全 文 ：北方园艺２０１２（２３）：１２５～１２８ ·生物技术·
第一作者简介：蒲仕明（１９８７－），男，四川南充人，在读硕士，研究方
向为细胞生物学和干细胞生物学。Ｅ－ｍａｉｌ：ｐｕｓｈｉｍｉｎｇ７７＠
１６３．ｃｏｍ．
责任作者：李荣峰（１９８０－），女，广西灵川人，硕士，讲师，现主要从
事植物生理生态和微生物及发酵研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ａｎｎｙ１１１９５２０
＠１２６．ｃｏｍ．
基金项目：广西高等学校生物技术特色专业建设资助项目
（ＧＸＴＳＺＹ２２４）；广 西 自 然 科 学 青 年 基 金 资 助 项 目
（２０１１ＧＸＮＳＦＢ０１８０４４）。
收稿日期：２０１２－０７－３０
燕子掌的组织培养与植株再生
蒲 仕 明１，２，李 荣 峰１，方 利 娟１，兰 翠 玲１，周 祖 平２
（１．百色学院 化学与生命科学系，广西 百色５３３０００；２．广西师范大学 生命科学学院，广西 桂林５４１００４）
　　摘　要：以燕子掌叶片为外植体，在培养基中添加不同浓度的６－ＢＡ和ＩＢＡ，研究燕子掌组培
苗形成过程中６－ＢＡ和ＩＢＡ浓度对各阶段的影响。结果表明：ＭＳ＋ＩＢＡ　５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　５ｍｇ／Ｌ
为愈伤组织诱导的最佳培养基，分化不明显，且诱导率为９５．５６％；ＭＳ＋ＩＢＡ　２ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ
１ｍｇ／Ｌ为外植体直接诱导不定芽的最佳培养基，平均可达１２芽以上；ＭＳ＋ＩＢＡ　５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ
５ｍｇ／Ｌ为愈伤组织增殖最佳培养基，增殖倍数为１０．９；愈伤组织分化的最佳培养基为 ＭＳ＋ＩＢＡ
１ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　５ｍｇ／Ｌ，单位面积芽数为３２个以上，且芽明显；壮苗的最佳培养基为 ＭＳ＋ＩＢＡ
２ｍｇ／Ｌ，４５ｄ后平均苗长为４．７４ｃｍ；诱根的最佳培养基为ＭＳ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ，诱根率为１００％。
关键词：燕子掌；愈伤组织；增殖；不定芽；球状胚体
中图分类号：Ｓ　６８１．９０３．６　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１２）２３－０１２５－０４
　　燕子掌（Ｃｒａｓｓｕｌａ　ａｒｇｅｎｔｅａ　Ｔｈｕｎｂ）为景天科青锁龙
属多年生多肉植物，中文别名金钱树、花月、玉树、玉树
景天等［１］。它原产南非较干旱地区，现我国南北各地均
有栽培，其体态极为俊美，可作树桩盆景［２］。燕子掌在
室内的滞尘能力很强，单位面积滞尘量比一般植物高；
对室内的ＣＯ、ＣＯ２、过氮氧化物的吸收能力强；对室内苯
和甲醛有很高的净化率［３－５］。燕子掌还是很好的试验材
料，常用于表皮细胞及气孔，不定根等实验教学材料［６－７］。
此外，燕子掌的提取物中含有多种有效化合物，如β?谷
甾醇、Ｄ－甘露醇、氯化钾、氯化钠的混合体、３－甲基－２－丁烯
基异胍等，临床实验证明燕子掌提取物对Ⅱ型糖尿病及
并发症的治疗效果好［８］。经过多年的研究开发，“燕子
掌中药材及其制剂”申报国家新药前的科研工作已基本
完成，这预示将需求大量的燕子掌作为原料供药品加工
生产使用。
目前，燕子掌组织培养的报道仅有１篇，Ｌｉｕ　Ｙ　Ｌ
等［９］燕子掌的茎、叶、根为外植体，通过直接分化为芽，再
壮苗、生根，形成组培苗。燕子掌不仅具极高的观赏价
值和净化空气的能力，而且其提取物具有药用价值。我
国的野生燕子掌并不多见，燕子掌的需求正成为一个突
出的问题。通过如扦插、叶片分化出苗等无性繁殖并不
理想［１０］，这些传统的繁殖并不能满足人们对幼苗需要。
为了得到更多的燕子掌幼苗，以燕子掌叶为外植体，采
用不同激素组合进行愈伤组织的诱导、增殖、分化、不定
芽壮苗、不定苗生根，探讨不同激素组合对试管苗形成
的影响，以期建立高效的再生体系。
１　材料与方法
１．１　试验材料
选用２０１０年１２月生长在广西百色学院校内的３龄
燕子掌（图１Ａ），采中等年龄、肥厚的，且健康无裂痕的叶
片。愈伤组织诱导与增殖培养基均以 ＭＳ为基本培养
基。附加不同浓度的激素，其中蔗糖为３０ｇ／Ｌ，琼脂为
７ｇ／Ｌ。培养于恒温２５℃，恒湿７０％，光照强度为
２　０００ｌｘ，光照时间为１３ｈ／ｄ的人工气候培养箱
（Ｂ２０４ＬＥＤＲ　ＩＮＰＵＴ）中。
１．２　试验方法
１．２．１　外植体取材与消毒　将采集回来的燕子掌叶片
放入大烧杯中，加入洗涤剂浸洗５ｍｉｎ，在清洗时用毛笔
轻轻的刷洗叶片表面的灰尘，但不能刷伤叶片表皮，随
后再用流水冲洗１０ｍｉｎ后带入超净工作台上。先用体
积分数为７５％的酒精浸１５ｓ后，迅速用无菌水冲洗１
次，再用浓度为０．１％的ＨｇＣｌ２浸泡５ｍｉｎ，后迅速用无
菌水冲洗４次，即获得无菌材料。
１．２．２　叶诱导愈伤组织或不定芽　用手术刀先将叶柄
伤口前０．５ｃｍ的叶柄切去，然后把叶片边缘切去，仅留
下叶脉周围的１ｃｍ宽的叶片。最后再将它横段成１ｃｍ２
５２１
·生物技术· 北方园艺２０１２（２３）：１２５～１２８
的小块。将外植体横放到附加了不同浓度激素的培养
基中，并将其按到培养基内约外植体厚度一半的深度
（图１Ｂ），用来诱导愈伤组织或不定芽。
１．２．３　愈伤组织的增殖　选择长势很好的愈伤组织，并
将其切成大小基本相同的若干块，随机抽取２０块在烘
箱中烘干。并称得其重量，计算出平均每一块的平均质
量（ｍ）。将余下的愈伤组织随机接种到不同配比的ＩＢＡ
和６－ＢＡ的ＭＳ培养基。培养４０ｄ后，取出愈伤组织烘
干，并称得其重量，计算出每个方案的平均质量（Ｍ）。计
算出增重倍数（Ｉ）。
１．２．４　愈伤组织的分化　选择长势很好的愈伤组织，并
将其切成大小基本相同的若干块，分别接种于不同生长
素和细胞分裂素的 ＭＳ培养基上，培养３０ｄ后，计算出
分化出的平均芽数。
１．２．５　不定芽的壮苗　选择已经分化的不定芽，将其接
种到不同生长素的 ＭＳ培养基中，培养４５ｄ后，随机从
每个方案中各取２０株测得其不定苗的平均长度。
１．２．６　不定苗的生根　选择壮苗后的不定苗，将其分切
成单个的苗，后接种到不同生长素的ＭＳ培养基中，培养
３０ｄ后，统计生根率。
２　结果与分析
２．１　不同浓度激素对燕子掌叶诱导愈伤组织和不定芽
的影响
将无菌材料接种到不同浓度激素的 ＭＳ培养基中
进行愈伤组织的诱导。接种４０ｄ左右，部分外植体的切
面处开始形成愈伤组织（图１Ｃ），为乳白色粒状，随后逐
渐长成大颗粒状；后有部分愈伤组织出现分化现象，即
出现球状胚体；随后，部分球状胚体的２个叶片分开，出
现不定芽。由于培养基激素组合与浓度配比不同，对
叶片愈伤组织和不定芽的诱导结果差异较大。由表
１可知，在相同浓度的６－ＢＡ，随ＩＢＡ浓度从１～５ｍｇ／Ｌ
之间的递增时，诱导率升高；当ＩＢＡ浓度为５ｍｇ／Ｌ时，
诱导率最高，随ＩＢＡ浓度从５～１０ｍｇ／Ｌ之间的递增时，
诱导率有所下降。但当６－ＢＡ为１０ｍｇ／Ｌ时，随ＩＢＡ浓
度从１～１０ｍｇ／Ｌ之间的递增时，诱导率下降，说明６－ＢＡ
为１０ｍｇ／Ｌ时激素浓度太高。在ＩＢＡ相同的情况下，当
６－ＢＡ浓度从１～５ｍｇ／Ｌ之间的递增时，诱导率升高；当
６－ＢＡ浓度为５ｍｇ／Ｌ时，诱导率最高；当６－ＢＡ从５～
１０ｍｇ／Ｌ之间的递增时，诱导率有所下降，说明６－ＢＡ的最
佳浓度为５ｍｇ／Ｌ。
由表１还可知，当ＩＢＡ浓度≥６－ＢＡ时或当６－ＢＡ的
浓度≤２ｍｇ／Ｌ时，诱导出的愈伤组织很快就分化出球状
胚体，以后逐渐分化成不定芽。在当ＩＢＡ在１～５ｍｇ／Ｌ
和６－ＢＡ在１～２ｍｇ／Ｌ时，愈伤组织很快分化出不定芽，
平均每个外植体分化的芽的数目都在７个以上，其中当
ＩＢＡ为２ｍｇ／Ｌ，６－ＢＡ为１ｍｇ／Ｌ时，平均每个外植体分化
的芽数目最多，均为１２个以上。故ＭＳ＋ＩＢＡ　２ｍｇ／Ｌ＋
６－ＢＡ　１ｍｇ／Ｌ为燕子掌叶片诱导不定芽的最佳培养基。
由表１可知，当ＩＢＡ浓度小于６－ＢＡ时，外植体诱导出的
愈伤组织很难分化或只有少量的愈伤组织分化成不定
芽，而长期保持在愈伤组织状态。当ＩＢＡ和６－ＢＡ都为
５ｍｇ／Ｌ时，诱导愈伤组织的能力最强，诱导率为
９５．５６％。故燕子掌叶片诱导愈伤组织的最佳培养基为
ＭＳ＋ＩＢＡ　５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　５ｍｇ／Ｌ。
　　表１ 不同浓度激素配比对燕子掌愈伤组织和芽诱导的影响
　　Ｔａｂｌｅ　１ Ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ　ｅｆｅｃｔ　ｏｎ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆ　ｃａｌｕｓ　ｏｆ　Ｃｒａｓｓｕｌａ　ａｒｇｅｎｔｅａ
编号
Ｎｏ．
ＩＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
６－ＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
接种瓶数
Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｂｏｔｔｌｅｓ
ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ
污染瓶数
Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｐｏｌｕｔｉｏｎ
ｂｏｔｔｌｅ
诱导瓶数
Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｉｎｄｕｃｅｄ
ｂｏｔｔｌｅｓ
诱导率
Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
／％
诱芽情况／平均芽数
Ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｕｄ　ｓｉｔｕａｔｉｏｎ
／Ａｖｅｒａｇｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｂｕｄ
诱导愈伤组织情况
Ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ
１　 １　 １　 ５０　 ２　 ３９　 ８１．２５ ＋＋＋／１０ －
２　 １　 ２　 ５０　 ３　 ４１　 ８７．２３ ＋＋／７ ＋
３　 １　 ５　 ５０　 ２　 ４４　 ９１．６７ － ＋＋＋
４　 １　 １０　 ５０　 ４　 ２０　 ４３．４８ － ＋＋
５　 ２　 １　 ５０　 ５　 ３９　 ８６．６７ ＋＋＋／１２ －
６　 ２　 ２　 ５０　 ３　 ４２　 ８９．３６ ＋＋／７ ＋
７　 ２　 ５　 ５０　 ３　 ４３　 ９１．４９ － ＋＋＋
８　 ２　 １０　 ５０　 ２　 ２１　 ４３．７５ － ＋＋
９　 ５　 １　 ５０　 ４　 ３９　 ８４．７８ ＋＋＋／１１ －
１０　 ５　 ２　 ５０　 １　 ４６　 ９３．８８ ＋＋／７ ＋
１１　 ５　 ５　 ５０　 ５　 ４３　 ９５．５６ － ＋＋＋
１２　 ５　 １０　 ５０　 ３　 １３　 ２７．６６ － ＋
１３　 １０　 １　 ５０　 ４　 ２６　 ５６．５２ ＋／３ －
１４　 １０　 ２　 ５０　 ４　 ２４　 ５２．１７ ＋／３ －
１５　 １０　 ５　 ５０　 ２　 １３　 ２７．０８ ＋／１ －
１６　 １０　 １０　 ５０　 １　 ７　 １４．２９ ＋／ －
　　注：诱导率＝诱导数／（接种数－污染数）×１００％，诱芽情况与诱导愈伤组织为相对比例，当诱芽情况全部为芽为“＋＋＋”，芽为主，愈伤组织少则为“＋＋”，无芽出现用“－”
表示；当诱导愈伤组织情况中无愈伤组织时用“－”表示，少量愈伤组织出现用“＋”，大量或全部为愈伤组织时用“＋＋＋”表示。
２．２　愈伤组织的增殖
经过４０ｄ培养，计算得到增重倍数。由表２可知，
在６－ＢＡ浓度相同的情况下，随着ＩＢＡ从１～５ｍｇ／Ｌ之
间递增，培养后质量（Ｍ）、增重倍数（Ｉ）都随之递增；当
６２１
北方园艺２０１２（２３）：１２５～１２８ ·生物技术·
ＩＢＡ为５ｍｇ／Ｌ时，有最大增重倍数。但当随着ＩＢＡ浓
度增加，愈伤组织的增重越来越不明显。在ＩＢＡ浓度一
定的情况下，随着６－ＢＡ从２～５ｍｇ／Ｌ之间递增，培养后
质量（Ｍ）、增重倍数（Ｉ）都随之递增；当６－ＢＡ为５ｍｇ／Ｌ
时，有最大增重倍数。试验并未设置６－ＢＡ浓度＞５ｍｇ／Ｌ
的方案，因为在愈伤组织诱导试验中，高６－ＢＡ浓度＞
５ｍｇ／Ｌ的方案出现外植体坏死。因此，愈伤组织（图１Ｄ）
在ＭＳ＋ＩＢＡ　５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　５ｍｇ／Ｌ进行增殖，经过４０ｄ
的传代培养，愈伤组织增重１０．９倍，为愈伤组织增殖的
最佳培养基。
表２　不同浓度激素配比对愈伤组织增殖的影响
　　Ｔａｂｌｅ　２ Ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ
ｈｏｒｍｏｎｅ　ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｌｕｓ
编号
Ｎｏ．
ＩＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
６－ＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
接种瓶数
Ｎｕｍｂｅｒ
ｏｆ　ｂｏｔｔｌｅｓ
ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ
接种前质量
Ｂｅｆｏｒｅ
ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ
ｗｅｉｇｈｔ／ｇ
培养后质量
Ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｆｔｅｒ
ｔｈｅ　ｗｅｉｇｈｔ
／ｇ
增重倍数
Ｗｅｉｇｈｔ
ｇａｉｎ　ｏｆ
ｍｕｌｔｉｐｌｅｓ
１　 １　 ２　 ２０　 ０．０２１７　 ０．２００２　 ９．２２６
２　 ２　 ２　 ２０　 ０．０２１７　 ０．２１１５　 ９．７４７
３　 ５　 ２　 ２０　 ０．０２１７　 ０．２１２１　 ９．７７４
４　 １　 ５　 ２０　 ０．０２１７　 ０．２１４　 ９．８６２
５　 ２　 ５　 ２０　 ０．０２１７　 ０．２３６１　 １０．８８０
６　 ５　 ５　 ２０　 ０．０２１７　 ０．２３６６　 １０．９０３
　　注：增重倍数（Ｉ）＝培养后质量（Ｍ）／接种前质量（ｍ）。
２．３　愈伤组织的分化
经过３０ｄ的培养，观察并记算每个方案的平均芽
数。由表３可知，当ＩＢＡ一定时，随着６－ＢＡ浓度从１～
５ｍｇ／Ｌ之间的递增，组织表面上的平均芽数也随之增
加，而且芽分化的越来越明显；在６－ＢＡ浓度为５ｍｇ／Ｌ
时为芽数最多。试验表明，当６－ＢＡ浓度与ＩＢＡ浓度之
差越大，分化的芽越明显。当６－ＢＡ浓度与ＩＢＡ浓度之
差越小时，愈伤组织分化不明显或愈伤组织分化仅停留
在球状胚体时期，球状胚体分化出２片幼叶比较困难。
燕子掌愈伤组织在ＭＳ＋６－ＢＡ　５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　２ｍｇ／Ｌ的
培养基上进行诱导分化时，单位面积可以达到平均３７
芽以上，但其芽多为球状胚体（图１Ｅ），２个叶片形成困难；
而燕子掌愈伤组织在ＭＳ＋６－ＢＡ　５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　１ｍｇ／Ｌ
的培养基上进行诱导分化时，单位面积可以达到平均３２
表３　不同浓度激素对燕子掌愈伤组织分化的影响
　　Ｔａｂｌｅ　３　　 　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｏｎ　ｃａｌｕｓ
　　　　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｓｈｏｏｔｓ　ｏｆ　Ｃｒａｓｓｕｌａ　ａｒｇｅｎｔｅａ
编号
Ｎｏ．
６－ＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
ＩＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
接种瓶数
Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ
ｂｏｔｔｌｅｓ
ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ
每瓶的平均芽数
Ｅａｃｈ　ｂｏｔｔｌｅ　ｏｆ
ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ
ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｂｕｄ
备注
Ｎｏｔｅ
１　 １　 １　 ２０　 ２４ 芽不明显，且芽为球状胚体
２　 ２　 １　 ２０　 ３０ 芽较明显
３　 ５　 １　 ２０　 ３２ 芽明显
４　 １　 ２　 ２０　 ２１ 芽不明显，且芽为球状胚体
５　 ２　 ２　 ２０　 ２６
芽少，不明显，
且芽为球状胚体
６　 ５　 ２　 ２０　 ３７ 芽多，分化多球状胚体
图１　燕子掌组织培养过程
注：Ａ．提供外植体的３龄燕子掌植株；Ｂ．接种后的外植体；Ｃ．在
ＭＳ＋ＩＢＡ　５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　２ｍｇ／Ｌ培养基中燕子掌叶片诱导产生的愈伤
组织，和一些分化出的不定芽；Ｄ．愈伤组织在 ＭＳ＋ＩＢＡ　５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ
５ｍｇ／Ｌ培养基中经过４０ｄ增殖后的传代愈伤组织，其为绿色透明状，组
织块内部较为紧密，组织块间却极为松散易分；Ｅ．愈伤组织在 ＭＳ＋ＩＢＡ
５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　２ｍｇ／Ｌ的培养基上进行诱导分化时形成的球状胚体；Ｆ．
在ＭＳ＋ＩＢＡ　２ｍｇ／Ｌ培养基上壮苗的不定苗；Ｇ．在 ＭＳ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ
培养基上诱导出根的试管苗。
Ｆｉｇ．１　Ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　Ｃｒａｓｓｕｌａ　ａｒｇｅｎｔｅａ　Ｔｈｕｎｂ
Ｎｏｔｅ：Ａ．３ｙｅａｒｓ　ｏｌｄ　Ｃｒａｓｓｕｌａ　ａｒｇｅｎｔｅａ　Ｔｈｕｎｂ　ｔｈａｔ　ｏｆｅｒ　ｔｈｅ　ｅｘｐｌａｎｔ．
Ｂ．Ｅｘｐｌａｎｔｓ　ａｆｔｅｒ　ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ．Ｃ．Ｃａｌｕｓ　ａｎｄ　ｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄ　ｔｈａｔ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ａｎｄ
ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ　ｂｙ　Ｃｒａｓｓｕｌａ　ａｒｇｅｎｔｅａ　Ｔｈｕｎｂ　ｌａｍｉｎａ　ｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗｉｔｈ　ＭＳ＋
ＩＢＡ　５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　２ｍｇ／Ｌ．Ｄ．Ｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｃａｌｕｓ　ｔｈａｔ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｃａｌｕｓ　ａｆ－
ｔｅｒ　４０ｄａｙｓ’ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗｉｔｈ　ＭＳ＋ＩＢＡ　５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　５
ｍｇ／Ｌ．ｔｈｅ　ｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｃａｌｕｓ　ｗａｓ　ｇｒｅｅｎ　ｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔ　ｓｈａｐｅ，ｔｉｇｈｔｅｒ　ｉｎｓｉｄｅ　ｔｈｅ
ｔｉｓｓｕｅ　ｂｌｏｃｋ　ａｎｄ　ｌｏｏｓｅ　ａｎｄ　ｅａｓｙ　ｔｏ　ｂｅ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ｂｌｏｃｋｓ．Ｅ．Ｇｌｏｂ－
ｕｌａｒ　ｅｍｂｒｙｏｓ　ｔｈａｔ　ｆｏｒｍｅｄ　ｂｙ　ｃａｌｕｓ　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｔｈａｔ　ｔｏ　ｉｎｄｕｃｅ　ｄｉｆｅｒ－
ｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗｉｔｈ　ＭＳ＋ＩＢＡ　５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　２ｍｇ／Ｌ．Ｆ．Ａｄｖｅｎｔｉ－
ｔｉｏｕｓ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ　ｔｈａｔ　ｔｏｕｇｈｅｎｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗｉｔｈ　ＭＳ＋ＩＢＡ　２ｍｇ／Ｌ．Ｇ．Ｐｌａ－
ｎｔｌｅｔｓ　ｔｈａｔ　ｈａｄ　ｂｅｅｎ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｒｏｏｔｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗｉｔｈ　ＭＳ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ．
芽以上，并且芽极为明显，２个子叶分开明显综合芽数和
芽的分化情况考虑，ＭＳ＋６－ＢＡ　５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　１ｍｇ／Ｌ
为愈伤组织分化出不定芽的最佳培养基。
２．４　不定芽的壮苗
培养４５ｄ，随机的从每个方案中各取２０株测得其
不定苗（图１Ｆ）的平均长度。由表４可以看出，随着ＩＢＡ
浓度的从０．５ｍｇ／Ｌ升至２ｍｇ／Ｌ，不定苗平均长度也随
之增长；当ＩＢＡ为２ｍｇ／Ｌ时，不定苗的平均长度为最
长，为４．７４ｃｍ；当ＩＢＡ浓度从２～１０ｍｇ／Ｌ时，不定苗的
平均长度有下降趋势。故燕子掌壮苗的最佳培养基为
ＭＳ＋ＩＢＡ　２ｍｇ／Ｌ。
表４ 不同浓度的ＩＢＡ对芽生长影响
　　Ｔａｂｌｅ　４　Ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ＩＢＡ　ｏｎ　ｓｈｏｏｔ　ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ
编号
Ｎｏ．
ＩＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
接种瓶数
Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｂｏｔｔｌｅｓ　ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ
平均生长高度
Ａｖｅｒａｇｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｈｅｉｇｈｔ／ｃｍ
１　 ０．５　 ２０　 ３．７８
２　 １　 ２０　 ４．１２
３　 ２　 ２０　 ４．７４
４　 ５　 ２０　 ４．６１
５　 １０　 ２０　 ３．４４
２．５　不定苗的诱根
培养３０ｄ后，统计不定苗的生根情况。由表５可知，随
７２１
·生物技术· 北方园艺２０１２（２３）：１２５～１２８
着ＩＢＡ浓度在０．１～０．５ｍｇ／Ｌ递增，生根率呈上升之势，当
ＩＢＡ浓度为０．５ｍｇ／Ｌ，生根率为１００％，为最佳。当ＩＢＡ
浓度在０．５～５ｍｇ／Ｌ递增时，生根率开始下降。因此，
ＭＳ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ为燕子掌不定苗诱根的最佳培养基。
表５　不同浓度的ＩＢＡ对不定苗根诱导的影响
　　Ｔａｂｌｅ　５　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ＩＢＡ　ｏｎ　ｒｏｏｔ－ｉｎｄｕｃｉｎｇ
编号
Ｎｏ．
ＩＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
接种瓶数
Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｂｏｔｔｌｅｓ
ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ
生根瓶数
Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ
ｒｏｏｔｉｎｇ　ｂｏｔｔｌｅ
生根率
Ｒｏｏｔｉｎｇ　ｒａｔｅ
／％
１　 ０．１　 ５０　 ３９　 ７８
２　 ０．５　 ５０　 ４８　 １００
３　 １　 ５０　 ４３　 ８６
４　 ２　 ５０　 ４０　 ８０
５　 ５　 ５０　 ３１　 ６２
　　注：生根率＝生根数／接种数×１００％。
３　讨论与结论
Ｌｉｕ　Ｙ　Ｌ等［９］在试验中用根、茎、叶做了对比试验，
表明诱导愈伤组织和芽的外植体效果依次是茎、叶、根，
但该试验仍只采用叶作为外植体，只为叶来源更加丰
富，茎来源受限。刘建华等［１０］研究表明，外植体诱导产
生的愈伤组织大多是在叶脉处出现，故该试验所接种的
外植体都为叶脉周围的１ｃｍ宽的叶片，这样可以提高
外植体的诱导率。
Ｌｉｕ　Ｙ　Ｌ等［９］在附加０．１～１０μｍｏｌ／Ｌ　ＮＡＡ 和
１０μｍｏｌ／Ｌ　６－ＢＡ的 ＭＳ培养基上，不定芽形成率达到
１００％，每个外植体再生芽数达到１０个以上。该研究虽
然没有达到１００％的诱导率，但平均芽数达到１２个芽以
上为最佳。通过分子量的换算，Ｌｉｕ　Ｙ　Ｌ等［９］所用培养
基为ＭＳ＋ＮＡＡ　０．０２～１．８７ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　２．２５ｍｇ／Ｌ，这
与该试验在ＭＳ＋ＩＢＡ　２ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　１ｍｇ／Ｌ上诱导出
１２个芽的培养基相比有较小的差距。但是，芦站根
等［１１］在研究指出，不同时期燕子掌叶片中激素的浓度有
一定的差异。课题组在１２月份获取的外植体，正是
ＩＡＡ含量最高的时期，故这样的差距是正常的。此外，
应用不同的激素类似物，也会造成一定的差异。
燕子掌叶片诱导出来的愈伤组织为乳白色或粉红
色（图１Ｃ），组织松散，有部分愈伤组织经过分化出现球
状胚体（图１Ｅ）。试验表明，当培养基为 ＭＳ＋ＩＢＡ
５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　２ｍｇ／Ｌ时，组织表面产生的球状胚比较
多，且能较长时间稳定在这个时间。球状胚体的出现为
研究燕子掌的人工种子提供了思考。经过传代后的愈
伤组织（图１Ｄ）变为绿色透明状，组织块内部较为紧密，
组织块间却极为松散易分。
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ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ，ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　６－ＢＡ　ａｎｄ　ＩＢＡ　ｏｎ　ｅａｃｈ　ｓｔａｇｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｃｒａｓｓｕｌａ　ａｒｇｅｎｔｅａ　Ｔｈｕｎｂ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ
ｆｏｒｍｉｎｇ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ＭＳ＋ＩＢＡ　５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　５ｍｇ／Ｌ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｃａｌｕｓ
ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｕｎｃｏｎｓｐｉｃｕｏｕｓ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｎ　ｉｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　９５．５６％；ＭＳ＋ＩＢＡ　２ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　１ｍｇ／Ｌ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ
ｆｏｒ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｄｉｒｅｃｔｌｙ　ｗｉｔｈ　ａｎ　ｉｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　８６．６７％，ｔｈａｔ　ｃｏｕｌｄ　ａｃｈｉｅｖｅ　ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　１２ｂｕｄｓ　ｉｎ　ａｖｅｒａｇｅ；ＭＳ＋
ＩＢＡ　５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　５ｍｇ／Ｌ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｆｏｒ　ｃａｌｕｓ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｍｕｌｔｉｐｌｅｓ　ｗａｓ　１０．９；ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｆｏｒ　ｃａｌｕｓ
ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ＭＳ＋ＩＢＡ　１ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　５ｍｇ／Ｌ，ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｂｕｄｓ　ｐｅｒ　ｕｎｉｔ　ａｒｅａ　ｗａｓ　ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　３２ａｎｄ　ｔｈｅ　ｂｕｄｓ　ｗｅｒｅ
ｏｂｖｉｏｕｓ；ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗａｓ　ＭＳ＋ＩＢＡ　２ｍｇ／＋６－ＢＡ　５ｍｇ／Ｌ，ｔｈｅ　ｇｌｏｂｕｌａｒ　ｅｍｂｒｙｏｓ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｍｏｒｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ｓｕｒｆａｃｅ
ｗｉｔｈ　ａ　ｌｏｎｇ　ｄｕｒａｔｉｏｎ；ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｆｏｒ　ｓｏｕｎｄ　ｓｅｅｄｉｎｇ　ｗａｓ　ＭＳ＋ＩＢＡ　２ｍｇ／Ｌ，ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　ｂｕｄｓ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　４．７４ｃｍ　ａｆｔｅｒ
４５ｄ；ｏｎ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗｉｔｈ　ＭＳ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ，ｔｈｅ　ｉｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｒｏｏｔ　ｉｎｄｕｃｉｎｇ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　１００％．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｃｒａｓｓｕｌａ　ａｒｇｅｎｔｅａ　Ｔｈｕｎｂ；ｃａｌｕｓ；ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄ；ｇｌｏｂｕｌａｒ　ｅｍｂｒｙｏｓ
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