全 文 :分光光度法测定蒙药材多叶棘豆中槲皮素的含量
马莹莹,李英杰,刘雅静,高扬,张力,包玉敏
(内蒙古民族大学化学化工学院,内蒙古通辽 028043)
〔摘 要〕采用回流和超声两种方法对蒙药材多叶棘豆中槲皮素进行提取,并用催化动力学光度法测定槲皮
素的含量,检测波长517 nm,回归方程为:Y=0.1652 + 548.0392X (mg/L) r= 0.99992 ,槲皮素浓度在0.00~
0.05mg/L范围内与吸光度呈线性关系.回流法和超声法测得槲皮素含量分别为0.1372 mg/g和0.1994 mg/g ,平
均回收率分别为96.63%和100.42%,相对标准偏差分别为1.73%和6.39%.实验结果表明,超声提取法较回流
提取法提取率高.
〔关键词〕槲皮素;多叶棘豆;分光光度法
〔中图分类号〕O657.32 〔文献标识码〕A 〔文章编号〕1671-0185(2010)01-0026-03
Quantitative Determination of Quercetin of Mongolian
Medicine Oxytropis Myriophylla by Spectrophotometry
MA Ying-ying,LI Ying-jie,LIU YA-jing,GAO Yang,ZHANG Li,BAO Yu-min
(College of Chemistry and Chemical Engineering,Inner Mongolia University for Nationalities,Tongliao 028043,China)
Abstract:Two methods,backward flow and ultrasonic wave were used in extracting Quercetin in Oxytropis Myriophylla.
Spectrophotometric method was adopted to determine the contents of Quercetin,the wavelength is 517nm.The regression
equation is Y=0.1652 + 548.0392X (mg/L) r=0.99992 ;With the extension of 0.00~0.05mg/L,the thickness of Quercetin
has a linear relationship with the absorbency. Backward flow and ultrasonic wave measured quercetin contents were 0.1372
mg/g and 0.1994 mg/g,the average recovery were 96.63% and 100.42%,the relative standard deviation were 1.73% and
6.39%.It is concluded that ultrasonic wave is better than backward flow in extracting.
Key words: Quercetin; Oxytropis Myriophylla; Spectrophotometer
多叶棘豆(Oxytropis Myriophylla)又名狐尾藻棘豆、鸡翎草.蒙药名:纳布其日哈嘎一奥日图哲.多叶棘豆为常用蒙药,具
有清热、消肿、止血、伤口愈合等功能.用于治疗流感、咽喉肿痛、痈疮肿毒、瘀血肿胀〔1〕.
槲皮素(Quercetin) 二水合物为黄色针状结晶,具有较好的祛痰、止咳作用,并有一定的平喘作用.此外还有降低血压、增
强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉,增加冠脉血流量等作用.用于治疗慢性支气管炎.对冠心病
及高血压患者也有辅助治疗作用.
笔者用两种方法对多叶棘豆中槲皮素进行提取〔2〕,采用分光光度法测定了槲皮素含量〔3〕,为进一步开发、利用多叶棘
豆奠定基础.
1 实验部分
1.1 仪器、试剂与实验材料 仪器 721型分光光度计(上海第三分析仪器厂);DZKW-S-4型恒温水浴(北京永光明医疗仪器
厂); QW3200V型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司),FA-2104N型电子天平(上海民桥精密科学仪器有限公司).
试剂:无水乙醇;甲基红,硫酸,溴酸钾均为分析纯.
供试材料:槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所,批号10008-2004604);多叶棘豆(由内蒙古蒙王医药公司提供).
收稿日期:2009-03-21
项目基金:内蒙古自然科学基金资助项目(200607010209);内蒙古高等学校自然科学基金资助项目(NJZY07138)
作者简介:马莹莹(1984—),女(蒙古族),内蒙古通辽市人,在读硕士研究生,主要从事天然有机化学研究.张力为通讯作者.
第25卷 第1期 内蒙古民族大学学报(自然科学版) Vol.25 No.1
2010年1月 Journal of Inner Mongolia University for Nationalities Jan.2010
DOI:10.14045/j.cnki.15-1220.2010.01.017
1.2 实验方法
1.2.1 槲皮素的提取 回流法:将洗净多叶棘豆于80℃烘干,粉碎过60目筛,精密称量多叶棘豆2.0000 g,放入圆底烧瓶
中,加入95%的乙醇40 mL,78℃水浴中回流3 h,趁热过滤,滤液置于100 mL容量瓶,用95%的乙醇定容至刻度,作为供试
品液.
超声波法:将洗净多叶棘豆于80℃烘干,粉碎过60目筛,精密称量多叶棘豆2.0000 g,放入100 mL烧瓶中.加入95%的乙
醇70 mL,室温浸泡24 h,超声35 min,减压抽滤,滤液置于100 mL容量瓶中,用95%的乙醇定容至刻度,作为供试品液〔2〕.
1.2.2 测定标准曲线 对照品液的制备精密称取槲皮素对照品0.0102 g,置于100 mL容量瓶中,用无水乙醇溶解,稀释至
刻度,摇匀,得浓度为10.20 mg/mL对照品液.用时用无水乙醇稀释成浓度为0.0204mg/mL对照品溶液.
线性回归方程的建立:在六支10 mL比色管中,分别加入1.00 mL 0.02%甲基红乙醇溶液,0.30 mL 1.0 mol/L硫酸溶液,
用水稀释至约8 mL.其中一支不加槲皮素,另五支比色管中分别加入0.20、0.40、0.60、0.80、1.00 mL浓度为0.0204 mg/mL的
槲皮素溶液.最后分别加入0.25 mL 0.025 mol/L 溴酸钾溶液,用水稀释至10 mL,摇匀,放入温度为80℃的水浴中加热6 min,
迅速取出,冷水冷却5 min,以终止反应.以水作参比,在517 nm 处测定吸光度,得回归方程Y=0.1652 + 548.0392X r=
0.99992,测定浓度在0.00~0.05 mg/L 范围内与吸光度呈线性关系.
1.2.3 测定方法
1.2.3.1 槲皮素含量的测定 精密移取样品溶液2.00 mL 置于10 mL 比色管中,加入其他溶液的量及浓度见表1.
表1 样品中槲皮素含量测定方法
Table 1 Determination of quercetin content in the samples
No.
0.02%甲基红(mL)
1.0mol/L硫酸(mL)
二次蒸馏水
样品(mL)
0.025mol/L溴酸钾(mL)
二次蒸馏水
0
1.00
0.30
2.00
0.25
1
1.00
0.30
至8mL左右
2.00
0.25
至刻度,摇匀
2
1.00
0.30
3
1.00
0.30
2.00
0.25
4
1.00
0.30
2.00
0.25
5
1.00
0.30
2.00
0.25
在波长517 nm 处测定吸光度值A,带入回归方程,计算槲皮素的含量.
1.2.3.2 回收率的测定 按1.2.3.1槲皮素含量测定方法,在加入2.00 mL样品液后,再加入0.0204mol/L对照品液0.60 mL,
其它操作方法相同.在波长517 nm 处测定吸光度,按下式计算回收率.
书
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2 结果与讨论
2.1 多叶棘豆中槲皮素的含量 按1.2.3.1方法测定样品中槲皮素的含量,结果见表2.
表2 样品中槲皮素的含量
Table 2 Determination results of sample
提取方法
回流法
超声波法
样品中槲皮素的含量(mg/g)
0.1281
0.1251
0.1304
0.1263
0.1292
0.1923
0.2037
0.1964
0.2052
0.1994
平均含量(mg/g)
0.1278
0.1994
RSD(%)
1.68
2.65
第1期 马莹莹等:分光光度法测定蒙药材多叶棘豆中槲皮素的含量2 27
2.2 回收率的测定 按1.2.3.2实验方法测定加标回收率,结果见表3.
表3 样品回收率测定结果
Table 3 The recovery rate determination results
提取方法
回流法
超声波法
样品中槲皮素的含量
(mg/g)
4.72×10 - 4
5.00×10 - 4
5.22×10 - 4
5.05×10 - 4
5.17×10 - 4
7.98×10 - 4
7.69×10 - 4
8.15×10 - 4
7.86×10 - 4
8.21×10 - 4
样品和标准槲皮素的含量
(mg/g)
16.97×10 - 4
16.99×10 - 4
16.63×10 - 4
16.94×10 - 4
17.03×10 - 4
20.14×10 - 4
20.07×10 - 4
20.79×10 - 4
16.15×10 - 4
16.80×10 - 4
加标含量(mg/g)
1.224×10 - 3
1.224×10 - 3
1.224×10 - 3
1.224×10 - 3
1.224×10 - 3
1.224×10 - 3
1.224×10 - 3
1.224×10 - 3
1.224×10 - 3
1.224×10 - 3
回收率(%)
96.81
97.96
93.21
97.14
96.92
99.32
101.15
103.30
100.41
102.83
3 结论
本实验建立了分光光度法测定多叶棘豆中槲皮素含量的方法.用回流法和超声法两种方法,提取了多叶棘豆中槲皮
素,用分光光度法测定了样品中槲皮素含量.超声法的提取率更高.分光光度法测定槲皮素含量具有灵敏度高、准确度好、
试剂用量少、重现性好等优点,适用于多叶棘豆中槲皮素含量的测定.
参 考 文 献
〔1〕董银山,赖乌云,李增春.多叶棘豆提取总黄酮的微型实验〔J〕.内蒙古民族大学学报(自然科学版),2008,23(1):28-29.
〔2〕王群立,张力,包玉敏.超声波提取扁蓄总黄酮及测定〔J〕.内蒙古民族大学学报(自然科学版),2007,22(1):33-35.
〔3〕乔俊缠,任常胜,菅艳艳,等.蒙药多叶棘豆总黄酮含量的测定〔J〕.中国民族医药杂志,1998,(2):47.
〔4〕刘维信,冯希环,蔡宋宋,等.大葱槲皮素含量的测定〔J].中国农学通报,2008,(3):266-269.
〔责任编辑 郑 瑛〕
内 蒙 古 民 族 大 学 学 报 2010年 228