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白玉银桦组培快繁技术研究



全 文 :甘肃农业科技 Gansu Agr. Sci. and Techn. No. 7 20112011 年 第 7 期
白玉银桦组培快繁技术研究
赵平丽1,2,邓小梅 2
(1. 广东农工商职业技术学院,广东 广州 510507 2. 华南农业大学,广东 广州 510642)
收稿日期:2011-04-02
作者简介:赵平丽(1980—),女,河南西平人,讲师,主要从事植物组织培养的教学及科研工作。联系电话:(0)15813309896。
E-mail:zpl8088@126.com
通讯作者:邓小梅(1966—),女,江西临川人,教授,主要从事生物技术研究。E-mail: dxmei2006 @scau.edu.cn
摘要:以白玉银桦的半木质化枝条为外植体,研究了适合白玉银桦丛芽诱导、增殖、生根培养的培养基组
分,结果表明,最适诱导培养基为 MS+1.0 mg/L 6-BA + 1.0 mg/L NAA;最佳增殖培养基为 MS +1.0 mg/L 6-BA +
0.2 mg/L KT+0.3 mg/L NAA,增殖系数达 3.6以上;适宜的生根培养基为 1/2MS+0.3 mg/L NAA。生根率达到 90%
以上,生根苗平均根数 3.0条。
关键词:白玉银桦;组织培养
中图分类号:S792.159 文献标识码:A 文章编号:1001- 1463(2011)07- 0005- 05
Study on the Technique of Tissue Culture and Rapid Propagation of
Grevillea baileyana
ZHAO Ping- li1,2,DENGXiao- mei2
(1. Guangdong AIB Polytechnic College,Guangzhou Guangdong 5105072,China; 2. South China Agricultural University,
Guangzhou Guangdong 510642,China)
Abstract:This study established an economic and hight effective technology systemon rapid propagation of Grevillea baileyana.
By comparision of the mainly factors on induction culture, proliferation culture and rooting culture, the optimal inducing medium was
MS+1.0 mg/L 6- BA +1.0 mg/L NAA; the optimal multiplication medium was MS +1.0 mg/L 6- BA +0.2 mg/L KT +0.3 mg/L NAA, the
highest multiplication rate was 3.6. The optimal rootinging medium was 1/2MS+0.3 mg/L NAA, the rooting rate has reached 90 % ,
health- rooted average number of roots 3.0.
Key words:Grevillea baileyana; Tissue culture
白玉银桦(Grevillea Baileyana) 为山龙眼科
(Proteaceae)银桦属(Grevillea)的一种常绿灌木或
小乔木,株高4~8 m,单叶互生,革质,幼叶羽
状深裂,叶面深绿色,中脉下陷,叶背被银灰色
绢毛。花期春季,总状花序,花两性,有艳丽的
白色长穗,花芳香,乳白色。其树型美观、叶形
奇特、花姿优雅,具有较高的观赏价值。白玉银
桦栽培方便,耐修剪,在园林应用中可用做高篱
树墙、园景和标志树;枝、叶奇特优美,均可造
型,是重要木本切花;也可矮化做盆景。同时白
玉银桦具有抗污染、抗烟尘、中度耐霜冻、耐高
温、耐盐碱等抗性,是很好的生态环境保护树种。
近年来白玉银桦在热带及南亚热带地区广为栽培,
成为新型优良的园林观赏树种。白玉银桦2003年
首次引入我国广州,现在广州、上海有少量试种,
生长正常具有推广应用前景。
在原产地,银桦属树种的常规繁殖方式主要
是播种繁殖,其次是扦插和嫁接繁殖。但目前扦
插生根率仅40%左右,且材料少,无法达到大量繁
殖的目的。为此,我们研究探讨了白玉银桦的组
培快繁技术,现报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料
供试桦木为白玉银桦,由华南农业大学林学
院提供。
1.2 方法
1.2.1 外植体的制备与消毒 于晴朗上午采集半木
质化新枝为外植体,除去多余的茎叶,将所需部
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甘肃农业科技 Gansu Agr. Sci. and Techn. No. 7 20112011 年 第 7 期

图2 腋芽的增殖培养
分用洗洁精溶液浸泡5 min,并用棉球仔细清洗,
然后用流水冲洗3 h,再用 75 %的酒精浸泡30 s后
在1 g/kg的升汞中按材料幼嫩程度消毒3~10 min,
最后用无菌水冲洗多次待用。
1.2.2 诱导培养 外植体经表面灭菌后,剪取带1
个腋芽或顶芽的茎段,迅速接种于诱导培养基
A1~A10(表1)上。观察生长状况和诱导情况。接
种28 d后统计各培养基中出现的愈伤组织块数,计
算愈伤组织诱导率[1]。
诱导率(%)= 愈伤组织数
接种的茎段外植体数
×100
1.2.3 丛芽增殖培养 初代培养获得的丛芽数量较
少,需进一步继代扩繁,以达到大量快速繁殖的
目的。经诱导产生的腋芽长至2 cm左右时,接种
于培养基1~16(表2)上,重复继代,进行丛芽的
增殖培养,比较不同激素浓度对幼苗生长状况及
增殖系数的影响[2]。
1.2.4 生根培养 材料增殖到一定数量时,将培养
物分流,一部分继续增殖,另一部分进入壮苗生
根阶段。丛生芽长至2~3 cm时,截取1.2~1.5 cm
的茎段,接种于生根培养基①~輥輰訛(表3)中诱导不
定根。观察其生根情况。
1.2.5 培养条件 pH 5.5~6.5,6 g/L琼脂,培养温
度为23~27℃,光照强度为1 000~2 000 Lx、光
照时数12 h/d,蔗糖在诱导培养和丛芽增殖培养时
为30 g/L,在生根培养时为20 g/L。
1.2.6 炼苗移栽 12月、翌年3、4月份进行生根苗
的移栽试验。瓶苗移栽前7 d左右,将装入穴盘或
营养袋的基质放于已经消毒的温室内。栽培基质
包括轻型基质、进口泥炭土。移栽前选取生根培
养20 d、有2~3条不定根、高2 cm以上的试管苗,
在自然光下不开盖炼苗5~7 d,使嫩苗逐渐与外界
接触,提高适应能力,再打开瓶盖炼苗1~2 d。将
基质在太阳下充分曝晒后,用8%~10%氧化乐果
溶液喷洒。移栽时用镊子轻轻取出试管苗,用流
水将根部培养基冲洗干净,然后移栽到灭菌基质
上,保证根系和基质密切接触。移栽前将基质浇
透水,移栽后叶面喷水,用塑料薄膜覆盖,并搭
遮荫棚。每天观察移栽苗生长情况,移栽30 d后统
计成活率。
2 结果与分析
2.1 不同培养基及激素对茎段诱导的影响
在白玉银桦腋芽的诱导过程中,激素的种类
与浓度起着非常重要的作用。观察结果表明,白
玉银桦在接种后第3 d叶柄开始形成离层,第5 d开
始脱叶柄,腋芽萌动,同时可见嫩绿的小芽点,
15 d左右为出芽最盛时期(图1)。从表1可以看出,
在不添加任何激素的基本培养基Al、A2上诱导率
低,发出芽后基本不伸长,长势差;在添加6- BA
和NAA的A3、A4、A5培养基上,诱导率分别为
57.50%、70.58%和47.62%,其中A4培养基的诱导
率较高,芽生长较好;在添加KT和NAA的A6、A7
培养基上,诱导率分别为53.48%、56.52%,芽生
长一般;在添加6- BA和IBA的A8培养基上,诱导
率最高,达72.09%,但是芽长的一般,而且玻璃
化严重,茎段基部和叶腋出现大量淡黄色愈伤组
织;在添加KT、6- BA和NAA的A9、A10培养基上
诱导率较低,分别为31.11%、32.60%,芽长的一
般,叶柄脱落处有愈伤。A4培养基的诱导率虽然
没有A8培养基高,但其芽萌动最早,叶芽伸长较
快,生长旺盛,叶片嫩绿且长势健壮,能出现多
个茎节。综合诱导率和生长情况,认为最适诱导
培养基为MS+1.0 mg/L 6- BA + 1.0 mg/LNAA。
2.2 不同激素配比对茎段增殖的影响
观察表明,白玉银桦无顶芽茎段增殖培养和
带顶芽茎段增殖培养有相似之处,但由于茎段已
经除去顶芽,消除了其顶端优势,腋芽较易分化
生长(图2),而带顶芽茎段增殖培养植株长势较
好,茎节较长,其腋芽分化较慢。从表2可以看
出,白玉银桦在低浓度激素培养基上,芽生长快,
图1 诱导15 d的芽
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甘肃农业科技 Gansu Agr. Sci. and Techn. No. 7 20112011 年 第 7 期
叶片舒展嫩绿,茎伸长较好,增殖系数高,有效
腋芽也多。而在高浓度激素的培养基上,表现叶
片肥大脆化,有些玻璃化,基部愈伤较多,影响
芽的生长,有的甚至出现畸形,有效芽少。从表2
还可以看出,分裂素6- BA比KT更有利于增殖培
养,在含有6- BA的培养基上添加KT,其增殖系数
无明显变化,且会出现轻微玻璃化和愈伤,后期
长势逐渐变差。在6- BA为1.0 mg/L的9、10、11、
12号培养基上,增殖系数明显优于其它激素组合,
且长势良好,叶片舒展嫩绿,茎干粗壮,茎段增
殖的叶腋均长出腋芽;有的分化出次生芽,带顶
芽的茎段增殖培养则长势较好且健壮,下部叶腋
分化出腋芽,叶片嫩绿舒展。其中10号培养基,
即MS +1.0 mg/L 6- BA +0.2 mg/L KT+0.3 mg/L NAA
的增值系数最高,为3.64,为最佳增殖培养基。
2.3 不同种类和浓度的生长素对生根效果的影响
观察结果表明,当用于生根的芽接入添加
NAA的①~④号培养基上时,第4 d开始形成根原
基,第7 d开始长出根,12 d左右出根最多,且随
着NAA浓度的升高,愈伤增多。在添加IBA的⑤~
表1 不同诱导培养基对白玉银桦诱导的影响
A2 MS 28.89 成活的芽为小芽点,芽不伸长,长势差
A3 1/2MS+0.5 mg/L 6- BA+0.1 mg/LNAA 57.50 芽生长的一般
A4 MS+1.0 mg/L 6- BA+0.1 mg/LNAA 70.58 芽萌动最早,叶芽伸长较快,生长旺盛,叶片嫩绿
且长势健壮,能出现多个茎节
A5 MS+2.0 mg/L 6- BA+0.1 mg/LNAA 47.62 有一半左右长的还好,但叶柄脱落处和茎段顶部有
愈伤,叶片畸形
A6 1/2MS+0.5 mg/LKT+0.1 mg/LNAA 53.48 芽生长一般,且有的玻璃化比较严重
A7 MS+1.0 mg/LKT+0.1 mg/LNAA 56.52 芽生长的一般
A8 MS+1.0 mg/L 6- BA+0.1 mg/L IBA 72.09 芽长的一般,玻璃化严重,茎段基部和叶腋出现大
量淡黄色愈伤组织
A9 MS+0.5 mg/LKT+0.5 mg/L 6- BA+0.2 mg/L IBA 31.11 芽长的一般,叶柄脱落处有愈伤
A10 1/2MS+0.5 mg/LKT+0.5 mg/L 6- BA+0.2 mg/LNAA 32.60 芽长的较差,叶柄脱落处有愈伤
A1 1/2MS 35.71 芽小不伸长,长势差,有些玻璃化
代号 培养基 诱导率(%) 生长状况
表2 不同激素配比对白玉银桦茎段的影响
代号 培养基 增殖系数 苗生长情况
1 MS+0.2 mg/L 6- BA+0.01 mg/LNAA 2.28
2 MS+0.2 mg/L 6- BA+0.2 mg/LKT+0.05 mg/LNAA 2.42
3 MS+0.2 mg/L 6- BA+0.5 mg/LKT+0.1 mg/LNAA 2.49 生长正常,基部有少量愈伤和玻璃化
4 MS+0.2 mg/L 6- BA+1.0 mg/LKT+0.3 mg/LNAA 2.69 生长瘦弱,叶片稍微发黄
5 MS+0.5 mg/L 6- BA +0.05 mg/LNAA 2.98 生长健壮,伸长较好,基部叶片少量畸形
6 MS+0.5 mg/L 6- BA+0.2 mg/LKT+0.01 mg/LNAA 2.82 生长正常,基部有少量愈伤
7 MS+0.5 mg/L 6- BA+0.5 mg/LKT+0.3 mg/LNAA 2.87 生长正常
8 MS+0.5 mg/L 6- BA+1.0 mg/LKT+0.1 mg/LNAA 2.82 生长一般,有些玻璃化,基部有愈伤
9 MS+1.0 mg/L 6- BA+0.1 mg/LNAA 3.42 生长正常,叶片嫩绿,基部有少量愈伤
10 MS+1.0 mg/L 6- BA+0.2 mg/LKT+0.3 mg/LNAA 3.64 生长健壮,叶片舒展嫩绿,茎伸长较好
11 MS+1.0 mg/L 6- BA+0.5 mg/LKT+0.01 mg/LNAA 3.15 生长正常,基部有少量愈伤
12 MS+1.0 mg/L 6- BA+1.0 mg/LKT+0.05 mg/LNAA 3.12 生长正常,基部有少量愈伤
13 MS+2.0 mg/L 6- BA+0.3 mg/LNAA 2.04 苗伸长差,植株瘦弱,叶片有些黄化,有效苗少
14 MS+2.0 mg/L 6- BA+0.2 mg/LKT+0.1 mg/LNAA 2.13 芽伸展不好有些出现畸形,叶片肥大水渍化
15 MS+2.0 mg/L 6- BA+0.5 mg/LKT+0.05 mg/LNAA 1.96 芽小,苗伸长差,有效苗少
16 MS+2.0 mg/L 6- BA+1.0 mg/LKT+0.01 mg/LNAA 1.84 芽小,苗伸长差,芽玻璃化严重,有效苗少
生长正常,叶片舒展嫩绿,茎伸长较好
生长正常,基部有少量叶片肥大畸形
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甘肃农业科技 Gansu Agr. Sci. and Techn. No. 7 20112011 年 第 7 期
⑧号培养基上,生根苗基部愈伤组织过多,第10 d
开始长出根,根似乎从愈伤组织中长出,发育状
况不太好。在添加IAA的⑨~輥輰訛号培养基上出根较
早,第4 d已经出现根原基,第6 d已经开始长出
根,但是长势一般, 12 d后没有伸长长粗的迹象,
根原基不再伸长生长,以后逐渐褐化(图3)。从表
3可以看出,添加NAA的①~④号培养基上,除①
号培养基外,其余培养基随着NAA浓度的升高生
根率反而下降;在添加IBA的⑤~⑧号培养基上,
生根率较低,生根数也只有1条,这种根移栽时比
较困难,不容易成活;在添加IAA的⑨~輥輰訛号培养
基上,生根率没有添加NAA的高,生根数很少且短。
综合苗与根系的生长情况,②号培养基,即1/2
MS+0.3 mg/L NAA的培养基为适宜的生根培养基,
生根率可达90.2%,且根系数量较多,为3.1条。
2.4 不同移栽基质组培苗的移栽效果
从表4可以看出,以进口泥炭土为移栽基质移
栽时成活率较高,达87%,且缓苗期短;轻型基质
移栽的成活株数、成活率为0。观察表明,3月份
在进口泥炭土中瓶苗移栽后第7 d萌发新芽,第10
d萌发新根,第14 d新芽抽枝达5 cm,并开始萌发
侧根;28 d后生长良好,新叶嫩绿光亮,已经显出
革质(图4)。移栽在轻型基质上的组培苗,可能因
为12月份天气较冷,没有温室等保温措施,管理
不当,加上轻型基质的的空隙度大,保水能力差,
浇水频繁容易烂苗,浇水少又易干枯失水甚至死
亡,导致成成率为0。
3 小结与结论
试验结果表明,无菌体系的建立是组织培养
的前提,最佳的外植体消毒程序是75%酒精表面消
毒30 s后,无菌水冲洗1次,再用1 g/kg升汞浸泡消
毒2~10 min,无菌水冲洗5~8次。最适诱导培养
基为MS+ 1.0 mg/L 6- BA + 0.1 mg/L NAA,接种28 d
后诱导率可达70.0%以上,诱导出的腋芽健壮嫩
绿,生长较好;最佳增殖培养基为MS+ 1.0 mg/L
6- BA + 0.2 mg/L KT + 0.3 mg/L NAA,继代周期以
28 d为好,增殖系数可达3.6以上,瓶苗健壮。适
图3 在生根培养基上形成的生根小苗
图4 移栽成活的组培苗
② 1/2MS+0.3 mg/LNAA 根粗壮且长,根较多且从皮部长出
③ 1/2MS+0.5 mg/LNAA 根粗壮,但愈伤多
④ 1/2MS+1.0 mg/LNAA 根一般,基部愈伤多
⑤ 1/2MS+0.1 mg/L IBA 纤细
⑥ 1/2MS+0.3 mg/L IBA 纤细,基部愈伤多
⑦ 1/2MS+0.5 mg/L IBA 基部愈伤多
⑧ 1/2MS+1.0 mg/L IBA
輥輰訛 1/2MS+1.0 mg/L IAA 一般
① 1/2MS+0.1 mg/LNAA 根粗壮
代号 培养基 根系状况
⑨ 1/2MS+0.1 mg/L IAA 细长
⑩ 1/2MS+0.3 mg/L IAA 一般
輥輯訛 1/2MS+0.5 mg/L IAA 一般
3.1
2.3
2.1
1.3
1.1
1.0
0
1.2
2.1
平均根数
(条)
1.1
1.1
1.0
生根率
(%)
35.3
90.2
64.0
51.3
20.6
23.5
9.0
0
23.3
32.6
28.5
21.5
表3 不同生长素种类及水平对白玉银桦生根效果的影响
基质类型 移栽时间(月)
移栽数
(株)
成活株数
(株)
成活率
(%) 生长状况
轻型基质 12 32 0 0
进口泥炭土 3 100 87 87 缓苗期短,
生长迅速
表4 不同移栽基质白玉银桦组培苗的移栽效果
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甘肃农业科技 Gansu Agr. Sci. and Techn. No. 7 20112011 年 第 7 期
收稿日期:2011-04-17
基金项目:国家现代西瓜甜瓜产业技术体系科研专项经费资助(CARS-26-20)部分内容
作者简介:魏全宏(1968—),男,甘肃民勤人,主要从事农作物种子生产经营和新品种选育工作。联系电话:(0)
13399352888。E-mail: Qsgs888@126.com
魏全宏,魏春燕
(甘肃省民勤县全盛永泰农业有限公司,甘肃 民勤 733300)
籽用西葫芦是甘肃省民勤县的特色经济作物,
随着农作物种植结构的调整,种植面积逐年增加,
2010年播种面积达2 330 hm2,逐渐替换了黑瓜籽
生产。由于当地西葫芦优良品种少,白粉病危害
严重,加之干旱、高温的影响,产籽量低而不稳,
选育耐旱抗病性强、授粉结籽率高、稳产优质的
西葫芦新品种是生产的迫切需要。民勤县全盛永
泰农业有限公司结合当地的生产条件确定育种目
摘要:籽用西葫芦新品种白雪公主是以 QS9916为母本、QS9901为父本育成的杂交种。2007年在民勤、
金昌井灌区进行的多点试验中,折合平均产籽量 2 024 kg/hm2,较对照品种山西 X8增产 18.4%,该品种籽粒含
粗蛋白 466.9 g/kg、粗脂肪 405.3 g/kg、棕榈酸 12.41%、硬脂酸 5.86%、油酸 44.03%、亚油酸 37.55%、亚麻酸
0.16%。生育期 110 d,抗白粉病,籽粒大而饱满,高产优质,适宜在甘肃民勤县、河西走廊及新疆、内蒙古等
地同类地区种植。
关键词:籽用西葫芦;新品种;白雪公主;选育
中图分类号:S561 文献标识码:A 文章编号:1001- 1463(2011)07- 0009- 02
Breeding Report of A New Seed-squash Variety Whitesnow Princess
WEI Quan- hong, WEI Chun- yan
(Gansu Minqin Quanshengyongtai Agriculture Co., Ltd. , Minqin Gansu 733300, China)
Abstract:Whitesnow princess was a new seed- squash variety winter wheat variety bred by crossing with the parental
combination of QS9916/ QS9901. In 2007,the average seed yield of Whitesnow princess was 2 024 kg/hm2 and 18.4% higher than of
the check Shanxi X8 in variety multi- place test of well irrigation area of Minqin, Jinchang. The results showed that the varieties of grain
crude protein, crude fat, palmitic acid, stearic acid, oleic acid, linoleic acid, linolenic acid were 466.9 g/kg, 405.3 g/kg, 12.41%, 5.86%,
44.03%, 37.55%, 0.16%, respectively. The growth period 110 days In addition, Whitesnow princess was resistant to powdery mildew,
large and plump grain, high- quality. It is suitable to plant in the region of Minqin county in Gansu, Hexi corridor and Xinjiang, Inner
Mongolia and other places the same type of area.
Key words:Seed- squash; New variety; Whitesnow princess; Breeding
籽用西葫芦白雪公主选育报告
宜的生根培养基为1/2 MS+0.3 mg/L NAA,7 d左右
可出根,生根率达到90.2%,生根苗平均根数3.0
条。适宜培养环境为pH 5.5~6.5,温度(25±2)℃,
光照时间12 h/d,光照强度1 000~2 000 Lx。组培
苗移栽基质以进口泥炭土效果最好。移栽后采用
覆膜保温保湿,用遮阳网遮荫,成活率可达87%。
参考文献:
[1] 张延红,陈红刚,高素芳,等. 基本培养基及激素和
附加物对黄芪组织培养的研究[J]. 甘肃农业科技,
2011(2):13-15.
[2] 邓小梅,王明庥,黄敏仁,等. 香花槐组培工厂化育
苗技术研究[J]. 江西农业大学学报,2003,25(1):
69~72.
[3] 潘瑞炽. 植物组织培养[M]. 广州:广东高等教育出版
社,2003.
(本文责编:杨 杰)
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