全 文 ：·药学研究·
镰形棘豆ＨＰＬＣ指纹图谱研究
燕珂１，顾青２，杨光明２＊，陈醒２，蔡宝昌２
（１．南京中医药大学科技处，江苏 南京 ２１００２３；２．南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室、国家中医药管理局中药炮
制标准重点实验室，江苏 南京 ２１００２３）
摘要：目的 建立镰形棘豆的指纹图谱。方法 采用反相高效液相色谱，色谱条件为Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）
色谱柱；流动相为甲醇－０．１％磷酸水溶液；流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长：２８４ｎｍ；柱温：３０℃。运用中药色谱指纹图谱相似度评
价系统２００４Ａ版（国家药典委员会）进行分析。结果 构建了镰形棘豆药材的高效液相指纹图谱。结论 该方法准确，快捷，
重现性好，可作为镰形棘豆药材的质控方法。
关键词：镰形棘豆；高效液相色谱；指纹图谱
中图号：Ｒ２８４．１ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２－０４８２（２０１３）０４－０３７６－０３
Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ＨＰＬＣ Ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ ｏｆ Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ ｆａｌｃａｔａ
ＹＡＮ Ｋｅ１，ＧＵ Ｑｉｎｇ２，ＹＡＮＧ Ｇｕａｎｇ－ｍｉｎｇ２＊ ，ＣＨＥＮ Ｘｉｎｇ２，ＣＡＩ Ｂａｏ－ｃｈａｎｇ２
（１．Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｊｉｎｇ，２１００２３，Ｃｈｉｎａ；２．Ｎａｎｊｉｎｇ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊｉａｎｇｓｕ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ，Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｓｔａｔｅ Ａｄｍｉｎ－
ｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｆｏｒ Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ，Ｎａｎｊｉｎｇ，２１００２３，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ｏｆ Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ ｆａｌｃａｔａ ｂｙ ＨＰＬＣ．ＭＥＴＨＯＤＳ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｗａｓ
ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｏｎ ａ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）ｃｏｌｕｍｎ ｗｉｔｈ ｍｅｔｈａｎｏｌ－０．１％ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｃｉｄ ｗａｔｅｒ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ａｓ ｍｏｂｉｌｅ
ｐｈａｓｅ ａｔ ａ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｏｆ １．０ｍＬ／ｍｉｎ．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ｓｅｔ ａｔ ２７０ｎｍ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ３０℃．ＲＥ－
ＳＵＬＴＳ Ｔｈｅ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｌｅｖｅｎ ｂａｔｃｈｅｓ ｏｆ Ｏ．ｆａｌｃａｔａ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｏｒｉｇｉｎ ｗｅｒｅ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｏｖｅｒ ０．９ｂｙ ａｎａｌｙｚｉｎｇ ｅｉｇｈｔ
ｃｏｍｍｏｎ ｐｅａｋｓ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｒｅｐｅａｔａｂｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ，ｐｒｅｃｉｓｅ ａｎｄ ｓｔａｂｌｅ ａｎｄ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｉ－
ｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｏ．ｆａｌｃａｔａ．
ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ：Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ ｆａｌｃａｔａ；ＨＰＬＣ；ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ
藏药镰形棘豆为豆科棘豆属（Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ Ｄ．
Ｃ．）植物镰形棘豆（Ｏ．ｆａｌｃａｔａ Ｂｕｎｇｅ）的干燥全草，
藏药名为“莪达夏”［１］。其味辛、性寒，有小毒，入肺、
脾二经，具有清热解毒、生肌愈疮、涩脉止血、抗炎止
痛、通利大便等功效，用于治疗流感、扁桃体炎、黄水
病、创伤、骨伤疼痛等［２－３］。国内外研究发现，镰形棘
豆药材中的主要成分为黄酮类和生物碱类化合物，
具有抗炎、镇痛、抗氧化、抗肿瘤等活性［４］，是一味重
要的藏药。为全面控制其质量，本实验对１０批镰形
棘豆药材进行了高效液相分析，对获得指纹图谱的
提取方法、流动相、洗脱梯度、检测波长、柱温等色谱
条件进行了优化，完成了系统的方法学考察，构建了
镰形棘豆的高效液相色谱指纹图谱。
１ 材料
１．１ 仪器
高效液相色谱仪Ａｇｉｌｅｎｔ １１００Ｓｅｒｉｅｓ四元泵在
线脱气装置，Ａｇｉｌｅｎｔ工作站，ＫＱ２２００Ｂ型超声清洗
器（昆山市超声仪器有限公司）。
１．２ 试剂
乙腈（色谱纯），甲醇（色谱纯），磷酸（分析纯），
甲酸（分析纯），娃哈哈纯净水。
１．３ 药材
不同产地、不同采收时间镰形棘豆原植物经南
京中医药大学刘训红教授鉴定为豆科棘豆属
（Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ Ｄ．Ｃ．）植物镰形棘豆 （Ｏ．ｆａｌｃａｔａ
Ｂｕｎｇｅ）的干燥全草。样品来源见表１。
—６７３—
南京中医药大学学报２０１３年７月第２９卷第４期
ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＮＡＮＪＩＮＧ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＴＣＭ Ｖｏｌ．２９ Ｎｏ．４ Ｊｕｌ．２０１３
收稿日期：２０１３－０３－２５；修稿日期：２０１３－０５－２２
基金项目：国家自然科学基金（３０９０２０１２）；江苏省中医药局项目（ＬＢ０９０２６）
作者简介：燕珂（１９７６－），男，江苏徐州人，南京中医药大学助理研究员。＊通信作者：ｙｇｍｍ０９０１＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ
DOI:10.14148/j.issn.1672-0482.2013.04.022
表１ 样品来源
样品编号 采收地点 采收时间
Ｓ１ 青海共和１ ２００９－０７
Ｓ２ 青海共和２ ２０１０－０７
Ｓ３ 青海２ ２００８－０８
Ｓ４ 青海３ ２００８－０８
Ｓ５ 青海海北 ２００８－０７
Ｓ６ 青海门源县 ２００８－０８
Ｓ７ 青海海南 ２００８－０７
Ｓ８ 青海互助甘淮乡 ２００８－０７
Ｓ９ 青海湖乡 ２００８－０８
Ｓ１０ 西藏巴达尔 ２００８－０７
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件
Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）色谱
柱；流动相：甲醇（Ａ）－０．１％磷酸水溶液（Ｂ），流速：１
ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长：２８４ｎｍ；柱温：３０℃；进样量：１０
μＬ。梯度洗脱：０～２２ｍｉｎ，Ａ为３５％～４５％；２２～
３５ｍｉｎ，Ａ为４５％～５５％；３５～６０ｍｉｎ，Ａ为５５％～
６０％；６０～７０ｍｉｎ，Ａ为６０％～７０％；７０～９０ｍｉｎ，Ａ
为７０％～７５％，保持５ｍｉｎ。
２．２ 供试品溶液的制备
取镰形棘豆药材粉末（过３号筛）约１．０ｇ，精密
称定，置５０ｍＬ具塞锥形瓶中，精密加入甲醇２０
ｍＬ，称质量，超声处理３０ｍｉｎ，放冷称质量，甲醇补
足质量，摇匀，静置，取上清液，用０．４５μｍ 微孔滤
膜滤过，取续滤液，即得。
２．３ 指纹图谱方法学考察
２．３．１ 数据处理软件
采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统２００４Ａ
版（国家药典委员会）。将测试数据导入该软件，经
选峰，设定匹配模板，谱峰自动匹配，然后设定标准
模板，进行谱峰差异性评价和整体相似性评价。
２．３．２ 精密度试验
取同一供试品（批号：２０１００７）溶液，连续进样６
次，结果用中药色谱指纹图谱相似度评价系统
２００４Ａ 版 （国 家 药 典 委 员 会）计 算，相 似 度 大
于０．９９７，表明精密度良好，符合要求［５］。
２．３．３ 重现性试验
取同一个样品（批号：２０１００７）５份，分别按供试
品溶液的制备方法制备供试品并测定，结果用中药
色谱指纹图谱相似度评价系统２００４Ａ版（国家药典
委员会）计算，相似度大于０．９９６，表明该方法重现
性良好，符合要求。
２．３．４ 稳定性试验
取同一供试品（批号：２０１００７）溶液，分别在０、
２、４、８、１２、２４ｈ检测，结果用中药色谱指纹图谱相似
度评价系统２００４Ａ版（国家药典委员会）计算，相似
度大于０．９９５，表明２４ｈ内稳定性良好。
２．４ ＨＰＬＣ指纹图谱的构建
２．４．１ 指纹图谱
按２．１项测定１０批镰形棘豆药材，根据检测结
果，建立镰形棘豆药材的高效液相色谱指纹图谱（见
图１），相似度评价见表２。
图１ １０批镰形棘豆药材色谱图
表２ 镰形棘豆１０批药材相似度评价
样品 Ｓ１ Ｓ２ Ｓ３ Ｓ４ Ｓ５ Ｓ６ Ｓ７ Ｓ８ Ｓ９ Ｓ１０ 对照指纹图谱
Ｓ１ １．０００ ０．９１４ ０．７８８ ０．９１１ ０．９０６ ０．９３２ ０．９０７ ０．９０２ ０．９２２ ０．８８２ ０．９３６
Ｓ２ ０．９１４ １．０００ ０．８５８ ０．９７５ ０．９８４ ０．９７８ ０．９８０ ０．９６２ ０．９８６ ０．９５０ ０．９８９
Ｓ３ ０．７８８ ０．８５８ １．０００ ０．９１３ ０．８９８ ０．８６６ ０．９０８ ０．９３３ ０．８１８ ０．８４７ ０．８９９
Ｓ４ ０．９１１ ０．９７５ ０．９１３ １．０００ ０．９９４ ０．９８５ ０．９８７ ０．９９４ ０．９５９ ０．９３７ ０．９９３
Ｓ５ ０．９０６ ０．９８４ ０．８９８ ０．９９４ １．０００ ０．９８７ ０．９９１ ０．９８４ ０．９７２ ０．９４６ ０．９９４
Ｓ６ ０．９３２ ０．９７８ ０．８６６ ０．９８５ ０．９８７ １．０００ ０．９８３ ０．９７３ ０．９７９ ０．９３３ ０．９９２
Ｓ７ ０．９０７ ０．９８０ ０．９０８ ０．９８７ ０．９９１ ０．９８３ １．０００ ０．９８０ ０．９７１ ０．９５０ ０．９９３
Ｓ８ ０．９０２ ０．９６２ ０．９３３ ０．９９４ ０．９８４ ０．９７３ ０．９８０ １．０００ ０．９４２ ０．９２２ ０．９８５
Ｓ９ ０．９２２ ０．９８６ ０．８１８ ０．９５９ ０．９７２ ０．９７９ ０．９７１ ０．９４２ １．０００ ０．９３１ ０．９８１
Ｓ１０ ０．８８２ ０．９５０ ０．８４７ ０．９３７ ０．９４６ ０．９３３ ０．９５０ ０．９２２ ０．９３１ １．０００ ０．９５２
对照指纹图谱 ０．９３６ ０．９８９ ０．８９９ ０．９９３ ０．９９４ ０．９９２ ０．９９３ ０．９８５ ０．９８１ ０．９５２ １．０００
—７７３—燕珂，等：镰形棘豆 ＨＰＬＣ指纹图谱研究 第４期
２．４．２ 共有指纹峰标定
根据１０批次供试品测定结果，镰形棘豆药材高
效液相色谱可分离出１０个主要色谱峰，经相似度计
算及匹配结果选取其中８个共有峰为特征峰，特征
指纹图谱见图２，特征峰保留时间与峰面积见表３。
图２ 镰形棘豆药材提取物特征指纹图谱
表３ 镰形棘豆特征指纹图谱中特征峰的保留时间与峰面积
特征峰编号 保留时间 相对保留时间 峰面积 相对峰面积
１ ２７．２５５ ０．７２２ ８４５．５６４ ０．７４８
２ ３０．６６６ ０．８１３ １ １９１．１４５ １．０５３
３ ３７．７３７ １．０００ １ １３１．１３１ １．０００
４ ４５．４１０ １．２０３ １ ５８０．７４１ １．３９７
５ ４６．５３６ １．２３３ １ ２７７．１６０ １．１２９
６ ５６．７１５ １．５０３ ２ ７３２．２０６ ２．４１５
７ ５８．９０５ １．５６１ ２ ４３８．８００ ２．１５６
８ ６９．５２８ １．８４２ ５１４．８１１ ０．４５５
３ 讨论
１）检测波长的选择。采用ＰＤＡ对镰形棘豆供
试品进行了全波长扫描，结果表明波长为２８４ｎｍ
时色谱图所包含的信息量大，且各色谱峰分离良好，
因此选择２８４ｎｍ作为检测波长。
２）流动相的选择。选用了乙腈－水、甲醇－水、甲
醇－０．１％磷酸水溶液等体系进行梯度洗脱，结果以
甲醇－０．１％磷酸水溶液梯度洗脱得到的色谱峰分离
较好，且较稳定，所以选择甲醇－０．１％磷酸水溶液作
为洗脱液。
３）柱温的选择。考察了柱温２５、３０℃下样品的
分离，测定结果表明，温度对保留时间基本没有影
响，而对分离度稍有影响。柱温３０℃时各峰分离较
好，特征峰都达到了基线分离。因此，柱温选择３０
℃。
４）供试品提取方法选择。分别考察了甲醇、
７０％甲醇 －水、５０％甲醇 －水作为提取溶剂，超声、回
流等不同提取方式，以及提取时间和提取次数，结果
表明，以甲醇超声３０ｍｉｎ提取１次基本提取完全，
因此确定该提取方法，即甲醇超声提取３０ｍｉｎ，提
取１次即可。
５）１０个不同批次的镰形棘豆指纹图谱中，主要
峰群的整体图貌基本一致，特征峰的相对保留时间
ＲＳＤ 小于１％，但特征指纹峰的相对峰面积积分比
值有较大差别。由此建立的指纹图谱基本反映了镰
形棘豆药材的内在化学特征。
本方法操作简单，稳定，重现性好，且干扰少，用
于控制镰形棘豆的质量是切实可行的。
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Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｇａｓｔｒｉｃ Ｃａｎｃｅｒ ＭＧＣ－８０３ｃｅｌｓ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｌ
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ｕｓｅｄ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｉｎｄｕｓ－
ｔｒｙ ｐｒｅｓｓ，２００５． （编辑：李伟东）
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计量单位及符号 计量单位一律采用以国际单位制为基础的“中华人民共和国法定计量单位”（简称“法定单位”），请参
阅《量和单位》（北京：中国标准出版社）。如μｍ，ｋｇ，ｍｇ，ｄ，ｍｉｎ，ｓ，ｍｏｌ／Ｌ等，每天不写每ｄ，但每天９ｍｇ可写成９ｍｇ／ｄ，第９ｄ
仍然用第９天。１Ｍ硫酸应写成１ｍｏｌ／Ｌ硫酸，压力单位应换算成Ｐａ、ｋＰａ等。ＲＳＤ（相对标准偏差）不用ＣＶ（变异系数），Ａ
（吸收度）不用ＯＤ（光密度），ｒ／ｍｉｎ（转速）不用ｒｐｍ。正文中写成ｇ／ｍＬ，表格图表里应写成ｇ·ｍＬ－１。
—８７３— 南京中医药大学学报２０１３年７月第２９卷第４期