全 文 ：综上所述，麻杏石甘汤在治疗感染后咳嗽时，取麻
黄发越阳气，用石膏清解肺热、兼制麻黄辛温，体现了
“火郁发之”的治法，尤其对迁延外邪入里化热时有很
好的疗效，值得临床进一步应用及研究。
参考文献:
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407 － 411．
质 量 工 艺
尖叶假龙胆中龙胆苦苷和獐牙菜苷的含量测定
吴琼，王知斌，于莹，翟亚东，杨炳友，王秋红，匡海学*
(教育部北药基础与应用研究重点实验室，黑龙江省中药天然药物药效物质基础研究重点实验室，
黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)
摘 要:目的:建立 HPLC方法同时测定尖叶假龙胆中龙胆苦苷和獐牙菜苷的含量。方法:采用 Cosmo-
sil 5C18 － MS － II (4． 6mm ×250mm，5μm)色谱柱，以甲醇(A)－水(B)为流动相，梯度洗脱程序为 0 ～
10min，10%→33%(A);10 ～ 20min，33% (A) ，流速 1． 0mL /min，检测波长 247nm，柱温 30℃。结果:龙
胆苦苷、獐牙菜苷的分别在 10． 95 ～ 438． 0μg /mL，7． 61 ～ 304． 4μg /mL 浓度范围内线性关系良好，回归
方程的相关系数 r分别为 0． 9996、0． 9995;龙胆苦苷、獐牙菜苷的平均加样回收率(n = 6)为 98． 8%，
100． 1%。结论:该方法能够快速、准确的测定尖叶假龙胆中龙胆苦苷和獐牙菜苷的含量。
关键词:尖叶假龙胆;龙胆苦苷;獐牙菜苷;HPLC
中图分类号:Ｒ284 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2406(2015)02 － 0047 － 03
基金项目:黑龙江中医药大学“杰出人才培育”基金项目(No． 2012cj02);2013 年度高等学校博士学科点专项科研基金资助课题(No．
20132327120002)
作者简介:吴琼(1990 －)，女，硕士研究生，主要研究方向:中药药效物质基础研究。
通讯作者:匡海学* (1955 －)，男，教授，博士研究生导师，主要研究方向:中药性味理论及中药药效物质基础研究。
收稿日期:2014 － 05 － 04
修回日期:2014 － 06 － 01
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2015 年 3 月第 32 卷第 2 期
Vol. 32，No. 2，Mar． 2015
中 医 药 信 息
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Simultaneous Determination of Gentiopicroside and Sweroside
Contents in Gentianella Acuta by HPLC
WU Qiong，WANG Zhi － bin，YU Ying，ZHAI Ya － dong，YANG Bing － you，WANG Qiu － hong，KUANG Hai － xue*
(Key Laboratory of Chinese Materia Medica (Ministry of Education)，Heilongjiang Key Laboratory of TCM
Pharmacidynamic Material Bases，Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China)
Abstract:Objective:To establish an HPLC method for the content determination of gentiopicroside and swero-
side in Gentianella acuta． Methods:A Cosmosil 5C18 － MS － II column (4． 6mm × 250mm，5μm)was used
for the seperation． Use methanol (A)and water (B)with a gradient elution［0 ～ 10min，10%→33%(A) ;
10 ～ 20min，33%(A) ］as the mobile phase． The flowing rate was 1． 0mL /min;the detective wavelength was
247nm and the column temperature was 30 ℃ ． Ｒesults :Good linear relationships were observed between the
masses and the peak areas of gentiopicroside and sweroside in the range of 10． 95 ～ 438． 0μg /mL(r =
0. 9996) ，7． 61 ～ 304． 4μg /mL(r = 0． 9995) ，respectively;the average recovery rates (n = 6)was 98. 8%
and 100． 1%，respectively;Conclusion:The established method is suitable for the quantitative analysis of
gentiopicroside and sweroside in Gentianella acuta．
Key words:Gentianella acuta;Gentiopicroside;Sweroside;HPLC
尖叶假龙胆(Gentianella acuta)，又名苦龙胆，蒙
药名为阿古特 －其其格，是龙胆科一年生草本植物，广
泛分布于我国的河北、东北、内蒙古、山西等地区。全
草入蒙药，味苦、性凉，具有清热、利湿的功效，与同科
植物肋柱花 (Lomatogonium carinthiacum)等同入药，可
用于治疗黄疸性肝炎、头痛、发烧［1］。本实验室对尖
叶假龙胆进行分离，得到了龙胆苦苷和獐牙菜苷两种
环烯醚萜类化合物，文献报道环烯醚萜类化合物具有
广泛的生物活性，如抗病毒、抗菌、抗肿瘤、抗氧化、保
肝利胆、解痉镇痛、增强免疫、降糖降脂等多种活性，并
且对神经系统、心血管系统和消化系统具有有益的作
用［2］。现代药理作用研究表明龙胆苦苷(gentiopicrin)
具有保肝利胆、镇痛、抗菌等活性［3 － 5］;獐牙菜苷
(sweroside)具有抗炎、抗糖尿病、促进成骨细胞生成等
活性［6 － 8］。尖叶假龙胆被收录于内《蒙古植物志》，在
民间及被蒙医广泛使用，本文通过测定尖叶假龙胆中
两种环烯醚萜类成分的含量，以期促进尖叶假龙胆的
合理应用，扩大应用范围，同时可以扩大龙胆科植物的
药用资源。
1 仪器与试药
Waters 2695 高效液相色谱仪(包括四元泵、在线
脱气机、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器、Em-
power化学工作站);KQ －500DB超声波清洗器 (昆仑
上市超声仪器有限公司);AK2140 万分之一电子天平
(上海奥豪斯公司)。
甲醇为色谱纯(美国 Dikma 公司);对照品龙胆苦
苷、獐牙菜苷为实验室从尖叶假龙胆 (Gentianella acu-
ta)中分离得到，经 (UV /MS，1H － NMＲ，13C － NMＲ)谱
学分析鉴定，HPLC(峰面积归一化法)两者纯度均 ＞
98%;尖叶假龙胆购买于黑龙江省大兴安岭地区，经鉴
定确定为龙胆科假龙胆属植物尖叶假龙胆［Gentianel-
la acuta (Michx．)Hulten］。
2 方法与结果
2． 1 对照品溶液制备
精密称取龙胆苦苷 7． 61mg、獐牙菜苷 10． 95mg置
同一个 10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，使每
1mL含龙胆苦苷 0． 761mg，獐牙菜苷 1． 095mg;既得混
合对照品溶液储备液。
2． 2 供试品溶液的制备
尖叶假龙胆粉碎过 40 目筛，精确称量 1． 0g 加
50mL甲醇，称定重量，超声提取 30min，取出，放冷，再
称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤
液，既得。
2． 3 色谱条件
采用 COSMOSIL 5C18 － MS － II(4． 6mm × 250mm，
Nacalai Tesque，Kyoto，Japan)色谱柱，以甲醇(A)－水
(B)为流动相，梯度洗脱 (0 ～ 10min，10% ～ 33% A;
10 ～ 20min，33% A)，流速 1． 0 mL /min，检测波长
247nm，进样量 10μL，柱温 30℃。样品和对照品色谱
图见图 1。
2． 4 线性关系考察
精密吸取龙胆苦苷、獐牙菜苷混合对照品溶液
0. 1mL，0． 2mL，0． 5mL，1mL，2mL，4mL 置 10mL 量瓶
内，加甲醇定容。分别取 10μL 注入液相色谱仪分析，
按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积 Y 对浓度 X
进行线性回归，龙胆苦苷和獐牙菜苷的回归方程分别
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图 1 尖叶假龙胆对照品溶液(A)与供试品溶液(B)HPLC色谱图
注:1．龙胆苦苷;2．当药苷。
为 Y = 66401X － 410000 (r = 0． 9996)，线性范围
10． 95 ～ 438． 0μg /mL;Y = 1842． 4X － 24493 (r =
0. 9995)，线性范围 7． 61 ～ 304． 4μg /mL。
2． 5 仪器精密度试验
精密吸取“2． 2”项下供试品溶液 10μL，按上述色
谱条件连续进样 6 次，记录峰面积，龙胆苦苷和獐牙菜
苷的峰面积 ＲSD (n = 6)分别为 0． 59%，0． 72%，表明
仪器精密度良好。
2． 6 重复性试验
取同一批尖叶假龙胆样品按“2． 2”项下方法制备
供试品溶液 6 份，进样 10μL，记录峰面积，计算含量。
龙胆苦苷平均含量 (n = 6)为 0． 80% (ＲSD =
1. 66%)，獐牙菜苷平均含量为 0． 39% (ＲSD =
1. 58%)。
2． 7 稳定性试验
精密吸取供试品溶液 10μL，室温下分别于 0、2、
4、6、12、24h进样测定，记录峰面积，龙胆苦苷和獐牙
菜苷的峰面积 ＲSD (n = 6)分别为 0． 94%，0． 98%，表
明龙胆苦苷和獐牙菜苷在 24h内稳定。
2． 8 加样回收率
精密称定已知含量的尖叶假龙胆样品 1． 0g，共 6
份，分别加入龙胆苦苷对照品储备液、獐牙菜苷对照品
储备液各 200μL，按照“2． 2”项下制备供试品溶液，进
样 10μL，计算回收率，龙胆苦苷和獐牙菜苷的平均回
收率分别为 98． 8% (ＲSD = 1． 16%)，100． 1%
(ＲSD =0． 95%)。
2． 9 含量测定
取 3 批尖叶假龙胆药材，精密称量 1． 0g，每个批
次按“2． 2”项下方法平行制定 3 份供试品溶液。分别
精密吸取 10μL进样分析，测定峰面积，外标法计算含
量，结果见表 1。
表 1 尖叶假龙胆中 2 种成分的含量测定结果(n = 3)
批次
龙胆苦苷 獐牙菜苷
含量(%) ＲSD(%) 含量 (%) ＲSD(%)
1 0． 79 1． 87 0． 39 1． 63
2 0． 76 1． 75 0． 40 1． 57
3 0． 79 1． 90 0． 38 1． 58
平均 0． 78 0． 39
3 讨论
在选择提取溶剂和提取方法时，文献报道龙胆苦
苷和獐牙菜苷的提取溶剂均为甲醇超声提取，因此选
择甲醇超声提取。在波长选择时，采用紫外分光光度
法，对龙胆苦苷和獐牙菜苷分别进行紫外全波长扫描
(190nm ～400nm)，综合文献确定龙胆苦苷、獐牙菜苷
的最大吸收波长分别为 275nm 和 247nm，考虑两个波
长下吸光度的变化情况，结果表明 247nm 下两个化合
物的峰型对称，分离度高，故选择 247nm 作为检测波
长。在流动相的选择上考察了不同溶剂系统 (甲醇 －
水、乙腈 －水系统)，结果表明采用甲醇 －水系统各峰
之间分离完全，龙胆苦苷和獐牙菜苷分离效果较好，色
谱图基线较平稳。
尖叶假龙胆在民间常用于治疗心率失常等疾病，
效果极为显著，但因其并未被收入药典而很大程度的
限制了其应用。本文采用 HPLC法首次对尖叶假龙胆
中龙胆苦苷和獐牙菜苷进行定量分析，该方法定量准
确、操作简便，为尖叶假龙胆的进一步研究奠定基础，
为其合理开发利用和质量控制提供依据。
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