免费文献传递   相关文献

穗花牡荆提取物诱导人胃癌细胞凋亡的机制



全 文 :国外医学中医中药分册 2004年第 26卷第 3期 ·185·
经口给予 3.75g/kg葡萄糖。经时从尾静脉采血,制备
血清,用 GOD法检测血糖。
结果:①体外研究:黄芩中的黄芩苷元有较强的
a-葡糖苷酶抑制活性。其中对蔗糖酶的作用强,而对
麦芽糖酶、乳糖酶的作用较弱,认为其抑制活性和抑
制模式存在差异。②体内研究:黄芩苷元对血糖升高
没有抑制作用,而在体外试验中抑制活性低的黄芩苷
对血糖升高有抑制作用。

198 黄芩苷元对人大肠癌细胞WiDr的作用〔日〕/
西井奈绪美⋯
方法:WiDr 细胞在含有黄芩苷元的 10%
FCS/MEM 培养基中培养 3d,用 alamar 蓝检测抑制
细胞增殖的作用。为了探讨增殖抑制时的细胞损害以
及细胞凋亡,检测 LDH 活性,并经 Hoechst 33342
进行核染色,通过琼脂糖凝胶电泳法分析 DNA片段。
结果与讨论:根据 alamar 蓝的荧光检测,计算
IC50为 6.7mg/mL,明确了黄芩苷元具有抑制细胞增殖
的作用。LDH 活性与对照组间无显著差异。在给予
黄芩苷元后第 2~3d 出现核固缩,表明引起细胞凋
亡,但未出现 DNA梯形带。黄芩苷元究竟是作用于
细胞周期抑制细胞增殖,还是诱导细胞凋亡,今后将
进行进一步探讨。

199 黄芩中的千层纸黄素A对人宫颈癌细胞HeLa S3
的作用〔日〕/小西真由子⋯
探讨了黄芩中的黄酮类化合物千层纸黄素 A 对
人宫颈癌细胞 HeLa S3的作用。
方法:用MEM+10% FCS的培养基培养HeLa S3
细胞,接种于 96孔微板(3 000个/孔),添加受试药
物后第 3d用荧光试剂 alamar蓝检测细胞增殖抑制作
用,并计算 IC50。用琼脂糖凝胶电泳法分析 DNA片
段;Hoechst 33342 染色观察核凝集;用荧光基质
DEVD-AFC检测 caspase-3酶的比活性。
结果:千层纸黄素 A可抑制 HeLa S3细胞增殖,
IC50约为 2mg/mL 。根据细胞呈圆形固缩的形态学变
化,认为可能为细胞凋亡。剂量为 2mg/mL时,第 3d
出现梯带与核固缩。caspase-3的酶活性经日增加。
上述结果表明,千层纸黄素A可能介导 caspase-3
途径引起 HeLa S3细胞凋亡。

200 生脉散诱导 PC12细胞凋亡〔日〕/小川能弘⋯
研究表明,生脉散对脑氧化应激损伤具有显著的
防御作用。为了明确其作用机制,本次以源自大鼠肾
上腺髓质褐色细胞瘤的神经样培养细胞(PC12)进
行了探讨。
方法:PC12细胞在含有 10% 胎牛血清和b-神经
生长因子(50ng/mL)的 DMEM 中培养,经台盼蓝
染色观察生存率。用流式细胞仪(FCM)观察碘化
丙锭(PI)和膜联蛋白 V-异硫氰酸荧光素染色的细
胞。
结果与讨论:PC12细胞与生脉散培养 10d后,
细胞增殖被显著抑制。与培养 7d 时的细胞数进行
比较,生脉散浓度依赖性抑制细胞增殖。加入生脉
散培养第 7d 的细胞生存率较对照组约降低 30%。
FCM分析,添加生脉散后出现细胞 DNA片段化和
磷脂酰丝氨酸表达,表明生脉散可诱导细胞凋亡。
进一步研究认为,方中五味子在抑制细胞增殖和降
低细胞生存率方面的作用最强。目前正在探讨生脉
散诱导细胞凋亡与防御脑氧化应激损伤之间的相
关性。

201 穗花牡荆提取物诱导人胃癌细胞凋亡的机制
〔日〕/赤池武则⋯
研究认为,穗花牡荆(Vitex agnus-castus)果实
的乙醇提取物(Vitex)具有杀伤细胞的作用,可诱
导数种人癌细胞凋亡。本次探讨了 Vitex诱导细胞凋
亡的机制。
方法:用 Vitex处理人胃癌细胞(Kato III),用
琼脂糖凝胶电泳法分析 DNA片段化。用 DTNB法检
测处理细胞的 GSH 量。用 Western 印迹法分析与细
胞凋亡相关的蛋白质的变化。进一步探讨对 N-乙酰-
L-半胱氨酸(NAC)及 GSH的影响。
结果:在 Vitex诱导 Kato III细胞凋亡的过程中,
·186· 国外医学中医中药分册 2004年第 26卷第 3期
细胞内总 GSH 量减少。此时,如加入 GSH 则诱导细
胞凋亡被抑制。另外,在用 Vitex处理细胞时,如加入
NAC,总GSH量减少被抑制的同时,细胞凋亡也被抑
制。经Vitex进一步处理,Bcl-2及 Bcl-XL表达减少,
线粒体释放细胞色素 C,caspase(cas)-3、-8、-9 被
激活。
结论:Vitex诱导 Kato III细胞凋亡,与伴有 GSH
量变化的细胞内氧化状态有关。并且,由于 Bcl-2家
族以及 cas类的变化,Vitex诱导的细胞凋亡与 cas-8
通路和介导线粒体途径有关。

202 蜂胶对特应性皮炎模型小鼠的影响〔日〕/神
名祥史⋯
研究认为,蜂胶可以抑制大鼠腹腔肥大细胞释放
组胺,从而具有抗过敏作用。本次探讨了蜂胶对瘙痒
模型小鼠的作用。
方法:实验动物为 6~10周龄 ICR系雌性小鼠,
经口给予蜂胶后,于小鼠背部皮内给予 48/80化合物,
通过计数 60min内搔抓后肢的次数,观察单次或连续
给予蜂胶的效果。另外,用 2% 伊文思蓝探讨对 48/80
化合物诱发血管通透性反应的影响。
结果:单次给予蜂胶(1 000mg/kg)时可明显
抑制搔抓行为。连续给予蜂胶 2 周后,各给药组
的抑制作用均增强。4周后即使剂量减为 500mg/kg
仍可明显抑制搔抓行为。并且,单次给予蜂胶 1 000
mg/kg,对增强的血管通透性反应有明显的抑制作
用。上述结果表明,顿服蜂胶可抑制肥大细胞脱
颗粒引起的瘙痒,连续服用低剂量即有抑制作用。

203 苹果子乙醇提取物改善去毛小鼠皱纹的作用
〔日〕/土井信幸⋯
探讨了苹果子乙醇提取物对去毛小鼠照射紫外
线(UVB)形成皱纹的改善作用。
方法:将 6 周龄雌性去毛小鼠放入薄型笼中,
距 UVB灯约 30cm,缓慢旋转照射背部(每日 1次,
每周 3次)。从照射开始至第 1、2、3、4周逐渐增
强 UVB照射强度,分别为 65、75、85、95mJ/cm2,
4~12 周为 95mJ/cm2。UVB 照射 12 周后,去毛小
鼠背部涂抹含有 10% 苹果子提取物的软膏、0.05%
维甲酸软膏、基质(每日 1 次,每周 5 次),涂抹
12周。涂抹结束后制备皮肤组织标本,进行 HE染
色,检测皮肤角层水分含量(高频传导率)、经表皮
水分丢失量(TEWL)。根据硅胶复制品用三维皮肤
深度分析变异功能,计算 UVB照射形成皱纹的面积
及体积。
结果:UVB照射 12周时角层水分减少,TEWL
增加,皱纹面积及体积增加,涂抹含有 10% 苹果子
提取物的软膏后,第 8、12周皱纹的面积及体积明显
减小,角质水分、TEWL没有变化,显示有抑制角层
肥厚的趋势。上述结果表明,苹果子提取物对 UVB
照射形成皱纹有改善作用。

204 苦参中的止痒成分〔日〕/宫本朋美⋯
对5-HT诱发的急性瘙痒以及类似特应性皮炎的慢
性瘙痒模型动物,经口给予苦参提取物具有显著的止痒
作用。本次对苦参提取物中的止痒成分进行了筛选。
方法:按照常法分离苦参甲醇提取物的生物碱组
分和非生物碱组分,探讨各组分对皮内注射 5-HT
(100nmol/50mL)诱发搔痒行为的影响。然后再观察
具有活性的组分对 NC系小鼠慢性搔痒行为的影响。
进一步经硅胶柱层析分离活性组分。
结果:皮内注射 5-HT 1h前经口给予生物碱组分
和非生物碱组分(20mg/kg),生物碱组分可减少搔痒
行为,表明生物碱组分对 NC系小鼠的慢性搔痒行为
亦有抑制作用,其作用出现的时间以及持续时间与苦
参提取物(200mg/kg)一致。经 HPLC 分析,其生
物碱组分含有约 50% 的羽扇豆生物碱氧化苦参碱。
硅胶柱层析分离得到的氧化苦参碱(1、10mg/kg)剂
量依赖型抑制 5-HT诱发的搔痒行为。上述结果表明,
苦参甲醇提取物的止痒成分为生物碱,氧化苦参碱是
主要活性成分之一。
(以上怡悦摘译)(未完待续)