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不同产地人工栽培黄花石蒜不同器官中加兰他敏含量测定



全 文 :不同产地人工栽培黄花石蒜不同器官中
加兰他敏含量测定
〔摘要〕 目的 探索人工栽培黄花石蒜中加兰他敏的最佳采收器官及最适产地,寻找高含量的药材原料。 方法 采用 HPLC
法测定人工栽培黄花石蒜不同器官及不同产地中加兰他敏含量。 结果 采用 SPSS 17.0 软件 Corrected Model(模型检验)进行统
计学分析表明:黄花石蒜不同器官加兰他敏的含量差别具有显著统计学意义 (P<0.001),其含量由高到低各产地均依次为:花>
根>花葶>鳞茎,其 3 个产地加兰他敏平均含量依次为花(0.135%)>根(0.080%)>花葶(0.020%)>鳞茎(0.017%);不同产地黄花石蒜
中加兰他敏含量差别无统计学意义(P>0.05)。 结论 黄花石蒜花中含量远远高于鳞茎中含量,每年都可采收,花可作为提取加兰
他敏的药材原料,代替传统上使用的一次性采挖的鳞茎;3 个产地人工栽培黄花石蒜中加兰他敏含量有细微差别,若以花作为
药材原料,则大围山可作为最适种植区。
〔关键词〕 黄花石蒜;加兰他敏;花;鳞茎;衡山;大围山
〔中图分类号〕R284.2 〔文献标识码〕A 〔文章编号〕doi:10.3969/j.issn.1674-070X.2015.05.010
Galantamine Content Determination of Different Organs of the Artificial
Cultivation Lycoris aurea from Different Places
Xiang-Dan Liu, Jiao Wang, Feng-Juan Li, Ri-Bao Zhou*, Zhao-Hui Wang, Xiao-Rong Liu
(School of Pharmacy, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha,Hunan 410208, China)
〔Abstract〕 Objective To explore the best organs and places of galantamine in the artificial cultivation Lycoris aurea and
find the medicinal material with high content. Methods HPLC method was adopted to determine the content of the artificial
cultivation Lycoris aurea in different organs and places. Results By using SPSS 17.0 software Corrected Model (Model test) for
statistical analysis, it shows that the difference of the galantamine content determination of different organs is statistically
significant (P<0.001), and its content from high to low are as follows: flower> root> scape> bulb. The average content of three
places are as follows:flower(0.135%)> root(0.080%)> scape(0.020%)> bulb(0.017%). While the difference of the galantamine
content determination of different places is not statistically significant (P >0.05). Conclusions The content in the flower is
far more than it in the bulb. The Lycoris aurea could be harvested every year, and the flower could be as
the medicinal material to extract galantamine instead of bulb only used once in traditionally. There is slight difference about
the galantamine content from three places. If the flowers were as medicinal material, Dawei Mountain will be the best choice
to plant Lycoris aurea.
〔Keywords〕 Lycoris aurea; galantamine; flowers; bulb; different origins; Mount Heng; Dawei Mountain
刘湘丹,王 姣,李凤娟,周日宝 *,王朝晖,刘笑蓉
(湖南中医药大学药学院,湖南 长沙 410208)
〔收稿日期〕2014-07-10
〔基金项目〕长沙市科技局重点项目(k1113001-31);湖南省研究生科研创新项目 2011;国家中医药管理局“药用植物学”重点学科(国中医药发
[2009]30 号);湖南省“中药学”重点学科建设项目资助(湘教通[2011]76 号)。
〔作者简介〕刘湘丹,女,讲师,研究方向:中药资源与质量。
〔通讯作者〕* 周日宝,男,博士,教授,E-mail:13973134355@139.com。
2015 年 5 月第 35 卷第 5 期
May 2015 Vol. 35 No. 5
湖 南 中 医 药 大 学 学 报
Journal of Hunan Univ. of CM
黄花石蒜(Lycoris aurea Herb.),又名忽地笑,
为石蒜科(Amaryllidaceae)石蒜属(Lycoris)的草本
植物[1]。 其含有多种生物碱,如石蒜碱、加兰他敏、力
可拉碱等,其中加兰他敏(Galanthamine)是一种可
逆性胆碱酯酶抑制剂,易透过血脑屏障,产生较强
的中枢作用,可用于重症肌无力、进行性肌营养不
良、脊髓灰质炎后遗症及老年痴呆症的治疗,是目
前临床上治疗老年痴呆症的首选药 [2-4]。
黄花石蒜鳞茎因含有较高的生物碱,是目前提
取加兰他敏等生物碱的主要原料,药厂长期大量采
31
挖野生黄花石蒜鳞茎,致野生资源濒临枯竭;同时,
产地山丘也被挖得千疮百孔,造成水土流失,环境
破坏严重。
本文充分利用人工栽培黄花石蒜的资源,寻找
高含量的药材原料,探索黄花石蒜中加兰他敏的最
佳采收部位及最适种植区。 现将方法与结果报道如
下。
1 仪器与材料
1.1 仪器
Agilent 1260 LC 高效液相色谱仪 (含二元泵、
柱温箱、手动进样器、紫外检测器)(安捷伦科技有
限公司);JY3002 电子天平(上海恒平科学仪器有限
公司)。
1.2 材料
黄花石蒜植物全株分别于 2013 年 7 月采自湖
南省南岳衡山、浏阳市大围山、湖南中医药大学药
植园的人工栽培黄花石蒜基地。 将黄花石蒜花、花
葶、鳞茎和根分别于 60 ℃烘箱内烘干,粉碎,过 60
目筛,备用。
1.3 试剂
加兰他敏对照品 (南京泽朗医药科技开发有限
公司,纯度为 99%);95%乙醇、氨水、盐酸、甲醇、磷
酸、三氯甲烷均为分析纯;重蒸馏水。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取加兰他敏对照
品 5.0 mg 和 7.0 mg,分别置于 10 mL 量瓶中,用甲
醇溶解,并定容,即得 0.500 mg/mL 和 0.700 mg/mL
的加兰他敏对照品溶液。
2.1.2 供试品溶液的制备 [5-6] 取黄花石蒜花和根
(花葶和鳞茎 )粉末各约 1.0 g(各约 5.0 g),精密
称定,加 95%乙醇 50 mL,水浴加热回流 1 h,提
取 2 次 , 过滤 , 合并滤液 , 水浴挥干 , 残渣加
0.1 mol/L 盐酸 25 mL 溶解 ,过滤 ,滤液加氨水
调至 pH 9.0, 以 三 氯 甲 烷 萃 取 3 次 , 每 次
25 mL,合并萃取液 ,水浴挥干 ,残渣加甲醇溶
解 ,定容至 10 mL,用 0.45 μm 微孔滤膜过滤 ,
取滤液,即得。
2.2 色谱条件
色谱柱 :Agilent Eclipse XDB-C18 (4.6 mm×
250 mm,5 μm);流动相 0.1%磷酸-甲醇(92∶8);流速
1.0 mL/min;检测波长 238 nm;进样量 10 μL;柱温
30 ℃。 在本色谱条件下,各供试品溶液中加兰他敏
可与相邻峰分离良好,峰形对称,保留时间均约为
12.0 min。 对照品、衡山黄花石蒜花、根、花葶、鳞茎
样品 HPLC图见图 1。
A.对照品;B.花;C.根;D.花葶;E.鳞茎
图 1 加兰他敏对照品溶液和衡山黄花石蒜
各部位供试品溶液的 HPLC 图
A
B
C
D
E
12
.0
60
12
.0
04
12
.0
73
12
.0
62
12
.0
60
t/min
t/min
t/min
t/min
t/min
湖南中医药大学学报 2015 年第 35 卷32
注:a. R 方=0.997(调整 R 方=0.994)。
2.3 方法学考察
2.3.1 线性范围考察 分别精密量取对照品溶液
0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50 mL, 用甲醇定容至
5 mL 量瓶中(加兰他敏浓度分别为 25、50、75、100、
125、150 μg/mL), 用 0.45 μm 微孔滤膜过滤后,分
别精密量取 10 μL 注入液相色谱仪, 记录峰面积,
以峰面积为纵坐标、进样浓度为横坐标,得线性回
归方程为:Y=3.371X-8.99(r=0.999 9)表明加兰他敏
对照品溶液的浓度在 25~150 μg/mL 范围内线性关
系良好。
2.3.2 精密度试验 精密量取 75.0 μg/mL 对照品
溶液 10 μL,连续进样 6 次,测定,得加兰他敏峰面
积的 RSD 为 0.7%(n=6),表明实验仪器的精密度良
好。
2.3.3 稳定性试验 分别精密量取同一供试品溶
液 10 μL 于 2、4、6、8、12、24 h 进样,测定,得加兰
他敏峰面积的 RSD 为 1.9%(n=6),表明供试溶液中
加兰他敏在 24 h内稳定。
2.3.4 重复性试验 分别取南岳衡山黄花石蒜花
和鳞茎粉末各约 1.0 g和 5.0 g,精密称定,各平行 6
份,按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液,精密量取
10 μL 进样,测定,计算花(鳞茎)中加兰他敏的平均
含量为 0.135%(0.0204%), 其 RSD 值为 1.7%(1.9%)
(n=6),表明本方法的重复性好。
2.3.5 回收率试验 取已知加兰他敏含量的南岳
衡山黄花石蒜(鳞茎) 粉末约 0.5 g(约 2.5 g),精密
称定 , 各平行 6 份 , 花和鳞茎样品分别加入
0.700 mg/mL 和 0.500 mg/mL 的加兰他敏对照品溶
液 1 mL,按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液,并分
别进行测定,记录峰面积,结果见表 1。
2.4 样品含量测定结果
分别取黄花石蒜各组样品, 各平行 2 份 ,按
“2.1.2” 项下方法制备供试品溶液。 分别精密量取
10 μL进样,测定。 计算加兰他敏的平均含量,结果
见表 2。
2.5 统计学分析结果
将黄花石蒜不同器官、不同产地和加兰他敏含
量三个变量用 SPSS 17.0 软件进行方差分析, 分析
结果见表 3,所选 Corrected Model(模型检验)具有
显著统计意义 (P=0.000<0.001),黄花石蒜不同器官
加兰他敏的含量差别也具有显著统计学意义 (P=
0.000<0.001),其含量由高到低依次为:花>根>花葶>
鳞茎;不同产地黄花石蒜中加兰他敏含量差别无统
计学意义(P>0.05)。
3 讨论
3.1 黄花石蒜不同器官中加兰他敏含量比较
从表 3 中数据统计分析结果可以看出,器官栏
中 P=0.000<0.001,说明人工栽培黄花石蒜各器官中
加兰他敏含量存在非常显著的统计学差异。 从表 2
可知,不同器官中加兰他敏含量差别大,花中含量
最高,而鳞茎中最低,前者约为后者的 8倍。 而在不
同产地的同一器官中加兰他敏含量差别很小,花中
差别最小 (RSD=2.4%,n=3),鳞茎中差别最大 (RSD=
18%,n=3)。 各器官加兰他敏含量高低依次为: 花>
根>花葶>鳞茎,提示黄花石蒜中加兰他敏含量主要
集中在花中, 且其含量远远高于其
表 1 黄花石蒜花的加样回收率测定结果
样品

鳞茎
样品含
量(mg)
0.667
0.668
0.669
0.669
0.668
0.668
0.503
0.502
0.503
0.503
0.504
0.505
加入量
(mg)
0.700
0.700
0.700
0.700
0.700
0.700
0.500
0.500
0.500
0.500
0.500
0.500
测得量
(mg)
1.339
1.355
1.355
1.355
1.355
1.333
0.993
0.979
0.995
1.004
0.978
0.991
回收率
(%)
95.9
98.1
98.8
99.5
98.7
95.0
98.0
95.4
98.4
100.2
94.9
97.2
平均
回收率(%)
97.7
97.4
RSD
(%)
1.8
2.0
表 2 不同产地人工栽培黄花石蒜各器官中
加兰他敏含量比较 (%)
器官

花葶
鳞茎

衡山 药植园 大围山 平均值 RSD
0.133 0.134 0.139 0.135 2.4
0.023 0.019 0.017 0.020 16
0.020 0.016 0.015 0.017 18
0.076 0.079 0.085 0.080 5.7
表 3 不同器官、不同产地与加兰他敏含量方差分析结果
来源
校正模型
截距
器官
产地
误差
总计
校正的总计
III 型平方和
0.029a
0.048
0.029
8.0×10-6
8.7×10-5
0.076
0.029
df
5
1
3
2
6
12
11
均方
0.006
0.048
0.010
4.0×10-6
1.5×10-5
F
392
3272
654
0.275
Sig.(P)
0.000
0.000
0.000
0.769
(下转第 72页)
刘湘丹,等 不同产地人工栽培黄花石蒜不同器官中加兰他敏含量测定第 5 期 33
传统入药部位地下鳞茎中含量。
传统方法往往靠采挖野生黄花石蒜地下鳞茎
提取加兰他敏的原料,仅具一次性收益,生产成本
高,采挖野生黄花石蒜鳞茎的劳动强度大,且劳务
费用成本高。 如以人工栽培黄花石蒜的花作为提取
加兰他敏的药材原料,其可连续多年采收,投入少,
长期性收益,劳动强度小,生产成本及劳务费用成
本低。 结合黄花石蒜鳞茎和花中加兰他敏的平均含
量及采收特点进行综合比较分析得出,以采收黄花
石蒜花作为加兰他敏的药材原料具有更广阔前景。
3.2 人工栽培黄花石蒜不同产地中加兰他敏含量
比较
从表 3 中数据统计分析结果可以看出,不同产
地样本中加兰他敏含量差异无统计学意义 (P>
0.05),说明三个产地人工栽培黄花石蒜各相同器官
中加兰他敏含量差异无统计学意义。
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(本文编辑 杨 瑛)
(上接第 33页)
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