全 文 ：［收稿日期］ 2011-10-26
［基金项目］ 国家自然科学基金项目(81060372，81160504) ;教
育部科学技术研究重点项目(211033)
［第一作者］ 邬国栋，讲师，硕士，从事蒙药活性成分研究，Tel:
0472-7167795，E-mail:wgdzd@ 126． com
［通讯作者］ * 李旻辉，副教授，博士，从事药用植物资源保护
研 究，Tel:0472-7166712，E-mail:li _ minhui @
yahoo． cn
尖叶假龙胆中 norswertianolin的含量测定
邬国栋，张佳，杨丹，王振旺，李旻辉 *
(内蒙古科技大学包头医学院，内蒙古 包头 014060)
［摘要］ 目的:利用反相高效液相色谱法对尖叶假龙胆中 norswertianolin 成分进行含量测定。方法:采用 Shim-pack VP-
ODS-C18柱(4. 6 mm × 150 mm，5 μm) ，流动相 0. 1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B) (80∶ 20) ，流速 1. 0 mL·min
－ 1，柱温 25 ℃，紫外
检测波长 254 nm。结果:尖叶假龙胆中 norswertianolin 在 9. 6 ～ 192 mg·L － 1线性关系良好(r = 0. 999 5) ;仪器精密度 RSD
0. 67%(n = 6) ;方法重复性 RSD 1. 88%(n = 6) ;样品在 12 h 内稳定;平均回收率为 99. 8%(RSD 1. 31%)。结论:本法快速、
准确、重复性好，可用于蒙药尖叶假龙胆中 norswertianolin 成分的含量测定。
［关键词］ 高效液相色谱法;尖叶假龙胆;口山酮;含量测定
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)06-0069-03
Determination of the Norswertianolin in Gentianella acuta
WU Guo-dong，ZHANG Jia，YANG Dan，WANG Zhen-wang，LI Min-hui*
(Baotou Medical College Baotou Inner Mongolia，Baotou 014060，China)
［Abstract］ Objective: To determine norswertianolin of Gentianella acuta by reverse-phase HPLC
method． Method:The determination of norswertianolin was performed on a shim-pack VP-ODS-C18 column (4. 6
mm × 150 mm，5 μm)． The mobil phase was 0. 1% phosphoric acid solution (A) -acetonitrile (B) (80 ∶ 20)．
The flow rate was 1. 0 mL·min － 1 ． Ultraviolet absorption detector was set at 254 nm and column temperature at 25
℃ ． Norswertianolin of G． acuta was separated well． Result:The result indicated that the linear range of
norswertianolin of G． acuta was between 9. 6-192 mg· L － 1 (r = 0. 999 5) ;the relative standard deviations of
instrument precision was 0. 67%(n = 6) ;the relative standard deviations of method reproducibility was 1. 88% (n
= 6) ;the relative standard deviations for stability was 1. 68%;the average recovery was 99. 8% (n = 6)．
Conclusion:The results indicated that this developed assay method was rapid，accurate，and reliable and could be
readily used as a quality control method for the norswertianolin．
［Key words］ HPLC;Gentianella acuta;xanthone;determination
尖叶假龙胆广泛分布于我国的河北、东北、内蒙
古、山西、山东等省区，全草入蒙药，味苦、性凉，具有
清热、利湿的功效，是蒙医用于治疗黄疸性肝炎、头
痛、发烧的主药，大兴安岭地区鄂仑春族猎民则长期
用其治疗心律失常等疾病，疗效极为显著［1］。
前期我们利用各种色谱技术已对尖叶假龙胆的
化学成分进行了分离纯化，分离得到了 13 个化合
物，主要为三萜、口山酮类化合物［2-3］。现已经对黄酮
类化合物(desmethylbellidifolin 与 bellidifolin)进行
了含量测定［4］。因 norswertianolin 具有较强的抗辐
射活性［5］，本实验拟对其含量进行测定，为尖叶假
龙胆进一步研究开发奠定基础。
1 材料
1. 1 仪器 DGU-20A3 型高效液相色谱仪(日本岛
津) ，FA1004 型电子天平(上海恒平科学科学仪器
有限公司) ，溶剂过滤器(北京超越未来科技发展有
限公司) ，压力泵(天津市沸腾实验设备有限责任公
司) ，DS-2510DT 型超声清洗机(上海生析超声仪器
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第 18 卷第 6 期
2012 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 6
Mar．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.06.031
有限公司) ，微量进样器。
1. 2 试剂与药品 乙腈为色谱纯，其他试剂均为分
析纯(天津市西华特种试剂厂) ;磷酸溶液(河北省
保定化学试剂厂) ;娃哈哈纯净水;尖叶假龙胆药材
采自于内蒙古自治区根河市，经内蒙古科技大学包
头医学院生药教研室李旻辉副教授鉴定为龙胆科植
物尖叶假龙胆 Gentianella acuta (Michx．)Hulten;
norswertianolin 对照品(对照品为本实验室自制，经
MS，NMR 鉴定，HPLC 测定纯度在 99%以上)。
2 方法与结果
2. 1 提取方法的选择 根据 norswertianolin 的性
质，考察了超声提取、加热回流提取和渗漉 3 种提
取方法，综合考虑提取率和有效成分的保留情况，
最终选用了超声提取方法。用正交法选择最佳提取
条件，结果以 75%甲醇超声处理 30 min 最佳。
2. 2 测定波长的选择 将供试品溶液与对照品溶
液在 190 ～ 400 nm 进行紫外扫描，选定最大紫外吸
收波长为 254 nm。
2. 3 色谱条件 色谱柱为 Shim-pack VP-ODS-C18
柱(4. 6 mm × 150 mm，5 μm) ，流动相为 0. 1%磷酸
水溶液(A)-乙腈(B) (80∶ 20) ，流速 1. 0 mL·min － 1，
检测波长 254 nm。norswertianolin 峰与相邻峰的分
离度 ＞ 1. 5，理论塔板数以 norswertianolin 峰计算不
低于3 000。对照品图与样品图分别见图 1。
A. 对照品;B. 供试品;1. norswertianolin
图 1 尖叶假龙胆 norswertianolin 对照品
2. 4 对照品溶液的制备 精密称取对照品适量，
75%的甲醇溶解并定容于量瓶中，制成每 1 mL 含
96 μg 的溶液，摇匀，过 0. 45 μm 滤膜，即得。
2. 5 供试品溶液的制备 将尖叶假龙胆药材粉碎，
磨成粉末，过 20 目筛，取约 0. 1 g，精密称量，精密
加入 75%甲醇 25 mL，称定质量，超声提取 30 min，
冷却至室温，再称定质量，用 75% 甲醇补足减失的
质量，摇匀，用 0. 45 μm 的微孔滤膜滤过，弃去初滤
液，取续滤液，即为供试品溶液。
2. 6 线性关系的考察 精密称取尖叶假龙胆中
norswertianolin 对照品 4. 8 mg，用 75%的甲醇定容到
25 mL 的量瓶中，作为储备液。分别吸取此储备液
0. 5，1，1. 5，2，5，8 mL 定容到 10 mL 的量瓶中，剩余
的储备液也作为 6 号对照品液使用，进样量均为 10
μL。以峰面积积分值为横坐标(X) ，以质量浓度
(mg·L － 1)为纵坐标(Y) ，绘制曲线。得回归方程
Y = 6. 4 × 10 － 5X － 15. 326，(r = 0. 999 5) ，线性范围
9. 6 ～ 192 mg·L － 1，表明在此范围内待测物质的浓度
与峰面积呈良好的线性关系。
2. 7 精密度试验 在上述色谱条件下，精密吸取同
一 norswertianolin 对照品溶液，重复进样 6 次，RSD
0. 67%，表明精密度良好。
2. 8 重复性试验 精密称取尖叶假龙胆样品 6 份，
按供试品溶液制备方法对样品进行处理，测定含量
的 RSD 1. 88%，表明重复性良好。
2. 9 稳定性试验 取上述重现性试验中的 5 号样
品，分别在 0，2，4，6，8，12 h 进样，测定峰面积积分
值，结果 RSD 1. 68%。表明供试品溶液在 12 h 内
稳定性良好。
2. 10 加样回收率试验 精密称取 norswertianolin
对照品适量，按照对照品溶液的制备方法进行制备，
将其定容于 10 mL 的量瓶中，以备使用。再精密称
取尖叶假龙胆药材(粉末)6 份，约 0. 05 g，分别吸取
已经制备好的对照品溶液(浓度为 0. 930 g·L － 1)
1. 5 mL 加入到 6 份样品中，定溶到 10 mL 的量瓶
中，然后按照供试品溶液的处理方法对 6 份样品进
行处理。进样量均为 20 μL，见表 1。
表 1 尖叶假龙胆中 norswertianolin 回收率试验测定
No．
称样量
/ g
样品含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
1 0． 050 3 1． 419 1． 395 2． 838 101． 7
2 0． 050 4 1． 422 1． 395 2． 823 100． 6
3 0． 051 1 1． 442 1． 395 2． 793 98． 5
99． 8 1． 31
4 0． 050 9 1． 436 1． 395 2． 788 98． 2
5 0． 051 4 1． 450 1． 395 2． 823 100． 1
6 0． 050 7 1． 430 1． 395 2． 810 99． 7
2. 11 样品测定 精密称取尖叶假龙胆样品 6 份，
按照供试品溶液的制备方法进行制备，准确吸取供
试液 20 μL 进样，在上述色谱条件下测定，计算得样
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第 18 卷第 6 期
2012 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 6
Mar．，2012
檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
品平均含量为 2. 83%，RSD 0. 63%。
3 讨论
Norswertianolin 是尖叶假龙胆的活性成分之一，
对其进行含量测定的过程中我们考察了不同流动相
体系对 norswertianolin 的分离情况，结果发现只有在
0. 1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B) (80 ∶ 20)的条件下，
主峰与杂质峰可以达到基线分离(R ＞ 1. 5) ，符合测
定要求。
由于文献报道 norswertianolin 具有比较显著的
药理活性［5］，我们在上述色谱条件下测得 6 份尖叶
假 龙 胆 中 norswertianolin 的 平 均 质 量 分 数 为
2. 83%，说明尖叶假龙胆中 norswertianolin 的含量较
高，所以我们选择 norswertianolin 为研究对象，对其
进行含量测定。本文首次建立了反相高效液相色谱
法测定尖叶假龙胆中 norswertianolin 的含量，该方法
简 便、准 确、重 复 性 好，对 尖 叶 假 龙 胆 中
norswertianolin 的含量控制提供了可靠依据，同时为
尖叶假龙胆在民间的传统应用提供了依据。
［参考文献］
［1］ 李旻辉，孙亚红，宋晓玲 ． 中国假龙胆属植物传统药物
学的调查研究［J］．包头医学院学报，2010，26(3) :3．
［2］ Lv L J，Li，M H，Terpenoids，flavonoids and xanthones
from Gentianella acuta (Gentianaceae) ［J］． Biochem
Syst Ecol，2009，37:497．
［3］ 李旻辉，靳敏，张海涛，等 ． 尖叶假龙胆化学成分研
［J］．包头医学院报，2011，27(2) :13．
［4］ Li M H，Zhou L S，Fang H Y，et al． Quantification of
Xanthones in a Mongolian health tea using high-
performance liquid chromatography［J］． J Med Plants
Research，2010，4(17) :1704．
［5］ Li M H，Li L，Yang Y M， et al． Genus gentianella
moench: A phytochemical and ethnopharmacological
review［J］． Chinese Herbal Med，2010，2(4) :262.
［责任编辑 蔡仲德］
［收稿日期］ 20110921(015)
［基金项目］ 山东省高等学校科技计划项目(Z09LF31)
［第一作者］ 王晓莉，在读硕士，从事中药复方活性成分与质量控制研究，Tel:0531-89628593，E-mail:wangxiali0401@ 163． com
［通讯作者］ * 容蓉，教授，从事中药复方活性成分与质量控制研究，Tel:0531-89628593，E-mail:r． rong@ sdutcm． edu． cn
3 种方法制备的四逆汤中甘草苷、甘草酸含量测定
王晓莉，巩丽丽，容蓉 * ，杨勇，吕青涛，王海燕
(山东中医药大学，济南 250355)
［摘要］ 目的:对四逆汤传统法、药典收录的水提醇沉法、各单味药分提合并法制备的四逆汤中甘草苷、甘草酸含量进行
比较。方法:采用 HPLC 测定 3 种不同的方法提取液中甘草苷、甘草酸的含量，C18色谱柱，流动相乙腈-0. 05% 磷酸水，梯度洗
脱，柱温 25 ℃，检测波长 237 nm，流速 1. 0 mL·min － 1，进样量 10 μL。结果:甘草苷在传统汤剂中含量为 2. 57 mg·g － 1，经方合
剂中的含量为 2. 21 mg·g － 1，单味配方合并液中含量为 3. 58 mg·g － 1;甘草酸在传统汤剂中含量为 1. 96 mg·g － 1，经方合剂中的
含量为 1. 84 mg·g － 1，单味配方合并液中含量为 3. 04 mg·g － 1。结论:四逆汤单提合并法中甘草苷、甘草酸含量高，且各制法的
四逆汤中甘草苷、甘草酸含量均有显著性差异，为四逆汤提取方法研究提供依据。
［关键词］ 四逆汤;甘草苷;甘草酸;高效液相色谱
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)06-0071-04
［DOI］ CNKI:11-3495 /R． 20120113． 1032． 007 ［网络出版时间］ 2012-01-13 10:32
［网络出版地址］ http:/ / www． cnki． net / kcms / detail /11． 3495． R． 20120113． 1032． 007． html
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2012 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 6
Mar．，2012