In order to understand the diversity and community structure of endophytic bacteria in Tricholoma matsutake, 14 Tricholoma matsutake samples were collected from 7 main production counties of Xiaojin, Yajiang, Muli, Yanyuan, Yanbian, Huidong and Mianning. The entophytic bacterial community structure and diversity were investigated by PCR denaturing gradient gel electrophoresis (PCR-DGGE). The results showed that the diversity and community structure of endophytic bacteria in T. matsutake varied significantly, while those from the environments alike had high similarity. In addition, each T. matsutake sample contained more than 15 species of endophytes, with that from Yanyuan having the highest endophytes diversity index and abundance, while those from Xiaojin were the lowest. Phylogenetic tree showed that endophytic bacterial species in T. matsutake were abundant. Dominant bacterial population in T. matsutake collected from different places varied, and Pseudomonas, Ewingella and Bacillus were distributed in all samples and retained a certain advantage. Alcaligenes and Sphingobacterium distributed in most samples, while Duganella and Lysinibacillus only in certain ones. This study demonstrated that the endophytic bacteria in T. matsutake were abundant and diversified, which could be in favor of searching the dominant bacteria promoting the growth of T. matsutake.
全 文 :四川松茸内生细菌群落结构与多样性*
李摇 强1 摇 李小林2 摇 黄文丽3 摇 熊摇 川1 摇 杨摇 阳1 摇 杨志荣1 摇 郑林用1,4**
( 1四川大学生命科学学院, 成都 610065; 2四川省农业科学院土壤肥料研究所, 成都 610066; 3四川省农业科学院生物技术核
技术研究所, 成都 610066; 4四川省农业科学院, 成都 610066)
摘摇 要摇 为了解松茸的内生细菌群落结构与多样性,以采自四川 7 个松茸主产区的 14 个松
茸样品为材料,通过变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析其内生细菌的群落结构与多样性差异.结
果表明: 各个产区松茸样品的内生细菌群落结构与多样性存在明显差异. 但采自相近地点、
相似环境的松茸样品内生细菌群落结构相似性较高;样品的丰度范围为 15 ~ 25,多样性指数
依次为盐源>冕宁>会东>木里>雅江>盐边>小金;条带回收测序构建的系统发育树显示,松茸
内生细菌种群丰富,各个产区松茸优势种群存在一定的差异,但假单胞菌属、爱文菌属、芽孢
杆菌属在所有样品中均有分布,而且都占据一定的优势地位.产碱杆菌属与鞘氨醇杆菌属在
大部分样品中为优势种群;而杜擀氏菌属、赖氨酸芽孢杆菌属在特定样品中为优势种群.表明
松茸内生细菌具有丰富的多样性,研究结果可为筛选促进松茸生长的内生菌提供依据.
关键词摇 松茸摇 内生细菌摇 群落结构摇 PCR鄄DGGE摇 促生细菌
文章编号摇 1001-9332(2014)11-3316-07摇 中图分类号摇 Q938. 1摇 文献标识码摇 A
Community structure and diversity of entophytic bacteria in Tricholoma matsutake in
Sichuan Province, Southwest China. LI Qiang1, LI Xiao鄄lin2, HUANG Wen鄄li3, XIONG
Chuan1, YANG Yang1, YANG Zhi鄄rong1, ZHENG Lin鄄yong1,4 ( 1College of Life Sciences, Sichuan
University, Chengdu 610065, China; 2Soil and Fertilizer Research Institute, Sichuan Academy of
Agricultural Sciences, Chengdu 610066, China; 3 Institute of Biological & Nuclear Technology, Si鄄
chuan Academy of Agricultural Sciences, Chengdu 610066, China; 4Sichuan Academy of Agricultur鄄
al Sciences, Chengdu 610066, China) . 鄄Chin. J. Appl. Ecol. , 2014, 25(11): 3316-3322.
Abstract: In order to understand the diversity and community structure of endophytic bacteria in
Tricholoma matsutake, 14 Tricholoma matsutake samples were collected from 7 main production
counties of Xiaojin, Yajiang, Muli, Yanyuan, Yanbian, Huidong and Mianning. The entophytic
bacterial community structure and diversity were investigated by PCR denaturing gradient gel elec鄄
trophoresis (PCR鄄DGGE). The results showed that the diversity and community structure of endo鄄
phytic bacteria in T. matsutake varied significantly, while those from the environments alike had
high similarity. In addition, each T. matsutake sample contained more than 15 species of endo鄄
phytes, with that from Yanyuan having the highest endophytes diversity index and abundance, while
those from Xiaojin were the lowest. Phylogenetic tree showed that endophytic bacterial species in T.
matsutake were abundant. Dominant bacterial population in T. matsutake collected from different
places varied, and Pseudomonas, Ewingella and Bacillus were distributed in all samples and retained
a certain advantage. Alcaligenes and Sphingobacterium distributed in most samples, while Duganella
and Lysinibacillus only in certain ones. This study demonstrated that the endophytic bacteria in T.
matsutake were abundant and diversified, which could be in favor of searching the dominant bacteria
promoting the growth of T. matsutake.
Key words: Tricholoma matsutake; entophytic bacteria; community structure; PCR鄄DGGE;
growth鄄promoting bacteria.
*四川省财政创新能力提升工程青年项目(2014CXSF鄄030)、四川省科技支撑计划项目(2013NZ0029,2014FZ0004,2012NZ0003)和以精深加工
为核心的食药用菌产业关键技术集成与产业化项目(成财教[2013]265 号)资助.
**通讯作者. E鄄mail: zly6559@ 126. com
2014鄄04鄄11 收稿,2014鄄08鄄25 接受.
应 用 生 态 学 报摇 2014 年 11 月摇 第 25 卷摇 第 11 期摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇
Chinese Journal of Applied Ecology, Nov. 2014, 25(11): 3316-3322
摇 摇 松茸(Tricholoma matsutake),学名松口蘑,隶属
担子菌亚门(Basidiomycotina)口蘑科(Tricholomata鄄
ceae),是松、栎等树木外生的菌根真菌,世界上名贵
的天然食药用菌. 松茸对生长环境要求极为苛
刻[1],生长过程也极为缓慢,从孢子和松树的根系
形成共生关系到子实体的发生一般需要 5 ~ 6 年.而
且对共生树种也有一定的要求,共生树种年龄必须
在 20 年以上,能为松茸菌丝的生长与子实体的发生
提供足够营养支持,才能长出健康的子实体[2] . 目
前,全世界尚无人工栽培的成功先例.
在松茸周围环境中分布着大量的微生物[3],它
们可能会影响松茸菌丝的生长与菌根的合成,并且
可能在松茸菌丝与共生植物物质交换与生长代谢过
程中发挥着某些作用[4],有些病原微生物还可能给
松茸带来病虫害,影响松茸的品质与产量. 因此,了
解松茸根际及其内生细菌的群落结构,分析其内生
菌的优势种群,将为促进松茸生长及防治松茸病虫
害微生物的筛选打下基础,对松茸的人工驯化栽培
具有重要意义[5] . 目前,已有学者通过传统培养[6]
与分子生物学方法[7]研究了松茸根际微生物群落
结构,发现了松茸根际微生物群落分布规律.但尚未
有学者对松茸内生菌群做过研究.
自然界大多数微生物由于难于模拟其生长繁殖
的真实条件而不能获得纯培养,因此, 为了更好地
了解微生物的群落结构及其在自然生态系统中的作
用,需要其他的补充技术. 自从 1993 年变性梯度
凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,
DGGE)被引入微生物生态学以来,该技术已被广泛
地用作分子工具比较微生物群落的多样性和监视种
群动态[8-12] .这一技术能够提供群落中优势种类信
息并同时分析多个样品.具有检测极限低、可重复和
容易操作等特点, 适合于调查种群的时空变化,并
且可通过对切下的带进行序列分析或与特异性探针
杂交分析鉴定群落成员[13-15] .
本文以采自四川 7 个松茸主产区的野生松茸子
实体为材料,通过 PCR鄄DGGE 方法研究松茸的内生
细菌群落结构,旨在为松茸的人工驯化栽培提供科
学参考.
1摇 材料与方法
1郾 1摇 松茸样品采集
松茸样品于 2013 年 7 月 30 日至 8 月 15 日采
集于四川省阿坝藏族羌族自治州小金县、甘孜藏族
自治州雅江县、凉山彝族自治州木里藏族自治县、盐
源县、会东县、冕宁县以及攀枝花市盐边县. 在每个
县的松茸产区依据海拔差异选取 2 个采样点,每个
样点采集 20 m2内的 3 株松茸子实体作为一个样品,
样品装于无菌封口袋中,并保存于冰盒,带回实验室
做后续研究. 后文分别采用 XJ、YJ、ML、YY、HD、
MN、YB代表各县所采松茸菌株编码.采样数据记录
见表 1.
1郾 2摇 主要试剂
DNA 标志物 (Marker)、 PCR 胶回收试剂盒、
pUCm鄄T 载体试剂盒、大肠杆菌 DH5琢 感受态细胞
及 2伊Taq PCR混合液购自 TAKARA公司;D3390鄄02
E. Z . N . A . TMFungal DNAKit ( 200 )真菌DNA提
表 1摇 松茸样品采集信息
Table 1摇 Information of Tricholoma matsutake samples collected
样品编号
Sample
采集地
Site
经度
Longitude
纬度摇
Latitude摇
海拔
Altitude (m)
植被类型
Vegetation
YY1 盐源 Yanyuan 101毅43忆20义 27毅32忆13义 3151 高山栎林 Alpine oak
YY2 盐源 Yanyuan 101毅43忆13义 27毅32忆18义 3132 高山栎林 Alpine oak
YB1 盐边 Yanbian 101毅12忆37义 27毅08忆18义 3207 高山栎林 Alpine oak
YB2 盐边 Yanbian 101毅12忆33义 27毅08忆17义 3191 高山栎林 Alpine oak
YJ1 雅江 Yajiang 101毅11忆37义 30毅04忆56义 3847 高山栎林 Alpine oak
YJ2 雅江 Yajiang 101毅11忆36义 30毅04忆56义 3843 高山栎林 Alpine oak
XJ1 小金 Xiaojin 102毅35忆08义 31毅12忆44义 3214 高山栎林 Alpine oak
XJ2 小金 Xiaojin 102毅35忆07义 31毅12忆44义 3235 高山栎林 Alpine oak
ML1 木里 Muli 101毅07忆38义 28毅01忆42义 3337 松栎混交林 Pine and oak
ML2 木里 Muli 101毅07忆28义 28毅00忆37义 3584 松栎混交林 Pine and oak
MN1 冕宁 Mianning 102毅12忆23义 28毅21忆23义 3100 松栎混交林 Pine and oak
MN2 冕宁 Mianning 102毅12忆23义 28毅21忆23义 3157 松栎混交林 Pine and oak
HD1 会东 Huidong 102毅32忆44义 26毅36忆49义 3055 松栎混交林 Pine and oak
HD2 会东 Huidong 102毅32忆48义 26毅36忆49义 3115 松栎混交林 Pine and oak
713311 期摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 李摇 强等: 四川松茸内生细菌群落结构与多样性摇 摇 摇 摇 摇 摇
取试剂盒购于 OMEGA公司;PCR引物 T1、T2 和 T1 鄄
GC由上海生工生物技术有限公司合成.
1郾 3摇 松茸样品表面消毒
将采集的松茸子实体用蒸馏水清洗干净,放置
于超净台晾干.然后将晾干的松茸子实体用 75%的
酒精浸泡 1 ~ 3 min,再用 3%次氯酸钠浸泡 2 min,
75%乙醇浸泡 3 min.最后用无菌水冲洗 3 ~ 4 次,然
后取最后一次清洗的无菌水 100 滋L 涂布到 LB 平
板上,30 益倒置培养 72 h,检测表面灭菌效果.
1郾 4摇 松茸组织总 DNA的提取与纯化
用灭菌的解剖刀剖开松茸菌柄,用灭菌的镊子
取松茸菌柄内部中心部位组织 0. 5 g,置于灭菌的研
钵中,加入一定量的液氮,充分研磨. 然后按照
D3390鄄02 E. Z. N. A. TM 真菌 DNA 提取试剂盒
(200)说明书按步骤操作,提取总 DNA. 提取的总
DNA用 1%琼脂糖凝胶电泳检测,并在凝胶成像系
统中观察、拍照,然后置于-20 益冰箱中保存备用.
1郾 5摇 细菌 16S rDNA V3区 PCR扩增
将每个样点的 3 株松茸子实体总 DNA混合,进
行 16S rDNA V3 区扩增,扩增采用细菌通用引物 T1 鄄
GC (5忆鄄GCCGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCG鄄
GGGGCATTACCGCGGCTGCTGG 鄄3忆)和 T2(5忆鄄ACG鄄
GGGGGCCTACGGGAGGCAGC鄄3忆),PCR 采用 50 滋L
反应体系,其中 2伊Taq PCR 混合液 25 滋L,10 滋mol
·L-1的引物各 1 滋L,DNA模板 1 滋L,超纯水(ddH2
O)补齐至 50 滋L. PCR 反应程序为:95 益变性 5
min,94 益变性 1 min,54 益退火 1 min,72 益延伸 1
min,35 个循环,然后 72 益延伸 10 min. PCR产物用
1%的琼脂糖凝胶电泳检测,然后用凝胶成像系统观
察、拍照. 并用 PCR 胶回收试剂盒回收纯化目的条
带.
1郾 6摇 DGGE电泳及图谱分析
DGGE电泳采用美国 Bio鄄Rad 变性梯度凝胶电
泳仪,条件为:8%聚丙烯酰胺凝胶,电泳缓冲液为
1伊TAE,凝胶变性梯度为40% ~70% ,每孔上样量为
20 滋L与 5 滋L 10伊加样缓冲液. 电泳温度 60 益,电
压 150 V,电泳时间 6 h.电泳完成,凝胶银染后通过
凝胶成像系统观察、拍照.
凝胶图谱通过 QUANTITY ONE软件处理,并进
行聚类,分析样品的多样性指数(H),丰度(S)以及
均匀度(EH).
H =- 移P i ln P i
EH =H / Hmax =H / lnS
式中:S代表每泳道的条带数量;P i为泳道中第 i 条
带灰度(height of the peak)占该泳道总灰度的比例.
1郾 7摇 DGGE条带克隆测序及系统发育分析
将 DGGE凝胶的优势条带切下,加一定量的无
菌水,用枪头捣碎凝胶,4 益放置过夜. 以上清液为
模板,以 T1(不带 GC 夹子)和 T2 为引物,程序参考
上文,对回收的条带进行 PCR 扩增. 扩增产物用胶
回收试剂盒回收纯化,然后连接到 pUCm鄄T载体,转
化到 DH5琢 大肠杆菌感受态细胞,涂布到含 X鄄gal
与 IPTG的氨苄青霉素 LB平板上,37 益倒置培养过
夜,筛选出具有氨苄青霉素抗性的白色菌落转化子,
利用载体通用引物 M13鄄47 (5忆鄄CGCCAGGGTTTTC鄄
CCAGTCACGAC鄄3忆) 和 M13鄄48 ( 5忆鄄AGCGGATAA鄄
CAATTTCACACAGGA鄄3忆)进行菌落 PCR 检测,筛选
出阳性菌落后,进行摇瓶培养,然后送 Invitrogen
测序.
序列通过 BLAST比对,选取 GenBank中序列同
源性最高的模式菌株作为参照,采用邻接法利用
MEGA 5. 2 软件构建系统发育树. 所有序列提交
GenBank(序列号 KJ725091—KJ725112).
1郾 8摇 数据处理
凝胶图谱通过 QUANTITY ONE 软件进行数据
化处理,并进行 UPGMA聚类,分析样品的多样性指
数(H)、丰度(S)以及均匀度(EH).
2摇 结果与分析
2郾 1摇 松茸组织总 DNA 的提取与 16S rDNA V3 区
扩增
取表面消毒最后一次淋洗用的无菌水 100 滋L
涂布于 LB平板上,30 益倒置培养 72 h 后无菌落长
出,表明表面消毒成功.采用细菌 16S rDNA V3 区通
用引物扩增产物,在琼脂糖凝胶上呈单一条带(图
1),无明显非特异扩增现象,条带大小为 190 bp 左
右 . 将此次扩增所用的引物序列结合GenBank中松
图 1摇 松茸内生细菌 16S rDNA V3 区扩增图谱
Fig. 1 摇 PCR amplification pattern of entophytic bacterial 16S
rDNA V3 fragments.
8133 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 应摇 用摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 25 卷
图 2摇 不同松茸样品内生细菌 DGGE图谱
Fig. 2摇 DGGE map of entophytic bacteria in different Tricholo鄄
ma matsutake samples.
茸的全序列通过 Primer premier分析,发现细菌通用
引物无法扩增出松茸的基因片段,证明此次扩增产
物为松茸内生细菌的遗传序列.
2郾 2摇 松茸内生细菌 DGGE图谱分析
通过 DGGE 图谱(图 2)发现,每个样品至少分
离出 15 个条带,理论上每个松茸样品至少含 15 种
内生菌,但由于 DGGE 方法的局限性,实际的微生
物种类数要略高于或略低于条带数量;各样品条带
迁移率及条带强度有所不同,在一定程度上表明松
茸内生菌多样性丰富. 根据条带数量及迁移率做出
的样品相似度矩阵(表 2)及聚类图(图 3)显示:条
带相似度最高的为 YJ1 与 YJ2 样品,相似度为 89% ;
其次为 YB1 与 YB2 样品,相似度达到 85% ;而 XJ1
与 ML1 样品条带相似度最低,仅为 29% . 通过聚类
图及相似度矩阵可以看出,采自相近地点、相似环境
的松茸样品内生菌DGGE图谱相似度较高,内生菌
图 3摇 不同松茸样品内生细菌群落 DGGE图谱聚类分析图
Fig. 3 摇 UPGMA dendrogram of DGGE of entophytic bacterial
community in different Tricholoma matsutake samples.
群落结构相似,而环境条件差异较大的样品内生菌
群落结构则差异明显. 表明松茸内生菌群落结构与
多样性和环境条件有一定的关系,环境条件会对松
茸内生菌的种类与分布产生影响.
2郾 3摇 松茸内生细菌 DGGE 条带多样性指数、丰度、
均匀度分析
条带的多样性指数、丰度、均匀度都能用来描述
及比较微生物的群落结构与多样性. 通过对条带进
行数据化处理并计算后发现,各样品的多样性指数、
丰度、均匀度都存在一定的差异. 其中,采自盐源的
样品 YY2 内生菌多样性指数与丰度最高,分别达到
了 3. 2 与 25;而采自小金的样品 XJ1 内生菌多样性
指数与丰度最低,分别为 2. 69 与 15.均匀度最高的
样品为采自雅江的 YJ2,为 1. 03;小金的 XJ2 样品均
匀度最低,仅为 0. 99. 通过比较样品的多样性指数
与丰度可以发现,采自相近地点的样品多样性指数
表 2摇 不同松茸样品内生细菌群落相似性比较
Table 2摇 Similarity coefficients of entophytic bacterial community in different Tricholoma matsutake samples (%)
样品
Sample
XJ1 XJ2 YJ1 YJ2 ML1 ML2 YY1 YY2 YB1 YB2 HD1 HD2 MN1
XJ2 37. 9
YJ1 43. 7 44. 3
YJ2 40. 1 46. 0 89. 0
ML1 29. 1 51. 8 56. 9 54. 3
ML2 36. 7 58. 9 52. 4 54. 7 73. 2
YY1 54. 8 54. 0 63. 8 59. 5 59. 2 67. 8
YY2 54. 2 49. 9 56. 5 55. 2 46. 3 57. 0 67. 8
YB1 64. 6 44. 4 70. 8 69. 8 48. 2 50. 0 58. 5 56. 7
YB2 69. 8 49. 8 58. 0 57. 3 41. 7 46. 9 55. 0 57. 7 85. 2
HD1 56. 7 51. 1 48. 7 46. 9 43. 3 46. 3 56. 2 47. 7 63. 0 67. 6
HD2 46. 8 42. 4 39. 0 37. 3 41. 0 40. 0 52. 7 44. 4 47. 8 45. 6 64. 3
MN1 47. 8 46. 7 44. 0 46. 5 41. 8 45. 4 63. 1 47. 9 51. 3 47. 8 42. 7 64. 1
MN2 39. 1 44. 0 42. 4 41. 5 47. 4 57. 4 62. 0 51. 0 42. 1 38. 6 33. 6 49. 4 65. 8
913311 期摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 李摇 强等: 四川松茸内生细菌群落结构与多样性摇 摇 摇 摇 摇 摇
及丰度差异相对较小,这与聚类图所反映的结果较
为一致.综合来看,样品内生细菌的多样性与丰度依
次为:盐源>冕宁>会东>木里>雅江>盐边>小金.
2郾 4摇 松茸内生细菌克隆条带分析
将 DGGE图谱中 22 个优势条带进行回收、克
隆、测序,然后与 GenBank 数据库中的序列进行比
对,发现所有样品序列与 GenBank 中的序列相似性
都在 96%以上. 其中,条带 1 ~ 10、15、16、17、19、21
为大部分样品共有条带,11、20 为木里样品特有条
带,12、13、14、18 为盐源样品特有条带,显示盐源与
木里样品内生细菌特有优势种群较多. 通过构建系
统发育树(图 4)发现,所有序列分为 8 个簇,显示出
松茸内生细菌种群较为丰富.在所有克隆条带中,有
6 个条带聚集在簇玉,属于假单胞菌属 ( Pseudo鄄
monas),占所有克隆条带的 27% . 有 7 个条带聚集
在簇域,属于爱文菌属(Ewingella),占 32% .有 3 个
条带聚集在簇吁,属于芽孢杆菌属 (Bacillus),占
14% .木里的特有条带 11、20 分别聚集在簇郁与簇
遇,分别属于杜擀氏菌属(Duganella)和赖氨酸芽孢
杆菌属(Lysinibacillus),表明这些不太常见的微生物
可以在松茸内生菌群落中占据一定的优势地位. 盐
源的特有条带 18 号聚集于簇芋,与寡养单胞菌属
(Stenotrophomonas)序列相似性较高. 22 号条带聚集
于簇喻,与产碱杆菌属(Alcaligenes)序列较近,16、17
图 4摇 不同松茸样品内生细菌群落 DGGE优势条带系统进化树
Fig. 4摇 Phylogenetic tree of the dominant DGGE bands of entophytic bacterial community in different Tricholoma matsutake samples.
0233 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 应摇 用摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 25 卷
号条带则与鞘氨醇杆菌属( Sphingobacterium)序列
较近.综上,松茸内生菌群种类丰富,多样性高,且一
些在自然界中不太常见的种类,在松茸内生菌群落
中占据着一定的优势地位.
虽然每个产区的松茸样品内生细菌群落结构有
一定的差异,但假单胞菌属、爱文菌属、芽孢杆菌属
在所有样品中均有分布,而且都占据优势地位.产碱
杆菌属与鞘氨醇杆菌属在大部分样品中都有分布;
而杜擀氏菌属、赖氨酸芽孢杆菌属仅在特定样品中
有分布,并占据一定的优势地位.
3摇 讨摇 摇 论
有些内生菌在寄主生长发育过程中发挥着重要
作用[16-17],可以参与寄主的代谢过程,合成重要的
生物大分子,有促生、抑菌作用[18-19],甚至还能影响
寄主的产量与品质[20-21] .但目前对内生菌的研究主
要集中于植物方面[22-25],对大型真菌的内生菌研究
则鲜有报道.很多珍贵的大型真菌生活史复杂,对环
境要求苛刻.掌握它们的内生菌群落结构,对实现珍
贵野生食用菌驯化栽培意义重大. 松茸是一种外生
菌根菌[26-27],目前尚未实现人工栽培.因此,亟需了
解松茸的内生菌群结构及其与松茸间的相互作用关
系,为实现松茸人工栽培打下基础.
本研究利用 PCR鄄DGGE 技术了解松茸内生细
菌的群落结构,并比较了不同产区野生松茸内生菌
的多样性差异. DGGE 图谱分析发现,采自相近地
点、相似环境的松茸样品,内生菌群落结构相似性较
高,表明环境对松茸内生菌的种群与分布有一定的
影响,这与马同锁等[28]的研究结果一致;通过比较
DGGE 图谱上条带的强度、迁移率及条带数量可以
看出,不同样品内生菌的多样性及丰度存在一定差
异,优势种群有所区别,但综合来看,内生细菌的多
样性依次为:盐源>冕宁>会东>木里>雅江>盐边>
小金.通过建立系统发育树发现,假单胞菌属、爱文
菌属、芽孢杆菌属在所有样品中均有分布,产碱杆菌
属与鞘氨醇杆菌属在大部分样品中是优势种群,而
杜擀氏菌属、赖氨酸芽孢杆菌属等存在于特定样品
中.表明松茸内生细菌具有丰富的多样性,而且其共
有优势种群的部分种属被证明具有一定的促生作
用[29],以后可从这些优势种群入手,探讨其与松茸
之间的相互作用关系,分离促进松茸生长或具有抵
抗松茸病虫害作用的菌剂,改善并提高松茸的品质
与产量,最终实现松茸的人工栽培.
参考文献
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作者简介摇 李摇 强,男,1989 年生,硕士研究生.主要从事资
源微生物学研究. E鄄mail: leeq110@ 126. com
责任编辑摇 肖摇 红
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