全 文 ：高速逆流色谱法分离小花黄堇中延胡索乙素和原阿片碱
吴东晶1 ,吴建国2 ,吴锦忠＊1 ,2(1.福建中医药大学药学院福州 350108;2.福建中医药大学中西医结合研究院
福州 350108)
摘要:目的　高速逆流色谱法分离纯化小花黄堇中延胡索乙素和原阿片碱。方法　采用高速逆流色谱法进行分离 ,以正已烷-乙酸乙酯-甲醇-
水(8∶8∶12∶8 , V/V)为溶剂系统 ,上相为固定相 ,下相为流动相 , 转速:800r·min-1 ,流速:2mL·min-1 ,检测波长:280nm。结果　从小花黄堇总
生物碱提取物中分离得到延胡索乙素和原阿片碱 ,纯度分别可达 99.2%和 99.6%。结论　利用高速逆流色谱法可高效分离和纯化小花黄堇
中延胡索乙素和原阿片碱。
关键词:高速逆流色谱;小花黄堇;延胡索乙素;原阿片碱
中图分类号:R927.2　文献标识码:A　文章编号:1006-3765(2011)-10-0063-03
作者简介:吴东晶 ,女(1978-)。毕业于福建中医学院 ,职称:主管药
师 ,现就读于福建中医药大学在职硕士研究生。联系电话:0591-
85321756 , E-mail:w dj1101@126.com
通讯作者:吴锦忠 , 男(1965-)。教授。 联系电话:0591-22861611 ,
E-mail:jinzhongfj@126.com
Preparative isolation of dl-tedrahypalmatine and protopine fromCorydalis
racemosa (Thunb.)Pers.by high-speed counter-current chromatography
WUDong-jing ,WU Jian-guo ,WU Jin-zhong(Fujian university of traditional Chinese medicine , Fuzhou 350108 ,
China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To separate dl-tedrahypalmatine and protopine f rom Corydalis racemosa (Thunb.)
Pers.by high-speed counter-current chromatog raphy (HSCCC).METHODS　Using high-speed counter-current
chromatography , solvent systems w as composed of n-hexane-ethylacetate-methanol-water(8∶8∶12∶8 , v/v), and its
upper phase w as used as the stationary phase and its lower phase as the mobile phase , separation w as performed at
the rotating speed of 800r·min-1 , flow rate of 2.0mL·min-1 and detection wavelength of 280nm.RESULTS　
Dl-tedrahypalmatine and pro topine f rom Corydalis racemosa (Thunb.)Pers.were isolated wi th the puri ty of
99.2%and 99.6%.CONCLUSION　Dl-tedrahypalmatine and protopine from Corydalis racemosa (Thunb.)
Pers.could be separated and purified by HSCCC w ith high-ef ficiency.
KEY WORDS:High-speed counter-current chromatog raphy;Corydalis racemosa (Thunb.)Pers.;Dl-Tedrahypalmatine;P rotopine
　　小花黄堇为罂粟科紫堇属植物小花黄堇 Corydalis race-
mosa (Thunb.)Pers.的全草或根。味苦 , 性寒 , 有毒。 具有
清热利尿 ,解毒杀虫之功效。主治湿热泄泻 , 痢疾 ,黄疸 , 目赤
肿痛 , 耳亭耳流脓 , 疮毒 , 疥癣 ,毒蛇咬伤〔1〕。小花黄堇中主要
有效成分为生物碱 , 如延胡索乙素和原阿片碱〔2 , 3〕。本实验
从小花黄堇中提取得到总生物碱 , 并利用高速逆流色谱法
(high-speed counter-current chromatog raphy ,HSCCC)分离延胡
索乙素和原阿片碱 ,为小花黄堇的进一步开发利用提供理论
依据。
1　仪器与试药
1.1　仪器　TBE-300A 高速逆流色谱仪(上海同田生化技术
有限公司), LC-2010A 高效液相色谱仪(日本岛津)。
1.2　样品　小花黄堇采收自福建省永春县 , 经福建中医药大
学药学院杨成梓副教授鉴定为罂粟科小花黄堇 Corydalis
racemosa (Thunb.)Pers.的全草。
1.3　试剂　乙酸乙酯 、正己烷 、甲醇(分析纯 , 上海国药化学
试剂股份有限公司),乙腈(色谱纯 ,美国 Merck 公司),延胡索
乙素 、原阿片碱对照品(≥98%, 中国药品生物制品检定所),
盐酸 、氢氧化钠(化学纯 , 衡阳市凯信化学试剂有限公司), 水
为纯净水。
2　方法与结果
2.1　总生物碱的提取　取小花黄堇药材1kg ,用 95%的乙醇
(含 0.1% HCl)回流提取 3 次 , 每次 1.5h , 合并提取液 ,过滤 ,
回收乙醇 , 至无醇味。加入 5%的 HCl溶液 , 调节 pH 值至 2
左右 , 静置 12h , 过滤 ,弃去沉淀;再往滤液中加入 NaOH , 调节
pH 值至 12 左右 , 静置 12h , 过滤 , 取沉淀 , 干燥 , 即得总生物
碱粉末。
2.2　总生物碱成分分析　采用 HPLC 分析小花黄堇总生物
碱的成分 , HPLC 分析条件为:色谱柱:SMA-RP C18(5μm ,
250mm×4.6mm);检测波长:280nm;进样量:20μL;流动相:
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Strait Pharmaceutical Journal Vol 23 No.10 2011
乙腈-水(0.15%三乙胺);流速 1mL·min-1 。
图 1　小花黄堇总生物碱成分的 HPLC分析图谱
图 2　延胡索乙素和原阿片碱对照品 HPLC分析图
从图 1 可以看出 ,峰 1 和峰 2 为主要色谱峰 , 与图 2 延胡
索乙素和原阿片碱对照品 HPLC 分析图比较 , 结果表明:成分
1 为延胡索乙素 , 成分 2 为原阿片碱。实验以图 1 所示 1 、2
两个峰 , 即延胡索乙素和原阿片碱为主要目标 ,采用 HSCCC
法对这两个成分进行分离 ,再用 HPLC 法检测经 HSCCC 分离
后的产品纯度。
2.3　HSCCC 分离条件的确定　HSCCC 最合适的分配系数
值范围通常在 0.5 ～ 2 , 根据待分离组分的极性 , 本实验考察
了正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水和氯仿-甲醇-水两个系统〔4〕 , 通
过改变各溶剂的比例调整目标成分 1 和 2 的分配系数。
按溶剂体系的体积比配制溶液 100m L ,于 250mL 分液漏
斗中剧烈振摇 10min , 静置分层后分别取上 、下层溶液(即为
溶剂体系的上 、下相)于具塞锥形瓶中备用。分别量取上 、下
溶剂各 4.0mL 于 10mL 具塞试管中 , 加入样品约 10mg , 振摇
至完全溶解。量取溶有样品的上 、下相溶剂各 3.0mL , 分别
于蒸发皿中蒸干 , 用适量甲醇溶解 , 稀释并定容至 100m L。
精密吸取等量的样品溶液 ,按 2.2 项下的色谱条件进样分析 ,
计算 K 值。K=上相峰面积/下相峰面积(见表 1)。
表 1　目标成分 1和 2不同溶剂体系分配系数值(K)
溶剂体系 K 1 K 2
氯仿-甲醇-水(8∶6∶4) - -
正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(8∶8∶8∶8) 2.1 3.0
正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(8∶8∶12∶8) 0.9 1.2
正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(4∶8∶4∶8) 15.0 9.0
K 1:目标成分 1分配系数 , K2:目标成分 2分配系数
可见 ,目标成分 1 和 2 在正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(8∶8∶
12∶8)系统中的分配系数较为理想 , 故确定采用该溶剂系统。
2.4　目标成分的制备　将正已烷-乙酸乙酯-甲醇-水按照体
积比 8∶8∶12∶8 振摇充分混合 ,静置平衡后分得上相(固定相)
和下相(流动相), 分别超声脱气 15min , 备用。称取小花黄堇
总生物碱粉末 25mg ,加人溶剂系统的上 、下相各 10m L , 振摇
使之溶解 ,作为样品溶液。上相以流速为 10mL·min-1进入
HSCCC 螺旋管 , 待螺旋管完全充满固定相后 , 开启 HSCCC 主
机 , 旋转方向为顺时针 ,使转速逐渐增加到 800r·min-1 , 同时
以 2.0mL·min-1的流速抽入下相(流动相)。当流动相从螺
旋管尾端流出时 , 系统即达到动力学平衡 , 基线平稳后即可进
样。紫外检测器检测波长设为 280nm , 根据色谱图收集各流
分。
按 HSCCC 图谱(见图 3)上的各成分峰收集流分 , 得到 5
个组分 , 分别用 HPLC 法测其纯度。 5 个组分通过 HPLC 检
测 , 结果表明 ,组分 1 、2、3 均为未知成分的混合物 , 组分 4 和
5 为目标成分(见图 4、5),以面积归一化法计算其纯度分别为
99.6%和 99.2%。通过比较目标成分 4 、5 与延胡索乙素 、原
阿片碱对照品保留时间 , 可知成分 4 为原阿片碱 ,成分 5 为延
胡索乙素。
图 3　小花黄堇总生物碱 HSCCC图谱
图 4　组分 4(原阿片碱)HPLC图谱
图 5　组分 5(延胡索乙素)HPLC图谱
3　讨论
高速 逆流色 谱(high-speed counter-current chroma to-
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海峡药学　2011年　第 23卷 第 10期
g raphy)是近年来发展起来的一种液一液分配色谱新技术 , 目
前 ,利用高速逆流色谱已从天然药物中分离出多种生物碱类 、
黄酮类等成分〔5 ～ 8〕。
小花黄堇罂粟科植物 , 其中延胡索乙素和原阿片碱的含
量很高 ,药理学研究表明延胡索乙素和原阿片碱抗炎镇痛效
果显著〔9 ～ 11〕。因此 ,本实验从小花黄堇中提取得到总生物碱
粉末 , 通过高效液相色谱法确定溶剂体系和分配系数 , 再以
HSCCC 对其生物碱有效成分进行分离 ,从而得到原阿片碱和
延胡索乙素 。与传统的溶剂洗脱分离法相比较 , 此方法更为
快速有效 ,而且能大大地节省溶剂。另外 , 先从药材中提取得
到总生物碱粉末 , 使目标成分含量更高 ,HSCCC 一次性分离
得到的目标成分的产量和纯度也更高。
参考文献
〔1〕中华本草编委会.中华本草〔M〕.上海:上海科学技术出版社 ,
1998 , 636-637.
〔2〕蒋遐芝 ,等.HPLC测定小花黄堇中原阿片碱的含量〔J〕.中国中
医药杂志 , 2010 , 35(17):2315-2317.
〔3〕蒋遐芝 ,等.HPLC测定小花黄堇中延胡索乙素的含量〔J〕.北京
中医药大学学报 , 2010 ,10:673-675.
〔4〕Qingfa , et al.Preparative isolation and puri fication of tw o new isomer-
ic diterpenoid alkaloids f rom Acont itum coreanum by high-speed
counter-current chromag raphy〔J〕.Jou rual of Chromagraphy B, 2008
(872):181-185.
〔5〕吴三桥 ,等.高速逆流色谱法分离纯化延胡索乙素和原阿片碱〔 J〕
.中国生化药物杂志, 2009 , 30(2):89-92.
〔6〕王祖林 ,等.高速逆流色谱法分离制备甘草中的芒柄花苷〔J〕.山
东科学 , 2010 , 23(2):18-21.
〔7〕甘春芳 ,等.高速逆流色谱技术在天然产物分离中的应用〔J〕.应
用化工 , 2009 , 38(10):1505-1508.
〔8〕杨长军 ,胥保华 ,耿越.高速逆流色谱在天然产物化学成分分离中
的应用〔J〕.山东师范大学学报 , 2009 , 24(3):109-112.
〔9〕徐婷 ,金昔陆.延胡索乙素药理作用的研究进展〔J〕.中国临床药
学杂志 , 2001 , 10(1):58-60.
〔10〕邓敏 , 王家高.普洛托品的药理作用研究进展〔 J〕.中草药 ,
2001 , 32(3):275-277.
〔11〕郑建芳 ,秦民坚.紫堇属植物生物碱类化学成分与药理作用〔J〕.
国外医药 , 2007 , 22(2):55-59.
不同产地及生长期马鞭草中槲皮素和芹菜素含量变化的比较
吕　兰(浙江中医药大学 杭州 310053)
摘要:目的　研究不同产地及不同生长期马鞭草中槲皮素和芹菜素的含量变化。方法　采用高效液相色谱法 , ODS-C18 , 以甲醇-0.1%磷酸溶
液(60∶40)为流动相 ,检测波长 350nm。并比较了不同产地及不同生长期马鞭草中槲皮素和芹菜素的含量。结果　槲皮素和芹菜素的线性范
围分别在 0.016～ 1.0μg 、0.01～ 0.64μg ,平均回收率分别为 98.5%、97.3%。江西南昌含量较高 ,不同生长期马鞭草中槲皮素和芹菜素含量以 6
～ 7月份为高。结论　建议马鞭草药材采收以 6～ 7月为宜。
关键词:HPLC;马鞭草;槲皮素;芹菜素
中图分类号:R927.2　文献标识码:A　文章编号:1006-3765(2011)-10-0065-03
作者简介:吕　兰 ,女(1983.2-)。毕业于浙江中医。职称:中药师。从事中药房工作。联系电话:13867461408
Determination of Quercetin and Apigenin in Verbena officinals from differ-
ent regions and different t imes
LV Lan(Zhejiang Chinese Medical University , Hangzhou 310053 ,China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To study the content of quercetin and apigenin in dif ferent regions and dif ferent sea-
sons of Verbena off icinals.METHODS　HPLC method w as used w ith ODS-C18 , the moblile phase w as methanol-
0.1%phosphoric acid (60∶40).Detection w ave lenth w as 350nm.RESULTS　The linear rang of quercetin w as
0.016～ 1.0μg and apigenin w as 0.01 ～ 0.64μg.The mean recoveries for quercet in w as 98.5%, apigenin w as
97.3%.The contents of quercetin and apigenin in june and july w ere the highest , and the contents in Verbena of-
f icinals f rom Jiangxi Nanchang were the highest in dif ferent places.CONCLUSION　It is better to harvest the
parts of Verbena officinals on the ground in june and july.
KEY WORDS:HPLC;Verbena officinals L.;Querce tin;Apigenin
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Strait Pharmaceutical Journal Vol 23 No.10 2011