全 文 ：585※营养卫生 食品科学 2008, Vol. 29, No. 11
熊果酸对小鼠体细胞的遗传毒性研究
姜 玮，张博超，卲薇璇，何晓庆，张存花，卢 静 *
(吉林大学军需科技学院食品质量与安全系，吉林 长春 130062)
摘 要：目的：探讨熊果酸对小鼠体细胞的遗传毒性，为其应用提供安全性毒理学评价依据。方法：用
小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核实验，检测小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率；利用小鼠染色体畸变实验，
观察不同浓度的熊果酸致小鼠畸形的数目。结果：小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验显示，熊果酸三个剂
量组的微核发生率均在正常范围内，与阴性对照组比较无显著性差异(p>0.05)，与阳性对照组比较差异显
著(p<0.05)；小鼠染色体畸变实验可见，熊果酸 3 个剂量组的小鼠染色体率均在正常范围内，与阴性对照组
比较无显著性差异(p>0.05)，与阳性对照组比较差异显著(p<0.05)。结论：熊果酸对小鼠体细胞无诱变性。
关键词：熊果酸；骨髓细胞微核试验；染色体畸变实验
Study on Genetic Toxicity of Ursolic Acid to Bone Marrow Cells of Mice
JIANG Wei ，ZHANG Bo-chao，SHAO Wei-xuan，HE Xiao-qing，ZHANG Cun-hua, LU Jing*
(Department of Food Quality and Safety, College of Quartermaster Technology, Jilin University,
Changchun 130062, China)
Abstract：Objective: To investigate the genetic toxicity of ursolic acid to bone marrow cell for its safety. Methods: By
mouse bone marrow polychromatic erythrocyte micronucleus test , the micronucleus rate was measured. Mammalian
bone marrow cell chromosome aberration test was persformed to assess the numbers of deformed chromosome. Results:
The micronucleus rates and numbers of deformed chromosome of different groups of ursolic acid are all negative (compared
with negative control p>0.05, compared with positive control p<0.05). Conclusion: Ursolic acid is nonmutagenic to
somatic cell in mice.
Key words：ursolic acid；bone marrow cell micronucleus test；mammalian bone marrow cell chromosome
aberration test
中图分类号: R114 　 文献标识码：A 文章编号:1002-6630(2008)11-0585-03
熊果酸，又名乌索酸、乌苏酸，属于 α - 香树脂
醇 (α- amyrin)型五环三萜类化合物，为许多中药复方的
主要有效成分之一，主要分布在女贞子、山楂、陆英、
夏枯草、车前草、白花蛇舌草、连翘和苦丁茶等药用
植物中，以游离形式或结合成糖苷存在，据不完全统
计，在自然界已有 34 科 108 种植物中分离得到熊果酸[1]。
目前，熊果酸提取技术及相应的检测技术日臻完善，为
其广泛的应用提供了有利的前提条件。尤其在近几年的
研究中发现熊果酸具有多种生物活性，其在抗癌、防癌
[ 2 -3 ]、保肝[ 4 ]、抗菌、抗病毒[ 5 -6 ]、抗氧化以及降血压、
降血脂、降血糖等方面均有广泛的应用，现在已经成
为食品工业和制药产业研究开发的重点，被认为是毒性
周期短、低毒高效的功能成分。但是，就其抗癌抑制
细胞生长等方面功效来说，熊果酸必然具有一定毒性。
目前，已有研究表明，按寇氏法测得小鼠通过灌胃熊
果酸的 LD50 为 8.33g/kg； 腹腔注射 LD50 为 637mg/kg[4]，
然而，对于熊果酸的其他的毒性指标还鲜有研究报道，
特别是慢性毒性和遗传毒性。本实验就针对熊果酸是否
对小鼠的体细胞有遗传毒性进行了研究考察。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
环磷酰胺(国药准字为H32020857) 江苏恒瑞医药
股份有限公司；吐温 80 大连旅顺化工厂；熊果酸(纯
收稿日期：2008-04-21
作者简介：姜玮(1986-)，女，本科生，研究方向为食品质量与安全。E-mail：jiangwei6891@163.com
* 通讯作者：卢静(1976-)，女，讲师，博士，研究方向为细胞技术在食品毒理学中的应用。E-mail：xlujingI@yahoo.com.cn
2008, Vol. 29, No. 11 食品科学 ※营养卫生586
度为 25%) 江苏吉安市恒诚天然香料油提炼厂，用吐
温 80 配制成悬浮溶液；其他试剂均为分析纯，按国标
要求配制试剂的浓度。
1.2 仪器与设备
MOTIC SFC-18 显微镜 麦克奥迪实业集团有限公
司；AR1140 电子天平 奥豪斯公司；HPX-9162MBE 恒
温箱 上海博迅实业有限公司医疗设备厂。
1.3 方法
1.3.1 小鼠骨髓微核实验
健康成年小鼠，体重 18～20g，按体重随机分为 5
组，3 个实验组为 8330、4156、2028mg/kg。同时设阴
性对照组(吐温 80)和阳性对照组(环磷酰胺，40mg/kg)。
采用经口灌胃 30h 染毒法，于最后一次给药 6h 后，将
受试动物颈椎脱臼处死，立即取出股骨，剪去两骨端
暴露骨髓腔。用 2ml 注射器吸取少量小牛血清冲洗骨髓
腔，推片，自然干燥。甲醇固定 7min，然后用 Giemsa
使用液染色 1 5 m i n，晾干。在油镜下，观察嗜多染红
细胞(PCE)微核，每只动物至少计数 1000 个嗜多染红细
胞，记录微核数，并计算微核率 [ 7 ]，同时计数嗜多染
红细胞和正染红细胞(NCE)的比例。
1.3.2 小鼠染色体畸变实验
健康成年小鼠，体重 18～2 0g，按体重随机分为
5 组，3 个实验组为 8330、4156、2028mg/kg。同时
设阴性对照组 ( 吐温 8 0 ) 和阳性对照组 ( 环磷酰胺，
40mg/kg)。采用经口灌胃法，于最后一次给药 18h 后，
将受试动物颈椎脱臼处死，处死前 2h 腹腔注射秋水仙
素(4mg/kg)，取出股骨，剪去两骨端暴露骨髓腔，用
2 . 2% 的柠檬酸钠溶液冲洗骨髓，经反复离心处理，最
终制成骨髓悬浮液，经滴片、干燥、固定、染色后。
在油镜下，观察染色体畸变，每只动物至少计数 100 个
分裂中期细胞，记录染色体畸变数，并计算染色体畸
变率 [ 8 ]。
1.4 数据分析软件
运用 SPSS 及 Excel 软件进行数据分析。
2 结果与分析
2.1 小鼠骨髓微核实验结果
2.1.1 小鼠骨髓微核发生率
表1 小鼠骨髓微核发生率
Table 1 Mouse bone marrow cell micronucleus rates of different
dose groups of ursolic acid
组别 剂量(mg/kg)
动物数
(只)
检查PCE
细胞数
微核细胞数
(个)
细胞微核
率(‰) PCE/NCE
阴性对照 _ 5 5000 10 2 1
阳性对照 40 5 5000 120 24 1.1
高剂量 8330 5 5000 11 2.2 0.8
中剂量 4165 5 5000 10 2 0.9
低剂量 2083 5 5000 9 1.8 0.9
由表 1 可以看出， 各组 PCE/NCE比值皆在正常范围
内，因此以上数据皆可用。并且阳性对照组(环磷酰胺)
有较高的小鼠骨髓微核发生率，阴性对照组与熊果酸各
剂量组小鼠骨髓微核发生率都很低。
2.1.2 小鼠骨髓微核实验数据分析
表2 小鼠骨髓微核实验数据多重比较检验结果
Table 2 Results of mutiple comparisons of bone marrow cell
micronucleus rates
注：*.标示在 0.05 水平上差异显著，该数据来源为微核率。
SPSS 分析，方差齐性检验结果 p=0.489 ＞ 0.05，方
差齐性；从方差分析的多重比较表知道，熊果酸的三个
剂量组的微核发生率均在正常范围内，没有呈现剂量反
应关系，与阴性对照组比较无显著性差异(p ＞ 0.05)，各
实验组间也不存在显著差异(p ＞ 0.05)，与阳性对照组比
较差异显著(p ＜ 0.05)。说明本实验中熊果酸无致小鼠骨
髓微核形成的作用。
2.2 小鼠染色体畸变实验结果
2.2.1 小鼠染色体畸变发生率
组别 剂量(mg/kg)
动物数
(只)
检查染色体
数(条)
染色体畸变
数(条)
染色体畸变
率(%)
阴性对照 — 5 500 6 1.2
阳性对照 40 5 500 30 6
高剂量 8330 5 500 7 1.4
中剂量 4165 5 500 6 1.2
低剂量 2083 5 500 5 1
表3 小鼠染色体畸变率
Table 3 Mouse of mammalian bone marrow cell chromosome
aberration rates of different dose groups of ursolic acid
由表 3 可以看出，阳性对照组(环磷酰胺)有较高的
染色体畸变率，阴性对照组与熊果酸各剂量组染色体畸
变率都很低。
2.2.2 小鼠染色体畸变实验数据分析
由 SPSS 分析表可见，熊果酸的 3 个剂量组的染色
体畸变率均在正常范围内，各实验组间也不存在显著差
异(p>0.05)，没有呈现剂量反应关系，经统计学处理与
阴性对照组比较无显著性差异(p>0.05)，与阳性对照组
比较差异显著(p<0.05)。说明本实验中熊果酸无致染色
下限 上限
阴性对照 _22.00000* 0.68702 0.000 _24.0558 _19.9442
高剂量 _0.20000 0.68702 0.998 _2.2558 1.8558
中剂量 0.00000 0.68702 1.000 _2.0558 2.0558
低剂量 0.20000 0.68702 0.998 _1.8558 2.2558
高剂量 21.80000* 0.68702 0.000 19.7442 23.8558
中剂量 22.00000* 0.68702 0.000 19.9442 24.0558
低剂量 22.20000* 0.68702 0.000 20.1442 24.2558
中剂量 0.20000 0.68702 0.998 _1.8558 2.2558
低剂量 0.40000 0.68702 0.976 _1.6558 204558
中剂量 低剂量 0.20000 0.68702 0.998 _1.8558 2.2558
95%置信区间
阴性
对照
阴性
对照
高剂量
均差 标准误差 p值(J)高剂量组
(I)高剂
量组
587※营养卫生 食品科学 2008, Vol. 29, No. 11
体畸变的作用。
表4 小鼠染色体畸变实验数据多重比较结果
Table 4 Results of mutiple comparisons of mouse mammalian
bone marrow cell chromosome aberration rates
注：*.表示在 0.05 水平上差异显著，该分析数据来源为染色体畸变率。
下限 上限
阳性对照 _4.80000* 0.73458 0.017 _8.4627 _1.1373
高剂量 _0.20000 0.31623 1.000 _1.4236 1.0236
中剂量 0.00000 0.28284 1.000 _1.0794 1.0794
低剂量 0.20000 0.20000 0.991 _0.9124 1.3124
高剂量 4.60000* 0.74833 0.017 1.0236 8.1764
中剂量 4.80000* 0.73485 0.017 1.1373 8.4627
低剂量 5.00000* 0.70711 0.021 1.067 8.9330
中剂量 0.20000 0.31623 1.000 _1.0236 1.4236
低剂量 0.40000 0.24495 0.859 _0.9624 1.7624
中剂量 低剂量 0.20000 0.20000 0.991 0.9124 1.3124
阴性对照
阳性对照
高剂量
95%置信区间p值标准误差均差(J)高剂量组
(I)高剂量
组
3 结 论
在小鼠骨髓微核试验中，熊果酸的高、中、低实
验组的微核率处于正常的范围，与阴性对照没有显著性
差异(p ＞ 0.05)，与阳性对照差异显著(p ＜ 0.05)；在小
鼠的染色体畸变试验中，熊果酸的高、中、低实验组
的染色体畸变率处于正常的范围，与阴性对照没有显著
性差异(p ＞ 0.05)，与阳性对照差异显著(p ＜ 0.05)。结
果表明，熊果酸无致小鼠骨髓微核形成和染色体畸变的
作用。小鼠骨髓微核实验和染色体畸变实验是重要的遗
传毒性或致突变性检测实验，可见在 LD 50、1/2LD 50、
1/4LD50 的灌胃剂量(即 8330、4156、2028mg/kg)下，熊
果酸对小鼠的体细胞没有致突变性。
参考文献：
[1] 杨新河, 吕帮玉, 毛清黎. 熊果酸的药理研究进展[J].贵阳中医院学
报, 2006, 28(6): 52-54.
[2] YOUNG H S, CHUNG H Y, LEE C K, et al. Ursolic acid inhibits afla-
toxim BI- induced mutagenicity in a Salmonella assay system[J]. Biol
Pharm Bull, 1994, 17(7) : 990.
[3] HUANG M T, HO C T, WANG Z Y, et al. Inhibition of skin tumorigen
esis by rosemary and its constituents carnosol and ursolic acid[J]. Cancer
Res, 1994, 54(3): 701-708.
[4] 李开泉, 陈武, 熊筱娟, 等. 乌索酸毒性实验研究[J].宜春医专学报,
2001 (13): 54.
[5] 陈国宝, 陈宝田. 番石榴叶提取物体外抗轮状病毒活性成分的研究
进展[J]. 中国医药学报, 2002, 17(8): 502-504.
[6] 许斌, 李莉, 徐焰, 等. 植物消毒剂对悬液中细菌和病毒的灭活作用
[J]. 第三军医大学学报, 2005, 27(9): 907-909.
[7] GB 15193.5 — 2003 骨髓细胞微核试验[S].
[8] GB 15193.5 — 2003 哺乳动物骨髓微核试验[S].