全 文 ：书收稿日期:2012-06-19; 修订日期:2012-12-24
基金项目:国家重点基础研究发展计划课题( No． 2006CB504707)
作者简介:鲁文静( 1988-) ，女( 汉族) ，河南荥阳人，现为西北农林科技大
学生命科学学院硕士研究生，学士学位，主要从事中药质量标准研究工
作．
* 通讯作者简介:陈世忠( 1962-) ，男( 汉族) ，江苏丰县人，现任北京大学
药学院副教授，博士学位，主要从事天然药物研究工作．
白屈菜中多种生物碱含量的高效液相色谱法测定
鲁文静2，罗世恒1，陈世忠1*
(1．北京大学医学部药学院，北京 100191; 2．天津中医药大学中药学院，天津 300193)
摘要:目的 通过测定白屈菜中多种生物碱的含量，以求建立更加完善的白屈菜药材的质量标准。方法 采用反向高效液
相色谱法。色谱柱为 Inertsil ODS － 3( 4． 6 mm × 250 mm) ，流动相为乙腈 － 1%三乙胺水溶液( 23∶ 77，三乙胺水溶液用磷
酸调 pH至 3) ，流速 1 ml /min，柱温: 35℃，检测波长: 274 nm。结果 白屈菜红碱、血根碱、黄连碱分别在 0． 013 4 ～ 0． 252 0
μg，0． 076 0 ～ 0． 684 0 μg，0． 141 6 ～ 2． 548 8 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，r = 0． 9997，0． 9999 和 0． 9999。结论
该方法准确、灵敏、可靠，重复性好，适用于对白屈菜药材的质量评价。
关键词:高效液相色谱法; 白屈菜; 生物碱; 含量测定
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 03． 036
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2013) 03-0601-02
Simultaneous determination of several alkaloids in Chelidonium majus L． by HPLC
LU Wen-jing2，LUO Shi-heng1，CHEN Shi-zhong1*
( 1． School of Pharmaceutlcal Sciences，Peking University，Beijing 100191，China; 2． College of Traditional
Chinese Medicine，Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China)
Abstract: Objective To establish a method for determination of several alkaloids in Chelidonium majus L． and perfect the quality
standard of this kind of traditional Chinese medicine． Methods The ＲP － HPLC method was used with Inertsil ODS － 3 column
( 4． 6 mm × 250 mm) ，and Acetonitrile － 1% triethylamine ( 25∶ 75，adjusted to pH 3 with phosphoric acid) as mobile phase．
The flow rate is 1ml /min，column temperature 35℃ and 274nm as detection wavelength． Ｒesults There were good linear relation-
ships between the masses and the peak areas of Chelerythrine，Sanguinarine，Coptisine in the ranges of 0． 0134 ～ 0． 2520μg( r =
0． 999 7) 、0． 0760 ～ 0． 6840μg ( r = 0． 999 9) and 0． 1416 ～ 2． 5488μg ( r = 0． 999 9) ，respectively． Conclusion The method is
accurate，sensitivite，reliable and can be used repeatedly which is suitable for the quality evaluation of Chelidonium majus L． ．
Key words: HPLC; Chelidonium majus L; Alkaloid; Content Determination
白屈菜为罂粟科植物白屈菜 Chelidonium majus L．的干燥全
草，性苦，凉;有毒，归肺、胃经，具有解痉止痛、止咳平喘的功效，
主要用于治疗胃脘挛痛，咳嗽气喘，百日咳。现代药理研究表明，
白屈菜具有明显的抗菌作用［1］及抗肝细胞毒活性［2］，其总生物
碱具有明显的祛咳止痰作用［3］，白屈菜红碱可诱导细胞凋亡［4］、
抑制肝纤维化［5］等，主要成分为白屈菜红碱、血根碱、黄连碱、小
檗碱、白屈菜碱、四氢黄连碱、原阿片碱等多种生物碱［6］。生物
碱类是白屈菜镇痛止咳平喘的主要成分及药理活性成分，但是关
于该药材定量测定的报道相对较少，且多限于对其总生物碱的含
量测定，考察概念相对模糊。为了建立系统、科学、规范的白屈菜
药材质量评价体系，保障临床用药的准确性，本实验采用反相高
效液相色潽法，建立了同时测定白屈菜药材中白屈菜红碱、黄连
碱、血根碱 3 种主要成分［7］的方法，为制定白屈菜药材的质量标
准提供了科学依据。
1 仪器与试药
岛津 LC － 10A 液相色谱仪(包括 LC － 10ADvp 泵，CTO －
10ASvp柱温箱，SPD － M10Avp 二极管阵列检测器，SIL － HTC 自
动进样器，DGU － 14A 在线脱气机，LC － solution 工作站) (岛津
国际贸易(上海)有限公司) ，KQ － 250DE超声波清洗器(昆山市
超声仪器有限公司) ，电热套(河南豫华仪器有限公司) ，Sartorius
电子天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司) ，AB － 250D SE-
ＲIAL分析天平(Denver Instrument Company)。
乙腈、甲醇(均为色谱纯)天津赛孚瑞科技有限公司，盐酸、
磷酸、三乙胺(均为分析纯)北京化工厂，超纯水为实验室自制。
对照品:白屈菜红碱(纯度≥98． 0%)购自上海同田生物技
术有限公司，血根碱(纯度≥98． 0%)购自四川省维克奇生物科
技有限公司，黄连碱(纯度≥98． 0%)购自天津马克生物技术有
限公司;白屈菜药材 Chelidonium majus L．购自北京，经鉴定为罂
粟科植物白屈菜 Chelidonium majus L．的干燥全草。
2 方法与结果
2． 1 溶液的制备［8］
2． 1． 1 对照品溶液的制备 精密称取白屈菜红碱、血根碱、黄连
碱标准品各适量，加甲醇溶解制成白屈菜红碱为 67． 0μg /ml，血
根碱为 38． 0μg /ml，黄连碱为 70． 8μg /ml的对照品溶液。
2． 1． 2 供试品溶液的制备 取白屈菜粉末(过 3 号筛)约 2． 5 g，
精密称定，置圆底烧瓶中，精密加盐酸 － 甲醇: (0． 5 ∶ 100)50
ml，称定重量，加热回流 1． 5 h，放冷，再称定重量，以盐酸 －甲醇
(0． 5∶ 100)补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液 25 ml，
蒸干，残渣加 50%甲醇使溶解，转移至 10 ml量瓶中，加 50%甲醇
至刻度，摇匀，滤过，取续滤液并经 0． 22 μm微孔滤膜滤过，即得。
2． 2 色谱条件 Inertsil ODS － 3 色谱柱(4． 6 mm × 250 mm) ;柱
温:35℃;流动相:乙腈 － 1%三乙胺水溶液(23∶ 77) (三乙胺水
液用磷酸调 pH值至 3) ;流速:1． 0 ml /min;检测波长:274 nm;进
样量:5 μl。理论塔板数以白屈菜红碱计大于 2 000，白屈菜红
碱。黄连碱和血根碱与相邻色谱峰均基线分离，拖尾因子符合要
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书求。见图 1 ～ 2。
2． 3 线性关系考察 取上述“2． 1． 1”项下的各对照品溶液，分别
以 2，6，10，14，18 μl进样，注入液相色谱仪，测定并记录峰面积。
以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归
计算，得白屈菜红碱、黄连碱和血根碱标准曲线回归方程分别为:
Y = 1． 295 7 × 10 －7 × X + 2． 846 7 × 10 －4，r = 0． 999 7;Y = 3． 375 5
× 10 －7 × X + 2． 155 4 × 10 －3，r = 0． 999 9;Y = 2． 682 8 × 10 －7 × X
+ 6． 031 1 × 10 －3，r = 0． 999 9。
白屈菜红碱、黄连碱、血根碱分别在 0． 013 4 ～ 0． 252 0 μg，
0． 141 6 ～ 2． 5488 μg，0． 076 0 ～ 0． 684 0 μg范围内与峰面积呈良
好的线性关系。
1．黄连碱 2．血根碱 3．白屈菜红碱
图 1 对照品混合溶液的 HPLC图
1．黄连碱 2．血根碱 3．白屈菜红碱
图 2 供试品溶液的 HPLC谱图
2． 4 精密度试验 取白屈菜药材按“2． 1． 2”项下供试品溶液制
备方法和色谱条件重复进样 5 次，测定峰面积。计算样品中白屈
菜红碱、黄连碱和血根碱的 ＲSD值(n = 5)分别为 0． 14%，0． 09%
和 0． 26%，表明仪器精密度良好。
2． 5 稳定性试验 按“2． 1． 2”项下方法处理白屈菜药材样品，分
别于 0，1，2，3，4，5，6，7 h进样，测定上述 3 种成分峰面积，样品中
白屈菜红碱、黄连碱和血根碱峰面积的 ＲSD 值(n = 8)分别为
0． 17%，0． 08%和 0． 27%，供试品溶液在 8 h内稳定性好。
2． 6 重复性试验 取白屈菜药材按“2． 1． 2”项下供试品溶液制
备方法和色谱条件进行 5 次测定，结果血根碱、黄连碱和白屈菜
红碱平均含量分别为 0． 042 5%，0． 3086%，0． 0109%;ＲSD 分别
为 0． 94%，0． 87%，0． 30%。表明本法有良好的重复性。
2． 7 加样回收试验 取同一批样品，研细，精确称取 5 份(分别编
序为 1，2，3，4，5) ，分别加入混合标准品，按“2． 1． 2”项下方法测
定，计算出血根碱、黄连碱和白屈菜红碱平均回收率。结果见
表 1。
2． 8 样品测定 从全国各省份和地区购买 10 批白屈菜药材饮
片，均经鉴定为罂粟科植物白屈菜 Chelidonium majus L．的正品。
按“2． 1． 2”项下方法处理样品，进样量:5 μl，连续进样 3 次，得出
峰面积并计算其平均值，根据回归方程计算含量，并求出每批样
品的平均含量。结果见表 2。
表 1 回收率结果
样品
称样量 /
g
样品中的
含量 /μg
对照品加
入量 /μg
实测值
/μg
加样回收
率(%)
平均回收
率(%)
ＲSD
(%)
白屈菜红碱 1 1． 2505 127． 9 133． 0 273． 7 96． 17
白屈菜红碱 2 1． 2503 127． 0 133． 0 272． 8 95． 49
白屈菜红碱 3 1． 2501 127． 3 133． 0 273． 0 95． 67 95． 89 0． 43
白屈菜红碱 4 1． 2506 127． 2 133． 0 273． 0 95． 66
白屈菜红碱 5 1． 2501 128． 3 133． 0 274． 1 96． 48
黄连碱 1 350． 3 1069． 5 1065． 3 2267． 0 100． 40
黄连碱 2 350． 1 1073． 1 1065． 3 2270． 6 100． 73
黄连碱 3 350． 2 1050． 2 1065． 3 2247． 7 98． 58 100． 51 1． 17
黄连碱 4 350． 0 1078． 2 1065． 3 2275． 7 101． 21
黄连碱 5 350． 3 1082． 6 1065． 3 2280． 1 101． 63
血根碱 1 1． 2502 652． 1 662． 2 1381． 6 98． 48
血根碱 2 1． 2504 668． 0 662． 2 1397． 5 100． 88
血根碱 3 1． 2501 643． 0 662． 2 1372． 5 97． 1 98． 87 1． 57
血根碱 4 1． 2502 648． 1 662． 2 1377． 6 97． 88
血根碱 5 1． 2501 662． 3 662． 2 1391． 8 100． 01
n =5
表 2 市售 10 批样品的含量测定结果 μg
编号 购买地 白屈菜红碱含量 黄连碱含量 血根碱含量
1 北京 0． 01094 0． 296 8 0． 045 49
2 山西 0． 012 57 0． 3565 0． 050 41
3 安徽 0． 033 70 0． 4032 0． 089 53
4 湖北 0． 015 54 0． 3258 0． 053 20
5 吉林 0． 029 04 0． 3617 0． 073 91
6 河北保定 0． 014 27 0． 3547 0． 048 12
7 湖北 0． 0281 4 0． 3596 0． 058 39
8 河北 0． 024 79 0． 3183 0． 066 20
9 江西 0． 031 12 0． 2849 0． 072 38
10 辽宁 0． 027 62 0． 3727 0． 069 34
3 讨论
白屈菜生物碱的提取工艺多采用超声萃取、热浸［9］、乙醇回
流提取［10］等方法，在前期试验中曾比较了盐酸 －甲醇超声提取
和回流提取两种方法，从色谱结果来看，回流提取的效果较好，故
本实验采用盐酸 －甲醇(0． 5∶ 100)加热回流提取方法。
有文献报道［11］采用相似的色谱条件同时测定白屈菜中白屈
菜红碱、小檗碱和血根碱的含量，但在本实验过程中，小檗碱的色
谱响应值很低，分析原因可能为供试品溶液的制备方法不同，文
献采用醇回流提取及萃取方法进行制备，而本实验采用药典规定
的制备方法，可能无法很好的提取其中的小檗碱成分。相应的，
本实验中测得的黄连碱含量很高，与相关文献报道的有差异，也
可能是制备方法的差异造成的。
本实验中测得的黄连碱成分含量远远高于《中国药典》规定
检测的白屈菜红碱，但药典并未收录以黄连碱为白屈菜药材含量
测定的指标，文献中对黄连碱的药理作用、临床使用及含量测定
的研究相对薄弱，在后续试验中可对黄连碱进行整体研究，为制
定更加合理有效的白屈菜质量控制方法提供理论依据。
2010年版《中国药典》规定白屈菜含量测定以药材中所含白
屈菜红碱的量为指标，即白屈菜红碱含量不少于 0． 02%，以该指
标检验上述试验中的 10 批市售药材可得出其中有 4 批药材不符
合《中国药典》的规定，说明市场上销售的白屈菜药材质量良莠
不齐，有必要制定合理的方法规范药材的质量。
本实验在 2010 版《中国药典》的基础上开发了一个同时测
定白屈菜中白屈菜红碱、黄连碱和血根碱的 ＲP － HPLC 方法，并
通过方法学考察，证明该方法重复性良好，回收率较高，且在该色
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时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 3 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 3
书谱条件下，进样精密度良好，故该法结论可靠，可作为白屈菜药材
的质量控制方法。
参考文献:
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［10］ 于 敏，焦连庆，陈红卫，等．正交试验法优选白屈菜药材醇提工艺
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血根碱、小檗碱和白屈菜红碱的含量［J］．药物分析杂志，2008，28
(6) :903．
收稿日期:2012-07-09; 修订日期:2012-12-24
基金项目:黑龙江省哈尔滨市科技创新人才研究专项基金
( No． 2012ＲFQXS040) ;
教育部博士学科点专项科研基金( No． 20112327110009)
作者简介:王 锐( 1977-) ，男( 汉族) ，黑龙江哈尔滨人，现任黑龙江中医
药大学药学院副教授，硕士研究生导师，硕士学位，主要从事新药研发及
新剂型研究工作．
* 通讯作者简介:王艳宏( 1972-) ，女 ( 汉族) ，黑龙江哈尔滨人，现任黑龙
江中医药大学药学院教授，硕士研究生导师，博士学位，主要从事新药研
发及新剂型研究工作．
超声法联合表面活性剂
提取蛇床子中蛇床子素的研究
王 锐，杨 婧，谢国梁，姜霁铭，王艳宏*
(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)
摘要:目的 考察在超声法和表面活性剂联合应用下提取蛇床子中蛇床子素的最佳工艺条件。方法 以蛇床子素的提取
率为指标，通过正交实验优化提取工艺。并对比超声法联合表面活性剂与单用超声法或回流提取法的提取率差异。结
果 超声法联合表面活性剂的提取效果优于其他两种方法。结论 超声法联合对蛇床子素的提取具有方法简便，收率高
等特点。
关键词:蛇床子; 蛇床子素; 表面活性剂; 超声提取
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 03． 037
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标识码:B 文章编号:1008-0805( 2013) 03-0603-02
中药蛇床子为伞形科植物蛇床 Cnidium monnieri (L．)Cuss．
的干燥成熟果实，具有温肾壮阳、祛风、燥湿及杀虫之效，主治阳
痿、宫冷、寒湿滞下和妇人瘙痒等。目前研究表明，其化学成分比
较复杂，除挥发油外，主要为蛇床子总香豆素(Total coumarins of
Fructus Cnidii，TCFC )。其中主要以蛇床子素(osthol)和欧前胡
素(imperatorin)为主［1］。笔者将传统的超声法和回流法进行改
进，采用在含有表面活性剂的醇溶液中进行超声提取蛇床子中的
总香豆素［2］，并通过测定其中蛇床子素的含量，以提取率为指标
通过正交试验得到最佳的提取工艺。
1 仪器与材料
2695 型高效液相色谱仪，2996 型检测器，Empower 工作站
(美国 Waters公司) ;KQ －250B 型超声波清洗器(昆山市超声仪
器有限公司) ;蛇床子(购自哈药集团世一堂中药饮片有限责任
公司，经鉴定符合《中国药典》2010 年版规定) ;蛇床子素对照品
(中国药品生物制品检定所，批号:201004) ;甲醇(美国迪马公
司) ;活性炭(国药集团化学试剂有限公司)。
2 方法
2． 1 测定方法的建立
2． 1． 1 色谱条件
色谱条件色谱柱 DiamonsilC18(5 μm，250 mm × 4． 6 mm) ;流
动相为甲醇 －水(80∶ 20) ;柱温 30 ℃;流速 1 ml /min;测定波长
323 nm。色谱图见图 1。
图 1 蛇床子素标准品
2． 1． 2 标准曲线的制备 精密称取蛇床子素对照品 1． 0 mg，置
25ml容量瓶中，用甲醇定容并制成浓度为 40． 0 μg·ml －1对照品
储备液。分别精密吸取上述对照品储备液 0． 1，0． 5，1，1． 5，2，2． 5
ml，置 5 ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，用 0． 22 μm微孔滤
膜过滤。精密吸取上述续滤液各 20μl，依次注入高效液相色谱
仪，测得峰面积。以峰面积(A)为纵坐标，其浓度(C)为横坐标，
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 3 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 3 期