全 文 ：收稿日期:2005 - 04 - 19　　修回日期:2005 - 06 -30
基金项目:福建省推广基金项目(0202B9).
作者简介:何玮毅(1982 -),男.研究方向:园艺植物遗传育种.
*通讯作者.
黄花水仙和南日岛水仙的组培快繁
何玮毅 , 陈晓静* , 陈祥檀
(福建农林大学园艺学院 ,福建 福州 350002)
摘要:以黄花水仙和南日岛水仙为材料 , 对 2个水仙品种的组培快繁技术进行了研究.结果表明:以低温处理 1个月的带鳞
茎盘基部的鳞片为外植体 ,接种于 M S+0. 5 mg L - 1 BA+0. 1 mg L - 1 2, 4-D的诱导培养基和 M S+1. 0 m g L - 1 BA +0. 5
或 1. 0 m g L -1 2, 4-D的继代增殖培养基中 ,诱导黄花水仙形成的小鳞茎数量多 , 增殖率高;南日岛水仙以 MS+0. 5 mg
L - 1 BA+2. 0 mg L - 1 NAA的诱导培养基和 MS+1. 0 mg L - 1 BA+0. 5或 1. 0 m g L - 1 2, 4-D的增殖培养基效果较好. 生
根培养基为 1 /2MS +0. 05 mg L - 1 NAA,移栽后成活率很高.
关键词:中国水仙;组织培养;快速繁殖
中图分类号:S682. 2+1;Q813. 1+2 文献标识码:A 文章编号:1671-5470(2005)03-0313-05
In vitro propagation ofHuanghua and Nanridao narc issus
HE Wei-y i, CHEN X iao-jing, CHEN X iang-tan
(Co llege of Ho rticulture, Fujian Ag ricu ltu re and Forestry University, Fuzhou, Fujian 350002, Ch ina)
Abstrac t:The study w as carried out to deve lop a technologica l sy stem fo r rap id propaga tion o fHuanghua and Nanridao na rc issus in
vitro. The re su lt indicated tha t segm ents of the bu lbs w ith basa l sca les and a po rtion o f the pla te, w hich we re pre trea ted under 4 ℃
for am on th, we re we ll used as exp lants. M S m edium containing 0. 5 m g L- 1 BA and 0. 1 m g L - 1 2, 4-D or 0. 5 mg L - 1 BA and
2. 0 m g L -1 NAA was su itab le fo r induction o f bu lb le ts ofH uanghua orNanridao narcissus, respec tive ly. TheMS medium , supple-
m en ted w ith 1. 0 m g L -1 BA and 0. 5 m g L- 1 or 1. 0 m g L - 1 2, 4-D, cou ld be used fo r subcu lture o f Huanghua and Nanridao
narcissus. A high ra te of v iability w as obta ined in a roo ting induction m edium of 1 /2 MS added w ith 0. 05 m g L - 1 NAA fo r bo th
narcissus.
K ey words:Narcissus tazetta L inn. var. ch inensis Roem;in vitro cu ltu re;rapid p ropaga tion
中国水仙(Narcissus tazetta Linn. va r. ch inensisRoem)系石蒜科水仙属多花水仙亚属植物 ,是法国水仙
的变种.水仙在我国已有 1300多年的栽培历史 ,以漳州水仙久负盛名 ,畅销海内外.然而由于中国水仙花
色品种单一 ,主栽品种受病毒侵染 ,商品性状普遍退化 ,严重影响了我国水仙的生产和发展 [ 1] . 福建农林
大学园艺学院开展了地方花卉资源开发与利用的研究 ,从多花水仙野生资源中选出了南日岛水仙和黄花
水仙 ,其中南日岛水仙的商品性状类似于漳州水仙 ,但因其较抗病毒病 ,可作为一些带毒漳州水仙的替代
品种;而黄花水仙的黄色花被打破了普通水仙花被单一的白色调 ,极具市场前景 ,很有必要迅速推广繁殖.
水仙的生产一般采用子鳞茎繁殖 ,不仅繁殖速度有限 ,而且长期的无性繁殖容易积累和传播病毒.组
织培养为水仙快速繁殖和脱除病毒提供了新的途径.一些学者[ 2 - 11]分别对不同产地的水仙进行了组培研
究 ,但由于技术本身和其它方面的原因 ,至今仍没有在生产上大量应用.为加速水仙品种的推广 ,丰富中国
水仙的花色品种类型 ,本试验对南日岛水仙和黄花水仙进行了组培快繁技术研究.
1　材料与方法
1. 1　材料
供试材料为福建农林大学园艺学院遗传育种教学部提供的南日岛水仙和黄花水仙的 2 - 3年生鳞茎.
1. 2　方法
1. 2. 1　外植体预处理及表面消毒　水仙鳞茎于冰箱 (4 ℃)中预处理 1个月 ,取出后剥除外层干枯的鳞
福建农林大学学报(自然科学版) 第 34卷 第 3期
Journa l o f Fu jian Ag ricu lture and Fo re stry University (Natura l Sc ience Edition) 2005年 9月
DOI牶牨牥牣牨牫牫牪牫牤j牣cnki牣j牣fafu牗nat牣sci牣牘牣牪牥牥牭牣牥牫牣牥牨牥
片 ,去除枯根 ,流水冲洗 30m in后置于体积分数为 70%的酒精中浸泡 30 s,接着在 1 g L- 1升汞中消毒 8
- 12m in,再用无菌水漂洗 5次.
1. 2. 2　培养基　基本培养基为 MS和 1 /2MS ,附加不同含量的 BA、NAA、2, 4-D及 30 g L -1蔗糖 、7 g
L
- 1琼脂 、3 g L - 1活性炭 , pH为 5. 8.诱导培养基以 MS为基本培养基 ,设置成 10种不同激素配比 ,分别
为:1. 0mg L -1 NAA;0. 5mg L - 1 BA+1. 0、2. 0mg L -1 NAA;0. 5mg L -1 BA +0. 1mg L -1 2, 4-D;1. 0
mg L -1 BA +1. 0、2. 0 mg L - 1 NAA;1. 0mg L - 1 BA +0. 1、 0. 3、0. 5mg L - 1 2, 4-D;2. 0 mg L -1 BA +
0. 1 mg L- 1 2, 4-D. 继代增殖培养基仍以 MS为基本培养基 ,激素配比分别为:1. 0 mg L -1 BA +0. 5 、1. 0
mg L -1 2, 4-D.壮苗培养基为:MS+0. 1、 0. 5 mg L - 1 NAA.生根培养基为:1 /2M S+0. 03、 0. 05 mg L -1
NAA.
1. 2. 3　培养条件　培养室温度为(25±2)℃,光强度为 1500 lx,光照时间为 14 h d-1.
1. 2. 4　外植体的接种　在超净工作台上 ,切除消毒过的水仙鳞茎上端鳞片 ,留下基部 3 - 4 mm的鳞片及
鳞茎盘.将鳞茎盘按放射状切成 8 mm ×5 mm的块状 ,每块带 2 - 3层鳞片 ,接种于诱导培养基中. 每隔 7 d
观察记载 1次 , 30 d后统计污染率;70 d后统计直径≥0. 5 cm的小鳞茎数 ,计算增殖率.
1. 2. 5　继代增殖培养　在无菌条件下 ,切除初代培养诱导的小鳞茎上半部分 ,带有鳞茎盘的下半部分切
成 2块 ,接入增殖培养基. 7 d观察记载 1次 , 45 d后统计直径≥0. 5 cm的小鳞茎数 ,计算增殖率.
1. 2. 6　生根培养和移栽　将继代培养获得的直径≥0. 8 cm的小鳞茎分离 ,接入生根培养基 , 30 d后计算
生根率 (生根小鳞茎总数 /接种小鳞茎总数 ).长势较弱的小鳞茎转入壮苗培养基继续培养.已生根的小鳞
茎开瓶炼苗 3 - 5 d后 ,取出小鳞茎 ,用自来水洗去根部附着的琼脂 ,移栽到盛有河泥的营养钵或塑料穴盘
中 ,室温下培养. 待小苗成活后 ,按株距 7 cm、行距 10 cm种植于疏松肥沃 、保水力较强的土壤中 ,覆盖稻
草 ,并用塑料膜保湿 , 2周后撤除.
2　结果与分析
2. 1　初代培养
2. 1. 1　不同激素配比对水仙小鳞茎的诱导效果　黄花水仙 (图 1A)和南日岛水仙外植体接入附加不同激
素配比的 MS初代培养基 7 d左右 ,鳞茎盘开始膨大 ,鳞片有所伸长并向外开张. 一般接种后 20 d左右在
两鳞片之间出现中空小球状体 (露白 )(图 1B).
A.黄花水仙;B.露白;C. 1个外植体上形成 6小鳞茎;D.鳞茎盘上长不定芽;E.南日岛水仙继代培养 30 d;F. 1年生黄花水仙小鳞茎.
图 1　黄花水仙和南日岛水仙的组培快繁
Fig. 1　 In vitro p ropagation ofH uanghu a and Nan ridao narcissu s
314
福建农林大学学报(自然科学版) 第 34卷
　表 1　不同初代培养基激素配比对南日岛水仙小鳞茎的诱导效果 1)
　Tab le 1　E ffects of dif feren t phytohormone com b ination on the induction of bu lb lets
ofN anrid ao narcissus
激素配比 /(m g L- 1)
BA NAA 2, 4-D
外植
体数
小鳞茎
总数
增殖率
%
0 1. 0 16 2 12. 50cC
0. 5 1. 0 27 38 140. 74aA
0. 5 2. 0 29 54 186. 21aA
0. 5 0. 1 28 39 139. 29aA
1. 0 1. 0 14 9 64. 29bcBC
1. 0 2. 0 27 39 144. 44aA
1. 0 0. 1 19 11 57. 89bcBC
1. 0 0. 3 17 23 135. 29aAB
1. 0 0. 5 32 53 165. 63aA
2. 0 0. 1 20 25 125. 00abAB
　　　1)基本培养基为 MS;多重比较采用 SSR法 ,数字后附不同大小写字母者
分别表示差异达 0. 01、0. 05显著水平.
　表 2　不同初代培养基激素配比对黄花水仙小鳞茎的诱导效果 1)
　Tab le 2　E ffects of dif feren t phytohormone com b ination on the induction of bu lb lets
ofH uanghua n arcissu s
激素配比 /(m g L- 1)
BA NAA 2, 4-D
外植
体数
小鳞茎
总数
增殖率
%
0 1. 0 14 0 0dC
0. 5 1. 0 9 14 155. 56 abAB
0. 5 0. 1 28 56 200. 00 aA
1. 0 1. 0 13 7 53. 85 cdBC
1. 0 0. 1 11 10 90. 91b cABC
1. 0 0. 3 15 13 86. 67b cABC
1. 0 0. 5 26 35 134. 62 abcAB
2. 0 0. 1 21 24 114. 29 abcABC
　　　1)基本培养基为 MS;多重比较采用 SSR法 ,数字后附不同大小写字母者
分别表示差异达 0. 01、0. 05显著水平.
　　表 1、2显示 , 3种不同含量的 BA与 1. 0、
2. 0 mg L- 1 NAA或 0. 1、0. 3、0. 5 mg L- 1
2, 4-D的配比均能诱导小鳞茎形成 ,而仅加
NAA ,不加 BA ,无法诱导黄花水仙小鳞茎的
产生. 0. 5 mg L - 1 BA +2. 0 mg L - 1 NAA
对南日岛水仙的诱导效果最好 ,增殖率达
186. 21%,但高增殖率与露白天数无线性关
系.黄花水仙最适的激素配比为 0. 5 mg
L
- 1
BA +0. 1mg L -1 2, 4-D ,接种后 16 d便
可见外 植体露白 , 2 个月后增 殖率达
200. 00%,平均一块外植体能产生 1 - 2个小
鳞茎. 除 1. 0 mg L - 1 NAA外 ,绝大部分的激
素配比都能诱导外植体形成 5 - 6个小鳞茎
(图 1C),且多数来自带基部鳞茎盘的中 、外
层鳞片. NAA与 BA含量的比值 (1 - 4)与小
鳞茎质量呈正相关 ,以 4为最佳;而 2, 4-D与
BA含量的比值为 0. 05 - 0. 5,以 0. 2为宜.
黄花水仙接入 0. 5mg L - 1 BA +1. 0mg
L -1 NAA和 0. 5 mg L - 1 BA +0. 1 mg
L
- 1
2, 4-D的初期 ,部分外植体的鳞茎盘和鳞
片边缘会有毛状物产生.接种 60 d左右 ,除
鳞片之间产生小鳞茎外 ,在毛状物表面还会
长出直径为 0. 8 - 1. 0mm的不定芽 ,并伴有
极短的小叶 (图 1D). 将这些小鳞茎切下 ,接
入 MS+0. 5 mg L- 1 NAA壮苗培养基 ,小鳞
茎迅速膨大.
2. 1. 2　不同含量 BA对水仙小鳞茎的诱导效
果　在含 0. 1mg L - 1 2 , 4-D或 1. 0mg L- 1
NAA的 MS初代培养基中分别添加 0、0. 5、1. 0、2. 0mg L -1 BA ,分析不同含量 BA对水仙小鳞茎的诱导效
果.结果(表 3、4)表明:0. 5mg L -1 BA对水仙小鳞茎的诱导效果极显著高于 1. 0、0mg L - 1 ,其它差异不
显著.
2. 1. 3　不同含量 2, 4-D对水仙小鳞茎的诱导效果　在含 1. 0 mg L- 1 BA的 MS初代培养基中分别添加
0. 1、0. 3、0. 5 mg L -1 2, 4-D,分析不同含量 2, 4-D对水仙小鳞茎的诱导效果. 结果 (表 5)表明:0. 5 mg
L
- 1
2, 4-D对水仙小鳞茎的诱导效果显著高于 0. 1mg L -1 ,其它差异不显著.
　　表 4　NAA附加不同含量 BA对水仙小鳞茎的诱导效果 1)
　　Tab le 4　E ffects of differen t concen tration of BA on the indu ction of
bu lb lets of narcissu s
ρ(BA)
m g L- 1
外植
体数
小鳞茎
总数
增殖率
%
0. 5 36 52 144. 44 aA
1. 0 27 16 59. 26bB
0. 0 30 2 6. 67bB
　　　　1)培养基为 M S+1. 0m g L - 1 NAA;多重比较采用 SSR法 ,数
字后附不同大小写字母者分别表示差异达 0. 01、0. 05显著水平.
表 3　2, 4-D附加不同含量 BA对水仙小鳞茎的诱导效果 1)
Tab le 3　 E ffects of differen t concentrat ion of BA on the induction of
bu lb lets of narcissus
ρ(BA)
m g L -1
外植
体数
小鳞茎
总数
增殖率
%
0. 5 56 95 169. 64aA
2. 0 49 41 119. 51abAB
1. 0 30 21 70. 00bB
　　1)培养基为 MS+0. 1 mg L- 1 2, 4-D;多重比较采用 SSR法 ,数
字后附不同大小写字母者分别表示差异达 0. 01、 0. 05显著水平.
315
第 3期 何玮毅等:黄花水仙和南日岛水仙的组培快繁
　表 5　不同含量 2, 4-D对水仙小鳞茎的诱导效果 1)
　Tab le 5　E ffects of d ifferen t con cen tration of 2, 4-D on the indu ction of
bu lb lets of narcissu s
ρ(2, 4-D)
mg L- 1
外植
体数
小鳞茎
总数
增殖率
%
0. 5 58 88 151. 72 a
0. 3 32 36 112. 50 ab
0. 1 30 21 70. 00b
　　　1)培养基为MS+1. 0 mg L- 1 BA;多重比较采用 SSR法 ,数字后
附不同小写字母者表示差异达 0. 05显著水平.
　表 6　不同继代培养基激素配比对水仙小鳞茎的诱导效果 1)
　Tab le 6　Ef fects of d ifferent phytohorm one comb inat ion on the induction of
sub cu ltu red bu lb lets of narcissu s
品种　　　 激素配比 /(m g L
- 1)
BA 2, 4-D
外植
体数
小鳞茎
总数
增殖率
%
南日岛水仙 1. 0 0. 5 35 45 128. 57
1. 0 1. 0 44 54 122. 73
黄花水仙　 1. 0 0. 5 37 31 83. 78
1. 0 1. 0 29 28 96. 55
　　　1)培养基为 M S.
　表 7　不同时期生根培养基的生根效果 1)
　Tab le 7　E ffects of root ing m ed ia on root form ation in dif feren t period
品种 接种日期 小鳞茎总数
生根小鳞
茎总数
生根率
%
南日岛水仙 12月 30日 8 6 75. 00
2月 20日 18 2 11. 11
黄花水仙 12月 30日 14 12 85. 71
2月 20日 13 6 46. 15
　　　1)生根培养基为 1 /2MS+0. 05 mg L- 1 NAA.
2. 1. 4　不同含量 NAA对水仙小鳞茎的诱导效果　
在含 0. 5、1. 0mg L -1 BA的 MS初代培养基中分别
添加 1. 0、2. 0 mg L -1 NAA ,分析不同含量 NAA对
水仙小鳞茎的诱导效果.结果表明:2种含量对水仙
小鳞茎的诱导效果差异不显著.
2. 2　继代培养
继代培养 3 d后鳞片便开始萌动 , 10 d左右露
白 , 20 d左右可以形成直径为 0. 5 cm的小鳞茎 (图
1E).多数的外植体最内层鳞片由四周向中心愈合
生长 ,形成一个新的小鳞茎. 如果外植体足够大 ,鳞
片间也会有小鳞茎形成 ,甚至在最外层鳞片的基部
外侧也可能形成小鳞茎 ,但继代培养的增殖率较初
代培养的低 ,而且小鳞茎质量也较差.南日岛水仙的
增殖率高于黄花水仙 (表 6),这可能是品种的特性
所致.
2. 3　生根诱导与壮苗培养
小鳞茎接入 1 /2M S +0. 03 mg L - 1 NAA和
1 /2M S+0. 05 mg L -1 NAA 2种生根培养基 15 d
后 ,便有 2 - 3条根原基形成 , 20 d根可长至 2 - 3
cm ,直径为 0. 8mm左右 ,此时移栽成活率高.发生
于外植体鳞茎盘上的不定根较粗 ,而在新形成的小
鳞茎盘上长出的根则较细 ,直径仅为 0. 5 mm.但无
论哪种形态的根对移栽后小鳞茎的成活均无很大影
响.表 7表明 ,同一时期接种的不同品种 ,黄花水仙
生根效果好于南日岛水仙. 12月 30日进行小鳞茎
生根诱导的效果明显好于 2月 20日 ,这与水仙自然
生长的情况一致.生根培养期间 ,小鳞茎会有所膨大 ,但也出现个别叶片生长过旺的现象. 小鳞茎在 1 /2MS
+0. 03 mg L - 1 NAA培养基上生根速度慢 ,根细 ,生根率也低.
M S+0. 5 mg L- 1 NAA壮苗培养基促进小鳞茎膨大的效果明显好于 MS+0. 1 mg L - 1 NAA.黄花水
仙小鳞茎的膨大速度快于南日岛水仙 ,所抽叶片较南日岛水仙宽而厚 ,且叶脉明显.据观察 ,接种于 0. 5mg
L -1 NAA的壮苗培养基 30 d后 ,小鳞茎直径比接种时增大 1 /3 - 1 /2,并且有 1 /3左右的小鳞茎生根 ,但
仍有个别叶片生长过旺的现象.
2. 4　组培苗的移栽
　表 8　水仙组培苗移栽成活率
　Tab le 8　V iab ility rate of test tub e seed lings transp lanted
品种 移栽小鳞茎总数
成活小鳞
茎总数
成活率
%
南日岛水仙 38 37 97. 37
黄花水仙 28 28 100. 00
小鳞茎接入生根培养基 20 d左右可以移栽. 按常规组培
苗移栽步骤 ,先将其移植于营养钵或塑料穴盘中 ,室温下培
养 ,该过程要注意保湿 、遮荫.继续培养 30 d左右移至田间 ,
12月份至翌年 2月份正值水仙的生长季节 ,移栽成活率达
97%以上(表 8).翌年的 5月下旬至 6月初 ,小苗叶片开始变
黄 、枯萎 , 1星期左右地上部分枯死 ,此时将鳞茎挖起 ,阴干 1
周后装袋收藏. 组培苗移栽成活后生长迅速 ,经 1个生长季节可以从移栽时的 1. 0 cm ×0. 8 cm左右长至
4. 0 cm ×2. 0 cm(图 1F).
3　讨论
适宜的激素配比是提高水仙小鳞茎增殖率的关键. BA含量为 0 - 2. 0 mg L- 1时 ,小鳞茎增殖率随着
316
福建农林大学学报(自然科学版) 第 34卷
NAA(1 - 2mg L -1)、2, 4-D(0. 1 - 0. 5 mg L -1)含量的增加而有所提高.而 2 - 4mg L- 1 BA与低含量
的 NAA(1mg L - 1)配比可以促进小鳞茎的形成 ,但小鳞茎的形成随着 NAA含量(1 -4mg L - 1)增加而
减少[ 7] . 不同配比试验表明 ,可以尝试以较高含量的 2, 4-D、NAA与 0. 5 mg L- 1 BA组合 ,继续进行比较
试验.
外植体切法与大小影响小鳞茎的质量和增殖率.水仙小鳞茎一般形成于鳞片之间 ,同一位置着生的小
鳞茎以 1 - 2个为宜 ,当过多的小鳞茎同时着生在相同位置时 ,每个小鳞茎的发育速度变缓 ,个别甚至停
止.因此 ,在外植体总量不变的前提下 ,将水仙带鳞片的鳞茎盘沿放射状方向切成小块 ,每块 4 -5片鳞片 ,
可以促进小鳞茎形成于不同位置并茁壮成长. 前人基本上采用 4 mm ×3mm左右大小的外植体 [ 5 - 8, 10, 11] ,
但本试验发现这样大小的外植体比 8mm ×5 mm左右大小的外植体露白时间推迟 15 - 20 d,增殖率以及
小鳞茎的质量也明显低于后者.由于小鳞茎的继代增殖呈几何级数增长 ,综合考虑各方面的因素 ,外植体
大小以 8 mm ×5mm为宜.
以不同部位的水仙鳞片为外植体 ,其增殖率与小鳞茎质量明显不同.外植体上带有鳞茎盘的鳞片位置
越靠外层增殖率越高 ,小鳞茎质量越好 ,这与李招文等[ 5] 、叶银根等 [ 12]的研究结果一致.叶银根等 [ 12]认
为 ,外植体鳞片的数量 、大小 、贮藏物质的多少与增殖率和小鳞茎质量有关. 靠近内层的鳞片 ,尤其是主芽
周围的鳞片 ,因其贮藏养分不足只会徒长 ,利用价值不大.实践中 ,可将鳞片切成 “外长内短 ”,以充分利用
外层鳞片所贮藏的养分.
黄花水仙和南日岛水仙组培苗的移栽步骤简单 ,无特殊要求 ,但应选择在水仙的自然生长季节里进
行.冬春两季 ,将组培苗诱导生根后 ,按组培常规移栽方法炼苗 、移入营养钵 , 1 d后小鳞茎的叶片便由下
垂状态恢复至挺立状态 ,待其成活后移入田间 ,成活率高达 97%以上. 陈振光等 [ 7]认为 ,组培苗无论长根
或不长根 ,均可直接移植于田间 ,此法是否适用于黄花水仙和南日岛水仙 ,有待于进一步试验.
致谢:本试验承福建农林大学林允信 、林庆良老师指导 ,在此谨表谢意.
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第 3期 何玮毅等:黄花水仙和南日岛水仙的组培快繁