ或２，
４－Ｄ结合细胞分裂素促进鳞片间小鳞茎的直接形
成（表１）。虽然随着２种生长素浓度升高，都会抑
制小鳞茎的形成，但高浓度 ＮＡＡ、２，４－Ｄ对外植体
的作用效果则不同（表１）。高浓度ＮＡＡ既促进分
生组织细胞也促进已分化细胞快速分裂，形成白
色凸起（图２Ａ），而高浓度２，４－Ｄ主要诱导分生组
织细胞分裂增殖（图２Ｄ、Ｅ）从而最有效地诱导易
再生分化的愈伤组织的形成（图３Ｂ）。并且当把培
养基中的ＮＡＡ换成２，４－Ｄ时，已经形成的白色凸
起会转变成无数瘤状愈伤组织，反之亦然。这２
种生长素在组织培养中的不同作用可能与它们本
身的物理化学结构以及不同植物组织对它们的敏
感性不同相关。由于ＮＡＡ具有亲脂性，能扩散进
入细胞，而２，４－Ｄ的吸收需要特殊的运输载体的
协助［１７］。因此，我们推测 ＮＡＡ能够诱导处于不
同分化状态的细胞进行分裂增生，增生的分生组
织细胞被大量增生的已分化的细胞包裹着，从而
导致其增殖受限。而２，４－Ｄ只能促进分生组织细
胞分裂或促进脱分化的细胞具有分生组织性质。
因此，高浓度２，４－Ｄ结合细胞分裂素可以高效地
促进愈伤组织的诱导与增殖，这与前人报道的２，
４－Ｄ通常被用作水仙和其他物种体细胞胚胎的诱
导因子的结论相一致［８，１１，１８－１９］。
３．２　不同方法诱导植株的再生
中国水仙植株的再生方法因生长素的类型和浓
度的不同而不同。实验数据分析表明，鳞茎盘在不
含激素的培养基或含低浓度生长素结合细胞分裂素
的培养基上可直接形成小鳞茎。当把外植体培养在
含高浓度ＮＡＡ和细胞分裂素的培养基（表１）上，首
先形成白色凸起，然后逐渐形成芽点、不定芽和再生
苗。在水仙属的其他物种中也有形成的不定芽的数
目与ＮＡＡ的浓度成正比的报道［５］。中国水仙的植
株再生也可以通过无色瘤状愈伤组织诱导途径，愈
伤组织首先被高浓度２，４－Ｄ诱导产生，每个外植体
获得的平均小鳞茎数较其他途径都极其显著性提
高，但该途径所需的时间较长。可见这几种植株再
生方法的效率是不同的（表２），在中国水仙组织培
养中应该根据不同实验目的来选择不同的再生
途径。
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２，４－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｏｘｙ　ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ，ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅ－ｌ－ａｃｅｔｉｃ
ａｃｉｄ，ａｎｄ　ｉｎｄｏｌｅ－３－ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ－ｃｕｌｔｕｒｅｄ
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［１８］　Ｊｈｅｎｇ　Ｆ　Ｙ，Ｄｏ　Ｙ　Ｙ，Ｌｉａｕｈ　Ｙ　Ｗ，ｅｔ　ａｌ．Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ
ｏｆ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｆｒｏｍ　ｅｍｂｒｙｏ－
ｇｅｎｉｃ　ｃａｌｕｓ　ｃｕｌｔｕｒｅｓ　ｏｆ　Ｏｎｃｉｄｉｕｍ ‘Ｇｏｗｅｒ　Ｒａｍｓｅｙ’
ｂｙ　ａｄｊｕｓｔｉｎｇ　ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　ｓｏｕｒｃｅｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，
２００６，１７０：１１３３－１１４０．
［１９］　Ｃｏｎｄｅ　Ｐ，Ｌｏｕｒｅｉｒｏ　Ｊ，Ｓａｎｔｏｓ　Ｃ．Ｓｏｍａｔｉｃ　ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ
ａｎｄ　ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｕｌｍｕｓ　ｍｉｎｏｒ
Ｍｉｌ ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌ　Ｒｅｐ，２００４，２２：６３２－６３９．
５１