全 文 ：莱 阳 农 学 院 学 报 2 1( l):7 4一 49, 19 9 5
OJ
u
rn a l
o
f L
a iy a
n g A g r ie u l l u
r a l C o le g
e
大岩桐组织培养和快速繁殖 ’
祝清俊 周钟信 张宗江 刘艳军
(山东省农科院原子能所 , 济南 25 01 0 0) (天津农学院 )
江倩云
(南京农业大学 )
大岩桐 , 又名新宁治花 、 落雪泥 , 是苦茵苔属多年生块茎植物 , 是重要的案头观叶观
花小型花卉 。 大岩桐在我国需温室人工授粉采种 , 采种量少 , 成本高 , 而插叶又难成活 ,
因此利用组培快繁颇具实用价值 。 近年来 , 有人做了一些工作 〔’ 〕 , 但对激素水平与细胞
分化和再生关系的研究 尚未见报道 , 本文对此进行了初步探讨 , 并提出一套有效的大岩桐
快繁技术程序 。
材料与方法
以盆栽的大岩桐为材料。 切取茎顶部 2一 3 节 , 去除大叶片 , 水冲洗干净 , 70 % 乙醇
浸润 , 用 18 % ( V / V )安替福民消毒 20 m in , 无菌水洗涤 3 次 , 吸干水分 , 无菌条件下切
取 2 一 3 m m 长的茎尖接种于 Z m g B A+ Zm g K T + 0 . 2m g N A A 的 M S 培养基上诱导芽丛。
从芽丛上分割 下 3一 s m m 高的茎芽作 外植体 , 接种在含有不同水平的细胞分裂素
6一 B A 的 M S 培养基上 (表 l) , 观察愈伤组织形成及芽分化效果 。 后将分化出小芽的愈伤
组织切成 3m m 左右的小块于同样培养基上继代 , 观察其增殖效果 。
从分化的芽丛上切取 1一 cZ m 高的茎芽接种于生根培养基上 , 观察诱导生根的效果 。
表 1 培养基组成及作用
代 号 培养基组成 作用
1 M S+ 3m g / L B A + 3 0 9 糖+ 6万g 琼脂粉 ( p H S名 ) 诱导芽分化
1 M S+ Zm g / L B A + 3 0 9 糖+ 6石 g 琼脂粉 ( p H S . 8 )
1 M s + l m g / L B A + 30 9 糖+ 6 . 5 9 琼脂粉 ( p H S名 )
VI M S+ 0 3 m g / L B A+ 30 9 糖+ 6乃 g 琼脂粉 ( p H S名 )
雪M s + 0 · Zm g / L N A A + 0 · , m g , A A+ , , g , `p H , · ` ,
盖M s+ 0 · s m g / LN A A+ , , g , ` p H , · ` ,
全M s+ “ · , m g / L N A A+ ,m g / L B A+ , , g糖 ( p H , · 8 ,
诱导生根
, 本文收到 日期 : 19 93 一 06 一 18
莱 阳 农 学 院 学 报 12卷
全部培养过程在 2 5一 2 5℃ , s ow / m Z 日光灯 1 2一 14 h 光照条件下进行。
2 结果与讨论
2
.
1 丛生芽茎尖外植体的脱分化与再分化
茎尖外植体于 4 种 6一 B A 水平的 M S 培养基上培养 3 0 d 的结果表明 : 6一 B A 水平升高
时 , 愈伤组 织诱导率呈 降低趋 势 , 且 愈伤组织的体积也急剧变小 。 当 B A 水 平达
.3 o m g / L 时 , 外植体叶腋侧芽生长明显且愈伤小 , 增殖率低 。 当 B A 水平在 Zm g / L 以
下时 , 随着 6一 B A 水平的下降 , 愈伤诱导率增高 , 愈伤大 , 分化率下降 , 增殖率降低 。
当 6一 B A 下降到 0 . 3m g / L 时 , 外植体本身明显长高且茎部普遍形成愈伤组织 , 但因分化
芽能力太低 , 增殖率达最低值 。 只有 6一 B A 水平为 Zm g / L 时 , 有一定的愈伤诱导率且
愈伤分化芽的能 力较强 , 故增殖率达 到最高 。 因此 , 对大岩桐 茎尖外植体而言 , 用
Zm g / L 6一 B A 诱导芽丛形成是最佳浓度 。
表 2 不同细胞分裂紊水平的增殖效果
培养基号
6一 B A 浓度
(m g / L )
接种茎尖
(个 )
增殖芽
(个 )
增殖率 愈伤诱导率
(% )
平均愈伤分化率
(个 / 块 )
0
0西ù,I
.…自j6,、ù.且. .人ORù0;:, lùU气、ù月呼,1月fō曰工0
、曰一门0帆一凡j, .自`l布生,`
16 1
14 4
9814536
,了nn民尸」,`、气乙onù,j..-门,é,`且ǐUn1lWI
.2 2 愈伤组织继代培养的增殖效果
将愈伤组织连同小芽分割后于上述 4 种培养基上继代培养 30 d 的结果见表 o3
表 3 愈伤组织继代培养的效果
6一 B A 浓度
(m g / L )
接种愈伤组织
(块 )
分化芽数 增殖率
(% )
分化芽平均高度
、划一,1凡j注一6,少汽比一0
培养基号
lnU)引8(心卜洲”,汀O矛产r…门曰Q
18 3 0 2
18 1 7 5
0…舟,ù`` .且ml1
VI 0
.
3 19 9 5 5 0 0 1
.
2 5
试验结果表明 : 用带芽的愈伤组织继代培养时 , 随着 6一 B A 浓度的提高 , 增殖率则
显著提高 , 但 6一 B A 水平越高越不利于芽的伸长生长 , 芽也越弱小 , 不利于以后的诱导
生根和移栽 。 为 了克服 这一 问题 , 又改 用 M S+ Zm g / L BA + Zm g / L K T + .0 2m g / L
N A A 代替 M S + Z m g / L B A , 结果增殖率高达 2 4 50 % , 而且分化的芽丛大而粗壮 。 与此
同时 , 将带芽的愈伤组织或分割的小茎芽于 M S+ Zm g K T + 0 . 2m g N A A 上培 养 20 一 3 0 d
后 , 原来有 茎芽的 明显伸展并增粗 , 但未见有新芽分化 。 这一结果暗示用 6一 B A 诱导大
岩桐外植体的芽丛分化时 , 因外植体内源生长素不足而限制 了诱导的效率 〔 2〕 。 因此用
M S+ Zm g / L 一 B A + Zm g / L K T + .0 2m g / L N A A 作为“ 伸长培养基 ”进行分化芽的伸长增
粗培养 , 是利于后期诱导生根和提高移栽成活率的较好途径 。
1期 祝清俊等 : 大岩桐组织培养和快速繁殖 49
.2 3 诱导生根的效果
将 2 一 c3 m 高的分化芽切下 , 转移到 V 、 VI 、 姐号培养基上 , 1d5 后统计生根率 (表
4)
。 结果表明 , 在 V 号培养基上不但小植株生长粗壮 , 而且生根率最高 , 达 肠 , 9 % , 说
明两种生长激素配合少量 K T 可显著促进生根 , 而在姐号培养基上生根率仅为 10 . 3% , 这
说明 B A 对生根有很强的抑制作用 。
表 4 不同培养基诱导生根的效果
培养基号 激素成份 接种茎芽数 (个 ) 生根株数 (株 ) 生根率 (% )
V Zm g / L K T + 0
.
2m g / L N A A切 , s m g / L I A A 3 2 3 1 9 6 . 9%
Vl 0
.
s m g / L N A A 2 7 2 4 8 8
.
9%
妞 l m g / L B A + o j m g / L N A A 2 9 3 10 . 3%
.2 4 移栽效果
将带根的试管苗植株用水冲干净 , 并移栽到蛙石中 , 每天浇 H or al n d 营养液 〔’ 〕 , 并
加塑料袋保湿 , 10 d 后成活率达 85 . 1% 。 定植于腐殖土中并移入温室栽培 , 大约 2一 3 个
月后可以开花 , 最终成活率达 83 . 3% 。
综上所述 , 6一 B A 对大岩桐茎尖外植体的愈伤形成和芽丛分化具有显著的效果 , 而以
Zm g / L 的 水平效 果 最佳 。 K T 对 芽的分 化诱导作 用 较温和 。 用 M S+ Zm g / L B A
+2 m g / L K T+0
.
2m g / L N A A 培养基诱导的愈伤和芽丛多而粗 , 以 “该分化培养基 ”作为
大岩桐茎尖外植体的启动培养和每月一次的继代培养 , 可大规模连续增殖芽丛 , 每代增殖
倍数达 25 倍 , 按每年进行 10 一 12 代计算 , 增殖倍数可达 25 ’ ” 一 25 ’ 2; 分化芽用 “ 伸长培
养基 ” 培 养 20 d 使茎 芽 高 达 c3 m 左右 , 并明 显增粗 ; 然后移入 1 / ZM S + Zm g / L
K T十 0 . 2m g / L N A A + o . s m g / L IA A 的 “ 生根培养基 ” 上 1d5 后 , 90 %以上可生根 ; 进而
移栽于蛙石中 , 后定植于盆土 中 , 有 80 % 以上可以成活 , 2一 3 个月后开花 , 从而实现大
岩桐的快速繁殖和批量生产 。
参 考 文 献
陈家银 . 植物生理学通迅 , 19 90 , (3 ) : 46
J
.
H D o d d s e t a l
.
in E x P e r im e n t s i n p la n t T L i s s u e e u l t u r e 8 1
L
.
R
.
w e fe
r e t a l i n P l a n t t i s s u e e u l t u r e m e th o d s 13 4