全 文 ：上海农业学报 2加 7, 23 ( 2 ) : 17 一 23
Ae ta Ag几 C dlt auer
s h a昭h a i
文 . 编号 : 1以X卜3924 《2X() 7 》0 2一 17刁7
东 方 杉 的 组 织 培 养 繁 殖 技 术 研 究
楼文率 , , 陈 权 , , 张朝君 , , 黄举文 , , 唐 寅 , , 张 军 , , 宋学孟 , , 王凌健 , , 杨远方
(
’上海光兆植物速生技术有限公司 . 上海 20 18 01 ;
2中国科学院上海植物生理生态研究所 ,上海 ZO x 〕32 ; 3新加坡南洋理工大学 , 新加坡 6 3 97 98)
摘 要 : 以东方杉大树基部当年生的幼嫩萌枝为外植体 ,进行了组织培养技术研究 。 结果表明 ,外植体的
最佳消毒方法为 75 % 酒精消毒 30 一 60 。 后用升汞 0 . 2% 浓度消毒 10 一 巧 m in 。 采用茎段微型扦擂和诱导丛生
芽的方法来增殖扩繁 ,适宜东方杉芽增殖培养基为 : M HJ + B A 0 . 5 m g lL 十 N A A 0 . 05 m g lL + L一谷氛陇胺
0
.
5 9几 + 活性碳 5 g lL 十蔗糖 2% ,茎段腋芽萌发率可达 90 % 。 芽伸长生长的培养基为: M田 + L一谷氮陇胺
0
.
5 g lL + 活性碳 5 以L + 蔗糖 2% , 35 d平均增高 4 . 2 c m 。 试管苗的生根培养基为 : 1忍 MHJ + L 一 谷氮既胺
0
.
5 g lL + 活性碳 5 g lL + 蔗糖 l % ,最高生根率达 75 % , 以沙为培养墓质的效果比琼脂好 。 生根的组培苗先在
沙床上进行炼苗 ,炼苗成活率达 87 % ,然后移栽到带混合基质的营养钵中育苗 ,移栽成活率可达 90 % ,育苗 l ~
2个月后移栽大田 。
关扭词 : 东方杉 ;组织培养 ;芽增殖 ;生根培养 ;炼苗 ;繁殖
中圈分类号 : 57 91 . 27 ; 9Q 43 . 1 文献标识码 : A
东方杉 (几%。 d i u m m cu or an : u m eT n x C呷 ot imer a fo 材 u ne i H o ib er n k e x o tt o e t Di e tr
.
)是我国著名林木
育种家叶培忠教授于 19 62 一 1963 年用墨西哥落羽杉 ( axT do iu m m~ an ut m ) ( ? )和中国柳杉 ( C叩切neI
-
血 fo 血ne i ) ( 幻进行杂交而获得的新树种 ,又称为杂交墨西哥落羽杉 ! ’ 一 ’ 」。 该树种树形高大优美 ,呈半
常绿 ,生长快 ,抗盐碱和耐水湿能力强 ,具有较强的抗风能力 [ ’ 〕 ,在城市绿化 、沿海防风 、湿地造林 、盐碱地
绿化 、河堤林带建设等生态环境建设中具有较为重要的推广应用价值【` } 。 适种区域可彼盖长江中下游地
区以及华东 、华南沿海地区 , 19 75 年上海引进种植以来 ,生长表现良好 。 目前我国自然保存的东方杉树
种资源已极其稀少 〔’ } ,加强对该树种的保存 、繁殖和推广有着重要的意义 。
由于东方杉无自然有性繁殖能力【’ · ,〕 , 而且扦插无性繁殖较慢 , 因此东方杉繁殖困难影响其推广应
用 。 目前虽然可以通过嫩枝扦插繁殖获得种苗 ,但繁殖速度慢难以满足对东方杉的推广应用需求 6[] 。 另
外现有保存的东方杉资源很少 ,大量采集插穗将使种质资源遭到破坏 。 因而采用组织培养快繁技术进行
东方杉的繁殖和利用是保存东方杉树种资源 、解决目前东方杉种苗繁殖最为有效的方法 。 本项目就东方
杉的组织培养繁殖技术进行研究 ,首次成功建立了利用茎段为外植体通过组织培养技术进行增殖并形成
再生植株的繁殖技术 。 本文报道该项研究结果 。
1 材 料 与方 法
1
.
1 材 料
供试材料为上海市浦东新区川沙林场采集的 2 一 3 年生东方杉扦插苗当年生的侧枝和树龄 30 年的
东方杉植株基部当年生的萌枝 。
1
.
2 方 法
1
.
2
.
1 外植体选择与消毒 对采集的东方杉枝条根据嫩枝的木质化程度分类 ,切成 3 C m 小段 。 茎段用洗洁
精进行表面清洗后 ,流水冲洗 so 而 n 。 然后用 75 % 酒精振荡消毒 30 一印 s ,清水冲洗 3 一 4 遍 。 再用 0 . 2% 升
汞溶液消毒 or ~ 20 而 n ,在超净工作台上用无菌水冲洗 5 一 6 遍 。
收稿 日期 : 20 , 一 04 一 04 初稿 ; 2 0 7 一 05 一 14 二改稿
基金项 目 : 上海市科学技术委员会农业科技领域重点攻关项目基金资助【项 目编号 : 06 3 91 91 16〕
作者简介 : 楼文阜 ( 19” 一 ) , 男 , 硕士研究生 ,从事植物育种和组织培养技术研究 。 eT l : ( 0 2 1 ) 6 91 5“ 沁 2
上 海 农 业 学 报 23 卷
1
.
2
.
2 芽的诱导与增殖 把消毒后的茎段切掉切口发褐的两端 ,再切成长约 1 Cm 的小段插在诱导腋芽的
培养基上 ,芽诱导基本培养基采用 M s 、花 [’ 〕 、 D c R[ ’ 〕和自配的 M川 (表 l) , 附加激素 B A 0 . 2 一 0 . 5 gnr lL 和
N A A 0
.
05
一 0
.
5 m g lL 等 。 腋芽长出后切下新芽转接到芽伸长生长培养基上 ,生长到 4 一 5 c m 后再切成
约 1 。m 的茎段进行芽诱导培养 ,利用茎段抽芽方式进行增殖 。 切下新芽后的茎段可继续培养诱导形成
丛生芽 , 以此方式继续进行增殖 。 培养温度控制在 25 一 28 ℃ ,光照强度为 50 一 80 林m al /m , · 。 。 培养容器
采用有透气孔的封口膜包扎的玻璃广口瓶 。
裹 1 M UJ 若本培养` 成分
介缺 I C咖脚目 do n or M F J . 目 iu . gm · L一
大 t 元家 M` , le m e n t 微 t 元素 Mi e oer l e m e n t 有机物 o gr an i e amt e : 其他 hOt e二
N H. N 0 3 80 H
3 B0 3 3 1 盐酸硫胺素仆 i am in e h yd溉 hl o d d e 0 . 0 5 蔗据 Su e oser 20 g l L
KN o 3 9 50 Msn o
;
·
H Z o 一5 . 16 盐酸毗哆醉 Pyir dxo i n e 卜yd叹 h lo ir d e 0 . 25 琼脂 A脚 6 g l L
KH ZOP
4
2 7 0 Zsn o
;
·
7 H2 0 8
.
6 烟酸 N ie o t in i e ac id 0 . 25 p H 5 . 8
M步 0 . 4 5 0 Kl 0 . 8 3 甘氨酸 G I” i n e l
CaC 1
2
4 0 N
a 2 Mo()
;
·
Z H ZO 0
.
25 肌醉 In os i tol 4 5 0
eF SO二 7 H 2 0 2 7 . 8 C oC 12 · 6 H2 0 0 . 0 2 5
N a z E DT A
·
Z H ZO 3 7
.
3 Cu SO心
.
5 H 2 0 0
.
2 5
1
.
2
.
3 生根培养 切取新生长的 Z C m高的小芽 , 摘去切 口端的叶片 , 转接到生根培养基 。 或者把芽切
下后先转接到芽伸长生长培养基 , 5 一 6 周苗 4 一 6 c m 时再转接到生根培养基上进行生根培养 。 生根基本
培养基用 M S 和 M H J , 加激素 IB A 0 . 1 一 1 . 0 m g lL 和附加物 L一谷氨酞胺 0 . 5 9 /L 、活性碳5 9 /L 。 培养温度
控制在 ( 25 土 l) ℃ ,光照强度为 80 一 10 林m ol /扩 · s 。 培养容器采用有透气孔的封 口膜包扎的玻璃广
口瓶 。
1
.
2
.
4 炼苗和移裁 生根的试管苗经清洗后 , 移栽到沙床上进行炼苗 , 1 一 2 周内需加盖遮阳网以避免
阳光直射 ,并通过自动喷雾控制苗床空气湿度 ,保持组培苗叶片湿润不失水 。 新根长出后逐步降低沙床
的湿度 ,待抽出新叶后移栽到营养钵中 ,移栽基质为大田园土 、河沙 、泥炭土和珍珠岩混合配制而成 。
2 结 果 与分 析
2
.
1 外植体选择与消毒
植物组织培养成功首先要选择合适的材料并通过消毒处理获得无菌外植体 。 本试验比较了东方杉
当年萌生的硬枝和嫩枝的消毒方法 (表 2 ) ,从无菌苗获取难易程度看 , 采取小苗上的当年生嫩枝或老树
基部的当年生幼嫩萌枝条作为外植体效果较好 ,这些外植体容易消毒且抽出的腋芽较强壮 。 褐色的硬枝
茎段和褐绿色嫩枝茎段的消毒比较困难 , 污染率高达 80 % 左右 。 叶片已经张开的嫩枝消毒效果好 , 叶片
紧包的顶芽难以消毒干净易受霉菌的污染 。 消毒试验表明在用 75 % 酒精消毒 5 一 60 5 和 0 . 2% 升汞消
毒 20 m in 时消毒剂量过大 ,大量嫩枝被消毒致死 。 最佳消毒方法是 75 % 酒精消毒 30 一 60 5 (由材料老嫩
确定时间 ) , 然后用 0 . 2% 升汞溶液消毒 or 一 巧 m in , 这样可避免外植体的消毒损伤 ,并保持了较低的污
染率 ,从而获得较多且健壮的无菌外植体进行下一步的组织培养 。
衰 2 不同外植体的消衡方法
aT 比 Z D如i. f6 团叨 . 姆比侧如 or d挽le 彻 t ex p la . st
外植体材料
E x p l助 t m a t e ir al
7 5% 酒精15
7 5% Eht an o l
0
.
2% 升汞 lm in
0
.
2% M e陀 u r i e
e h lo ir d e
接种数 死亡率 /%
N u n lbe r Of s t e ms M
o rt al i t y
污染率%l
C on 妞m i n at i o n m t e
褐色的硬枝茎段 Bor w n h耐 w袱 I 。et lsn
褐绿色嫩枝茎段 G er en it ep w刚 st e ms
绿色的嫩枝茎段 G既 n so ft w以 x l st e m 。
嫩茎尖 (叶片紧包 ) S le m it sP
大树基部嫩的萌枝 G er en so ft w呱 l 。et lsn 加m bas 】utr kn
印
O4
2 0
l 2
3 0
2 0
8 1
.
3
6 7
.
6
20
.
0
7 7
.
1
12
.
5
032405D
只`岌抢么 _
2期 楼文阜 ,等 : 东方杉的组织培养繁殖技术研究
2
.
2 腋芽诱导和芽增殖
经过消毒的茎段在初代培养中进行腋芽诱导 , 2 周后开始抽出新芽 , 综合出芽率和出芽质量调查发
现培养基 M H J + BA 0 . s m g几 + N A A 0 . 05 m g几较好 (表 3 ) ,抽芽率达 64 % ,芽呈绿色而且健壮 ,生长速度
较快 , 20 d 后芽平均长高 0 . 8 。 m 。 在相同激素组合的条件下 , TE 和 D CR 基本培养基抽出新芽有黄化现
象 , 且生长缓慢 。 在 M S 基本培养基上茎段抽芽质量好于 T E 和 D CR , 但在 M川 中表现更佳 。 比较发现
花 和 D CR 培养基的无机盐离子浓度较低 , M S 和 M H J培养基相对较高 ,说明培养基的无机盐离子浓度高
有利于东方杉的生长 ,这与周音等〔6〕报道的结果一致 。
衰 3 外植体在初代培养中腋芽诱导和生长状况
aT b le 3 E xP lan tS
’ . 对朋. yr b叻 加 d u cd o n a . d 山 o t g门 , 价 atS 妞
培养基 接种数 抽芽率 /% 芽高 cI m 芽生长状况
M e d iu m St e m n u m b
e r
eP o
e n t
age fO ge mr i
n a t io n M e . , ho t h e igh t S ho t脚Wt 卜 .妞 . e
ET
+ B A 0
.
5 m g l L +
N AA 0
.
0 5 m g l L + S u e or se 3%
D C R + B A 0
.
5 m g / L +
N A A 0
.
0 5 m g l L + S u e or s e 3%
M S + B A 0
.
5 m g l L +
N A A 0
.
05 m g l L
+ S u e
oser
3%
MHJ + B A 0
.
5 m g l L +
N A A 0
.
0 5 m g / L + S u e功 s e Z%
芽小而黄 , 生长级慢
S m al l an d y e l ow
, 目陷w i叱 sl o w
芽小而黄 , 生长级慢
s m al l an d y e l o w
,
, , , i n ` sl ow
芽呈绿色 , 生长较快
Gre
n , 目旧 w i n g 俪 t
芽呈绿色而健壮 , 生长较快
G溉 n an d s t or n g , 目旧 , . n g佃 .
待新芽长至 1 e m ,切下小芽转接至单株生长培养基 ,接种 1 一 3 周 ,东方杉组培苗生长较慢 , 3周后生
长速度明显加快 , 35 d 平均增高 4 . 2 c m 。 试验分别比较了 M HJ 和 MS 培养基在附加 L一谷氨酞胺 、活性碳
和生长素 ( BI A )等添加物或激素对东方杉的伸长生长的影响 (表 4 ) ,结果显示 M H J培养基的培养效果明
显比 M S 培养基好 , M H J培养基上附加了 L一谷氨酞胺 0 . 5 g lL 和活性碳5 9 L/ 的效果较好 ,说明 L一谷氛酞
胺和活性碳很大程度上促进东方杉的伸长生长 ( 图版 1 ) 。 v a 。 w ikn l e 等 [ 9 ]对活性炭在组培中的作用研
究中也发现活性炭可提高道格拉斯杉组培苗生长率和活力 。 L一谷氨酞胺也被报道广泛应用于针叶树的
体细胞胚胎发生研究中 ,对胚的诱导和分化都起到重要的作用 [’ “ ] 。 培养基中加生长素 BI A 对东方杉的
生长无明显作用 , 基部切口处形成较多愈伤 , 反而有一定的抑制作用 。 周音等 [` 〕发现 BI A 和 G A 3对东方
杉的芽伸长生长不起作用 , HM I 对芽的伸长生长有明显的影响 。
裹 4 单株在不同培养若上的伸长生长比较
aT b le 4 C o m aP d 约 n o r elo n g ado n gr o wt b or P画山st o n d ife eur t . 侧目a
培养荃 M e d iu m 2 0 d平均增高高度 l
e m 3 5 d 平均增商高度 le m
M e an h e ihg r脚切山 w i th in 2 0 d a y s M e an he ihg t , w ht w i ht in 35 d a y s
MHJ
+ Gl u ra m i n e 0
.
s g l L+ A e t i v a tde e a rob n 5 9 /L 1
.
X() 4
.
2
M H J+ IB A 1
.
0 m g /L+ Gl u taxn i
n e
0
.
5 g l L + Ae ti v at e d e ar ob n 5 9 /L 0
.
6 8 3
.
2
MHJ
+ Glu ta m i n e 0
.
5 9 /L 0
.
34 2
.
7
M lJ + A
e t i v a t e d e a r ob n 5 g l L 0
.
3 8 2
.
9
M S+ G lu tam i
n e 0
.
5 9 /L + Ae t i v a t e d e ar长〕 n 5 9 /L 0 . 2 8 2. 0
· 试管苗长高后切成长 1一 1 . 5 c m 的茎段进行循环增殖培养 , 比较 M川 和 M S 培养墓及不同浓度 B A
对茎段抽芽率和芽生长质量的影响 (表 5 ) , 结果表明 , 试管苗增殖生长培养基以 M川 + BA 0 . 5 m g lL +
N A A 0
.
0 5 m g /L + L
一谷氨酞胺 0 . 5 9 /L + 活性碳 5 9 /L + 蔗糖 2% 的效果最好 。
M H J培养基中 B A 浓度为 0 . 5 m g L/ 时 , 芽直接从腋芽处抽出新芽 (图版 2 ) , 腋芽处无明显膨大的白
色愈伤 ,新抽芽先呈黄绿色 ,后变成健康的绿色 , 每段抽芽 1 一 3 个 , 芽粗壮 , 叶间距短 , 30 d 后芽平均高
0
.
8 一 1
.
2 c m ; M H J 培养基中 B A 浓度为 1 . o m g几 时 ,每段抽芽 2 一 5 个 ,芽的茎细嫩 ,基部叶片间距较长 ,
3O d 后芽高 0 . 3 一 1 . 0 c m 。 而 M S 培养基中抽出的芽生长较慢 , 每段可抽 l 一 3 个芽 ,芽粗短 , 30 d后芽高
0
.
2 一 0
.
5 Cm
,顶端叶张开 ,基部叶紧包着茎杆不舒展 ,芽质量较差 。 B A 浓度的提高可提高每个茎段的抽
芽数量 ,但是由于每个茎段上的芽数量多会引起芽变细变弱 , 为了控制增殖中芽的质 t , B A 浓度不宜过
高 。 增殖培养中采用单株生长到一定高度后进行试管内微型扦插诱导腋芽抽出新芽的方式来扩策 ,茎段
上 海 农 业 学 报 3 2卷
增殖方式每 4一 5 周增殖比例达到 1 ` 5 。 已抽芽的茎段切下新芽后继续培养可形成丛生芽 (图版 3 ) ,丛生
芽的增殖方式每 4 周增殖比例可达 1: 2 . 5 左右 。
衰 S 试 , 苗增玻培葬` 及 X发芽率比较
T . b le S E日伙臼 or m lu d川幽臼0 . . 目加 加 讲峨 . 。唱 e or 解 n川 . .如 .
培养基 Mde i. 接种数
S宜e口 n u浏比 r
抽芽率 l%
Pe氏 en t叫笋 of 醉蒯 an d on
MS + B A 0
.
5 gm l L
+ N AA 0
.
05 gm l L +
砂u at m i n e 0 . 5 g l L + Ae石v at de e目比 n 5 g l L
M S+ B A 1
.
0叱几 + NA 0 . 0 5吨 L/ +
Gl
u .am i
n e 0
.
s g l L + A
eit v at de e目比 n s g l L
M HJ + B A 0
.
S gln 几 + N AA 0 .仍 吨了L +
Gl
u tam l
n e 0
.
5 9几 + Ae it v a tde e a d扣 n 5 g l L
M HJ
+ B A 1
.
O gln 几 + N AA 0 . 05 gnI l L +
lG u at m in e 0
.
5 9几 + Ae it vat de e a d沁 n s g几
2
.
3 生根培养
选择了若干个不同的基本培养基并附加不同浓度的生长素进行东方杉的生根培养实验 (图版 4 ) ,在
M S
、
ET
、
cD R
、
wP M
、矶 it e 等培养基上都未获得生根苗 ,仅在 MHJ 培养基上获得了少 t 生根苗 ,但其生根
周期较长 ,且生根率较低 。 以 M川 为基本培养基 ,进一步比较了不同离子浓度和培养基质对东方杉组培
苗诱导生根的影响(表 6 ) 。 降低 M川 培养基的离子浓度 50 % 可适当的提高生根率 ,增加活性碳对生根起
到很大的促进作用 ,这可能是由于东方杉生长期间切口处易形成抑制根原基形成的代谢物 [川 , 活性炭能
有效的吸附有害代谢物 。 60 d 后可以看到部分苗白色的根尖从基部切口处的愈伤上形成 , 3 一 4 个月根
系可长达 3 一 5 。m ,并有侧根形成 (图版 5 ) 。 组培苗的生物个体大小影响东方杉的生根率 ,高约 4 一 6 。 m
的苗在同样的培养周期内比高约 2 一 3 c m 的小苗生根率提高了 25 % 。 琼脂为基质的培养基形成的根系
白而嫩 ,培养基质用透气性更好的沙可明显提高生根率 , 115 d 生根率可达 75 % , 而且形成的根系粗壮 ,
易于组培苗的移栽 。
衰 ` 加盯培养` 的浓度 、培养介质和苗大小对组培苗生很的影晌
介 .bl ` E日“ 灿 or OC . 比 . lt , d。山 ot M习 J . 目 Ium . 。目勿悦 . 加妞砚湘 胡 d P灿 d e t 目. on 彻比呀 01 da . e心 ul 加曰目 砷. 山自
培养荃 M诫 u m 培养介质
C
u
l t
u er 词抽切口 ce
苗类型 .
Plan il e t . 1肠
接种株数
N u m be r of P l朋 d .et
生根率 l%
Ro 6 n g n lt e
1口 M HJ + lG u t . . i n e 0 . 5 9几 +
助 it v at de 。公加 n s 以L + Su e~ 1%
114 M HJ
+ Gl
u t目 m j n e 0
.
5 9几 +
A o it v at de e肚 ob n 5 9几 + Su e
~
l%
M HJ
+ lG u t到 m i n e 0
.
5 9几 +
A e it v a tde e ar 场 n 5 9几 + su e~ l%
l忍 M川 + lG u t创 m i n e 0 . 5 g l L + S u e~ l%
1瓜 M HJ + Gl u t到 m l n e 2 g/ L +
A
e it v at 记 e川比 n s gjL + su e~ 1%
1泛 M HJ + Glu .t 口 i n e 0
.
5 g lL
+
A e d v at de e目阮 n s 叭 + Su e~ l%
小苗
Sm al Pl an d e妞
小苗
S
。回】paln Ue et
小苗
S
n l
a]】p lan d .et
小苗
S n . 山 lPo Ue .
大苗
I月卿 p lan il e .t
大苗
1月奄吧 p lan d etB
姗妙翎咖枷酗adnS
· 小苗是指把断抽的芽切下来的小苗 ,高 2 一 3 。 m ;大苗是指断切下的小苗在单株生长培养羞上培养 5 一 6 周后的大苗 . 高 4 , 6 。 m 。
Sm目】 P俪 d e .t , 。 ht e n e wl y 花 , n e art de 山的 . 2 · 3 e m hi hg e u t加 m .et , ; U咚 e Paln Uset wer o n .e 4 一 6 e m hi沙 w址 e h had be n e日 tU民 d for
5
一
6 w e k一 o n 脚 hwt 二诫 u m .
2
.
4 炼苗和移栽
生根的组培苗移栽到土壤前摇要进行 4 一 6周的炼苗 , 尤其是以琼脂为基质的培养基中生根的苗 ,需
要移栽到沙床上在合适的温度和湿度条件下炼苗 (图版 6 ) ,炼苗成活率可达 87 % ,待新的根系形成后移
2 期 楼文阜 ,等 : 东方杉的组织培养繁殖技术研究
栽到营养钵中。 炼苗期间保持沙床湿润透气 , 太湿易引起苗基部腐烂或透气性差从而影响新根生长 。 炼
苗初期保持幼苗叶片湿润不失水 ,苗床温度控制在 20 一 30 ℃为宜 ,用遮阳网遮阴避免阳光直射到苗上 。
高温天气 ,用遮阳网遮阴和喷雾等方法降温 ,最高温不超过 35 ℃ ,冬季苗床内极端最低温不低于 12 ℃ 。
新根形成后的小苗可移栽到营养钵中 (图版 7 ) , 移栽基质使用混合配制的基质 (大田园土 : 河沙 : 泥炭
土 : 珍珠岩 二 2 : 1 : 2 : 1 ) ,移栽前基质用杀虫剂 、杀菌剂处理 。 最佳移栽时间为新根形成并长出新的嫩
叶后 ,移栽前控制沙床的湿度使东方杉组培苗的根系逐渐老化 , 须根发达 ,根毛发育健全 ,有利于提高移
栽成活率 ,本试验的移栽成活率达 90 % 。 营养钵小苗护理生长 1 一 2 个月后即可移栽大田 (图版 8 , 9 ) 。
3 讨 论
在东方杉的组织培养繁殖过程中 , 除基本培养基的离子成分 、激素和各种添加物对其生长起 I 要作
用外 ,繁殖培养微环境控制也很重要 ,如对光照强度 、温度 、湿度 、培养容器的透气性 、 培养容器内气体如
CO
Z浓度等控制 。 本研究发现东方杉对光照强度比较敏感 , 提高光照强度可以有效地促进组培苗的生
长 ,但对芽的诱导没有明显作用 。 研究结果表明 ,培养容器的透气性影响东方杉的生长发育 ,提高容器的
透气性很大程度上提高了东方杉的生长速度 , 其代谢产物如乙烯等气体的影响还有待进一步研究分
析【” 〕 。 目前国内外对组织培养微环境中的各种培养因子的研究已更加深入与细化 ,这些研究成果对植
物的组织培养工厂化生产提供了可靠的参考依据〔` , · “ 〕。 如 目前无糖培养技术或光 自养萦殖技术在植物
的无性繁殖上的应用已是越来越广【” J。 对培养微环境里的各种因子的更加细化和 t 化研究将有助于东
方杉以及其他针叶树种的组织培养规模化繁殖育苗 。
生根培养难是针叶树组织培养中常见的难题 【“ 〕 。 东方杉生根困难的原因除了其本身的基因型外 ,
还有树龄过大受到年龄阶段制约引起生根困难也是因素之一 。 针叶树母树枝条的年龄效应很明显 ,幼龄
树枝条一般扦插生根率较高 ,但是 4 一 5 年以上树龄的枝条生根率明显下降 , 生根性状退化 [” ·” , 。 目前已
有报道东方杉在幼龄树上采集的枝条进行嫩枝扦插生根率在 80 % 以上 [” ·洲 ,说明降低母树的年龄对东
方杉的生根起到很重要的作用 。 通过组织培养获得的东方杉组培苗在一定程度上幼化了原来的树龄 ,明
显提高了其生长势 ,其复壮效果要明显优于扦插繁殖 。 通过组织培养获得的东方杉再生植株与扦擂苗的
生长对比调查 , 发现组培苗从生长势和树形上都要优于扦插苗。 另外对于目前分布在上海各种立地条件
下的东方杉林中选出的优株 ,采用组织培养的技术进行繁殖是 目前繁殖速度最快 、复壮效果最好的方法 。
东方杉的组织培养繁殖技术研究成功为其商业化工厂化生产育苗莫定了技术基础 ,进一步完善该技术及
降低生产成本将可很快应用于大规模生产育苗 。
近几年国内外对针叶树种无性繁殖的研究取得了很大的进展 , 随着对生根生理基础分析 、生根分子
机理 、植物激素的作用机理等的深人研究〔’ ` 一 243 ,针叶树的大规模商业化苗木生产将具有很大的发展潜
力 。 现在国内外在体细胞胚胎发生规模化繁殖针叶树苗上有了很大的突破 , 落叶松 、火炬松等已在实脸
室里能够进行生物反应器规模化繁殖体细胞胚 〔芬 26j 。 通过研究体细胞胚胎发生建立东方衫利用体胚增
殖来快速繁殖的技术体系将是开辟东方杉无性快繁的又一新技术途径 。
参 考 文 献
【1 〕 (中国树木志 )编委会 . 中国主要树种造林技术 (上册 )【M〕. 北京 :农业出版杜 , 1978 : 52 .
【2 〕 陈云鹅 .潘士华 ,张建军 , 等 . 利用 RA PD 检测技术推测杂交落羽杉群落间的亲缘关系【J〕. 复且学报 ( 自然科学版 ) , 2加 2 .引 ( 6 ) :
64 1
一
64 5
.
【3 〕 张建军 ,洛士华 ,沈烈英 ,等 . 东方杉的树种特征与生态价值〔J〕. 上海农业学报 , 20 3 , 1 9 ( 3 ) : 56 ~ 59 .
【4 〕 沈烈英 .张建军 ,洛士华 ,等 . 东方衫— 我国自主育成的园林新树种【lJ . 园林 . 20 3 ( 5 ) : 36 一 37 .【5 〕 Zhan g Ji咧 u n , Zh u Ji阴 h u a . T ax 记 io m e ir a ( TXa od i a e ea e ) , A n In t e卿 n e ir e Hyb ir d B e tw e e n 爪双浏 i“ m an d Co p必
~
F二m S h an gh ` , P-eO
pl e
’ 一 R e p u b li e of C h in a 【J〕. S ID A . 2加 3 , 2 0 ( 3 ) : 99 一 l加 6 .
〔6 〕 周 音 , 张智奇 ,刘金鹏 ,等. 东方杉不定芽的高频率分化研究【J〕. 上海农业学报 , 2以抖 , 20( 3 ) : 11 一 14 .
〔7 〕店 魏 ,欧阳落 ,郭仲碟 . 火炬松胚性愈伤组织诱导和植株再生的研究〔J〕. 林业科学 , 19 8 , 34 ( 3 ) : 1 15 一 1 19 .
[ 8 ] uC atP P K
, 加~ D J
.
Sh o t m u lit p li e at i o n 加m m at u er 比 e . o f D o u ig as · if r an d 一u脚 p i n e 【J〕. p l an 一 C e ll Re p二 19 8 5 , 4 : 17 7 一 179 .
[ 9 〕 V . W inkl e S C , uP l m an G . 5 . hT e , l e o f a e t iv a t e d c a d怕 n i n t i o u e e u lt u 、 m de i u m [ J〕. E n e grE ia . 19 5 , 6 ( 6 ) : l 一 3 .
[一0 1枷nj 加 o ig at . Ham ak o s~
o t o , e t 日 . hT e e fe e切 of 砂u tanz in e o n ht e 二 n t e n an e e of e m b叮o g e n ie e u lt u 二 s o f c 。 , 句侧必 J咖目蕊m [ J ] . 加
V i加 C山 . eD v . B IOI . lP an t , 2叨 l , 37 : 2 6 8 一 2 7 3 .
上 海 农 业 学 报 3 2卷
【川 陈 伟 .酚类化合物对木本植物组织培养根形态建成的影响【 J」 .福建林业科技 , 19 5 ( 1 ) : 51 一 53 .
〔12] 江 玲 ,管晓春 . 植物激素与不定根的形成【J] . 生物学通报 , 2以X) , 3 5 ( 1 1 ) : 17 一 19 .
【13」吴毅明 . 植物组织培养的环境调节研究进展【J] . 中国生态农业学报 , 2仪阳 , 8 ( 1 ) : 73 一 75 .
【14 」徐志刚 . 组培微环境与规模化育苗设施环境调控的研究【D 〕. 南京 : 南京农业大学 , 20 2 .
【巧」牟宁宁 ,高亦坷 . 植物无糖组培技术研究进展【J」. 林业科技开发 , 2X() 7 ( 1 ) : 10 一 12 .
【16 〕 王 虹 ,张金凤 , 蓝建生 . 针叶树组织培养繁殖技术研究进展【J] . 河北林业科技 , 2侧抖 ( 2 ) : 14 一 18 .
【17 〕 雷泽勇 . 针叶树无性萦殖研究进展【J〕. 防护林科技 , 20 1 ( 1 ) : 5 一 57 .
〔18 」季孔庶 . 王章荣 , 陈天华 , 等. 马尾松扦插的年龄效应及继代扦插复壮效果【J〕. 浙江林学院学报 , 19 9 , 16 ( 4) : 34 1 一 M S.
【19 」阂士元 . 东方杉造林技术【J] . 林业实用技术 , 2仪阵 ( 12 ) : 1 1 一 12 .
【20 」孙 强 , 尹中明 , 吴 文 , 等 . 东方杉夏季嫩枝扦插育苗【J〕. 中国花卉园艺 , 2侧拓 , ( 14 ) : 38 一 3.9
【川 肖薄安 , 熊 红 . 不定根发生机理的研究进展〔J] . 生物技术通报 , 20 2 ( 3 ) : 31 一 34 .
【2 2】B面 n FO记 e , H e le n a 肠 er n oz . hT e n u itr 一i o n al e o n如 l of 。 一d e v e lo pme n t【J」. p lan t an d 50 11. 20 1 , 2 32 : 5 1 一 6 5 .
【2 3」G i n a H MhO am m e d , W illiam E . v id a v er . Rot p耐 u e t io n an d p lan il e t d e v e lo p m e n t in 一i s s u e 一 e u l t u耐 e on ife 、 [ J ] . lP an t C e l , T isu e an d o -r
g朋 Cu l tu er , 19 88 , 14 : 13 7 一 160 .
【2 4 ] T im R Mark s , S al l y E S im p so n . In t e acr t io n of e x p lan t 一, an d s n d o le一 b u t州 e a e id d u d n g ort sn g in v i tor in a二罗 of d iif e u l t an d e as y一 to -
ort
w耐 y p aln 扭 [ J ] . P I即 t e e ll , it , u e an d o电 a n e己一u er , 2创x 〕, 6 2 : 6 5 一 7 4 .
【25 〕 贾彩风 ,李 悦 ,粗 超 . 木本植物体细胞胚胎发生技术〔J〕. 中国生物工程杂志 , 2侧抖 , 24 ( 3 ) : 26 一 29 .
【26 〕 张守攻 ,邱宏伟 ,韩素英 ,等 . 落叶松树种的体细胞胚胎发生与规模化技术体系〔J〕. 中国生物工程杂志 , 2以只 , 24 ( 6) : 28 一 3 .
R e s e a r e h o n P re P a g a t i o n of
x 几扰o dot m e血 P e ihz o gn i i
(朴跳。成“ m m u c or n 侧恤m x Q yP ot m e州油of 血 n e i ) by it s u e e ul tu r e
oL U W
e n 一 fu ’
,
C HEN Q
u a n ’ , z H A NG Ch a o一u n ’ , D O NG Ju 一w e n ’ , TA NG Yi n
z H ^ Ne J u n ’
,
s o N e x u e
一
m e n g ,
,
w A N e L i n g一ia n , , J e an Y o n g w a n H o n g ,
hs
a n g h a i uC
a够hao P l a nt F’a S t一`哪 ign eT e hon le群 oC . , 几 d . , hs a咭h a i 20 180 1 , hc ian ;
, s h a ghn
a i snI
t众以。 of 肋nt 外” 动之哪粼 。耐腼甸毋尸 ,队 a hgn a i Z仪刃 32 , 以 ian ;
,
aN anr 鳍 ceT h on l哪理 vn i , sr iyt
,
51拜g aP o er 6 39795 )
Abst acr t
: Th e s h o ts n e w ly s p or u te d w i t h i n o n e y e a r for m ht
e b a s a l part
o f m a t u er t er e o f x aT
x o而~脚七人。叮11 (几劣。 d i u m m uc or an t u m x C呷忿o me iar fo rt u en i ) w e er u s e d a s e x p la n t s , an d t h e te e h n o l o盯 of p or p a ·
, ti o n b y ti s s u e e u l tu er w a s s t u di e d
.
hT
e er s u l t s w e er a s fo llow
s : th e o p ti m al d i s ifen
e t i o n of e x p la n t s w as t
o d i s
-
i fen
e t t h e m w i th 7 5% e t h a n o l fo r 30 一 6() s
, a n d th e n w i t h 0
.
2% m e cr u ir e e h lo ir d e fo r 10 一 15 m in ; th e s t e m
e u t ti n g s w e er u s e d to i n d u e e er g e n e ar te d s ho t s a n d a d v e n ti t i o u s s ho t s ; ht e a p p or p ir a te m e d i u m o f sho t m u l t i
-
p l i e a t i o n w a s M川 + 0 . 5 m g /L B A + 0 . 05 m g /L NA A + 2 g lL g l u tam i n e + 5 9 /L a e t iv a te d e ar bo n + 2%
s u e or s e
, a n d th e 罗mr i n a t i o n 伴代 e n ta g e Of s t e m ’ 5 ax i l l叼 b u d s e o u ld er a e h 90% ; ht e e lo n邵 t i o n m e d i u m w as
M川 + 2 9 /L g l u t a m i n e + 5 9 /L a e t i v a t e d c a r bo n + 2% s u e or s e , a n d t h e s ho t h e i gh t 脚w t h w a s a v e邺 e ly
4
.
2 e m in 35 d a y s ; th e or o t i n g m e d iu m fo r t e s t
一
t u be p l
a n d e t s w as l尼 M川 + 2 9 / L砂u t a m i n e + 5 9 /L a e t iv a -
te d e a r bo
n + l % s u e or s e
, a n d t h e h i gh e s t or o t i n g fer q
u e n e y w as 7 5% ; as e u l tu er s u b s at n e e
, s a n d w as be t t
e r
ht a n a gar ; t h e or
t e d p l a n t l e t s w e er if sr il y t ar n s fe er d t
o s an d be d i n 犷 e n h o u se fo r 4 一 6 w e e k s o f h耐 e n in g
Of
,
i n w h i e h t h e s u vr iv a l ar t e w as 8 7 %
, a n d th e n i n t o n u tir t io n p o t w iht a s u vr i v al ar te o f 9() % ; aft
e r o n e o r
two m
o n t h s t h e er g e n e ar t e d p l a n t le t s w e er t ar n s p la n t e d i n t o if e ld
.
K ey w o r ds
: 几谈。 d i u m m
ucor an
tu m x C呷 ot enz 血 fo rt u en i ; T i s s u e e u l tu er ; S ho t m u l ti Pl i e a t i o n ; Ro ti n g
e u l tu er ; H耐e n i n g o f ; Por p昭 a t i o n