全 文 ：镰形棘豆中黄酮类化合物抗肿瘤活性的体外实验研
究
楼成华1 ,王明艳1 ,杨欢1 ,杨光明1 ,童丽2 ,蔡宝昌1＊
(1南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室 ,江苏 南京　210029;2 青海大学医学院科研处 ,青海 西宁　810001)
摘要:目的　对从镰形棘豆中分离得到的 13 个黄酮类单体化合物进行体外抗肿瘤活性筛选。方法　采用MTT 法观察黄
酮类化合物对SMMC-7721、Hela、A549、MGC-803、MDA-MB-231、LOVO 6种人癌细胞株的影响。结果　黄酮类化合物具有不
同程度的抑制人癌细胞株增殖的作用 ,并有明显的量效关系。结论　镰形棘豆中黄酮类化合物作为抗肿瘤药物具有较
好的开发前景。
关键词:镰形棘豆;黄酮类化合物;癌细胞株;抗肿瘤;MTT法
中图号:R285.5　　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-5005(2009)01-0046-05
　　镰形棘豆 Oxyptropis falcate Bunge为豆科棘豆
属植物 ,主产于青藏高原等地区 ,其药用部位为根
茎或全草 ,主要有抗炎止痛 、清热解毒 、止血等功
效 ,藏医在临床上使用广泛 ,是多种藏药复方或藏
成药的主要药物 ,享有“草药之王”的称号[ 1] 。目
前 ,对于镰形棘豆药理活性的研究尚处于初步研
究阶段 , 药理实验主要集中于镰形棘豆抗炎镇
痛[ 2] 、止血[ 3]作用的研究 ,未见有其他药理作用的
报道。本实验观察了从镰形棘豆中分离得到的
13个黄酮类单体化合物对 6 种人癌细胞株的细
胞毒作用 ,确定了其中体外抗肿瘤的有效单体成
分。
1　材料
1.1　药材来源
镰形棘豆药材于 2005年 7 月采自青海省共
和县 ,由南京中医药大学药学院陈建伟教授鉴定。
1.2　试药
实验所用 13个黄酮类单体化合物均由本实
验室从镰形棘豆中分离所得[ 4 ,5] , 经熔点测定 、
UV 、1H-NMR和13C-NMR 等确定结构 , HPLC 测定
其纯度均>90.0%;溴化-3-(4 ,5-二甲基-2
-噻唑基)-2 ,5-二苯基四氮唑(MTT ,Amresco);
RPMI-1640培养基(GIBCO);DMEM 培养基;胎牛
血清(杭州四季青生物工程公司);二甲基亚砜
(DMSO ,Amresco)。
化合物名称:a.2 , , 4-二羟基查尔酮;b.7-
羟基二氢黄酮;c.甘草素;d.染料木素;e.山柰
酚;f.乔松素;g.芹菜素;h.异甘草素;i.2-甲氧基
-4-羟基查尔酮;j.异鼠李素;k.白杨素;l.2-羟
基-4-甲氧基查尔酮;m.球松素 。
1.3　样品配制
称取各黄酮类单体化合物适量 ,以二甲基亚
枫(DMSO)助溶 , DMSO 最终浓度为 1.0%。过滤
除菌 ,4℃保存备用。
2　方法
人肝癌细胞株 SMMC-7721 、人宫颈癌细胞株
Hela、人胃癌细胞株 MGC-803购自南京凯基生物
技术发展有限公司;人结肠癌细胞株 LOVO 、人乳
腺癌细胞株 MDA-MB-231由南京医科大学蔡云清
教授惠赠;人肺癌细胞株 A549由南京中医药大学
基础医学院李育老师惠赠 。SMMC-7721 、MDA-
MB-231以及 LOVO 细胞株选用含 10%小牛血清
的 RPMI-1640培养液 ,其余细胞株选用含 10%小
牛血清的 DMEM 培养液 ,于 37℃、5%CO2培养箱
收稿日期:2008-06-13;修稿日期:2008-07-21
基金项目:教育部“春晖”计划(Z2006-1-81003),青海省科技厅基金资助项目(2007-N-534)
作者简介:楼成华(1983-),男 ,浙江诸暨人 ,南京中医药大学 2006级硕士研究生。 ＊通讯作者:025-85811112
—46— 南京中医药大学学报 2009 年 1月第 25 卷第 1 期JOURNALOF NANJINGTCMUNIVERSITY Vol.25 No.1 Jan.2009
DOI :10.14148/j.issn.1672-0482.2009.01.017
中培养至细胞生长至一定密度(1 ×106), 用
0.25%的胰酶消化 ,吹打成单细胞悬液 ,将细胞悬
液接种于96孔板中 ,每孔98μL。37℃,5%CO2培
养箱中培养 ,待 50%以上的细胞贴壁后加药 ,给
药组分别加入 2μL不同浓度的化合物 ,对照组加
入相应的溶剂 ,细胞加药培养 72 h 后 ,每孔加入
10μL 5 mg/mL的MTT溶液 ,继续孵育 4 h 。除去
上清 ,每孔加入 100μL DMSO ,轻轻振荡使甲月赞完
全溶解。用酶标仪在 490 nm 波长处测定吸光度
(OD)值 ,并按下列公式计算其细胞存活率 。
　　细胞存活率(%)=实验组 OD值对照组 OD值×100%。
3　结果
3.1　对人肝癌细胞 SMMC-7721生长的抑制作用
由图 1可知 ,化合物 a、d 、e 、h 、i与 l对人肝癌
细胞 SMMC-7721的生长具有较强的抑制作用 ,并
且显示出明显的剂量依赖关系 ,在最高剂量(20
μg/mL)时 ,药物对细胞的抑制作用最强 ,分别为
68.18%、66.07%、56.69%、66.69%、45.76%与
62.34%。
图 1　对人肝癌细胞 SMMC-7721生长的抑制作用
3.2　对人肺癌细胞 A549生长的抑制作用
由图2可知 ,化合物 a、h 、k与 l对人肺癌细胞
A549的生长具有较强的抑制作用 ,显示出明显的
剂量依赖关系 ,在最高剂量(20 μg/mL)时 ,药物对
细胞的抑制率分别为 91.87%、85.46%、54.43%
与58.19%。其余化合物抑制作用较弱或几乎无
抑制作用 。
3.3　对人结肠癌细胞 LOVO生长的抑制作用
由图 3可知 ,化合物 a、d 、h 、i与 l对人结肠癌
细胞 LOVO具有较强的抑制作用 ,在最高剂量(20
μg/mL)时 ,对细胞的抑制率分别为 94.68%、64.
17%、90.87%与 52.85%。其余化合物抑制作用
较弱或几乎无抑制作用。
3.4　对人宫颈癌细胞Hela生长的抑制作用
由图 4可知 ,化合物 a、b 、d 、h 、k与 l对人宫颈
癌细胞Hela抑制作用较强 ,其在最高剂量(20μg/
mL)对细胞的抑制率分别为 89.57%、69.77%、
74.36%、92.77%、77.39%与 80.04%。
3.5　对人胃癌细胞 MGC-803生长的抑制作用
由图5可知 ,化合物 a、d 、h 、k与 l对人胃癌细
胞MGC-803抑制作用较强 ,其在最高剂量(20μg/
mL)对细胞的抑制率分别为 90.79%、79.83%、
79.38%、78.27%与 71.51%。
3.6　对人乳腺癌细胞 MDA-MB-231生长的抑制
作用
由图 6可知 ,化合物 a、h 、k 、l、m 对人乳腺癌
—47—楼成华 , 等:镰形棘豆中黄酮类化合物抗肿瘤活性的体外实验研究　第 1期
图2　对人肺癌细胞 A549生长的抑制作用
图 3　对人结肠癌细胞 LOVO生长的抑制作用
—48— 南京中医药大学学报 2009年 1 月第 25卷第 1 期
图 4　对人宫颈癌细胞 Hela生长的抑制作用
图 5　对人胃癌细胞MGC-803生长的抑制作用
—49—楼成华 , 等:镰形棘豆中黄酮类化合物抗肿瘤活性的体外实验研究　第 1期
图 6　对人乳腺癌细胞MDA-MB-231生长的抑制作用
细胞 MDA-MB-231抑制作用较强 ,其在最高剂量
(20 μg/mL)对细胞的抑制率分别为 57.32%、
53.05%、67.26%、52.46%与 51.47%。
4　讨论
实验结果表明化合物 a、h 、l对 6种细胞株均
具有较强的抑制作用(最高剂量下抑制率均大于
50%);化合物 d 、k则显示出对大部分癌细胞的抑
制作用(化合物 d对 A549与MDA-MB-231细胞抑
制作用较弱 ,化合物 k则对 SMMC-7721与 LOVO
作用较弱);而化合物 b 、e、i 、m 等则表现为对其中
一种或两种细胞具有较强的抑制活性 ,对某些细
胞则几乎无抑制作用 。
实验结果还显示 , 化合物 a 在最高剂量(20
μg/mL)时 , 药物对 A549 细胞的抑制率达 91.
87%,而化合物 b 、c与 d则几无抑制作用;化合物
l在最高剂量下对癌细胞的抑制率为 58.19%,而
化合物 i在相同剂量下的抑制率仅为 36.60%,证
明化合物的生物活性与其结构密切相关 。
此外 ,不同肿瘤细胞株对同一化合物的敏感
性也各不相同。如化合物 a ,在最高剂量(20 μg/
mL)下 ,对 SMMC-7721 、A549 、LOVO 、Hela 、MGC-803
与MDA-MB-231细胞的抑制率分别为:68.18%、
91.87%、94.68%、89.57%、90.79%与 57.32%。
综上所述 ,黄酮类化合物具有不同程度的抑
制人癌细胞株 SMMC-7721 、Hela 、A549 、MGC-803 、
MDA-MB-231 、LOVO细胞生长的作用 ,并具有一定
的剂量依赖性 。这将为以后进一步进行抗肿瘤机
理的研究奠定了基础 。
参考文献:
[ 1]中华本草编委会.中华本草(藏药卷)[ M] .上海:上海
科技出版社 , 1999.323-324.
[ 2] 魏群 ,贺幼平 , 李经才.镰形棘豆总黄酮甙元对下丘脑
-垂体-肾上腺皮质系统的药理作用[ J] .中华医学杂志 ,
1979 , 59(11):677-680.
[ 3]戴衍朋 , 杨欢 , 童丽 , 等.镰形棘豆止血作用初步研究
[ J] .南京中医药大学学报 , 2008 , 24(2):107-108.
[ 4] 杨欢 , 王栋 , 童丽 , 等.镰形棘豆的化学成分研究(I)
[ J] .中国药学杂志 , 2008 , 43(5):338-340.
[ 5] 杨欢 ,王栋 , 童丽 , 等.镰形棘豆的化学成分研究(Ⅲ)
[ J] .南京中医药大学学报 , 2008 , 24(1):43-44.
(编辑:李伟东)
—50— 南京中医药大学学报 2009年 1 月第 25卷第 1 期