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食品工业科技
山楂（!#$#!%&’()*++#$*,*-#(.%/）为蔷薇科山楂属
植物，山楂叶中的黄酮类化合物是其主要的有效成
分，可促使血管扩张，冠状动脉血流量增加，对人体
可以起到降压、降血脂、增大心脏血流量等作用，还
具有清除自由基的作用!#$%。还有研究表明，黄酮类成
分中牡荆素化合物具有良好的抗癌作用。对黄酮类
化合物的提取常以乙醇、水、甲醇等溶剂为提取剂。
水浸提取成本低，但提取率也低；而用乙醇等有机溶
剂提取的成本高。由于山楂叶中总黄酮几乎都被以
纤维素为主体的细胞壁所包围，这些细胞尚有原果
胶粘结，因此，本法应用纤维素酶和果胶酶的复合酶
液对山楂叶进行酶解，然后用水提取，可以大大提高
总黄酮得率。
% 材料与方法
%#% 材料与仪器
山楂叶 & 月份采收于山东省科学院内，用烘
箱在 ’(#)&*条件下烘干，粉碎至 +& 目备用；槲皮素
标准品 ,-./0 产品；果胶酶 天津市利华酶制剂
厂，酶活力：1&&&&2 3 4；纤维素酶 上海丽珠东风生
物技术有限公司，酶活力：(&&&2 3 4；盐酸，5(6乙
醇，三氯化铝，醋酸钾均为分析纯。
)11型分光光度计 上海分析仪器厂；78,91 型
酸度计 上海第二分析仪器厂；恒温水浴锅 上海
分析仪器厂。
%#! 方法
:1: 标准液的制备及标准曲线的制作参照文献!+%。
以标准槲皮素量 ;，吸光度 0，最小二乘法进行线
性回归，得回归方程：0<(:&’);=&:&5) >1<&:555)。
:1:1 总黄酮的提取与测定 !+% 取试样，加酶液、水
于三角瓶，在不同 ?8、不同温度下酶解不同时间，然
后升温至不同温度浸提，离心去沉淀，损失溶剂补充
至原体积，取 (@A 提取液于蒸发皿中蒸干，用 5(6乙
醇溶解，充分转移至 (&@A 容量瓶中，并用 5(6乙醇
定容至刻度。从容量瓶中准确量取 (@A，加 &:@BA 3
C0A;A$ 溶液 $@A，@BA 3 C 醋酸钾溶液 (@A，摇匀，放置
+&@DE，于 )11型分光光度计 +1&E@处测定吸光度（以
同一滤液 (@A，加蒸馏水至 $@A作空白），根据标准曲
线及以下公式计算出浸提样中总黄酮的得率。
总黄酮得率<1;FG&9$ 3H
式中，; 为回归方程中求得的黄酮量（@4），F 为
定容体积（@A），H为样品重量（4）。
! 结果与讨论
!#% 酶浓度对浸提的影响
在 I<(&*，?8<+:( 的条件下，考察提取介质中
酶的浓度对提取的影响，以确定最佳的酶：底物比，
结果如图 所示。
从 图 中 可 见 ， 当 山 楂 叶 用 量 为 (:&&4 3
&&@A81J 时，提取介质中酶浓度为 0（&:1@4 3 @A 的
纤维素酶和 &:@4 3 @A的果胶酶）时总黄酮得率最高；
其次为 K（&:@4 3 @A 的纤维素酶和 &:1@4 3 @A 的果胶
摘 要 采用酶法提取工艺提取山楂叶中的总黄酮，与传统工艺
相比，提取率提高了 !#$%，提取条件温和。实验确定的最
佳提取条件为：酶浓度为 &#’() * (+的纤维素酶和 &#!() *
(+ 的果胶酶，酶解温度为 ,&-，提取温度为 $&-，提取
./0#,，提取时间为 $&(12。
关键词 山楂叶 总黄酮 酶法浸提
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-0-+1 21+50$& 240) 0#$#!%&’()*++#$*,*-#( 1%/ 1&+5&
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中图分类号：I,1&1:$ 文献标识码：0
文 章 编 号 ：&&19&$&’（1&&1）&$9&&$)9&1
（山东省科学院测试中心，济南 ’,&&!0） 王 晓 % 李林波 & 马小来 ’
（济南柴油机厂理化实验室，济南 ’,&&!0） 张红侠 !
（济南大学化学系，济南 ’,&&!0） 王其亮 $
酶法提取 的研究山楂叶中总黄酮
收稿日期：1&&9&)91(
作者简介：王晓（!$3!4），男，硕士，研究方向：天然产物研究与开发。
工艺技术
$(
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2002.03.014
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!!#$食品工业科技
酶）处理；!（#$%& ’ %( 的纤维素酶和 #$%& ’ %( 的果
胶酶）处理的得率最低。可以看到纤维素酶的浓度对
黄酮提取率影响最大。因此选用 )（#*%& ’ %(的纤维
素酶和 #$%& ’ %(的果胶酶）。
!#! 酶解温度对浸提的影响
在 +,-.#/，不同温度下酶解 $*%01 后，升温至
23，浸提 2 %01，结果如图 * 所示。在 .4/3时，
随着温度的升高，总黄酮的得率不断增加，当酶解温
度达到 /3时总黄酮得率最高；在 //3时总黄酮的
得率减少，因为当温度升高到一定程度时，酶蛋白开
始受热变性，使酶的活性降低，从而降低了总黄酮的
得率。
!#$ %&对浸提的影响
在 /3下，以不同 +, 酶解 $*%01，酶解后升温
至 23，浸提 2%01，结果如图 5所示。在 +,-5#/ 时
提取的得率最低，随着 +, 的升高而逐步增加，在
+,-.#/ 时达到最高，而后随着 +, 的升高而得率下
降，因为酶活力受 +,的影响，+,不仅能够影响酶的
构象，也影响底物的解离状态。在该实验中 +,.#/是
该复合酶的最适 +,。
!#’ 酶解时间对浸提的影响
在 /3，+,-.#/时，以不同的酶解时间酶解，然
后升温至 23，保温，结果如图 . 所示。随着酶解时
间的延长，提取率在增加，但在酶解 $*%01 后，提取
率的增加减慢，因此，本着节约时间，降低成本的原
则，选用的酶解时间为 $*%01。
!#( 浸提温度对浸提的影响
在 /3，+,-.#/ 的条件下，酶解 $*%01，然后升
至不同温度，保温浸提 2%01，结果如图 /所示。
从图 / 中可见，随着浸提温度的升高，总黄酮的
得率也在升高，但由于在常压下，$3时水已沸腾，
故选 23为浸提温度。
!#) 直接水提和酶法水提浸提效果的比较
采用两种方法进行浸提，结果如表 *所示。
从表 * 可见，用复合酶酶解后提取，其总黄酮得
率比直接水提法提高了 $6#27，这是由于复合酶可充
分破坏山楂叶以纤维素为主的细胞壁结构及其细胞
间相连的果胶物质，使提取传质阻力减小，使内容物
总黄酮易于溶出。
!#* 最佳工艺流程的确定+,-
干山楂叶!破碎!酶解!保温浸提!离心!上清液!
大孔树脂吸附!!#乙醇溶液洗脱!减压浓缩!烘干!粉碎
$ 结论
以 #*%& ’ %( 的纤维素酶和 #$%& ’ %( 的果胶酶
的复合酶液，在 /3，+,-.#/ 的条件下酶解 $*%01，
先对山楂叶细胞壁进行破坏，然后再在 23下浸提
2%01，可提高总黄酮提取得率，为山楂叶总黄酮提
取提供了一种新方法。
参考文献
方法 +, 提取温度
（3）
提取时间
（%01） )
总黄酮得率
（7）
水提法
酶提法
6#8
.#/
2
2
2
2
#528
#.*5
$#.2/
$#9.5
表 * 直接水提和酶法水提浸提效果比较
工艺技术 工艺技术
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食品工业科技
! 刘振南 用正交法探讨山楂叶中黄酮化合物的乙醇提取工
艺 广西民族学院学报，!###（$）：%&’%(
% 王威 从山楂叶中提取黄酮类物质及其鉴定方法 食品科
学，!##)（$）：*$’**
$ 高光跃 山楂属主要叶子生物学研究 天然产物研究与开
发，!##)（!%）：%&’$)
) 陈发奎 常用中草药有效成分含量测定北京+人民教育出
版社，!##&%((’%#!
* 纵伟酶法提取银杏黄酮的研究山西食品工业，%,,,（$）：
!$’!*
柚皮中生物类黄酮
提取优化工艺研究
柚皮为芸香科柑橘属柚抛类的果皮。柚皮中除
含有丰富的芳香油、果胶、色素外，还有经济价值很
高的橙皮苷和柚皮苷等生物类黄酮物质。目前，柚皮
的主要用途是制取芳香油、果胶，而长期以来柚皮综
合利用的附加价值并没有得到充分的挖掘。比如，每
年大量的柚皮被舍弃，含有大量生物类黄酮物质的
果胶浸提液也没有得到再利用。造成了柚皮资源的
极大的浪费。
据报道，生物类黄酮物质具有多种生理活性，可
调节毛细血管的脆性与渗透性，保护心脏。有抗溃
疡、解毒、利尿、抗菌、消炎清热等功效，也是一种高
效的天然抗氧化剂，并可用于祛齿斑、消口臭、预防
流感病毒的药物牙膏配方中。
如果每年能从废弃的柚皮中提取柚皮苷等生物
类黄酮物质，不仅可以用于功能食品添加剂、制药和
化妆品行业，而且对深化柚皮原料的综合利用，提高
其附加值，降低生产成本，减少环境污染，都具有重
要的现实意义。
% 材料与方法
%#% 实验材料
柚皮 晒干；食用酒精，丙酮 （试剂），稀碱
（,!--./0），甲醇（试剂），食用酒精，一缩二乙二
醇，!--./0等。
%#! 分析方法
生物类黄酮测定（以柚皮苷含量计）采用中林改
良 1.234法和萃取中林改良 1.234法。
!%! 工作曲线 将标准柚皮苷在 !!,5干燥至恒
重，秤取 %,67左右。以乙醇溶解并定容至 !,,68，得
柚皮苷标准液。分别吸取 ,,、,!、,%、,$、,)、,*、
,968 标准液，在碱性条件下，与一缩二乙二醇在
$,5恒温水浴保温条件下进行显色反应，在 )%,:6
的波长处测吸光度，绘制标准曲线。
!%% 样品测定 准确吸取待测液 ,*68 至比色管
中，在碱性条件下，与一缩二乙二醇在 $,5恒温水浴
保温条件下进行显色反应，测定 )%,:6处吸光度，以
摘 要 在初选溶剂的基础上，对柚皮中生物类黄酮提取进行正
交试验优化工艺研究，以提取温度、提取时间、乙醇浓度、
固液比为因素，选用 !#（$$）正交表进行试验。结果表明，
优化工艺条件是：温度为 #%&，提取时间为 ’，浓度为
()*，固液比为 +,%。在此条件下，生物类黄酮提取含量较
高，可达 -$.%%/01 2 1）。
关键词 柚皮 提取 生物类黄酮 正交试验
!#$%&’$ ! #$% &’(% )* +,%-./.’,0 ()-1%# (2,%%.34#$%
)+#./5/ #%2$)-)30 )* %6#,’2#.3 7.)*’1)).8(
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中图分类号：;<%,%$ 文献标识码：=
文 章 编 号 ：!,,%>,$,9（%,,%）,$>,,$#>,%
（浙江工业大学生物环境学院食品系，杭州 ,%%,-） 何晋浙 汪 钊 金再宿
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作者简介：何晋浙（3)34），女，高级实验师，研究方向：食品资源利
用与开发。
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工艺技术 工艺技术
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