全 文 ：
2014,43(2): 108 ~ 110.
Subtropical Plant Science
有柄石韦总多酚含量测定及其超声提取工艺优化
程丹丹，高 贝，辛晓伟，高德民
（山东中医药大学 药学院，山东 济南 250355）
摘 要：为优选有柄石韦Pyrrosia petiolos中总多酚超声提取工艺，采用Folin-Ciocalteus比色法对总多酚进行含
量测定，通过单因素和正交试验，对提取工艺参数进行优化。结果表明，没食子酸对照品在浓度为 1～10 mg·L-1
范围内，与吸光度呈良好线性关系（y = 2.406x－0.012，R = 0.9994），有柄石韦总多酚的最佳提取工艺条件为：
55%乙醇，料液比 1∶10（W/V），超声提取 60 min，超声提取温度 75 ℃，总多酚提取率为 21.47 mg·g-1。
关键词：超声法；有柄石韦；总多酚；提取工艺；正交试验
Doi: 10.3969/j.issn.1009-7791.2014.02.004
中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2014)02-0108-03
Polyphenols Extraction from Pyrrosia petiolosa by Ultrasonic and
Its Content Determination
CHENG Dan-dan, GAO Bei, XIN Xiao-wei, GAO De-min
(School of Pharmacy, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, Shandong China)
Abstract: To optimize the extraction of total polyphenols in Pyrrosia petiolosa by ultrasonic, the
content of the polyphenols was used as investigation index, and the total polyphenol content was
determined by Folin-Ciocalteus colorimetric. The extraction process parameters for polyphenols were
optimized by the single factor and the orthogonal experiment. The results showed that there was a
good linearity between gallic acid concentration and absorbance in the range 1~10 mg·L-1 (y = 2.406x
－0.012, R= 0.9994)；The optimum conditions were as follows: solvent concentration 55%,
ultrasound time 60 min, extraction temperature 75 ℃, solid to liquid ratio 1∶10. The polyphenols
extraction rate was 21.47 mg·g-1 in the best technical conditions.
Key words：ultrasonic; Pyrrosia petiolosa; polyphenols; extracting technique; orthogonal experiment
有柄石韦Pyrrosia petiolosa始载于《神农本草经》，为水龙骨科石韦属植物。有利水通淋、清肺泄
热、清热止血之功效[1—2],主治肺炎水肿、尿道炎、慢性气管炎、淋病、小便不通、出血及肺热咳喘等[3]。
有柄石韦含有多种活性成分，多酚类物质的生物活性及对人体的保健预防作用日益受到关注，其
清除机体内自由基、抗脂质氧化、延缓机体衰老、预防心血管系统疾病、防癌、抗辐射等生物活性功
能的发现，使多酚的研究和应用越来越受到重视[4—6]，但石韦多酚的提取工艺尚不成熟。为此，本文以
有柄石韦为实验材料，以乙醇为溶剂，利用超声波技术，在单因素基础上进行正交实验得到有柄石韦
多酚提取的最佳工艺条件，以期为有柄石韦的开发利用研究提供理论参考。
1 材料与方法
1.1 材料
有柄石韦 Pyrrosia petiolosa 采自胶东地区，样本保存于山东中医药大学标本馆（SDCM，201220）。
1.2 仪器与试剂
RE52AA 旋转蒸发器（菏泽市鑫源仪器仪表有限公司）；PS-40A 超声波清洗机（深圳市超艺达科
收稿日期：2014-03-06
基金项目：山东中医药大学 2013 年 SRT
作者简介：程丹丹，硕士研究生，从事中药资源与质量控制研究。E-mail: chengyan0913@126.com
注：高德民为通讯作者。E-mail: gdm607@126.com.
第 2 期 程丹丹,等：有柄石韦总多酚含量测定及其超声提取工艺优化 ﹒109﹒
技有限公司）；754PC 紫外-可见分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司。没食子酸对照品（北京鼎
国昌盛生物技术有限公司，MUST-13040103），Folin-Ciocalteu 试剂（北京鼎国昌盛生物技术有限公司），
其他试剂均为分析纯。
1.3 方法
1.3.1 单因素试验 药材经粉碎，过 16 目筛，用石油醚脱脂 12 h，抽滤干燥备用。
1.3.1.1 乙醇体积分数 称取脱脂的有柄石韦干粉 30 g，并选择乙醇体积分数分别为 20%、35%、50%、
65%、80%，固定料液比为 1∶10（W/V），在 65 ℃水浴中超声提取 30 min，以提取液中多酚含量为指
标，考察乙醇体积分数对提取效果的影响。
1.3.1.2 料液比 称取脱脂后有柄石韦干粉 30 g，以 65%乙醇为提取溶剂，选择料液比分别为 1∶5、1∶
10、1∶15、1∶20、1∶25，在 65 ℃水浴中超声提取 30 min，以提取液中多酚含量为指标，考察料液
比对提取效果的影响。
1.3.1.3 提取温度 称取脱脂后有柄石韦干粉 30 g，以 65%乙醇为提取溶剂，固定料液比为 1∶10，选
择提取温度分别为 20、35、50、65、80 ℃，超声提取 30 min，以提取液中多酚含量为指标，考察提取
温度对提取效果的影响。
1.3.1.4 超声提取时间 称取脱脂后的有柄石韦粉末 30 g，以 65%乙醇为提取溶剂，固定料液比为 1∶
10，在 65 ℃水浴中分别提取 15、30、45、60、75 min，以提取液中多酚含量为指标，考察超声提取时
间对提取效果的影响。
1.3.2 正交试验 在单因素试验的
基础上选取乙醇体积分数、料液比、
提取温度和超声提取时间，测定提取
液中多酚含量，以优化有柄石韦多酚
类化合物的最佳提取工艺（表 1）。
1.3.3 多酚含量测定 采用Folin-
Ciocalteu试剂对总多酚含量进行测定。用紫外-可见光分光光度计在 760 nm处测量吸光度。以浓度对吸
光度值做标准曲线，得到线性回归方程y = 2.406x－0.012（r = 0.9994）。有柄石韦提取液按照以上方法
测定吸光度。
表 1 L9(34)正交试验因素与水平设计
Table 1 Factors and levels of L9(34) orthogonal test
因 素 水平
A 料液比(W/V) B 超声时间/min C 提取温度/℃ D 乙醇体积分数/%
1 1∶7 50 55 55
2 1∶10 60 65 65
3 1∶12 70 75 75
2 结果与分析
2.1 单因素试验
随着乙醇体积分数的增大，
提取的多酚含量先升高后降低，
且当乙醇体积分数为 65%时，
多酚含量最高为 40.52 mg·g-1，
故乙醇体积分数以 65%为宜（图
1）。随着料液比的增大，在消除
溶剂体积影响后，多酚含量呈先
升高后降低趋势，当料液比为
1:10 时，多酚含量最高为 32.78
mg·g-1，故料液比以 1:10为宜(图
1)。随着提取温度的升高，提取
液中多酚含量先升高后降低再
升高，当水浴温度为 65 ℃时，
多酚含量最高为 30.76 mg·g-1。
故水浴温度以 65 ℃为宜(图 1)。
29.5
30
30.5
31
31.5
32
32.5
33
33.5
34
34.5
0 20 40 60
超声提取时间/min
多
酚
含
80
量
/m
g·
g-
1
图 1 单因素对多酚提取率的影响
Fig.1 The effects of single factor on the polyphenols extraction rate
25
26
27
28
29
30
31
32
0 20 40 60 80 100
提取温度/℃
多
酚
含
量
/m
g·
g-
1
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
0 20 40 60 80 100
乙醇体积分数/%
多
酚
含
量
/m
g·
g-
1
0
5
10
15
20
25
30
35
0 5 10 15 20 25
液料比(V/W)
多
酚
含
量
/m
g·
g-
1
多
酚
含
量
/m
g·
g-
1
多
酚
含
量
/m
g·
g-
1
多
酚
含
量
/m
g·
g-
1
多
酚
含
量
/m
g·
g-
1
第 43 卷 ﹒110﹒
当超声时间为 60 min时，多酚含量最高为
33.93 mg·g-1，60 min后提取液中多酚含量反
而降低，这可能是随着加热时间延长，多酚
被氧化所致[7]。故超声提取时间以 60 min为
宜(图 1)。
2.2 正交试验
正交试验表明（表 2），影响有柄石韦总
多酚提取率的因素分别为：超声提取时间＞
乙醇体积分数＞超声提取温度＞料液比。最
佳组合为A2B2C3D1，即最佳提取工艺条件：
料液比为 1:10，超声时间为 60 min，超声提
取温度为 75 ℃，乙醇体积分数为 55 %。
3 讨论
多酚在植物体内通常与蛋白质、多糖以
氢键和疏水键的形式形成稳定的分子复合
物，故在提取时，提取溶剂不仅要求对多酚具有很好的溶解性，而且具有氢键断裂的作用。丙酮浸提
率高于甲醇和乙醇，但易浸取大量脂质尤其是色素，使后续操作困难且回收难度较大，而乙醇可以抑
制多酚类物质的氧化，同时可以除去一些亲水性的蛋白质、黏液质和部分多糖及其它水溶性杂质，故
本试验选用乙醇作为提取溶剂[8]。
表 2 L9(34)正交试验结果
Table 2 L9(34) orthogonal test results for the extraction
of total polyphenols
因素水平 试验
号 A B C D
多酚含量
/mg·g-1
1 1 1 1 1 21.24
2 1 2 2 2 19.03
3 1 3 3 3 19.96
4 2 1 2 3 20.92
5 2 2 3 1 21.47
6 2 3 1 2 15.80
7 3 1 3 2 20.10
8 3 2 1 3 21.06
9 3 3 2 1 16.26
K1 60.23 62.26 58.10 58.97
K2 58.19 61.56 56.21 54.93
K3 57.42 52.02 61.53 61.94
k1 20.08 20.75 19.37 19.66
k2 19.40 20.52 18.74 18.31
k3 19.14 17.34 20.51 20.65
R 0.94 3.41 1.77 2.34
目前植物多酚含量测定常用的方法有高锰酸钾滴定法、香草醛法、流动注射法、铁氰化钾分光光
度法、Folin-Denis法和Folin-Ciocalteus法等[9—10]。其中，高锰酸钾滴定法滴定终点较难观察，测定灵敏
度较低。香草醛法和铁氰化钾分光光度法对测定条件要求严格，稳定性较差，干扰因素较多，易出现
沉淀。Folin-Denis法灵敏度较高，简便易行，但显色不太稳定，对环境温度要求高。Folin-Ciocalteu法
具有操作简单，效率高，设备要求低，显色明显，精密度高，稳定性好，回收率高等优点[11]。故选用
Folin-Ciocalteu法。
综合分析确定最佳工艺条件：料液比 1∶10，超声提取时间 60 min，提取温度 75 ℃，乙醇体积分
数为 55%，提取率可达 21.47 mg·g-1。该研究可为有柄石韦多酚的进一步研究提供理论参考。
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