全 文 ：〔收稿日期〕2009－08－25
〔基金项目〕湖南省科技厅科研基金资助项目（2009SK3121）；湖南省教育厅重点科研资助项目（07A052）。
〔作者简介〕聂媛媛（1984-），女，河北石家庄人，在读硕士研究生，主要从事中药资源与质量研究工作。
〔通讯作者〕* 鲁耀邦，男，教授，硕士研究生导师，E-mail：luyb414@sina.com。
HPLC法测定黄花石蒜不同部位的
加兰他敏含量
〔摘要〕 目的 测定黄花石蒜不同部位加兰他敏的含量。方法 采用 HPLC 法。色谱柱为 Agilent Eclipse XDB-
C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为 0.1%磷酸-甲醇（94∶6），流速为 1.0 mL/min，检测波长为 238 nm，柱温为
30 ℃，进样量为 20 μL。结果 加兰他敏在 10.4~124 μg/mL 范围内线性关系良好(r=0.999 7)，加样回收率 102.8%，
RSD 为 5.2%。黄花石蒜的花中加兰他敏含量最高，根次之，鳞茎和茎中含量最少。结论 黄花石蒜不同部位中加兰
他敏含量存在差异。
〔关键词〕 黄花石蒜；加兰他敏；高效液相色谱法；含量测定
〔中图分类号〕R284.1 〔文献标识码〕B 〔文章编号〕1674－070X（2009）05－0051－03
Determination of galanthamine from different
parts of Lycoris aurea herb with HPLC
NIE Yuan-yuan, ZHOU Hai-xiang, PENG Fei, LU Yao-bang
(Pharmaceutical College, TCM University of Hunan, Changsha, Hunan 410208, China)
〔Abstract〕 Objective To determine the con tent of galanthamine from different parts
of Lycoris aurea herb with HPLC. Method There were the agilent eclipse XDB-C18 column
(150 mm×4.6 mm, 5 μm), the mobile phase 0.1% phosphoric acid-methanol (94:6) at the flow
rate of 1.0 mL/min, the detection wavelength was 238 nm, the column temperature 30 ℃, and
the injection volume 20 μL in HPLC method. Results The linear range of galanthamine amount
was 10.4~124 μg/mL(r=0.999 7); the average recovery of galanthamine was 100.8% with RSD of
6.8%. The highest percentage of galanthamine was in the flowers of Lycoris aurea herb, next in
the roots and the lowest in the stem and bulb. Conclusion The contents of galanthamine
in different parts of Lycoris aurea herb are different.
〔Key words〕 Lycoris aurea herb; galanthamine; HPLC; content determination
聂媛媛，周海翔，彭 菲，鲁耀邦 *
（湖南中医药大学药学院，湖南 长沙 410208）
加兰他敏（Galanthamine）又称雪花莲胺碱，为叔胺生物
碱[1]，是有效的、具有竞争性和可逆的乙酰胆碱酯酶抑制剂。
其易于通过血脑屏障进入脑组织， 对中枢神经作用较强[2]。
临床用药形式为氢溴酸加兰他敏（Galanthamine Hydrobro-
mide），可广泛用于阿尔茨海默氏症(Alzheimers disease，A
D)、重症肌无力、脊髓灰白质炎静止期和后遗症、儿童脑性
麻痹、多发性神经炎、脊神经根及由于神经系统疾病或外
伤所引起的感觉运动障碍等症治疗 [3-4]。 由于该药对于轻、
2009 年 10 月第 29 卷第 5 期
Oct． 2009 Vol． 29 No． 5
湖 南 中 医 药 大 学 学 报
Journal of TCM Univ． of Hunan 51
中度 AD 的治疗具有很好的疗效，且无肝毒性，随着目前
AD 的治疗朝着预防疾病的方向发展， 该药有可能成为
AD治疗的首选药物 [5]。
加兰他敏主要从石蒜属植物中获取， 但目前对石蒜
属植物各部位加兰他敏的含量尚未有明确记载。 因此，本
试验选用 HPLC 法测定石蒜属黄花石蒜中茎、鳞茎、根、花
4 个部位的加兰他敏含量，为扩大黄花石蒜的药用资源以
及今后的开发应用提供实验依据。
1 实验材料
1.1 仪器
高效液相色谱仪 Agilent 1200LC，HP-1200 紫外多波
长检测仪，HP 色谱工作站 （安捷伦科技有限公司）；UV-
1700 紫外-可见分光光度计（日本岛津公司）；MA110 电子
分析天平（上海良平仪器仪表有限公司）。
1.2 试药
黄花石蒜采自湖南衡山， 经鉴定为石蒜科石蒜属黄
花石蒜（Lycoris aurea Herb）；加兰他敏对照品（南京泽朗
医药科技开发有限公司，纯度为 99%），甲醇为色谱纯，磷
酸、氯仿、氨水均为分析纯，水为去离子水。
2 方法与结果
2.1 溶液制备
2.1.1 对照品溶液制备 精密称取加兰他敏对照品适
量，用甲醇配成浓度为 259 μg/mL 和 72 μg/mL 的加兰他
敏溶液各 50 mL，经 0.45 μm 微孔滤膜过滤后即得。
2.1.2 供试品溶液制备 取黄花石蒜茎、鳞茎、根、花 4 个
部位的组织经 60 ℃烘干 ， 各称取 5 g， 加 95%乙醇
50 mL，水浴加热回流 1 h，提取 2 次，过滤。 滤液水浴挥
干，残渣加 0.1 mol/L 盐酸 25 mL 溶解，过滤。滤液加氨水
调 pH 10.0，然后以氯仿萃取 3 次，每次 25 mL，合并氯仿
液，水浴挥干，残渣加甲醇溶解，定容至 10 mL，经 0.45
μm 微孔滤膜过滤后作为供试品溶液。
2.2 色谱条件
色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18（150 mm×4.6 mm，5
μm）；流动相：0.1%磷酸-甲醇（94∶6）；柱温：30 ℃；流速：
1.0 mL/min；检测波长：238 nm；进样量：20 μL。 所用流动
相在使用之前用 0.22 μm 微孔滤膜过滤。
2.3 线性关系考察
精密量取浓度为 259 μg/mL 的对照品溶液 0.2，0.6，
1.2，1.6，2.4 mL 置于 5 mL 容量瓶中加甲醇至刻度，摇匀。
分别精密量取 20 μL 注入液相色谱仪， 记录峰面积并以
峰面积（Y）对进样浓度（X）进行线性回归，得方程为
Y=3.336X+6.71（r=0.999 7）
表明在 10.4~124 μg/mL 浓度范围内峰面积与加兰他
敏浓度的线性关系良好。
2.4 精密度试验
精密吸取对照品溶液（72 μg/mL）20 μL，按上述色谱
条件，重复进样 6 次，测定加兰他敏的峰面积，得平均峰
面积的 RSD为 2.7%（n=6），表明仪器精密度良好。
2.5 稳定性试验
精密吸取供试品溶液 20 μL， 按上述色谱条件分别于
0、2、4、6、8、10 h时进样，记录峰面积，计算得平均峰面积的
RSD为 3.8%（n=6），表明供试品溶液至少在 10 h内稳定。
2.6 重复性试验
取同一部位（鳞茎）组织 6 份（经 60 ℃烘干后各称取
5 g），按“2.1.2”项下方法制成供试品溶液 6 份，按上述色
谱条件分别测定加兰他敏含量， 结果显示平均含量为
0.008 6%，RSD 4.0%（n=6）。
2.7 加样回收率试验
精密称取已知含量的鳞茎 5 份 （加兰他敏含量为
0.008 6%），每份约 2 g，精密加入加兰他敏对照品溶液（72
μg/mL）2.5 mL，按“2.1.2”项下方法进行提取和制备溶液，
按上述色谱条件测定峰面积，计算回收率。 结果见表 1。
2.8 样品测定
分别取供试品溶液及对照品溶液各 20 μL， 注入液
相色谱仪，测定峰面积，按外标法计算含量，结果显示：黄
花石蒜根、 鳞茎、 茎、 花等部位的加兰他敏含量分别为
0.051 2%、0.008 6%、0.003 4%和 0.056 3%。 见图 1。
3 讨论
加兰他敏含量测定的方法主要有紫外分光光度法 、
薄层色谱法、非水滴定法、正相和反相 HPLC 法等。通过比
较加兰他敏含量的不同测定方法发现： 药典中所采用的
经典非水滴定法和 TLC 法对于检测有关物质和测定含量
准确性不高，专属性不强；采用 HPLC 法，样品中加兰他敏
峰的分离效果好，且方法的灵敏度高，结果的重复性和准
确度都较好[6]，故采用 HPLC 法进行加兰他敏含量测定。加
兰他敏溶于水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿等，采用乙醇
提取，既可以避免用水提取而出现乳化现象，又可减小用
氯仿、乙酸乙酯提取时的杂质干扰，且提取较完全，可取
得良好的色谱分离效果[7]。
表 1 黄花石蒜鳞茎样品中加兰他敏的加样回收率表 （n=6）
样品量
（g）
2.003 2
2.002 7
2.001 2
2.000 8
2.001 6
加入对照
品量（μg）
180
样品中
含量（μg）
172.5
172.4
172.3
172.3
172.3
测得量
（μg）
348.0
346.8
361.7
367.0
363.5
回收率
（%）
97.5
96.9
105.2
108.2
106.2
平均值
（%）
102.8
RSD
（%）
5.2
湖南中医药大学学报 2009 年第 29 卷52
A.加兰他敏对照品；B.黄花石蒜茎提取液；
C.黄花石蒜鳞茎提取液；D.黄花石蒜根提取液；
E.黄花石蒜花提取液
图 1 黄花石蒜不同部位提取液的加兰他敏 HPLC 图
在流动相选择中，曾比较了 0.1%三氟乙酸-甲醇、水-
甲醇、甲醇-冰醋酸-水、磷酸盐缓冲液（pH 3~4）-甲醇、
0.1%磷酸-甲醇的实验效果， 发现三氟乙酸导致峰型不
好；水-甲醇使基线不平，且保留时间过小；磷酸盐缓冲液
在使用磷酸调节 pH 3~4 时不易控制，且范围过大，产生
误差较大。 磷酸-甲醇作为流动相保留时间较为合适，峰
型较好，基线较平，且主峰与杂质的分离效果良好，容易
控制。 实验中也曾加入三乙胺作为扫尾剂，但观察到样品
中所含杂质保留时间本身与加兰他敏相差较大， 分离较
好，故可以不用加入。
经测定加兰他敏在 238 nm 和 289 nm 处有最大吸
收，且有较好的选择性和灵敏度。 但 238 nm 处的吸收强
于 289 nm，故采用 238 nm 作为检测波长。
测定结果表明， 黄花石蒜花和根组织中加兰他敏的
含量较高，而茎和鳞茎中较低。 因此，目前单纯从石蒜鳞
茎中提取加兰他敏并不合理，在实际操作过程中，可从根
或花等入药部位中提取，以扩大加兰他敏的药用资源。
阿尔茨海默氏症在发达国家已经成为引起死亡的第
四大“杀手”，虽然加兰他敏的合成工艺已经趋于成熟，但
是来自于药用植物资源的加兰他敏仍然具有重要意义 [8]。
本研究对扩大药用植物黄花石蒜中加兰他敏的提取范围
以丰富药物资源提供了可靠的理论依据。
参考文献：
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Plant Extracts[J]. Phytochemical Analysis, 2008, 19: 353-358.
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B
C
D
E
加兰他敏对照品
加兰他敏
加兰他敏
加兰他敏
加兰他敏
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（本文编辑 徐爱良）
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