全 文 :第 37卷 第 8期 东 北 林 业 大 学 学 报 Vol.37 No.8
2009年 8月 JOURNALOFNORTHEASTFORESTRYUNIVERSITY Aug.2009
小叶丁香的再生体系建立 1)
武术杰
(长春大学 ,长春 , 130022)
摘 要 以小叶丁香的带花芽的茎段为外植体进行诱导培养 , 结果表明 , 茎段作为小叶丁香组织培养的外植
体是适宜的。初代最佳培养基为 MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LIBA,继代培养的最佳培养基为 MS+1.0mg/L
6-BA+0.1mg/LIBA,生根培养最佳培养基为 1/2MS+0.1mg/LNAA。培养条件为培养基中加入 3%蔗糖 、8g/
L琼脂 , pH=6.1。培养温度为 24 ~ 26℃, 光照时间为 12 ~ 14h/d, 光照强度为 2 200 ~ 2 500lx。
关键词 小叶丁香;组织培养;茎段
分类号 S723.132
RegenerationSystemofSyringamicrophyla/WuShujie(SchoolofBiologicalScienceandTechnology, ChangchunUni-
versity, Jilin130022, P.R.China)//JournalofNortheastForestryUniversity.-2009, 37(8).-17 ~ 18
TissuecultureofSyringamicrophylawasconductedusingstemsegmentswithflowerbudasexplants.ResultshowsthatthestemsegmentsofS.microphylaaresuitabletobeusedasexplants.Theoptimalmediaforprimarycultureand
successivecultureofS.microphyllawerebothMSmediumsupplementedwith1.0mg/L6-BAand0.1mg/LIBA, andthe
optimalmediumforrootingwas1/2MSmediumwith0.1mg/LNAA.Theoptimumcultureconditionswereobtainedas
mediumwith3 percentofsucroseand8g/Lagar, pH6.1, culturetemperature24 ~ 26degreesC, light-darkcycle(12h-12h), andlightintensity2 200 ~ 2 500lx.
Keywords Syringamicrophylla;Tissueculture;Stemsegments
小叶丁香(SyringamicrophylaDiels), 又名四季丁香 、野丁
香 ,为木犀科丁香属落叶灌木。花淡紫红色, 具香味 ,花期 4月
下旬至 5月上旬 ,秋季 7月下旬至 8月上旬。枝条柔细 , 小枝
密集 ,灰褐色 ,被柔毛 ,高达 1.5m。其花序繁多紧密 ,耐修剪 ,
可塑型 ,常见于庭院栽培与观赏 , 也常与其他树种相间种植 ,是
城市绿化的优良树种。丁香的繁殖方法很多 ,各种方法都有自
身的优点。国外 Hilderbrandt.VandHarneyPM等运用组织培
养的方法对丁香属品种欧洲丁香(S.vulgaris)进行过组织培养
研究 ,并在茎尖培养中获得成功 [ 1] 。国内刘建斌等以紫丁香
(S.oblata)的茎尖和带腋芽的茎段为外植体分别进行诱导培
养的结果表明 , 茎段作为紫丁香组培的外植体是适宜的 [ 2] 。刘
华英等利用暴马丁香(S.reticulata)成熟硕果种子的下胚轴进
行离体培养并获得无菌小苗 [ 3] 。周莉等对杂交幼胚的离体培
养进行了研究, 李容辉等对丁香杂交胚的离体培养进行了研
究 [ 4] 。吴鸣建对小叶丁香的悬浮细胞培养曾做过研究 ,并建立
了小叶丁香的悬浮细胞培养体系 [ 5] 。笔者通过组织培养技术
进行了小叶丁香再生体系建立的试验研究。
1 材料与方法
植物材料:小叶丁香(SyringamicrophylaDiels)取自哈尔
滨市园林研究所苗圃 ,时间为 4月下旬 ,气温在 6℃左右。外
植体选取优良健壮且带有花芽的当年生枝条及花蕾。
培养基:芽诱导培养基与丛生芽增殖继代培养基以 MS
(MurashigeandSkoog, 1962)(pH=6.1)为基础培养基 ,附加不
同质量浓度 6-苄基腺嘌呤(6-BA)和吲哚乙酸(IAA)或吲哚
1)吉林省教育厅科研项目(2006-94)。
作者简介:武术杰 ,女 , 1965年 11月生 , 长春大学生物科学技术
学院 ,副教授。
收稿日期:2008年 12月 26日。
责任编辑:戴芳天。
丁酸(IBA),生根培养基为 1/2MS(pH=6.1),附加不同质量
浓度的 NAA和 IBA。以上培养基均加入 3%蔗糖 、8g/L琼脂。
外植体的建立:外植体选取优良健壮且带有花芽的当年
生枝条 , 将其剪成 2 ~ 4cm长的茎段 ,置于流水下冲洗 2h;然
后用次氯酸钠浸泡 10 min, 并不断搅动 , 用无菌水冲洗 4 ~ 5
次;再将茎段用 75%酒精浸泡 30s进行灭菌 ,用无菌水冲洗 4~
5次;最后用无菌水浸泡 ,以备接种。
离体芽的诱导培养:将经过消毒灭菌的带花芽茎段剪成
1.0 ~ 1.5cm的茎段 , 接种于以 MS为基础培养基同时附加 6-
BA和 IAA或 IBA的不同质量浓度配比组合的诱导培养基
上。培养期间观察萌芽及生长状况。培养条件:温度为 24 ~
26℃,光照时间为 12 ~ 14h/d, 光照强度为 2 200 ~ 2 500lx。
丛生芽的继代培养:将诱导培养基上萌发的生长良好 、健
壮的嫩芽切下转接到继代培养基中培养。培养期间观察芽的
增殖及生长状况。培养条件同上。
试管苗的生根培养:取继代培养基中苗高 2cm左右的健
壮幼苗转入生根培养基中 , 观察生根状况。培养条件同上。
2 结果与分析
2.1 离体芽的诱导培养
在诱导培养基上进行芽的诱导培养 , 所得结果见表 1。
可见 ,接种后 30d左右 ,茎段基部膨大 , 不形成愈伤组织 , 直
接长出不定芽。茎段在几种培养基上的诱导结果不同 , 其中
以 1.0mg/L6-BA+0.1mg/LIAA的培养基和 1.0mg/L6-
BA+0.1mg/LIBA的培养基上的芽分化率高 , 可达 80%以
上 ,其试管苗长势也较好;尤其以 F培养基上的芽分化率最
高 ,可达 85%,其试管苗长势也最好。在不同质量浓度 6 -
BA和相同质量浓度的 IAA配比组合中 , 随着 6-BA质量浓
度加大 , 虽长势较好 , 但芽分化率降低。而若 6-BA质量浓
度低于 0.5mg/L时 , 芽分化率也是逐渐降低的 , 长势一般。
低的 6-BA与低的 IAA的质量浓度配比 ,无论是发芽率还是
DOI :10.13759/j.cnki.dlxb.2009.08.025
试管苗长势均较弱。在不同质量浓度的 6 -BA和相同质量
浓度的 IBA配比组合中 , 在 F培养基上的芽分化率最高 , 可
达 85%, 其试管苗长势也最好 ,见图 1。
表 1 不同质量浓度 6-BA和 IAA、IBA对小叶丁香腋芽萌发的影响
培养基(MS)/mg· L-1
IAA 6-BA IBA
植体接
种数量 /个
分化芽
数量 /个
芽分化
率 /%
试管苗
长势
0.10 0.5 20 10 50 ++
0.10 1.0 20 16 80 +++
0.10 2.0 20 14 70 +
0.02 0.4 20 6 30 +
0.04 0.4 20 8 40 +
0.5 0.1 20 11 55 ++
1.0 0.1 20 17 85 ++++
2.0 0.1 20 15 75 +++
注:+:芽发育不良;++:芽发育较好;+++:芽发育良好;++++:芽
发育很好;芽分化率 =分化芽数 /外植体总数×100%。
图 1 1.0mg/L6-BA+0.1mg/LIBA初代培养基上的试管苗长势
2.2 继代培养
将 2 ~ 3cm长的无菌芽从诱导成功的原茎段上切下 , 再
分别将其切成 1 ~ 2cm的带 1 ~ 2个腋芽的茎段 , 转入继代培
养基中。继代增殖培养中 , 6 -BA的质量浓度范围为 0.5 ~
2.0mg/L, IBA的质量浓度范围为 0.02 ~ 0.10mg/L, 不同质
量浓度的配比组合试验结果见表 2。可见 , 继代培养中无论
腋芽增殖数量和试管苗长势均以 MS+1.0mg/L6-BA+0.1
mg/LIBA为最好(见图 2)。如再经过 20 ~ 30d的培养 , 将从
继代茎段的叶腋处萌发出新的腋芽。待新的腋芽长至 2 ~ 3
cm时 ,再将其从原茎段上切下进行新的继代培养。将新芽仍
切成 1 ~ 2cm带腋芽的茎段进行再次继代 , 平均 30d增殖一
次。经过连续 4次继代培养 , 芽在上述培养基上的平均增殖
量为 4 ~ 5倍。其繁殖速度远远超过常规的扦插繁殖。
表 2 不同质量浓度 6-BA和 IBA对小叶丁香继代增殖的影响
培养基(MS)/mg· L-1
IBA 6-BA
外植体接
种数量 /个
增殖量 /
倍
试管苗
长势
0.1 0.5 20 5.2±0.2 +++
1.0 20 6.0±0.2 ++++
2.0 20 5.0±0.2 +++
0.02 0.2 20 3.0±0.2 ++
0.04 0.4 20 4.9±0.2 +++
注:+:再生芽发育不良;++:再生芽发育较好;+++:再生芽发育
良好;++++:再生芽发育很好。
图 2 1.0mg/L6-BA+0.1mg/LIBA继代培养基上的试管苗长势
2.3 试管苗生根培养
将生长健壮 , 高 3~ 4cm的无根幼苗转入生根培养基中 ,
大约 10d左右开始分化出根的生长点 , 20d时开始长出白色
粗壮的幼根(见表 3)。实验结果表明 , 5种生根培养基对小
叶丁香生根和生长的影响是有差异的 , 其中以 1/2MS+0.1
mg/LNAA培养基上的生根率最高(达 86%), 长势也最好;
而 1/2MS+0.5mg/LIBA+0.1 mg/LNAA培养基上的试管
苗长势虽然也很好 , 但生根率有所下降。
表 3 不同 IBA、NAA质量浓度对小叶丁香幼苗生根的影响
培养基 供试芽数量 /个 生根率 /%试管苗长势
1/2MS+0.1mg/LIBA 20 60.1 ++
1/2MS+0.1mg/LIBA+0.5mg/LNAA 20 67.9 ++
1/2MS+0.5mg/LIBA+0.1mg/LNAA 20 73.3 ++++
1/2MS++0.1mg/LNAA 20 86.0 ++++
1/2MS+0.2mg/LNAA 20 70.9 +++
注:+:根发育不良;++:根长势较好;+++:根长势良好;++++:根长势很好;
生根率 =发根芽数 /供试芽数 ×100%。
3 结论与建议
对小叶丁香茎段的组织培养技术的试验研究表明 , 以小
叶丁香的带花芽的茎段为外植体进行诱导培养是适宜的 , 说
明用组织培养技术快速繁殖小叶丁香苗木是可行的。初代最
佳培养基为 MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LIBA。继代培
养的最佳培养基仍为 MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LIBA。
生根培养最佳培养基为 1/2MS+0.1mg/LNAA, 其生根率最
高 ,长势最好 ,生长健壮。 但由于试验条件的限制 , 本试验所
设计的培养基配方的数量较少 ,尚有许多需改进之处。曾以
花蕾为外植体进行试验 , 但因脱毒过程出现问题使试验未成
功 ,笔者将以此次试验为基础进一步研究花蕾脱毒及继续探
索新的组培方法。
参 考 文 献
[ 1] HilderbrandtV, HarneyPM.InvitropropagationofSyringavul-
garis`Vesper [ J] .HortScience, 1983, 18(4):432-434.
[ 2] 刘建斌 ,赵祥云 ,王俊娟 ,等.紫丁香的组织培养 [ J].北京农学
院学报 , 2001, 14(4):42-45.
[ 3] 刘华英 ,沈海龙.暴马丁香下胚轴的离体培养和植株再生 [ J] .
植物生理学通讯 , 2003(4):351.
[ 4] 周莉 ,罗凤霞 ,代力民.丁香(SyringaL.)种间杂交幼胚离体培
养研究 [ J] .应用生态学报.2003, 14(3):382-386.
[ 5] 吴鸣建.小叶丁香的悬浮细胞培养研究 [ J] .郑州大学学报 ,
2004, 25(3):22-25.
18 东 北 林 业 大 学 学 报 第 37卷