全 文 ：北方园艺 2009(6):81～ 83 ·研究简报 ·
楔 叶 茶 藨 组 织 培 养 研 究
李金 英1 , 张 志东1 , 李 亚东1 , 吴 　林1 , 宋宏 伟2
(1.吉林农业大学园艺学院,吉林 长春 130118;2.吉林省农业科学院,吉林 长春 130033)
　　摘　要:试验采用楔叶茶藨水培新梢为外植体 ,进行了组织培养研究 ,成功的建立了无性繁
殖体系 ,即初代培养基:MS+BA 1.0 mg/L+IBA 0.1 mg/ L;增殖培养基:MS+BA 1.0 mg/L+
IBA 0.1～ 0.2 mg/L+GA 30.25～ 0.5 mg/ L。
关键词:楔叶茶藨;组织培养
中图分类号:S 793.04　文献标识码:A　文章编号:1001-0009(2009)06-0081-03
　　楔叶茶藨(Ribes diacantha Pall)是茶藨子属(Ribes
L.)虎耳草科(Saxif ragaceae)植物 ,全世界约150种 ,资源
非常丰富[ 1] 。茶藨子属植物主产于北半球寒带至温带 ,
少数种延伸到亚洲的亚热带和南美洲的安第斯山 ,非洲
仅2种 ,分布于阿特拉斯山 ,我国约50种 ,主产西南、西
北至东北 ,其中有些供观赏用 ,有些种的浆果可食[ 2] 。
楔叶茶藨高 1 ～ 2 m ,中生灌木 ,叶片有光泽 ,叶基楔形 ,
花绿黄色 ,浆果球形 ,红色 ,具有观赏性 ,果实可食 ,雌雄
异株。产量低 ,抗寒性好 ,可作育种原始材料 ,主要生长
于内蒙古东部及朝鲜 、蒙古 、原苏联(西伯利亚远东)地
区[ 3-4] 。茶藨属植物虽然资源十分丰富 ,但除对黑穗醋栗
第一作者简介:李金英(1978-),女,吉林舒兰人,硕士 ,研究方向为
果树生物技术。E-mail:yuxinlijinying@yahoo.com.cn。
通讯作者:张志东(1962-),男, 黑龙江省肇源县人 ,硕士 ,教授, 研
究方向为果树生物技术。 E-mail:cur rant1985@163.com。
基金项目:吉林省科技厅资助项目(20040701-1);农业部 948 重点
资助项目(2006-G25);科技部资助项目(2005DKA21002-25)。
收稿日期:2008-12-27
(Ribes nigrum L.)等少数栽培品种有组培研究[ 5-8]外 ,对
一些野生种基本没有相关研究报道。该试验以楔叶茶
藨为试材 ,对其初代培养物建立、继代增殖培养进行了
研究 ,旨在探讨楔叶茶藨组培过程中的主要影响因素 ,
建立离体无性系 ,为楔叶茶藨快速繁殖技术体系的建立
提供依据。该研究结果将对茶藨属植物新野生种的组
培技术研究提供重要的参考价值和借鉴意义 ,也为利用
楔叶茶藨组培苗进行转基因技术的应用研究提供了科
学参考。
1　材料与方法
1.1　材料
楔叶茶藨外植体采自吉林农业大学小浆果园。
1.2　方法
除特殊处理外 ,外植体均来自越冬枝条在室内水培
后萌发出的新梢 ,外植体长度为 1.0 ～ 2.0 cm ,试验中外
植体材料表面消毒方法均为:用适量洗涤剂浸洗数分钟
后 ,在流水下冲洗 30 min ,在超净工作台上用消毒药剂
进行表面消毒后 ,用无菌水冲洗 3 ～ 4 次 ,每次至少
3 min。除消毒时间试验处理所接种的外植体数不同外 ,
[ 9] 　郑晓英 ,连雯.提高香蕉试管苗的质量和生产效益的研究[ J] .福建农 业大学学报, 1995 , 24(4):405-409.
The Study of Mass-produced Techonology Tissue Culture on Banana
SHAN Qin-li1 ,ZHAO Hui1 , ZHANG Fu-dou2
(1.Research of Food Crops Institute , Yunnan Academy of Agricultural Sciences , Kunming , Yunnan 650205 , China;2.Agricultural Environment
and Resource Research Institute , Yunnan Academy of Agricultural Sciences , Kunming , Yunnan 650205 , China)
Abstract:The technology and flow of production on tissue culture of young banana plant w as introduced systematically in
this article , and some common problem and how to resolve it in the young banana plant mass-produced procedure was an-
alysed and discussed.Aim to reduce the cost of production and optimize the flow of production , the authors did provide
a set of technical project so as to further improve the quality of young banana plant and the production efficience.
Keywords:Banana;Tissue culture;Produce;Technology
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其它试验每个处理接种 30瓶 ,每瓶接种一个外植体。
每个调查项目的数据均取平均值 ,以MS为基本培养基 ,
附加激素 BA 1.0 mg/L+IBA 0.1 mg/ L。30 d后调查
统计污染率 、成活率和死亡率等指标。增殖培养试验采
用的基本培养基均为 MS培养基 ,除多种激素组合比较
试验外 ,增殖均以 MS+BA 1.0 mg/L+IBA 0.1 mg/ L
为基本培养基。采用高度大于 0.5 cm、生长状态基本一
致的组培苗。随时观察组培苗的生长变化情况 ,30 d后
调查和统计增殖倍数 、污染率 、死亡率等指标。
2　结果与分析
2.1　影响楔叶茶藨离体初代培养的因素
2.1.1　抗生素对楔叶茶藨离体初代培养的影响　抗生
素是生物代谢的产物 ,一般是通过阻断微生物的正常代
谢途径使微生物致死。通过向培养基中添加抗生素可
防止植物材料内部的内生细菌[ 9] 。针对楔叶茶藨离体
初代培养中污染比较严重的问题 ,对材料使用了抗生素
进行消毒。由表1可知 ,楔叶茶藨外植体使用抗生素消
毒的处理与对照相比 ,材料的污染率有不同程度的降
低 ,成活率明显提高。其中用庆大霉素 100 mg/L 溶液
处理接种材料 30 min后 ,再用0.1%升汞消毒 8 min ,其
效果比较理想 ,污染率仅为 10%,成活率达 80%,并且使
用这种处理后 ,并未发现庆大霉素对组培苗的增殖和生
长产生毒害作用。另外 ,使用抗生素的 3个处理的死亡
率分别为 5%、10%、10%,而对照的死亡率为 0 ,说明抗
生素对离体材料也有一定的伤害 ,因此使用时要注意选
择适宜浓度。
2.1.2　外植体采集时间对楔叶茶藨离体初代培养的影
响　由图 1可以看出 ,6 ～ 9月份 ,接种外植体的污染率
和死亡率普遍较高 ,而其它时期接种效果相对较好。分
析原因是夏季高温多雨 ,接种材料容易污染 ,而秋 、冬季
节各方面条件比较适宜材料的接种与培养。由此看来 ,
正确选择接种时期是组培成功的重要因素之一。
图 1　接种时间对楔叶茶藨外植体初代培养污染的影响
2.1.3　外植体来源对楔叶茶藨初代培养的影响　植物
的生长环境不同 ,其组织表面及内部带菌情况存在很大
的差异。对田间 、温室和室内水培的楔叶茶藨新梢进行
初代培养的研究结果表明(图2),用 0.1%升汞对不同来
源的楔叶茶藨材料消毒 8 min ,初代培养的效果差异很
大。其中水培的外植体污染率较低 ,成活率较高 ,组培
效果最好;田间采集的外植体污染率最高 ,温室次之。
　　表 1 抗生素对楔叶茶藨外植体初代培养的影响
处理 污染率/ %死亡率/ %成活率/ %
青霉素100 mg/L 30 min+0.1%升汞8 min 30 5 65
庆大霉素100 mg/ L 30 min+0.1%升汞8 min 10 10 80
链霉素100 mg/L 30 min+0.1%升汞8 min 40 10 50
0.1%升汞8 min(CK) 55 0 45
2.1.4　继代培养时期对楔叶茶藨初代培养的影响　由
图 3看出 ,继代过程中组培苗污染率的高低与继代培养
时期有很大的关系。6 ～ 9月份进行继代的组培苗污染
率明显高于4 ～ 5月份和 10 ～ 12月份。可能是 6 ～ 9月
环境中的微生物密度大 ,从而造成的污染问题比较严
重 ,因此 ,在此时期要特别注意环境的控制 ,以降低污
染率。
　　　　　　图 2　材料来源对楔叶茶藨初代培养的影响 图 3　继代培养时期对楔叶茶藨组培苗生长的影响
2.2　影响楔叶茶藨组培苗增殖培养的因素
2.2.1　赤霉素(GA3)对楔叶茶藨组培苗增殖的影响　
针对楔叶茶藨组培苗在MS+BA 1.0 mg/L 培养基中节
间短 、生长缓慢问题 ,采用在原培养基中加入不同浓度
的 GA3处理 ,研究了 GA3对楔叶茶藨组培苗生长的影
响。从图 4看出 ,楔叶茶藨增殖倍数随着 GA3浓度的增
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加逐渐降低 ,但苗高呈增高趋势。赤霉素对楔叶茶藨组
培苗苗高有很大的影响 ,而对照中的组培苗虽然增殖倍
数略高 ,但平均苗高均≤1.0 cm ,而在 0.25 ～ 1.5 mg/ L
赤霉素作用下 ,组培苗苗高均高于对照 ,平均苗高可达
1.0～ 1.5 cm ,说明GA3具有促进组培苗伸长的作用 ,但
对增殖并没有明显的促进作用 ,并且GA 3浓度超过 1.0
mg/L 以后会抑制楔叶茶藨组培苗增殖生长。适宜组培
苗增殖培养的GA 3浓度为 0.25～ 0.5 mg/L。
　　　图 4 GA3对楔叶茶藨组培苗增殖倍数与苗高的影响　　　　　　　图 5　外源植物激素对楔叶茶藨组培苗增殖的影响
2.2.2　细胞分裂素 BA与不同生长素对楔叶茶藨组培
苗增殖的影响　增殖速度是影响植物组培快繁的重要
因素。通常采用细胞分裂素来调节组培苗繁殖速度。
在组培增殖过程中 ,不同植物种类对激素的种类和浓度
的反应不同。试验过程中发现 ,在不同浓度的 NAA中
组培苗基部愈伤化比较严重 ,在0.1～ 0.3 mg/ L IAA中
组培苗增殖效果较好 ,但苗生长缓慢 ,在 0.1 ～ 0.2 mg/ L
IBA中组培苗长势较好。综合考虑 ,楔叶茶藨较为适宜
的增殖培养基为 MS+BA 1.0 mg/L +IBA 0.1 ～ 0.2
mg/ L。
3　小结
楔叶茶藨初代培养过程中外植体最佳的消毒方法
是用 0.1%的升汞+2滴吐温消毒 8 min ,或者在 0.1%
升汞水溶液消毒前用庆大霉素 100 mg/ L水溶液浸泡楔
叶茶藨茎段 30 min ,污染率可以控制在 10%～ 55%以
下。另外 ,水培外植体组培效果好 ,且采集组培材料宜
在秋 、冬季进行。楔叶茶藨组培苗在 4 ～ 5月和 10 ～ 12
月期间继代增殖培养污染率低 ,成活率高 ,适宜的增殖
培养基为 MS+BA 1.0 mg/L+IBA 0.1 ～ 0.2 mg/L+
GA 30.25 ～ 0.5 mg/ L。
参考文献
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Study on Tissue Culture of Ribes diacantha Pall
LI Jin-ying1 ,ZHANG Zhi-dong1 , LI Ya-dong1 , WU Lin1 , SONG Hong-wei2
(1.College of Horticulture, Jilin Ag ricultural University , Changchun , Jilin 130118 , China;2.Jilin Academy of Ag ricultural Sciences , Changchun ,
Jilin 130033 , China)
Abstract:The new shoots from water cultured branches of Ribes diacantha Pall were taken as experiment.The optimum
media for initiating ,proliferating , and rooting cluture were established.The initial culture medium of Ribes diacantha Pall
was MS supplemented with BA 1.0 mg/ L and IBA 0.1 mg/ L;The experiment of bud multiplication showed that:the
best sub-culture medium for it in vitro was MS medium containing BA 1.0 mg/L , IBA 0.1～ 0.2 mg/L and GA 30.25～
0.5 mg/L.
Keywords:Ribes diacantha Pall;Plant tissue culture
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