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莫丽银桦组培技术研究



全 文 :林业科技开发 2013 年第 27 卷第 1 期 101
doi:10. 3969 / j. issn. 1000-8101. 2013. 01. 028
莫丽银桦组培技术研究
张晓明,陈叶,邓小梅* ,赵先海,袁金英
(华南农业大学,广州 510642)
摘 要:对园林植物莫丽银桦的组培技术进行研究,结果表明,适合诱导的培养基为 MS + 6-BA 0. 5 mg /L + IBA
0. 01 mg /L + GA3 0. 5 mg /L,诱导率达 58%,腋芽健壮嫩绿;较好的增殖培养基为 1 /2 MS + 6-BA 1. 0 mg /L + IBA
0. 05 mg /L + GA3 0. 5 mg /L,芽生长健壮,增殖系数可达 3. 8 以上;较好的生根培养基为 1 /2 MS + IBA 0. 5 mg /L,生
根率达 92%。移栽基质为泥炭土 +珍珠岩( V泥炭土 ∶ V珍珠岩 = 3∶ 1) ,移栽成活率可达 90%以上。
关键词:莫丽银桦;组织培养;增殖培养
Studies on tissue culture of Grevillea molly∥ZHANG Xiao-ming,CHEN Ye,DENG Xiao-mei,ZHAO Xian-hai,
YUAN Jin-ying
Abstract:The tissue culture technique for garden plant Grevillea molly was studied in this paper. The results showed that
the suitable induction medium was MS + 6-BA 0. 5 mg /L + IBA 0. 01 mg /L + GA3 0. 5 mg /L,and the adventitious buds
robust growth,verdant;The proliferation medium was 1 /2 MS + 6-BA 1. 0 mg /L + IBA 0. 05 mg /L + GA3 0. 5 mg /L,and
adventitious buds grew well,green leaves stretch,plants were robust and the multiplication coefficient up to 3. 8;The me-
dium for rooting was 1 /2MS + IBA 0. 5 mg /L,the rooting rate up to 92% . The transplanting matrix were peat and perlite
(Vpeat ∶ Vperlite = 3∶ 1) ,and the transplanting survival rate up to 90% .
Key words:Grevillea molly;tissue culture;proliferation culture
Author’s address:South China Agricultural University,Guangzhou 510642,China
收稿日期:2012-10-21 修回日期:2012-11-08
基金项目:广东省高等学校人才引进科研资助项目(编号:粤教师
200886)。
作者简介:张晓明(1986 -) ,男,硕士生,研究方向为林木遗传育种。
通讯作者:邓小梅,女,教授。E-mail:dxmei2006@ scau. edu. cn
莫丽银桦(Grevillea molly)为山龙眼科银桦属植
物,产于澳大利亚昆士兰的海岸和附近岛屿。常绿灌
木,株高 1. 5 m,叶背银白色,叶面深绿色,叶子蕨叶
状深裂,花序圆柱状,花多,鲜红色,花期为冬春季。
其叶形奇特、花姿优雅,在园林应用中可用作绿篱、庭
院观赏树木,也可用作木本切花。同时,莫丽银桦具
有抗病虫害、耐旱等抗性,适生范围广,2003 年引入
我国广州,目前生长开花正常,表现出良好的观赏性
图 1 莫丽银桦花序
(图 1) ,推广应用
前景大。
由于莫丽银桦
为新引进品种,尽
管已正常开花,但
不结实,常规主要
采用扦插技术进行
扩繁,但扦插生根
率低,无法达到大
量繁殖的目的。本研究建立的莫丽银桦组培快繁技
术,将为其规模化育苗及推广应用提供技术支撑。迄
今为止,有关银桦属的红花银桦[1]、白翅银桦[2]组培
试验研究在国内外已有报道,但莫丽银桦的组培快繁
试验尚未见报道。
1 材料与方法
1. 1 材 料
以莫利银桦成年树半木质化带芽茎段为试验材
料,取自华南农业大学林学院苗圃。
1. 2 方 法
1. 2. 1 外植体的处理
采集半木质化嫩枝为外植体,剪去嫩枝上的叶
片,之后用 5%洗洁精溶液浸泡 5 min,用软毛笔清洗
叶腋,自来水冲洗干净后备用。
1. 2. 2 无菌系的建立
在超净工作台上,按外植体的幼嫩程度在 0. 1%
的升汞中消毒 3 ~ 10 min,最后用无菌水冲洗 5 ~ 6
次,将灭过菌的外植体切成 1. 0 ~ 2. 0 cm 的带芽茎
段,迅速接种于 A1 ~ A4 号诱导培养基上,每瓶接种 1
个外植体,每种处理接种 50 瓶。30 d 后观察外植体
的生长情况。
欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗 技术开发
102 林业科技开发 2013 年第 27 卷第 1 期
1. 2. 3 丛芽增殖培养
试验选用 1 /2 MS为基本培养基,各激素水平见
表 2、表 3。每种处理接种 5 瓶,每瓶接种 6 个带 2 个
叶腋的茎段,重复 3 次。通过激素种类及质量浓度的
配比等调控,提高增殖系数及有效芽数。
1. 2. 4 生根培养
选取经继代培养后生长健壮、高在 1. 0 cm 以上
的芽,将其接种于生根培养基中进行生根培养。以
1 /2 MS 为基本培养基,分别添加 4 个浓度梯度的
NAA和 IBA,共 9 个处理进行生根培养研究。每种处
理接种 5 瓶,每瓶接种 6 株芽,重复 3 次。21 d 后观
察其生根情况。
1. 2. 5 炼苗移栽
移栽前将生根瓶苗置于温室炼苗 7 d,之后将洗
净的幼苗移栽到消毒好的基质(V泥炭土 ∶ V珍珠岩 = 3∶ 1)
中,浇透水,再用塑料薄膜覆盖,以便保温保湿。15 d
后,揭开塑料薄膜进行常规管理。30 d 后观察统计
其移栽成活率。
1. 2. 6 培养条件
接种好的试验材料置于培养室进行培养,温度为
(25 ± 2)℃,以日光灯为光源,光照强度为 1 500 ~
2 000 lx,光照时间 12 h /d[3]。
1. 2. 7 数据计算
诱导率 =(萌发腋芽的外植体数 /接种外植体数)
×100%;增殖系数 =每个处理接出的总瓶数 /每个处
理母瓶数;生根率 =(生根芽数 /接种芽总数)×100%。
2 结果与分析
2. 1 不同激素处理组合对外植体腋芽诱导的影响
激素的种类、浓度及其配比对莫丽银桦腋芽的诱
导及生长起着重要作用。在不添加任何激素的 MS
培养基中,没有腋芽萌动,诱导率为 0。在激素浓度
较低的 2 号培养基上,腋芽萌动较慢,虽诱导率达
39%,但腋芽生长慢,玻化严重,最后变褐死亡。在提
高细胞分裂素浓度的 A3 号培养基上,腋芽萌动加
快,诱导率提高到 56%,但芽伸长生长慢。在 A3 号
培养基上加入适量的 GA3 对腋芽的伸长生长有明显
的促进作用(表 1)。
由此可见,添加激素对诱导莫丽银桦是必需的,
较好的诱导培养基为 6-BA 0. 5 mg /L、IBA 0. 01 mg /
L和 GA3 0. 5 mg /L激素组合(图 2 - A)。
2. 2 不同基本培养基、激素配比对增殖效果的影响
2. 2. 1 基本培养基的筛选
分别以 1 /2 MS 与 MS 作为基本培养基进行筛
选,试验结果表明莫丽银桦在 1 /2 MS 培养基中的增
殖效果优于 MS 培养基,表现为不定芽生长健壮、叶
片舒展。可能与 MS 中高含量的无机盐不同程度地
诱导不定芽玻璃化的产生有关,这与张宏志等[4]结
论相符。而选用 1 /2 MS作为基本培养基则能有效地
减少玻化现象的产生。
表 1 不同激素处理组合对莫丽银桦外植体
腋芽诱导的影响 /(mg·L -1)
处理 诱导培养基 诱导率 /% 生长情况
A1 MS 0 基本无腋芽萌动
A2 MS +6-BA 0. 2 + NAA 0. 01 39 腋芽 20 d开始萌动,严重玻
化,之后慢慢变褐死亡
A3 MS +6-BA 0. 5 + IBA 0. 01 56 腋芽 14 d 开始萌动,芽短,
轻微玻化
A4
MS + 6 -BA 0. 5 + IBA 0. 01
+ GA3 0. 5
58 腋芽 14 d 开始萌动,叶绿,
芽长而壮,轻微玻化
2. 2. 2 不同细胞分裂素浓度对增殖效果的影响
6-BA能有效诱导不定芽的增殖。试验结果表
明,当 6-BA浓度从 1 号处理的 0. 1 mg /L上提高到 3
号处理的 1. 0 mg /L时,其增殖系数也相应的从 1. 25
提高到了 3. 82;但当 6-BA浓度继续提高到1. 5 mg /L
及以上时,其增殖系数反而下降(表 2) ,且不同程度
地出现了玻化和褐化现象。如在 6-BA浓度达到 2. 0
mg /L的 5 号培养基上,丛芽基部有白色愈伤组织的
产生,不定芽质量明显下降。本实验说明高浓度的细
胞分裂素容易导致莫丽银桦组培苗玻璃化,而且玻璃
化苗发生程度和细胞分裂素浓度呈正相关,这与蔡祖
国等[5]结论相似。
表 2 不同 6-BA浓度对莫丽银桦增殖效果的影响
处理
6-BA /
(mg·L -1)
增殖
系数
生长情况
1 0. 1 1. 25 D 芽生长好且健壮,叶片嫩绿舒展,腋芽少
2 0. 5 2. 35 C 芽生长好且健壮,叶片嫩绿舒展,腋芽少
3 1. 0 3. 82 A 芽生长好,叶片嫩绿舒展,芽整齐,生长
良好,腋芽较多
4 1. 5 2. 91 B 芽生长较好,叶片舒展,芽整齐,生长良
好,腋芽较多,轻微玻化、褐化
5 2. 0 1. 17 D 芽生长较差,叶片瘦小黄化,玻化、褐化,
基部有白色愈伤
注:本试验添加 IBA 0. 01 mg /L、GA3 0. 5 mg /L;大写字母表示 5%水平
的显著差异。
为了探讨生长素浓度对莫丽银桦增殖生长的影
响,试验固定 6-BA 1. 0 mg /L、GA3 0. 5 mg /L,添加不
同浓度的 IBA。在 IBA浓度分别为 0. 01、0. 05 mg /L
的 6、7 号培养基上,增殖系数及芽生长没有显著差
异。但随着 IBA浓度的继续增加,增殖系数下降,玻
化、褐化及烂顶现象加重,直接影响不定芽的增殖生
长(表 3)。本实验也说明高浓度的生长素同样容易
技术开发 欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗
林业科技开发 2013 年第 27 卷第 1 期 103
导致莫丽银桦组培苗玻璃化的产生。
表 3 不同 IBA浓度对莫丽银桦增殖效果的影响
处理
IBA /
(mg·L -1)
增殖
系数
苗生长情况
6 0. 01 3. 75 A 叶片嫩绿舒展,苗长势整齐一致,生长
良好,腋芽多
7 0. 05 3. 86 A 叶片嫩绿舒展,苗长势整齐一致,生长
良好,腋芽多
8 0. 1 3. 42 AB 叶片舒展,苗较壮,有少量淡黄色愈伤,
轻微玻化、烂顶
9 0. 15 3. 22 B 叶片嫩绿舒展,玻璃化,苗长势较好,轻
微烂顶现象
10 0. 2 2. 41 C 叶片嫩绿舒展,玻化、褐化,苗长势差,
烂顶现象严重
注:本试验添加 6-BA 1. 0 mg /L、GA3 0. 5 mg /L;大写字母表示 5%水
平的显著差异。
综合以上分析,以7号处理(MS +6-BA 1. 0 mg /L
+ IBA 0. 05 mg /L + GA3 0. 5 mg /L)的增殖系数最大,
不定芽生长健壮整齐,叶片嫩绿舒展,为最佳增殖培
养基(图 2 - B)。
2. 3 不同生长素浓度对莫丽银桦生根效果的影响
不添加生长素的 C1 号培养基上基本没有根的
产生,而添加不同浓度 NAA或 IBA,均能在一定程度
上诱导莫丽银桦生根,植株生长情况见表 4。IBA 对
莫丽银桦的生根效果优于 NAA。在 IBA 浓度为 0. 5
mg /L时,生根效果最好,转入生根培养基上 7 d 后,
组培苗基部便膨大;10 d 左右可以看到白色的短根
从基部长出;30 d 生根率达 92%,根粗壮且长,苗生
长健壮。但随着生长素浓度的提高,生根率开始下降
(图 2 - C)。莫丽银桦最佳生根培养基为 C7 处理:
1 /2 MS + IBA 0. 5 mg /L。
表 4 不同生长素种类及水平对莫丽银桦生根效果的影响
处理
NAA /
(mg·L -1)
IBA /
(mg·L -1)
生根率
/%
平均根长 /
(cm·条 - 1)
植株生长状况
C1 ― ― 0 0 无根萌动,苗生长健壮
C2 0. 2 ― 53. 03 2. 05 根细弱且长势一般
,苗生长
健壮
C3 0. 5 ― 57. 58 1. 63 根粗壮,须根多,苗生长一般
C4 0. 8 ― 64. 67 1. 80 根粗壮且长
,有淡黄色愈
伤,苗生长一般
C5 1. 0 ― 62. 12 2. 09 根粗壮,愈伤多,苗生长一般
C6 ― 0. 2 41. 63 1. 64 根粗壮且有较多须根
,苗生
长健壮
C7 ― 0. 5 92. 56 2. 14 根粗壮且长,苗生长健壮
C8 ― 0. 8 46. 22 1. 93 根粗壮且长,苗生长健壮
C9 ― 1. 0 79. 13 2. 63 根粗壮且长,苗生长健壮
2. 4 生根苗移栽
生根试管苗的移栽是组织培养育苗的重要环节,
生根培养 21 d后,将瓶苗放到温室炼苗 5 ~ 7 d,使幼
苗逐渐适应外界环境。将基质在太阳下充分曝晒后,
用 800 倍多菌灵溶液消毒待用。将试管苗取出洗净
后移栽到基质(V泥炭土 ∶ V珍珠岩 = 3∶ 1)上,浇透水,用塑
料薄膜覆盖,并遮阴。结果表明:4 月份,移栽后第 14
天萌发新芽,第 18 天萌发新根,第 28 天新芽抽枝达
3 cm,并开始萌发侧根,30 d后苗生长良好,新叶嫩绿
光亮,移栽成活率达 90%以上。
3 讨 论
据文献资料所得,在多花银叶树(Leucadendron
floridum)[6]、澳洲坚果(Macadamia integrifolia & Mac-
adamia tetraphylla)[7]、极美泰洛泊(Telopea speciosiss-
ma)[8]等多种山龙眼科植物组织培养试验过程中,在
1 /2 MS培养基上均能培养成功,而在 MS 培养基上则
容易玻化、褐化,这一结论与本研究实验结果相一致。
培养基中的生长素和细胞分裂素浓度对莫丽银
桦组培苗生长有显著影响。在增殖培养过程中,较高
浓度的生长素和细胞分裂素则容易造成组培苗玻化、
褐化,不利于莫丽银桦不定芽的分化。本试验得出最
佳的增殖培养基为 1 /2 MS + 6-BA 1. 0 mg /L + IBA
0. 05 mg /L + GA3 0. 5mg /L。
以 1 /2 MS + IBA 0. 5 mg /L 为生根培养基,组培
欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗 技术开发
104 林业科技开发 2013 年第 27 卷第 1 期
苗生长健壮,根系质量好,第 21 天生根率高达 92%。
但如要进行规模化生产,还需进一步优化培养基及培
养条件,提高生根率。
参考文献
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( 责任编辑 史洁 葛华忠
櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒
)
doi:10. 3969 / j. issn. 1000-8101. 2013. 01. 029
油茶小苗嫁接技术试验
罗健1,陈永忠1* ,陈隆升1,彭邵锋1,杨正华1,2,王湘南1,王瑞1,马力1
(1.湖南省林业科学院,国家油茶工程技术研究中心,长沙 410004;2.云南省德宏州林业局)
摘 要:研究了嫁接方式、嫁接时间、砧木、接穗等因素对油茶小苗嫁接成活率和抽梢率的影响。结果表明:各因
素对小苗嫁接的成活率和抽梢率的影响明显;铝皮包扎方法的抽梢率达 34. 1%,显著高于嫁接膜包扎的抽梢率,且
嫁接效率高;嫁接高度越低越有利于嫁接成活和抽梢,3 cm 嫁接高度的成活率和抽梢率分别达 76. 4%和 24. 6% ;
嫁接时间对抽梢率的影响较大,嫁接时间越早,抽梢率越高; 1 年生砧木的嫁接成活率达 87. 0%,明显高于 2 年生砧
木的嫁接成活率,但抽梢率较 2年生砧木低; 不同砧木品种及不同接穗品种和物种间的嫁接成活率和抽梢率的差异
显著或极显著。采用切接、铝皮包扎嫁接口、低嫁接高度和 1年生砧木进行油茶小苗嫁接,能达到较好的育苗效果。
关键词:油茶;小苗嫁接; 成活率;抽梢率
收稿日期:2012-08-24 修回日期:2012-10-08
基金项目:中央财政林业科技推广示范跨区域重点推广示范项目“油
茶高产新品种区试示范及丰产栽培技术推广”(编号:TK019)。
作者简介:罗健(1985 -) ,男,硕士,主要从事油茶栽培技术研究工作。
通讯作者:陈永忠,男,研究员。E-mail:chenyongzhong06@ 163. com
An experiment on grafting technique of young Camellia oleifera seedlings∥LUO Jian,CHEN Yong-zhong,
CHEN Long-sheng,PENG Shao-feng,YANG Zheng-hua,WANG Xiang-nan,WANG Rui,MA Li
Abstract:The effects of the grafting factors including methods,time,stock and scion on the survival rate and shooting rate
of small Camellia oleifera grafting plants were studied. The results showed that the effects of grafting factors on survival rate
and shooting rate were significant. The shooting rate of grafting plants bound with aluminum sheet was 34. 1%,it was
markedly higher than that of binding with grafting membrane. The lower grafting height was beneficial to survive and shoot-
ing of grafting seedlings,and their survival rate and shooting rate were 76. 4% and 24. 6%,respectively,when the grafting
height was three centimeters. Grafting time had great influence to budding rate,and the earlier grafting time,the higher
grafting survival rate. The survival rate of grafting plants grafted with annual stock was 87. 0%,it was markedly higher than
that of grafted with biennials stock,but the shooting rate of grafting plants grafted with annual stock was lower than that of
grafted with biennials stock. The difference of survival rate and shooting rate of grafting plants were significant or highly sig-
nificant among different stock and scion varieties and species. There was a good grafting plants cultivating effect by develo-
ping a small seedling grafting method with cut grafting,aluminum sheet binding,lower grafting height and annual stock in
Camellia oleifera.
Key words:Camellia oleifera;small seedling graft;survival rate;shooting rate
First author’s address:Hunan Academy of Forestry,National Engineering Research Center of Camellia oleifera,Chang-
sha 410004,China
油茶(Camellia oleifera)属山茶科山茶属,为常
绿灌木或小乔木,是我国南方重要的经济树种,与油
棕、油橄榄和椰子并称为世界四大木本食用油料树
技术开发 欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗