全 文 ：·生物技术· 北方园艺２０１６（１２）：９２～９６
第一作者简介：程明（１９８９－），男，湖北黄梅人，硕士，研究方向为园
林植物遗传多样性和繁育。Ｅ－ｍａｉｌ：９６２０７３９７７＠ｑｑ．ｃｏｍ．
责任作者：蔡靖（１９６８－），女，陕西子州人，博士，教授，现主要从事
森林植物及观赏植物和植物生理生态与森林生态等研究工作。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｊｃａｉｊｉｎｇ＠１６３．ｃｏｍ．
基金项目：林业公益性行业科研专项资助项目（２０１２０４３０８）。
收稿日期：２０１６―０２―１４
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１６１２０２３
濒危植物羽叶丁香组织培养
程 　 明１，李 厚 华２，和 子 森１，姜 在 民３，蔡 　 靖１
（１．西北农林科技大学 林学院，陕西 杨凌７１２１００；２．西北农林科技大学 风景园林艺术学院，陕西 杨凌７１２１００；
３．西北农林科技大学 生命科学学院，陕西 杨凌７１２１００）
　　摘　要：以濒危植物羽叶丁香的芽和种子为外植体，采用植物组织培养法，研究了不同消毒
方法对无菌体系建立、不同浓度的蔗糖和激素组合对种子初代培养、不同基本培养基和激素组合
对增殖和生根的影响，以期为羽叶丁香的组培快繁、种质资源保护和开发利用提供依据。结果表
明：新枝为较适宜的外植体，适宜的消毒方式为７５％酒精消毒３０ｓ，０．１％升汞消毒７ｍｉｎ，最适增
殖培养基为ＭＳ＋５．０ｍｇ·Ｌ－１　６－ＢＡ＋０．０１ｍｇ·Ｌ－１　ＩＢＡ；最适种子初代培养基为ＭＳ＋２０ｇ·Ｌ－１
蔗糖汁＋３．０ｍｇ·Ｌ－１　６－ＢＡ＋０．１０ｍｇ·Ｌ－１　ＩＢＡ，最适增殖培养基为 ＭＳ＋７．０ｍｇ·Ｌ－１　６－ＢＡ＋
０．０５ｍｇ·Ｌ－１　ＩＢＡ；最适生根培养基为 ＷＰＭ＋２．０ｍｇ·Ｌ－１　ＩＢＡ。
关键词：羽叶丁香；组织培养；芽；种子
中图分类号：Ｓ　６８５．２６　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１６）１２－００９２－０５
　　羽叶丁香（Ｓｙｒｉｎｇａｐｉｎｎａｔｉｆｏｌｉａ　Ｈｅｍｓｌ．）属木犀科
丁香属直立灌木，羽状复叶；花为圆锥花序，花冠多淡红
色，略带淡紫色；蒴果长圆形，花期５—６月，果期８—９
月；产于内蒙古和宁夏交界的贺兰山地区以及陕西南部、
甘肃、青海东部和四川西部；生山坡灌丛，海拔２　０００～
３　１００ｍ；根或枝干入药，具降气、温中、暖胃等功效［１］。
羽叶丁香是中医、蒙医的名贵药材，同时又可作为优良
的观赏花灌木。在丁香属中，已经有人对欧丁香［２］、紫
丁香［３］、裂叶朝鲜丁香［４］等多种丁香的组织培养方法进
行了研究。目前有关羽叶丁香的组织培养方法研究在
国内外尚鲜见相关报道。羽叶丁香作为我国特有种，属
国家三级保护植物，野生种群数量和栖息地的范围在不
断减小。现以羽叶丁香的芽和种子为外植体，对其组织
培养体系进行研究，以期为羽叶丁香的种质资源保护和
人工快繁提供理论基础。
１　材料与方法
１．１　试验材料
试验所用羽叶丁香种子和芽采自于内蒙古阿拉善
盟左旗８年生植株。
１．２　试验方法
１．２．１　外植体消毒　将采集的芽分为２个部分：一部分
芽在未萌发时先用流水冲洗１ｈ，再用７５％酒精消毒
３０ｓ，无菌水冲洗１次，最后用０．１％升汞消毒３、５、７、
９ｍｉｎ，无菌水冲洗３次以上；另一部分芽放入温室中水
培，待其萌发后取其新枝先用流水冲洗１ｈ，再用酒精消
毒３０ｓ，最后用０．１％升汞消毒３、５、７、９ｍｉｎ，无菌水冲洗
３次以上。种子先用流水冲洗１ｈ，再用７５％的酒精消
毒３０ｓ，无菌水冲洗１次，最后用０．１％升汞消毒５、１０、
１５、２０ｍｉｎ，无菌水冲洗３次以上。
１．２．２　外植体接种与无菌体系建立　消毒后，将长１ｃｍ
带芽的茎段和新枝接种于培养基 ＭＳ＋１．０ｍｇ·Ｌ－１
６－ＢＡ＋０．１ｍｇ·Ｌ－１　ＩＢＡ＋３０ｇ·Ｌ－１蔗糖＋７ｇ·Ｌ－１琼
脂上，接种至少６０个外植体。将消毒后的种子一部分
切除子叶端１ｍｍ露出白色的胚，一部分保持完整，分别
接种于培养基ＭＳ＋２０ｇ·Ｌ－１蔗糖＋７ｇ·Ｌ－１琼脂上。
１４ｄ后统计污染率、萌发率。
１．２．３　种子初代培养　以ＭＳ培养基为基本培养基，选
取蔗糖、６－ＢＡ、ＩＢＡ　３个因素，蔗糖设２０、３０、４０ｇ·Ｌ－１　３
个水平，６－ＢＡ设１．０、３．０、６．０ｍｇ·Ｌ－１　３个水平，ＩＢＡ设
０．０１、０．１０、０．２０ｍｇ·Ｌ－１　３个水平，试验选用Ｌ９（３４）表
进行正交设计，共９个组合，以种子的萌发率为指标，分
析３种生长物质对切开种子培养的影响。
１．２．４　增殖培养　待芽和种子上胚轴长至２～３ｃｍ时，
转至增殖培养基中，以 ＭＳ为基本培养基，６－ＢＡ设３．０、
５．０、７．０、９．０ｍｇ·Ｌ－１　４个水平，ＩＢＡ 设０．０１、０．０５、
０．１０ｍｇ·Ｌ－１　３个水平，试验采用完全随机设计，每个组
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北方园艺２０１６（１２）：９２～９６ ·生物技术·
合１５瓶，每瓶３个无菌苗，４５ｄ后统计增殖结果。
１．２．５　生根培养　以生长健壮的２ｃｍ增殖苗为材料，试
验采用２因素３水平完全随机设计，基本培养基选取
１／２ＭＳ、ＭＳ、ＷＰＭ　３种培养基，ＩＢＡ设０．５、１．０、２．０ｍｇ·Ｌ－１
３个水平，研究基本培养基与激素水平对生根的影响，３０ｄ
后统计生根结果，每个组合至少１５瓶，每瓶３个增殖苗。
１．２．６　培养条件　培养温度（２５±２）℃，光照强度
２　０００ｌｘ，光照时间１２ｈ·ｄ－１，培养基均附加琼脂
７ｇ·Ｌ－１，ｐＨ　５．８。
２　结果与分析
２．１　不同消毒方法对无菌体系建立的影响
未切开的种子全部未萌发，由表１、２、３可知，高污
染率和高褐化率是羽叶丁香无菌体系建立的重要限制
因子，随着消毒的时间加长，污染率随之降低，但褐化死
亡率随之升高。芽污染率都在９５％以上，新枝和切开的
种子污染率都较低（２８．１３％以下），存活率和萌发率都较
高（７１．８７％以上）。综合考虑，适合建立无菌体系的外植
体为芽萌发后抽出的新枝，消毒方式为７５％酒精消毒
３０ｓ，０．１％升汞消毒７ｍｉｎ（图１Ａ－Ｄ）。
表１　不同消毒方法对芽无菌体系建立的影响
　　Ｔａｂｌｅ　１ Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｎ
ｔｈｅ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　ｂｕｄ
试验号
Ｎｕｍｂｅｒ
升汞消毒时间
Ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ
ｔｉｍｅ／ｍｉｎ
接种数
Ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ
ｎｕｍｂｅｒ／个
污染率
Ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ／％
褐化死亡率
Ｂｒｏｗｎｉｎｇ　ｍｏｒｔａｌｉｔｙ
ｒａｔｅ／％
萌发率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ／％
１　 ３　 ６０　 １００　 ０　 ０
２　 ５　 ６０　 １００　 ０　 ０
３　 ７　 ６０　 ９５　 ０　 ５
４　 ９　 ６０　 ９５　 ５　 ０
　　表２　不同消毒方法对新枝无菌体系建立的影响
　　Ｔａｂｌｅ　２ Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｎ
ｔｈｅ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　ｓｈｏｏｔ
试验号
Ｎｕｍｂｅｒ
升汞消毒时间
Ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ
ｔｉｍｅ／ｍｉｎ
接种数
Ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ
ｎｕｍｂｅｒ／个
污染率
Ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ／％
褐化死亡率
Ｂｒｏｗｎｉｎｇ　ｍｏｒｔａｌｉｔｙ
ｒａｔｅ／％
存活率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ／％
１　 ３　 ６６　 １５．６４　 １．０３　 ８３．３３
２　 ５　 ６３　 ８．９４　 ２．１７　 ８８．８９
３　 ７　 ６６　 ２．０３　 ２．５２　 ９５．４５
４　 ９　 ６０　 ０．００　 ６．６７　 ９３．３３
　　表３　不同消毒方法对种子无菌体系建立的影响
　　Ｔａｂｌｅ　３ Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｎ
ｔｈｅ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　ｓｅｅｄ
试验号
Ｎｕｍｂｅｒ
升汞消毒时间
Ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ
ｔｉｍｅ／ｍｉｎ
接种数
Ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ
ｎｕｍｂｅｒ／个
污染率
Ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ／％
褐化死亡率
Ｂｒｏｗｎｉｎｇ　ｍｏｒｔａｌｉｔｙ
ｒａｔｅ／％
萌发率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ／％
１　 ５　 ６４　 ２８．１３　 ０　　 ７１．８７
２　 １０　 ６４　 １５．００　 １．６７　 ８３．３３
３　 １５　 ６４　 ８．３３　 １１．６７　 ８０．００
４　 ２０　 ６４　 ６．６７　 １６．６７　 ７６．６６
２．２　蔗糖和激素对种子初代培养的影响
种子培养１４ｄ内开始萌发，子叶变绿，胚轴伸长。由表
４、５可以看出，影响切开种子萌发的因素依次为６－ＢＡ＞蔗
糖＞ＩＢＡ，因此种子初代培养最优组合为２０ｇ·Ｌ－１蔗糖＋
３．０ｍｇ·Ｌ－１６－ＢＡ＋０．１０ｍｇ·Ｌ－１　ＩＢＡ。方差分析结果显
示ＩＢＡ对切开种子初代培养影响最小，蔗糖、６－ＢＡ、ＩＢＡ　３个
因素对种子萌发率均不存在显著性差异（图１Ｅ、Ｆ）。
表４ 种子初代培养萌发率极差分析
　　Ｔａｂｌｅ　４　Ｒａｎｇｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｎ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｐｒｉｍａｒｙ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ｓｅｅｄ
试验号
Ｎｕｍｂｅｒ
Ａ蔗糖
Ｓｕｇｅｒ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
／（ｇ·Ｌ－１）
Ｂ
６－ＢＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
Ｃ
ＩＢＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
空列
种子萌发率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ／％
１　 １（２０） １（１．０） １（０．０１） １　 ６８．８９
２　 １（２０） ２（３．０） ２（０．１） ２　 ８６．６７
３　 １（２０） ３（６．０） ３（０．２） ３　 ７７．７８
４　 ２（３０） １（１．０） ２（０．１） ３　 ６４．７１
５　 ２（３０） ２（３．０） ３（０．２） １　 ６４．５８
６　 ２（３０） ３（６．０） １（０．０１） ２　 ７５．５６
７　 ３（４０） １（１．０） ３（０．２） ２　 ６４．５８
８　 ３（４０） ２（３．０） １（０．０１） ３　 ８３．３３
９　 ３（４０） ３（６．０） ２（０．１） １　 ７９．１７
ｋ１　 ７７．７８　 ６６．０６　 ７５．９３
ｋ２　 ６８．２８　 ７８．１９　 ７６．８５
ｋ３　 ７５．６９　 ７７．５０　 ６８．９８
ｒ　 ９．５０　 １２．１３　 ７．８７
主次顺序 Ｂ＞Ａ＞Ｃ
最优水平 Ａ１ Ｂ２ Ｃ２
最优组合 Ａ１Ｂ２Ｃ２
　　表５ 种子初代培养萌发率方差分析
　　Ｔａｂｌｅ　５　Ｖａｒｉａｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｎ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ
ｐｒｉｍａｒｙ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ｓｅｅｄ
源
Ｓｏｕｒｃｅ
ＩＩＩ型平方和
ＩＩＩ　ｓｔｙｌｅ　ｏｆ　ｓｑｕａｒｅ　ｓｕｍ
ｄｆ
均方
Ｍｅａｎ　ｓｑｕａｒｅ
Ｆ　 Ｓｉｇ．
蔗糖 １４９．４４９　 ２　 ７４．７２４　 ３．５８２　 ０．２１８
６－ＢＡ　 ２７８．６４４　 ２　 １３９．３２２　 ６．６７９　 ０．１３０
ＩＢＡ　 １１１．０４６　 ２　 ５５．５２３　 ２．６６２　 ０．２７３
误差 ４１．７２０　 ２　 ２０．８６０
２．３　不同激素组合对组培苗增殖的影响
由萌发的芽长成的无菌苗和种子的上胚轴及以上
部分（去除子叶和下胚轴部位）接入增殖培养基中２０ｄ
后，腋芽开始萌发，培养４５ｄ后统计增殖和生长情况，期
间产生大量愈伤组织但不分化不定芽。种子在培养基
７．０ｍｇ·Ｌ－１　６－ＢＡ＋０．０５ｍｇ·Ｌ－１　ＩＢＡ中增殖系数最高，
为３．３３；新枝在培养基５．０ｍｇ·Ｌ－１　６－ＢＡ＋０．０１ｍｇ·Ｌ－１
ＩＢＡ中增殖系数最高，为１．８３。进一步的方差分析结果显
示６－ＢＡ和ＩＢＡ对增殖系数没有显著性影响（表６～９、图
１Ｇ～Ｊ）。
２．４　不同激素组合对组培苗生根的影响
将增殖的组培苗接入生根培养基中，通过种子萌发
获得的组培苗生根培养１５ｄ左右，在切口处开始生根，
萌发的芽获得的增殖组培苗完全不生根，切口处全部长
出愈伤组织但不分化。由表１０可知，３０ｄ后统计发现
在培养基 ＷＰＭ＋ＩＢＡ　２．０ｍｇ·Ｌ－１中生根率最高为
６０．００％，生根最多，达到４．００条，根长最长，为３．１７ｃｍ
（图１Ｋ、Ｌ）。
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·生物技术· 北方园艺２０１６（１２）：９２～９６
表６ 不同激素组合对种子增殖的影响
　　Ｔａｂｌｅ　６　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｓｅｅｄ　ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ
试验号
Ｎｕｍｂｅｒ
６－ＢＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
ＩＢＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
增殖系数
Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔ
１　 ３．０　 ０．０１　 １．８９
２　 ３．０　 ０．０５　 １．２２
３　 ３．０　 ０．１０　 １．６３
４　 ５．０　 ０．０１　 １．３８
５　 ５．０　 ０．０５　 ２．２９
６　 ５．０　 ０．１０　 ３．１１
７　 ７．０　 ０．０１　 ２．６２
８　 ７．０　 ０．０５　 ３．３３
９　 ７．０　 ０．１０　 ２．３０
１０　 ９．０　 ０．０１　 １．４８
１１　 ９．０　 ０．０５　 １．２２
１２　 ９．０　 ０．１０　 １．１９
　　表７　不同激素组合对种子增殖的方差分析
　　Ｔａｂｌｅ　７ Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｖａｒｉａｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｓｅｅｄ　ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ
源
Ｓｏｕｒｃｅ
ＩＩＩ型平方和
ＩＩＩ　ｓｔｙｌｅ　ｏｆ　ｓｑｕａｒｅ　ｓｕｍ
ｄｆ
均方
Ｍｅａｎ　ｓｑｕａｒｅ
Ｆ　 Ｓｉｇ．
６－ＢＡ　 ３．８９４　 ３　 １．２９８　 ３．４９４　 ０．０９０
ＩＢＡ　 ０．１０４　 ２　 ０．０５２　 ０．１４０　 ０．８７２
误差 ２．２２９　 ６　 ０．３７１
总计 ５２．８７６　 １２
　　表８ 不同激素组合对新枝增殖的影响
　　Ｔａｂｌｅ　８　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｓｈｏｏｔｓ　ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ
试验号
Ｎｕｍｂｅｒ
６－ＢＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
ＩＢＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
增殖系数
Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔ
１　 ３．０　 ０．０１　 １．０３
２　 ３．０　 ０．０５　 １．２３
３　 ３．０　 ０．１０　 １．５４
４　 ５．０　 ０．０１　 １．８３
５　 ５．０　 ０．０５　 １．７７
６　 ５．０　 ０．１０　 １．５２
７　 ７．０　 ０．０１　 １．５０
８　 ７．０　 ０．０５　 １．４９
９　 ７．０　 ０．１０　 １．７５
１０　 ９．０　 ０．０１　 １．６５
１１　 ９．０　 ０．０５　 １．６１
１２　 ９．０　 ０．１０　 １．５７
　　表９ 不同激素组合对种子萌发的
芽增殖的方差分析
　　Ｔａｂｌｅ　９　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｖａｒｉａｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ　ｏｎ
ｇｅｒｍｉｎａｔｅｄ　ｂｕｄ　ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ
源
Ｓｏｕｒｃｅ
ＩＩＩ型平方和
ＩＩＩ　ｓｔｙｌｅ　ｏｆ　ｓｑｕａｒｅ　ｓｕｍ
ｄｆ
均方
Ｍｅａｎ　ｓｑｕａｒｅ
Ｆ　 Ｓｉｇ．
６－ＢＡ　 ０．３２７　 ３　 ０．１０９　 ３．０５４　 ０．１１４
ＩＢＡ　 ０．０１９　 ２　 ０．００９　 ０．２６１　 ０．７７９
误差 ０．２１４　 ６　 ０．０３６
总计 ２９．０５０　 １２
３　结论与讨论
不同外植体和不同消毒方法对无菌体系的建立均
有较大的影响。萌发的芽为较适宜的外植体，其适宜的
　　表１０ 不同激素组合对生根的影响
　　Ｔａｂｌｅ　１０　Ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｒｏｏｔｉｎｇ
试验号
Ｎｕｍｂｅｒ
基本培养基
Ｂａｓａｌ　ｍｅｄｉａ
ＩＢＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
生根率
Ｒｏｏｔｉｎｇ
ｒａｔｅ／％
生根数
Ｒｏｏｔｉｎｇ　ｎｕｍｂｅｒ
／条
根长
Ｒｏｏｔ　ｌｅｎｇｔｈ
／ｃｍ
１　 １／２ＭＳ　 ０．５　 ３３．３３　 ２．６７　 １．７３
２ ＭＳ　 ０．５　 １２．００　 ３．３３　 １．８０
３ ＷＰＭ　 ０．５　 １０．３４　 １．９２　 ０．９５
４　 １／２ＭＳ　 １．０　 １１．５４　 １．１４　 １．０３
５ ＭＳ　 １．０　 ０　 ０ －
６ ＷＰＭ　 １．０　 ３０．００　 １．３３　 ３．０３
７　 １／２ＭＳ　 ２．０　 １１．１１　 １．０２　 １．３３
８ ＭＳ　 ２．０　 ８．９７　 ０．５３　 ２．４９
９ ＷＰＭ　 ２．０　 ６０．００　 ４．００　 ３．１７
消毒方式为７５％酒精３０ｓ，０．１％升汞消毒７ｍｉｎ；萌发芽
最适增殖培养基为 ＭＳ＋５．０ｍｇ·Ｌ－１　６－ＢＡ＋
０．０１ｍｇ·Ｌ－１　ＩＢＡ；最适种子初代培养基为ＭＳ＋２０ｇ·Ｌ－１
蔗糖＋３．０ｍｇ·Ｌ－１６－ＢＡ＋０．１０ｍｇ·Ｌ－１　ＩＢＡ，最适增殖
培养基为 ＭＳ＋７．０ｍｇ·Ｌ－１　６－ＢＡ＋０．０５ｍｇ·Ｌ－１
ＩＢＡ；最适生根培养基为 ＷＰＭ＋２．０ｍｇ·Ｌ－１　ＩＢＡ。
试验结果显示，未萌发的芽很难消毒导致污染率很
高，而种子和萌发的芽则污染率较低，可能是未萌发的
芽鳞片层层包裹导致消毒效果不理想。外植体表面和
内部常携带一些微生物，是组织培养过程中的主要污染
源［５］。试验中完整的种子全部未萌发，可能是因为羽叶
丁香种皮较硬阻碍了胚的萌发［６］，切开后能明显的提高
种子发芽率，这与刘华英等［７］的研究结果一致。
周莉等［８］在丁香种间杂交幼胚离体培养研究中发
现，低浓度的６－ＢＡ能促进胚的萌发，而高浓度有抑制作
用，ＩＢＡ则抑制胚的萌发；孟昕等［９－１０］在白丁香胚和佛手
丁香胚离体培养的研究中发现低浓度的６－ＢＡ和ＩＢＡ能
促进胚的萌发。在种子初代培养中，不同浓度的６－ＢＡ
和ＩＢＡ对种子萌发率没有明显的促进作用。段乃彬
等［１１］和韩丽媛等［１２］在枣胚离体培养中的研究中发现，
外源激素对胚的萌芽率无明显的促进作用。产生这种
差异的原因可能是不同物种间，适宜的外源激素种类和
浓度不同，试验中的激素浓度或种类未达到最适条件。
增殖培养中愈伤组织不能分化出不定芽，这与丁香属中
紫丁香［３，１３］、朝鲜裂叶丁香［４］、小叶丁香［１４－１５］、欧丁香［２］
的研究结果较为相似。在丁香属植物中，由愈伤组织分
化出不定芽这一途径还需要进行深入研究。
在组织培养过程中，降低无机盐的浓度有利于组培
苗的生根，组培苗的生根培养基多数情况只选择用生长
素ＮＡＡ或ＩＢＡ［１６］。生根培养中最有利于生根的基本培
养基为 ＷＰＭ，这与ＣＯＲＩＮＡ等［１７］的研究结果一致，说
明对大多数木本植物生根比较有利的 ＷＰＭ培养基同
样有利于羽叶丁香生根。羽叶丁香由芽获得的组培苗
不能生根，而由种子萌发后的组培苗去除子叶及下胚轴
部位能生根，可能是因为试验中的植物生长调节剂种类
４９
北方园艺２０１６（１２）：９２～９６ ·生物技术·
　　
　　注：Ａ．芽；Ｂ．新枝；Ｃ．新枝长成的无菌苗；Ｄ．切开的种子；Ｅ．切开的种子开始萌发；Ｆ．萌发后的种子胚轴伸长；Ｇ～Ｈ．芽和种子接入增殖培养基中；
Ｉ～Ｊ．芽和种子的增殖；Ｋ～Ｌ．由种子获得的组培苗生根。
Ｎｏｔｅ：Ａ．Ｂｕｄ；Ｂ．Ｓｈｏｏｔｓ；Ｃ．Ｓｔｅｒｉｌｅ　ｓｅｅｄｉｎｇ　ｏｆ　ｓｈｏｏｔｓ；Ｄ．Ｃｕｔ　ｓｅｅｄｓ；Ｅ．Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｎｇ　ｏｆ　ｃｕｔ　ｓｅｅｄｓ；Ｆ．Ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ　ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇｅｒｍｉｎａｔｅｄ　ｓｅｅｄｓ；Ｇ　ａｎｄ　Ｈ．Ｂｕｄｓ
ａｎｄ　ｓｅｅｄｓ　ｉｎｓｅｒｔｅｄ　ｉｎ　ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ；Ｉ　ａｎｄ　Ｊ．Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｅｄ　ｏｆ　ｓｅｅｄｓ　ａｎｄ　ｂｕｄｓ；Ｋ　ａｎｄ　Ｌ．Ｒｏｏｔｅｄ　ｏｆ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｓｅｅｄｉｎｇ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｆｒｏｍ　ｓｅｅｄｓ．
图１　羽叶丁香组织培养
Ｆｉｇ．１　Ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　Ｓｙｒｉｎｇａｐｉｎｎａｔｉｆｏｌｉａ
及浓度不适用于由芽获得的组培苗的生根。植物组织
培养生根受到植物生长调节剂、内源激素、植物生长势、
金属元素、基因转化等多种因素的影响［１８］。
参考文献
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ｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ａｘｉｌａｒｙ　ｂｕｄｓ　ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ　ｉｎ　ａｌｇｉｎａｔｅ　ｂｅａｄｓ，ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ａ　ｐｒｅ－ａｃ－
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５９
·生物技术· 北方园艺２０１６（１２）：９６～１００
第一作者简介：夏江宏（１９９０－），男，重庆垫江人，硕士研究生，研究
方向为果树学。Ｅ－ｍａｉｌ：９３９４１４０９８＠ｑｑ．ｃｏｍ．
责任作者：曾斌（１９７０－），男，湖北松滋人，博士，副教授，硕士生导
师，现主要从事果树种质资源及生物技术的教学与科研等工作。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｂｘｎｄ＠１６３．ｃｏｍ．
基金项目：国家自然科学基金资助项目（３１２６０４６５）；国家林业公益
性行业科研专项资助项目（２０１３０４７０１－１）；新疆维吾尔自治区科技
计划资助项目（２０１１３０１０２－１－５）；新疆维吾尔自治区果树学重点学
科资助项目（２０１００７）。
收稿日期：２０１５－１２－１６
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１６１２０２４
新疆野扁桃自交不亲和相关基因
ＰｅｔＳＳＫ１转“梦幻”矮牵牛的研究
夏 江 宏１，曾 　 斌１，王 建 友２，李 伟 阳１，田 　 嘉１，李 　 疆１
（１．新疆农业大学 林学与园艺学院，新疆农业大学果树学新疆特色果树研究中心，新疆 乌鲁木齐８３００５２；
２．新疆林业科学院推广站，新疆 乌鲁木齐８３００６３）
　　摘　要：以新疆野扁桃（Ｐｒｕｎｕｓ　ｔｅｎｅｌａ）花粉为试材，构建其自交不亲和性相关基因ＰｅｔＳＳＫ１的
植物表达载体ｐＣＡＭＢＩＡ１３０３－ＰｅｔＳＳＫ１，采用根癌农杆菌介导法，将该基因导入矮牵牛，并研究了不
同种类及浓度抗生素对矮牵牛再生的影响。结果表明：该试验成功获得了转化新疆野扁桃自交不亲
和相关基因ＰｅｔＳＳＫ１的矮牵牛植株，并筛选出矮牵牛的卡那霉素（Ｋａｎ）和头孢霉素（Ｃｅｆ）的敏感浓度
分别为２５、３００ｍｇ·Ｌ－１，并进一步通过ＰＣＲ分子检测确认其为转基因阳性植株。
关键词：野扁桃；ＰｅｔＳＳＫ１；植物表达载体；根癌农杆菌介导；矮牵牛
中图分类号：Ｓ　６８１．６０３．６　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１６）１１－００９６－０５
　　野扁桃（Ｐｒｕｎｕｓ　ｔｅｎｅｌｌａ）属蔷薇科李亚科桃属扁桃
　　　　　　
亚属植物，也称野巴旦杏，属新生代第３纪遗留物种，
是世界上古老的野生果树之一，现今只有哈萨克斯坦
和中国新疆塔城和阿勒泰地区有少量分布［１］。而随着
过度放牧，自然环境的恶化等因素对野扁桃的生存造
成了很大威胁［２］。通过对张一婧等［３］发现的一种新基
因ＳＫＰ１－ｌｉｋｅ进行同源克隆，获得一个新的基因
ＰｅｔＳＳＫ１，该试验拟验证野扁桃ＰｅｔＳＳＫ１基因是否与野
扁桃的自交不亲和相关。
矮牵牛（Ｐｅｔｕｎｉａ　ｈｙｂｒｉｄａ　Ｖｉｌｍ）属配子体自交不亲
和多年生草本植物，又名碧冬茄，常作一二年生栽培。
株高２０～４５ｃｍ，茎匍地生长，被有粘质柔毛，叶质柔软，
　　
Ｔｉｓｓｕｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　Ｅｎｄａｎｇｅｒｅｄ　Ｐｌａｎｔ　Ｓｙｒｉｎｇａｐｉｎｎａｔｉｆｏｌｉａ
ＣＨＥＮＧ　Ｍｉｎｇ１，ＬＩ　Ｈｏｕｈｕａ２，ＨＥ　Ｚｉｓｅｎ１，ＪＩＡＮＧ　Ｚａｉｍｉｎ３，ＣＡＩ　Ｊｉｎｇ１
（１．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，Ｓｈａａｎｘｉ　７１２１００；２．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌａｎｄｓｃａｐｅ　Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ　ａｎｄ
Ａｒｔｓ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，Ｓｈａａｎｘｉ　７１２１００；３．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，Ｓｈａａｎｘｉ　７１２１００）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｂｕｄｓ　ａｎｄ　ｓｅｅｄｓ　ｏｆ　ｅｎｄａｎｇｅｒｅｄ　ｐｌａｎｔ　Ｓｙｒｉｎｇａｐｉｎｎａｔｉｆｏｌｉａ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｔｈｅ　ｔｅｓｔ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ，ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ
ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ，ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｓｕｃｒｏｓｅ　ａｎｄ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｏｎ　ｐｒｉｍａｒｙ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ｓｅｅｄｓ，ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ
ｏｆ　ｂａｓａｌ　ｍｅｄｉａ　ａｎｄ　ｈｏｒｍｏｎｅｓ　ｏｎ　ｓｈｏｏｔｓ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｂｙ　ｐｌａｎｔ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ，ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｐｒｏｖｉｄｅ
ｂａｓｉｓ　ｆｏｒ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ，ｇｅｒｍｐｌａｓｍ　ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｘｐｌｏｉｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｙｒｉｎｇａｐｉｎｎａｔｉｆｏｌｉａ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ
ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｓｈｏｏｔｓ．Ｔｈｅ　ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｗｅｒｅ　７５％ｅｔｈａｎｏｌ　ｆｏｒ　３０ｓｅｃｏｎｄｓ，０．１％ ｍｅｒｃｕｒｉｃ
ｃｈｌｏｒｉｄｅ　ｆｏｒ　７ｍｉｎｕｔｅｓ，ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗａｓ　ＭＳ＋５．０ｍｇ·Ｌ－１　６－ＢＡ＋０．０１ｍｇ·Ｌ－１　ＩＢＡ；ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｉｎｉｔｉａｌ，
ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｓｅｅｄ　ｗａｓ　ＭＳ＋２０ｇ·Ｌ－１　ｓｕｃｒｏｓｅ＋３．０ｍｇ·Ｌ－１　６－ＢＡ＋０．１０ｍｇ·Ｌ－１　ＩＢＡ，ＭＳ＋
７．０ｍｇ·Ｌ－１　６－ＢＡ＋０．０５ｍｇ·Ｌ－１　ＩＢＡ　ａｎｄ　ＷＰＭ＋２．０ｍｇ·Ｌ－１　ＩＢＡ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｓｙｒｉｎｇａｐｉｎｎａｔｉｆｏｌｉａ；ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ；ｂｕｄ；ｓｅｅｄ
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