全 文 ：状，减轻其临床痛苦，提高其生活质量，延缓疾病发展
的速度，延长患者的生命。
总之，目前广西艾滋病的防治形势相当严峻，各
级疾病控制机构和卫生防疫部门及艾滋病研究者应
当在自治区党委和政府的领导下，做好艾滋病的防治
工作，共同打赢这场攻坚战。同时，我们也应该明白，
艾滋病防治是一项长期的任务，应当做好打持久战的
准备。另外，对于艾滋病的防治不能仅限于一种单一
的方式，应当多管齐下，从多个方面来对其进行防治，
这样才能达到预期的效果。
参 考 文 献
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(收稿日期:2010 － 10 － 13 修回日期:2010 － 11 － 19)
● 调查与研究
通信作者:蒋伟哲(1968 ～) ，男，回族，广西宜州人，教授，硕士研究生导师，研究方向:天然药物、药物化学、新药开发研究。
山乌龟中延胡索乙素的提取和含量测定
巫玲玲 蒋伟哲 黄兴振 施晓霞 吕 聪 许崇摇 邱 卓
(广西医科大学药学院，南宁市 530021)
【摘要】 目的 建立山乌龟中延胡索乙素的含量测定方法，并对其提取分离工艺进行优化。方法 采用
高效液相色谱法测定含量，采用单因素实验法进行工艺优化。结果 以 60%乙醇回流提取 3 次，每次 1 h为最
佳提取工艺;延胡索乙素在(0． 0138 ～ 0． 1650)mg /ml范围内，进样浓度与峰面积呈良好的线性关系，回归方程:
Y =1923． 6X + 2． 7449(r = 0． 9999) ，平均回收率 98． 31%，样品延胡索乙素含量为 1． 81%。结论 该分离纯化
方法简单易行;含量测定方法简单，稳定可靠，可以作为山乌龟中延胡索乙素的测定方法。
【关键词】 延胡索乙素;提取;高效液相色谱法;山乌龟
【中图分类号】 R 284． 2 【文献标识码】 A 【文章编号】 0253-4304(2011)01-0109-03
山乌龟是我国的传统中草药，在长江流域以南各
地尤其是华南和西南等地少数民族中使用广泛，是广
西壮族等少数民族民间常用草药，药材来源于防己科
千金藤属植物的块根［1］。山乌龟块根中生物碱含量
高达 3% ～4%，其中主要为异喹啉类生物碱［2 － 5］，其
中最重要且含量较高的是延胡索乙素(tetrahydropal-
matine) ，具有良好的镇痛作用。本研究以延胡索乙
素为对照品，采用高效液相色谱法测定其中延胡索乙
素含量。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 LC-10A高效液相色谱仪(SHIMADZU) ;
101-1 型电热鼓风恒温干燥箱(上海东星建材试验设
备有限公司) ;电子天平 BS110S(北京赛多丽斯天平
有限公司) ;FW-177 型中草药万能粉碎机(天津市泰
斯特仪器有限公司)。
1． 2 试药 山乌龟药材饮片购自玉林制药有限责任
公司，粉碎后过 40 目筛，60℃干燥 24 h 备用;延胡索
乙素对照品购自中国药品生物制品检定所(批号:
200610，供含量测定用) ，甲醇为色谱纯，其他试剂均
为分析纯。
901广西医学 2011 年 1 月第 33 卷第 1 期
2 方法与结果
2． 1 提取方法的研究
2． 1． 1 提取方法的选择:参考中国药典一部(2010
年版)延胡索项，选择 100 倍氨水 －甲醇(1 ∶ 20)为溶
剂，以延胡索乙素含量为指标，考察冷浸(48 h)和回
流(1 h)两种方法。结果延胡索乙素含量分别为
0． 97%和 1． 09%，以回流的方法提取效率较高。
2． 1． 2 提取溶剂的选择:参考中国药典一部(2010
年版)延胡索项，以 100 倍氨水 － 甲醇(1:20)、氨
水 －乙醇(1 ∶ 20)和 95%乙醇三者为溶剂，进行回流
提取，发现三者延胡索乙素含量差别不大。因甲醇毒
性较大，氨水具有刺激性，不利于劳动保护，我们采用
乙醇为提取溶剂。
2． 1． 3 回流提取工艺研究:采用单因素实验的方法，
以延胡索乙素含量为指标，对回流溶剂用量和乙醇浓
度进行考察，结果:溶剂用量为 10 倍量时含量最高，
为 1． 93%。乙醇浓度为 60%时含量最高，为 1． 83%。
综上所述，以 10 倍量 60%乙醇回流提取 3 次，每次
1 h为最佳提取工艺。
2． 2 方法学考察
2． 2． 1 色谱条件:色谱柱:AichromBond-AQ C18
(5 μm，46 mm × 250 mm) ;柱温:25℃;流动相:甲
醇 － 0． 1%磷酸(三乙胺调节 pH 值至 6． 0，65 ∶ 35) ;
流速:0． 8 ml /min;检测波长:280 nm;进样体积:
20 μl。
2． 2． 2 对照品溶液的制备:取延胡索乙素对照品约
5． 0 mg，精密称定，置 10 ml容量瓶中，加甲醇适量使
溶解，定容至刻度，摇匀，制成每毫升含延胡索乙素
0． 5 mg的对照品储备溶液。
2． 2． 3 供试品溶液的制备:取山乌龟药材粉末约
1． 0 g，精密称定，置 50 ml 圆底烧瓶中，用 10 倍量
60%乙醇回流提取 3 次，每次 1 h，合并提取液，摇匀，
过滤，精密量取滤液 2 ml 置蒸发皿中，水浴蒸干，残
渣加甲醇溶解，转移至 10 ml量瓶中，并稀释至刻度，
摇匀，0． 45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，为供试品溶
液。
2． 2． 4 系统适用性:上述 2 种溶液和空白对照(甲
醇) ，分别精密量取 20 μl，按 2． 2． 1 项色谱条件测定。
结果对照品保留时间为 23 min 左右，供试品主峰保
留时间均在(23 ± 1)min 范围内，空白对照(甲醇)无
干扰;对照品和供试品主峰的理论塔板数均不低于
5 000，各杂质峰与主峰均达到基线分离，分离度均大
于 1． 8;见图 1。
2． 2． 5 线性关系考察:精密量取对照品储备溶液
0． 25 ml、0． 50 ml、1． 00 ml、1． 50 ml、2． 00 ml、3． 00 ml，
分别置于 10 ml 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制
成不同浓度的对照品溶液。按上述色谱条件分别进样
分析，精密量取 20 μl进样，以进样浓度 X(mg /ml)为横
坐标，峰面积 Y(万)为纵坐标，进行线性回归分析;结
果，线性回归方程为 Y =1923． 6X +2． 7449，r =0． 9999，表
明在 0． 0138 ～0． 1650 mg /ml，进样浓度与峰面积呈良好
的线性关系。
2． 2． 6 精密度试验:精密量取对照品溶液 20 μl，重
复进样 5 次，测定峰面积，结果峰面积 RSD 值为
1． 99%。
2． 2． 7 重复性试验:按供试品溶液的制备项下平行
制备 6 份供试品溶液，测定峰面积值，代入回归直线
方程并计算延胡索乙素含量，结果平均含量为
1． 81%，RSD值为 1． 62%。
2． 2． 8 稳定性试验:取同一份供试品溶液，分别于
0 h、2 h、4 h、8 h和 12 h分别测定峰面积值，计算，结
果峰面积 RSD值为 1． 90%，表明供试品溶液在 12 h
内测定稳定性良好。
2． 2． 9 加样回收率实验:取已知含量(1． 81%)的山
乌龟药材粉末约 0． 5 g，9 份，精密称定，置 50 ml圆底
烧瓶中，用 10 倍量 60%回流提取 3 次，每次 1 h，合并
提取液，摇匀，过滤，精密量取滤液 0． 5 ml 置蒸发皿
中，分别精密加入对照品溶液(0． 0825 mg /ml)3 ml、
4 ml、5 ml，各 3份，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至
5 ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，0． 45 μm 微孔滤膜
滤过，取续滤液进样，测定峰面积，代入回归方程计算，
结果平均加样回收率为 98． 31%，RSD = 0． 81%，见表
1。
A 延胡索乙素对照品图谱 B 空白对照图谱
011 Guangxi Medical Journal，Jan． 2011，Vol． 33，No． 1
C 供试品图谱
图 1 高效液相色谱
表 1 加样回收率实验结果
称样量
(g)
原有量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
X
(%)
RSD
(%)
1． 0003 0． 3018 0． 2475 0． 5428 97． 39
1． 0015 0． 3021 0． 2475 0． 5450 98． 13
1． 0007 0． 3019 0． 2475 0． 5485 99． 65
1． 0011 0． 3020 0． 3300 0． 6249 97． 85
1． 0004 0． 3018 0． 3300 0． 6257 98． 16 98． 31 0． 81
1． 0027 0． 3025 0． 3300 0． 6261 98． 08
1． 0008 0． 3019 0． 4125 0． 7113 98． 25
1． 0019 0． 3022 0． 4125 0． 7104 98． 95
1． 0001 0． 3017 0． 4125 0． 7033 97． 36
2． 3 药材中延胡索乙素含量测定 按 2． 2． 3 项下供
试品溶液制备方法，平行制备 6 份供试品溶液，进样
测定峰面积，分别计算含量，其平均含量为 1． 81%。
3 讨 论
氨水 －甲醇、氨水 －乙醇和 95%乙醇均可作为
延胡索乙素的提取溶剂，但甲醇毒性较大，氨水具有
刺激性且三者提取得到的延胡索乙素含量差别不大，
从劳动保护方面考虑，采用乙醇为提取溶剂因甲醇毒
性较大，氨水具有刺激性，不利于劳动保护，我们采用
乙醇为提取溶剂。实验过程中，通过比较高效液相色
谱谱图发现，随着溶剂乙醇浓度的减小，含水量的增
加，主峰的峰面积增大，同时，杂质峰的数量增多，杂
质峰面积也有明显增大，不利于进一步纯化。本实验
建立的山乌龟中延胡索乙素的含量测定方法及优化
后的提取分离工艺具有简单、稳定可靠、操作性强等
特点，可为山乌龟中延胡索乙素的进一步研究提供参
考依据。含量测定结果与闵知大等［2 － 3］报告基本一
致。
延胡索乙素作为常用的镇痛药，镇痛效果显著且
无成瘾性，并且近年来有研究表明延胡索乙素能够提
高海洛因成瘾者的戒毒率［6 － 7］，提示延胡索乙素有更
大的开发价值。另外，利用化学合成法大量制备延胡
索乙素，化学反应复杂，回收率约 40%，可行性
差［8 － 9］。山乌龟中延胡索乙素的含量较高，有望成为
提取延胡索乙素的原药材而具有广阔的应用开发的
前景。
参 考 文 献
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(收稿日期:2010 － 10 － 14 修回日期:2010 － 11 － 17)
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● 中国卫生法学会第三届理事会第四次会长办公会在南宁举行
2011 年 1 月 13 日，中国卫生法学会第三届理事会第四次会长办公会在南宁举行。会议由中国卫生法学会会长、卫生部原
副部长孙隆椿主持。会议听取了学会 2010 年度工作情况汇报，审议、通过了学会 2011 年度主要工作计划。自治区卫生厅厅长、
中国卫生法学会副会长李国坚参加了会议。
111广西医学 2011 年 1 月第 33 卷第 1 期