全 文 ：镰形棘豆止血作用初步研究
戴衍朋1 , 2 ,杨欢1 , 2 ,童丽3 ,蔡宝昌1 ,2＊
(1南京中医药大学中医药研究院 ,江苏 南京　210029;3青海大学医学院 ,青海 西宁　810001)
摘要:目的　研究藏药镰形棘豆提取物的止血 、促凝血作用。方法　镰形棘豆总提取物给小鼠连续灌胃 5 d , 测定出血时
间(BT)、凝血时间(CT);石油醚部位 、二氯甲烷部位 、乙酸乙酯部位 、正丁醇部位 、水溶液部位分别连续灌胃给药 5 d , 测定
凝血时间(CT)、凝血酶原时间(PT)、血浆复钙时间(RT)。结果　镰形棘豆总提物各剂量组与生理盐水组比较 , 具有缩短
出血时间 、凝血时间作用;与生理盐水组比较 ,正丁醇部位 、水部位的 CT、PT、RT缩短率最大且有显著性差异。结论　镰
形棘豆具有较好的止血 、促凝血作用 , 其正丁醇部位和水部位为止血作用有效部位。
关键词:镰形棘豆;止血作用;凝血时间;凝血酶原时间;血浆复钙时间
中图号:R282.710.5　　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-5005(2008)02-0107-03
　　镰形棘豆(Oxyptropis falcate Bunge),藏药称
“莪达夏” ,为藏药部颁标准收载的品种 ,主要产于
青藏高原地区 ,药用根茎或全草 ,主要有抗炎止
痛 、清热解毒 、止血等功效 ,用于愈疮 ,利便 、除毒 、
消肿 、止血 ,可治疗炭疽病 、麻风病 、流感及扁桃体
炎等多种病症[ 1] 。藏医在临床上广泛使用 ,是多
种藏药复方或藏成药的主要药物 ,被誉为“草药之
王” 。但是 ,对于镰形棘豆药理化学等方面的研究
均较少 ,为了更好地开发利用镰形棘豆这一民族
药 ,本实验室对镰形棘豆化学成分以及止血 、抗炎
镇痛等药效作用进行了实验研究 ,现对其止血作
用进行报道。
1　材料
1.1　动物
昆明种小白鼠 , 18 ～ 22 g ,南京中医药大学实
验动物中心提供 。
1.2　药物
镰形棘豆药材经南京中医药大学陈建伟教授
鉴定为镰形棘豆的全草;总提取物以及石油醚部
位 、二氯甲烷部位 、乙酸乙醇部位 、正丁醇部位水
溶液部位 5个极性部位本实验室自制;阳性对照
药为肾上腺色腙片 ,上海信谊九福药业有限公司 ,
批号:060301。
2　方法
2.1　镰形棘豆总提物对小鼠出 、凝血时间的影响
2.1.1　出血时间(BT)测定[ 2]
取小鼠 50只 ,雌雄各半 ,随机分为 5组即空
白组 、阳性组(3.65 mg/kg)、高剂量组(4.04 g/
kg)、中剂量组(2.02 g/kg)、低剂量组(1.01 g/kg),
分别按 0.2 mL/20g 灌胃给药 5 d ,末次给药后 1
h ,将小鼠尾尖 0.5 cm 处横向切断 ,当血液自动流
出时开始计时 ,每隔 30 s用滤纸吸去血滴一次 ,
到血液不在流出为止 。以人工形成创面到出血停
止所经时间作为出血时间 ,观察并记录实验结果。
2.1.2　凝血时间(CT)测定[ 3]
取小鼠50只 ,雌雄各半 ,分组给药均同上 ,末
次给药后 1 h ,用 1 mm 毛细玻管插入小鼠内眦球
后静脉丛 ,深约 4 ～ 5 mm ,自血液流进管内计时 ,
注满毛细管后平放于桌上 ,每隔 30 s折断两端约
0.5 cm ,并缓慢向左右拉开 ,仔细观察折断处有无
血凝丝出现 ,出现血丝时停表即为血液凝固时间。
收稿日期:2007-12-03;修稿日期:2008-01-10
基金项目:教育部“春晖”计划(Z2006-1-81003);青海省科技厅项目(2007-N-534)
作者简介:戴衍朋(1981-),男 ,山东泰安人 ,南京中医药大学 2005级硕士研究生。 ＊通讯作者:025-85811112
—107—南京中医药大学学报 2008 年 3月第 24 卷第 2期JOURNAL OF NANJING TCMUNIVERSITY Vol .24 No.2 Mar.2008
DOI :10.14148/j.issn.1672-0482.2008.02.020
2.2　镰形棘豆不同极性部位对小鼠凝血时间的
影响
2.2.1　玻片法[ 3]
取小鼠 70 只 ,雌雄各半 ,随机分为 7组 ,以
2.02 g/kg灌胃给药 5 d ,末次给药后 1 h ,眼眶取
血 ,取一滴血滴在玻璃片上 ,血滴直径约 5 mm ,立
即用秒表记时 。每 30 s用清洁针头自血液边缘
向里轻轻挑动一次 ,当有血丝挑起时即为血液凝
固时间。
2.2.2　毛细管法
取小鼠 70只 ,雌雄各半 ,分组 、给药均同上。
末次给药后1 h ,实验方法同 2.1。
2.2.3　对小鼠凝血酶原时间(PT)[ 4]的影响
以文献法[ 3]制取凝血活酶备用 。
取18 ～ 22 g 小鼠 70 只 ,雌雄各半 ,分组 、给药
均同上 。末次用药后 1 h ,各组小鼠摘眼球取 0.9
mL 含抗凝剂 0.1 mL 的离心管内 ,混合后置离心
机以 3 000 r/min离心 10 min ,分离血浆备用。
凝血酶原时间测定:取试管 70支 ,每管加入
凝血活酶浸出液和 25 nmol/L 氯化钙溶液各 0.1
mL ,再加入小鼠血浆 0.1 mL ,混匀后立即放入
37℃水浴中温育。同时开始记时 。每隔2 ～ 3 s倾
斜试管1 次 ,记录纤维蛋白凝固时间 。
2.2.4　对小鼠血浆复钙时间(RT)[ 5]的影响
取小鼠 70 只 ,雌雄各半 ,随机分为 7组 ,分
组 、给药均同上 ,末次给药后 1 h ,摘眼球取血 0.9
mL于含有抗凝剂 0.1 mL 离心管中 ,加 NS 0.2
mL ,离心 10 min(1 000 r/min)。取上清液(无钙血
浆)0.2 mL于试管中 ,置 37 ℃水浴温育 1 min 后 ,
加入 2.8 mg/mL CaCl2水溶液 0.2 mL ,混匀后计
时 ,1 min后每隔 10 s ,缓慢倾斜试管 1次 ,观察血
浆是否凝固 ,记录 RT。
3　结果
3.1　镰形棘豆总提物的止血作用
棘豆总提物小鼠灌胃给药 5 d 后 ,各剂量组
BT 均有所缩短;与生理盐水组相比 ,中剂量组和
阳性组有显著性差异(P<0.05),结果见表 1。
　　棘豆总提物小鼠灌胃给药 5 d后 ,与生理盐
水组相比 ,低剂量组 CT 显著性缩短(P <0.05),
中 、高剂量组 CT 均极显著性缩短(P <0.01);同
时阳性药可极显著缩短 CT(P <0.01),结果见表
2。
表 1 镰形棘豆总提物对小鼠 BT的影响( x±s)
组别 n BT/min 缩短率(%)
空白组 10 20.97±4.13 -
阳性组 10 14.81±3.84＊ 33.04
低剂量组 10 18.71±5.03 10.75
中剂量组 10 13.70±4.80＊ 34.67
高剂量组 10 18.51±5.12 11.70
　　　　注:与空白组比较 , ＊P <0.05。
表 2　镰形棘豆总提物对小鼠 CT 的影响( x±s)
组别 n CT/ s 缩短率(%)
空白组 10 184.10±58.79 -
阳性组 10 149.56±44.83＊＊ 18.76
低剂量组 10 156.60±42.21＊ 14.94
中剂量组 10 134.36±38.11＊＊ 27.01
高剂量组 10 146.90±40.10＊＊ 20.21
　　　　注:与空白组比较 , ＊P <0.05 , ＊＊P <0.01。
3.2　镰形棘豆各极性部位的止血作用
镰形棘豆连续灌胃给药 5 d 后 ,各极性部位
组均可以缩短小鼠 CT ,其中正丁醇组和水组凝血
时间最短 ,且与空白组相比有极显著性差异(P<
0.01)。结果见表3 。
表 3　镰形棘豆各极性部位对凝血时间(CT)
的影响( x±s , n=10)
组别 玻片法/ min 毛细管法/min
空白组 4.50±1.16 2.55±0.89
肾上腺色腙片组 3.05±1.11＊ 2.04±0.53＊
石油醚组 3.20±0.89＊ 2.41±0.80
二氯甲烷组 2.98±0.43＊＊ 2.09±0.62
乙酸乙酯组 3.10±0.89＊＊ 2.08±0.67
正丁醇组 2.69±0.87＊＊ 1.67±0.82＊＊
水溶液组 2.97±0.96＊＊ 1.83±0.62＊＊
　　　　注:与空白组比较 , ＊P <0.05 , ＊＊P <0.01。
镰形棘豆连续灌胃给药 5 d 后 ,各极性部位
组均可以缩短小鼠 PT 和PRT ,其中正丁醇组和水
组时间最短 ,且与空白组相比有极显著性差异(P
<0.01)。结果见表 4。
表 4　镰形棘豆各极性部位对凝血酶原时间(PT)和血浆
复钙时间(RT)的影响( x±s , n=10)
组别 PT/ s RT/min
空白组 19.25±2.71 2.01±0.81
肾上腺色腙片组 15.70±2.79＊ 1.40±0.65＊
石油醚组 15.33±3.16 1.64±0.90
二氯甲烷组 15.67±3.04＊ 1.41±0.43
乙酸乙酯组 16.67±1.73＊ 1.57±0.76
正丁醇组 14.80±3.12＊＊ 1.26±0.54＊＊
水溶液组 14.67±2.78＊＊ 1.27±0.59＊
　　　　注:与空白组比较 , ＊P <0.05 , ＊＊P <0.01。
(下转 126页)
—108— 南京中医药大学学报 2008年 3 月第 24卷第 2 期
0.05)。表 4表明:A , B , C , D因素的差异对芍药
苷指标无显著性意义(P >0.05),综合表 2 、表 3
及表 4的结果 ,考虑到生产实际成本 ,故确定水提
最佳工艺条件为A2B2C3D2 ,即:浸泡时间0.5 h ,提
取2次 ,提取时间 2 h ,每次加水量 10倍 。
2.4　水煎煮最佳工艺验证
按比例取一剂处方量的药材 ,以上述最佳水
提工艺考察并验证最佳工艺 ,样品处理及测定方
法同上 。分别测定葛根素和芍药苷的含量 ,结果
见表 6。
表 6　水提取最佳工艺验证(n=3)
编号 葛根素/mg 芍药苷/mg
1 19.71 10.15
2 19.68 10.16
3 19.85 9.97
　　上述实验结果说明:优化提取的结果与正交
表中的最优水平比较相近 ,说明本研究所确定的
工艺合理可行 ,可操作性强。可以作为颈通胶囊
的最佳工艺。
3　讨论
本实验采用正交设计 ,以双指标进行考察 ,正
交实验结果的方差分析表明 ,对于葛根素含量指
标A 、B 、D因素无显著影响 ,选择何种水平均可 ,
而C 因素有显著影响 ,选择C2含量最佳 。而对于
芍药苷含量指标A 、B 、C 、D因素均无显著影响 ,所
以经过综合分析后选择 A2B2C3D2 为最佳提取工
艺。重复验证实验表明优选出的工艺科学 、经济 ,
可以作为颈通胶囊工艺优化的依据 。
参考文献:
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(编辑:李伟东)
(上接 108页)
4　讨论
镰形棘豆具有止血作用 , 《如意宝树》中有记
载:“镰形棘豆粉末撒疮生新肌 ,去骨结 ,内服涩脉
止血 ,为止血之君药 。”由总提物止血实验结果可
以看出镰形棘豆总提物可以显著缩短小鼠出血时
间和凝血时间 ,由此可以验证其止血作用 。镰形
棘豆各极性部位药效筛选实验结果显示 ,正丁醇
部位和水部位具有明显的止血作用 ,是镰形棘豆
止血作用的有效部位 ,为下一步活性物质分离打
下基础。
凝血酶原时间是测定外凝系统凝血功能的最
常用方法 ,其长短与血浆中因子Ⅰ 、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ 、Ⅹ
的浓度和抗凝物的存在有关;而血浆复钙时间用
于测定内凝系统有无缺陷 。镰形棘豆正丁醇部位
和水部位均可以使凝血酶原时间和血浆复钙时间
缩短 ,说明镰形棘豆提取物对小鼠内凝系统和外
凝系统均有作用 ,这对进一步研究镰形棘豆止血
作用机理提供一定的依据 。
止血作用是一个复杂的生理过程 ,影响止血
的因素很多 ,如:凝血因子 、纤溶系统 、血管状态 、
血小板等等 ,因此对镰形棘豆止血作用的机理需
要进行的深入研究 ,为临床应用提供指导。
参考文献:
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(编辑:李伟东)
—126— 南京中医药大学学报 2008年 3 月第 24卷第 2 期