全 文 ：香茶藨子叶片总酚、总黄酮提取及抗氧化性研究
邹维娜 1,2,3，王 微 1,2,3*，徐启江 4* ，杜伟伟 1,2,3，李灵玉 1,2,3
(1.东北林业大学，森林植物生态学教育部重点实验室，黑龙江哈尔滨，150040；
2.东北林业大学，林业生物制剂教育部工程研究中心，黑龙江哈尔滨，150040；
3. 东北林业大学，生物资源生态利用国家地方联合工程实验室，黑龙江哈尔滨，150040；
4.东北林业大学生命科学学院，林木遗传育种国家重点实验室，黑龙江哈尔滨，150040)
摘 要: 目的:获得微波辅助提取香茶藨子叶片中总酚及总黄酮的最佳工艺，以及香茶藨子叶片中总酚及总
黄酮的体外抗氧化活性。方法:在单因素的基础上，采用响应面法对影响总酚和总黄酮提取量的主要因素进
行分析，探讨微波辅助提取香茶藨子叶片中总酚及总黄酮的最优工艺，并与超声提取、索氏提取进行比较。
采用 DPPH 和 FRAP 法对香茶藨子叶片中总酚及总黄酮的自由基清除能力和总抗氧化活性进行评价。结果:
最佳的提取工艺条件为：提取温度 58 ℃，液固比 39∶1 mL/g,乙醇浓度 57%,提取时间 15 min 和微波功率
600 W，此条件下总酚及总黄酮的提取量分别为 99.89 mg/g、38.16 mg/g。微波辅助提取得到的香茶藨子叶
片提取物对 DPPH 自由基有很好的清除作用，IC50值为 0.0445 mg/mL，此外其还有较高的总抗氧化能力，
FRAP 值为 4.832 mmoL/g。结论:优选的总酚、总黄酮提取工艺稳定可行，香茶藨子叶片中总酚及总黄酮有
较好的抗氧化活性，为其研究开发提供一定的科学依据。
关键词:香茶藨子；总酚；总黄酮；响应面法；微波辅助提取；抗氧化 
Extraction of total phenolics and flavonoids from the leaf of Ribes
odoratum Wendl. and its antioxidant activity
ZOU Wei-na1,2,3,WANG Wei1,2,3*, XU Qi-jiang4*,DU Wei-wei1,2,3,LI Ling-yu1,2,3
(1.Key Laboratory of Forest Plant Ecology, Ministry of Education, Northeast Forestry University,
Harbin 150040, PR China;
2.Engineering Research Center of Forest Bio-preparation,Ministry of Education, Northeast
Forestry University, Harbin 150040, PR China;
3.State Engineering Laboratory for Bio-Resource Eco-Utilization, Northeast Forestry University,
Harbin 150040, PR China;
4.The state key Laboratory of Tree Genetics and Breeding, College of Life Sciences, Northeast
Forestry University,Harbin 150040, PR China)
Abstract: Objective：To obtain the optimum microwave-assisted extraction process for total
phenolics and flavonoids from the leaf of Ribes odoratum Wendl. and to examine the antioxidant
activity. Method：Based on single factor tests, effects of various factors on total phenolics and
flavonoids contents were analyzed through response surface methodology (RSM).The optimal
conditions for microwave extraction of total phenolics and flavonoids from the leaf of Ribes
odoratum Wendl. were discussed．And the comparison between different extraction methods, such
                                                              

基金项目：E 类中央高校基本科研业务费专项资金项目（创新团队与重大项目培育资金项目）——茶藨子属植物花发育及次生代
谢产物合成分子调控机制研究（2572014EA03-03） 
作者简介：邹维娜(1992-)，女，硕士研究生在读，研究方向：生药学。Email: fht1167@126.com 
*通信作者：王微(1978-)，女，副研究员，研究方向：植物药提取及活性研究。Email:wangwping780110@163.com
*通信作者：徐启江(1970-)，男，教授，研究方向：植物分子系统发育生物学。Email:249904367@qq.com


网络出版时间：2016-09-26 09:10:53
网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/11.1759.TS.20160926.0910.048.html
as ultrasonic extraction and soxhlet extraction were also investigated. Moreover, the DPPH radical
scavenging capacity and FRAP total antioxidant activity tests were carried out to determine its
potential antioxidant activity. Result：The optimum conditions for microwave-assisted extraction
were determined as follows: extraction temperature 58 ℃, liquid-to-solid ratio 39:1 mL/g ,ethanol
concentration 57%, extraction time 15 min and microwave power 600 W. The extraction yields of
total phenolics and flavonoids were up to 99.89 mg/g and 38.16 mg/g under the optimal conditions.
The antioxidant tests showed that the total phenolics and flavonoids extracted from the leaf of
Ribes odoratum Wendl. had a potent scavenging effect on DPPH free radicals with IC50 value of
0.0445 mg/mL and FRAP ferric reducing antioxidant power with value of 4.832 mmoL/g.
Conclusion：The microwave-assisted extraction of total phenolics and flavonoids from the leaf of
Ribes odoratum Wendl. was stable and feasible, and the extracts by this method also exhibited a
better antioxidant activity. The study can provide a certain scientific basis for research and
development of Ribes odoratum Wendl.
Key words: Ribes odoratum Wendl.; total phenolics; total flavonoids;  response surface
methodology; microwave-assisted extraction ; antioxidant activity
中图分类号：TS201.1 文献标识码：B
香茶藨子(Ribes odoratum Wendl.)为虎耳草科茶藨子属落叶灌木,又名黄花茶藨子。茶藨
属植物为浆果类资源，被称为第三代新兴果树[1]。香茶藨子原产北美洲，在我国东北及华北
地区多有栽培[2]。耐寒力强，在东北、华北及西北地区冬季不需要采取防护措施即可安全越
冬[3]。
茶藨子属植物的果实、叶片及芽中含有大量的营养成分[4]。现有研究表明：茶藨子属植物
中含有槲皮素、芦丁、异槲皮苷、黄芩苷、杨梅素、山柰酚[5]、没食子酸、香草酸、没食子
儿茶素等[6]多种有效成分。酚及黄酮类活性化合物不仅对保护心血管系统，抗癌，抗病毒，
治疗咳嗽、风湿、冠心病、肝脏及动脉硬化等会起到一定治疗作用[7-9]，也具有抗氧化和抗
炎活性[10]。因此，茶藨子属植物在医药、食品保健等领域都有广阔的应用前景。
目前对于茶藨子属植物的研究与应用方面多集中于黑茶藨子，进而对黑茶藨子的需求量
日渐增多，盲目开发及人为破坏导致其群体数量及分布范围变小[11]，将阻碍其资源和产品
的利用，所以当务之急是寻找一种新的替代性资源，作为同属植物的香茶藨子可成为首选考
虑，现在对于香茶藨子的研究多集中于栽培管理方面，对其酚及黄酮类活性物质的提取工艺、
抗氧化作用鲜有报道。本文以香茶藨子叶为研究对象，对微波辅助提取、超声提取、索氏提
取进行了比较，结果显示，微波辅助提取更有优势，与索氏提取和超声提取等常规方法相比，
具有节能、省时、高效等优点，此外，该方法在提取过程中无粉尘、有害气体、余热产生，
符合绿色环保要求。随后，对香茶藨子叶片中总酚和总黄酮的微波辅助提取工艺进行优化并
研究其抗氧化活性，为香茶藨子的开发利用提供科学理论依据。
1.材料与方法
1.1 材料与仪器
香茶藨子叶片 采于哈尔滨东北林业大学知园，晾干，粉碎，过 200 目筛，置阴凉干燥
处备用；总抗氧化能力检测试剂盒（FRAP 法） 碧云天生物技术有限公司；VC、 DPPH 、
Folin-Ciocalteu（2 N） 美国 Sigma 公司；没食子酸、芦丁标准品 南京泽郎医药科技有限
公司；碳酸钠、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、乙醇均为市售分析纯。
MAS-II  微波反应罐 新仪微波化学科技有限公司；植物粉碎机 HX-200A 永康市溪岸
五金药具厂；WK891 型电热恒温鼓风干燥箱 重庆四达实验仪器厂；SHB-III 型循环水式多
用真空泵 郑州长城科工贸有限公司；电子分析天平 FA1104 上海天平仪器厂；721 可见
分光光度计 上海佑科仪器仪表有限公司；Infinite 200 PRO NanoQuant 酶标仪 上海安景科
技有限公司；KQ-250DB 型数控超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司；索氏提取器 天
津玻璃仪器厂。
1.2 实验方法 
1.2.1 标准工作曲线的绘制 
以没食子酸为标准品，测定波长的确定参考文献[12],采用 Folin-Ciocalteu 法测得总酚含
量。取 40 μL 不同浓度（0、100、200、400、600、800 及 1000 μg/mL）没食子酸于离心
管中，分别加入 1.8 mL 稀释 20 倍的 Folin-Ciocalteu 试剂（2 N）。混合均匀避光静置 5 min
后，添加 1.2 mL Na2CO3（7.5%）避光静置 1-2 h，取澄清液用 721 可见分光光度计在波
长 765 nm 处测吸光度，以吸光度（A）为纵坐标，没食子酸质量浓度（μg/mL）为横坐标，
绘制没食子酸标准曲线，得标准工作曲线方程为：y=0.0014x+0.038,R2=0.9993。
以芦丁为标准品，采用 NaNO2-Al(NO3)3 比色法测总黄酮含量，参考韩志萍等的方法稍
作调整[13]。取 0.2 mL 不同浓度（0、50、100、200、300、400、及 500 μg/mL）芦丁于离
心管中，分别加入 2.8 mL 蒸馏水，加 5% 亚硝酸钠水溶液 0.5 mL，放置 6 分钟。加 10%
硝酸铝 0.5 mL，混匀后放置 6 分钟。加入 5% 氢氧化钠溶液 2.5 mL，混匀，放置 15 min
后，蒸馏水定容至 10 mL（加 3.5 mL 水）。用 721 可见分光光度计，在 λ＝510 nm 处测
吸光度，以吸光度（A）为纵坐标，芦丁质量浓度（μg/mL）为横坐标，绘制芦丁标准曲线,
得标准工作曲线方程为：y=0.0002x+0.0036,R2=0.9991。
1.2.2 香茶藨子叶片中总酚及总黄酮提取量的测定 
称取 1.00 g 香茶藨子叶片粉末，在一定的温度、乙醇浓度、液固比下提取，抽滤，离心，
定容。移取一定量待测液按 1.2.1 方法测定吸光度，按下式计算总酚及总黄酮提取量。
总酚/总黄酮提取量(mg/g)=( C×V×n)/m
式中 C 代表根据回归方程计算得到的质量浓度 mg/mL，V 代表提取液总体积 mL，n 代
表稀释倍数，m 代表香茶藨子叶片粉末的质量 g。
1.2.3 香茶藨子叶片中总酚及总黄酮的提取
1.2.3.1 微波法提取 称取 1.00 g 香茶藨子叶片粉末，加入一定量的乙醇后放于微波仪器中设
置不同的条件进行提取（具体参考数值详见 1.2.4 单因素实验设计），抽滤，离心，定容，每
组试验重复 3 次。移取一定量待测液按 1.2.1 方法测定吸光度。
1.2.3.2超声法提取 称取 1.00 g香茶藨子叶片粉末，按照最优提取条件加入 50% 乙醇 30 mL，
于 50 ℃、功率 250 W 条件下超声提取 30 min，重复 3 次，提取液抽滤，离心，定容，移
取一定量待测液按 1.2.1 方法测定吸光度。
1.2.3.3索氏法提取 称取 1.00 g香茶藨子叶片粉末，按照最优提取条件加入 50% 乙醇 30 mL，
于 50 ℃条件下提取 2 h，重复 3 次，提取液抽滤，离心，定容，移取一定量待测液按 1.2.1
方法测定吸光度。
1.2.4 单因素实验设计 
分别以不同提取温度、液固比、乙醇浓度、提取时间、微波功率作为单因素，考察各因
素对总酚、总黄酮提取量的影响，每组实验重复 3 次。
1.2.4.1 微波温度的影响 在液固比 30:1 mL/g，乙醇浓度 50%，提取时间 15 min，微波功率
600 W 的条件下，探讨微波温度（30、40、50、60、70 ℃）对香茶藨子叶片中总酚、总黄
酮提取量的影响。
1.2.4.2 液固比的影响 在微波温度 60 ℃，乙醇浓度 50%，提取时间 15 min，微波功率 600
W 的条件下，探讨液固比（10:1、20:1、30:1、40:1、50:1 mL/g）对香茶藨子叶片中总酚、
总黄酮提取量的影响。
1.2.4.3 乙醇浓度的影响 在微波温度 60 ℃，液固比 40:1 mL/g，提取时间 15 min，微波功
率 600 W 的条件下，探讨乙醇浓度（10%、30%、50%、70%、90%）对香茶藨子叶片中总
酚、总黄酮提取量的影响。
1.2.4.4 提取时间的影响 在微波温度 60 ℃，液固比 40:1 mL/g，乙醇浓度 50%，微波功率
600 W 的条件下，探讨提取时间（5、10、15、20、25 min）对香茶藨子叶片中总酚、总黄
酮提取量的影响。
1.2.4.5 微波功率的影响 在微波温度 60 ℃，液固比 40:1 mL/g，乙醇浓度 50%，提取时间
15 min 的条件下，探讨微波功率（300、400、500、600、700 W）对香茶藨子叶片中总酚、
总黄酮提取量的影响。
1.2.5 响应面优化实验设计
综合单因素实验结果，利用响应面分析法进行提取工艺条件的优化[14]。选取提取温度、
液固比、乙醇浓度作为响应变量，以总酚及总黄酮提取量为响应值，根据 Box-Benhnken 中
心组合设计原理进行三因素三水平实验设计，实验因素和水平见表 1。
表 1 响应面分析因素与水平
Table 1 Factors and levels of response surface methodology
因素
水平
-1 0 1
          X1提取温度(℃) 40 55 70
X2液固比(mL/g) 20:1 35:1 50:1
          X3乙醇浓度(%) 30 60 90
1.2.6 香茶藨子叶片提取物的抗氧化活性测定 
将香茶藨子叶片在优化后的微波提取工艺及其他不同方法下得到的提取物进行旋干，精
密称取 Vc 和旋干粗提物 2.00 mg，再用 2.5 mL 乙醇将其溶解，然后配制成一系列不同浓度
的 Vc 和样品溶液，其浓度分别为 0.8、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125 mg/mL，备用。
1.2.6.1 对 DPPH 自由基清除率的测定 
          DPPH 溶液为紫红色，在 517 nm 处有最大光吸收，通过加入抗氧化剂后吸光值的下降
表示对自由基的清除作用。取 0.1 mL 不同浓度的样品乙醇溶液与 1.4 mL 的乙醇溶液混合，
再加入 1 mL DPPH（0.04 mg/mL）放置于避光处 70 min，反应完成后进行检测，初始吸光
度以 1.5 mL 的 55% 乙醇溶液与 1 mL DPPH（0.04 mg/mL）作为混合液。在 517 nm 处测定
样品溶液吸光值，每个样品重复测定 3 次，结果取平均值[15]。
DPPH 自由基清除率实验计算公式：DPPH 清除能力（%）=（1-As/Ac）×100%
在 517 nm 波长下，初始对照液吸光度 Ac，样品的吸光度 As。
1.2.6.2 FRAP 法测定总抗氧化能力 
称取 27.8 mg FeSO4·7H2O,溶解并定容到 1 mL，此时浓度即 100 mmol/L。取适量 100
mmol/L FeSO4 溶液稀释至 0.05、0.1、0.15、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、2、4 mmol/L，备用。
96 孔板的每个检测孔中加入 180 µL FRAP 工作液，空白对照孔中加入 5 µL 55% 乙醇
溶液；标准曲线孔内加入 5 µL 各种浓度的 FeSO4 标准溶液；样品检测孔内加入 5 µL 各种样
品。轻轻混匀。37 ℃下反应 5 min，于 593 nm 处重复 3 次平行测定其吸光度[16]。以吸光度
（A）为纵坐标，FeSO4 摩尔浓度（mmol/L）为横坐标，绘制 FeSO4 标准曲线，得标准工作
曲线方程为：y=0.2862x+0.0296,R2=0.999。样品的 FRAP 值以达到相同吸光度所需 FeSO4 的
毫摩尔数表示。FRAP 值越大，抗氧化活性越强。
1.3 数据处理
采用 Microsoft Excle（Office 2007）、Design-Expert.V8.0.6.1、Origin8 Pro SR4 软件进行
数据整理及分析。
2 结果与分析
2.1 不同提取工艺的比较
微波提取、超声提取、索氏提取对香茶藨子叶片中总酚及总黄酮提取量结果如图 1，从
结果可以看出微波的提取效果明显好于另外两种，这可能是由于在微波作用下,溶剂分子高
速转动成为激发态,溶剂分子回到基态所释放的能量传递给目标化合物分子,加速其热运动,
从而使提取速率提高数倍,同时又减少其他杂质的溶出,保证提取目标物的质量[17]。超声提
取、索氏提取需要的时间较长，且提取量低于微波提取，因此选定微波辅助提取作为样品的
提取方法。
 
图 1 不同提取工艺的比较
Fig.1 Comparison of different extraction processes
2.2 单因素试验结果与分析
2.2.1 微波温度的影响
由图 2 可以看出，总酚、总黄酮提取量随提取温度的升高而增长较快，在 50 ℃和  60 ℃
时，  总酚、总黄酮提取量较大，温度高于  60 ℃时总酚、总黄酮提取量开始下降。这可能
是由于温度过高，其中的活性成分会受到破坏，杂质的溶出量增加，提取时适宜温度约为
60 ℃。 
         图 2 提取温度的影响
      Fig.2 Effect of extraction temperature
2.2.2 液固比的影响
由图 3 可以看出，在液固比 40:1 mL/g 时，总酚、总黄酮提取量最高，当液固比小于
40:1 mL/g 时，活性物质不能完全被浸提，当液固比大于 40:1 mL/g 后，提取量开始下降。
这可能是由于随着液固比增加，溶液浓度逐渐变小，酚及黄酮类活性物质对微波能的吸收受
到影响[18]，因而香茶藨子总酚、总黄酮的提取量不增加反而下降。从提取效果和减少溶剂
用量等方面综合考虑，用量应不宜过大，故将液固比定在约 40:1 mL/g 比较合适。
 
          图 3 液固比的影响
        Fig.3 Effect of liquid-to-solid ratio
2.2.3 乙醇浓度的影响
由图 4 可以看出，总酚、总黄酮提取量开始随乙醇浓度的增大而增加，当浓度达到 50%～
70% 时，总酚、总黄酮提取量最高，当乙醇浓度再增加时，提取量又开始下降，这可能是
由于乙醇浓度过高，其他醇溶性物质被提出，导致酚及黄酮类化合物溶出量下降[19]。从成
本和提取量来考虑，乙醇浓度最好控制在 50%～70% 为好。 
 
          图 4 乙醇浓度的影响
  Fig.4 Effect of ethanol concentration
2.2.4 提取时间的影响
由图 5 可以看出，总酚、总黄酮提取量随提取时间的加长不断增大，但 15 min 后趋于
稳定且略有下降趋势，这可能与微波提取时间过长导致酚及黄酮类物质破坏有关[20]，因此
提取时间选择 15 min。
 
图 5 提取时间的影响
Fig.5 Effect of extraction time
2.2.5 微波功率的影响
从图 6 功率角度分析发现，功率越大，提取得率越高。但当功率为 600 W 和 700 W 时，
总酚、总黄酮提取量的变化不大，由此可知提取功率 600 W 较为适宜。



图 6 微波功率的影响
Fig.6 Effect of microwave power
2.3 响应面法优化提取工艺
2.3.1回归模型的建立与分析
在本实验中，采用 BBD 实验设计及响应面分析对香茶藨子叶片中总酚及总黄酮提取量
影响比较显著的 3 个参数做了模型拟合以及条件预测。将提取温度（X1，℃），液固比（X2，
mL/g），乙醇浓度（X3，%）做 3 因素，3 水平的 BBD 实验及响应面分析,其中响应值 Y1
为总酚的提取量（mg/g）、Y2 为总黄酮提取量（mg/g），方案及结果如表 2 所示。
采用 Design-Expert.V8.0.6.1 软件，对表 2 中的实验数据进行回归分析，得出香茶藨子
叶片中总酚及总黄酮提取量的回归方程：
以总酚的提取量 Y1（mg/g）为响应值的多元函数回归方程： 
Y1= ﹣ 250.538 ＋ 6.771X1+3.276X2 ＋ 2.959X3 ＋ 7.778×10-3X1X2 ＋ 6.139×10-3X1X3 －
4.822×10-3X2X3－0.064X12－0.045X22－0.026X32
以总黄酮的提取量 Y2（mg/g）为响应值的多元函数回归方程： 
Y2= ﹣ 13.944 ＋ 1.067X1 ＋ 0.842X2 ＋ 0.242X3 － 4.467×10-3X1X2 ＋ 1.028×10-3X1X3 ＋
2.189×10-3X2X3－8.103×10-3X12－8.937×10-3X22－3.787×10-3X32
表 2 响应面实验方案及结果
Table 2 Response surface design and results
实验号 

因素 
总酚提取量 
Y1(mg/g)
 
总黄酮提取量
Y2(mg/g)

X1 X2 

X3

1 –1 –1 0 66.28 31.97
2 1 –1 0 75.27 35.49
3 –1 1 0 69.56 36.94
4 1 1 0 85.55 36.44
5 –1 0 –1 57.25 34.47
6 1 0 –1 62.74 36.92
7 –1 0 1 54.08 29.78
8 1 0 1 70.62 34.08
9 0 –1 –1 56.93 35.91
10 0 1 –1 70.61 37.09
11 0 –1 1 64.57 28.19
12 0 1 1 69.57 33.31
13 0 0 0 98.09 39.18
14 0 0 0 99.05 38.16
15 0 0 0 99.52 39.22
16 0 0 0 97.69 38.98
17 0 0 0 98.82 39.68
对上述方程进行方差分析，结果如表 3 所示。
从表 3 中香茶藨子叶片中总酚以及总黄酮的提取量的二次模型方差统计分析的结果能
够看出其实验模型模拟具有良好的相关性，R2 值分别为 0.9984 和 0.9721，p 值分别为<
0.0001、0.0001，并且失拟项 p 值分别为 0.1621、0.1066，模型拟合显著（p < 0.05）并且失
拟项不显著（p > 0.05），表明建立的此模型为有效模型。
由表 3 中 F值可知各单因素对香茶藨子叶片中总酚提取量的影响程度大小依次为：提取
温度>液固比>乙醇浓度；各单因素对香茶藨子叶片中总黄酮提取量的影响程度大小依次为：
乙醇浓度>液固比>提取温度；每两因素交互作用对香茶藨子叶片中总酚提取量的影响程度
最显著的是提取温度和乙醇浓度；每两因素交互作用对香茶藨子叶片中总黄酮提取量的影响
程度最显著的是提取温度和液固比。
表 3 总酚总黄酮提取量的方差分析
Table 3 ANOVA statistics of the model for extraction yields of total phenolics and flavonoids
变量 
总酚    总黄酮 
均方差 

F 值 

P 值 

  均方差 

F 值 

P 值 

模型 487.21 487.84 < 0.0001 19.21 27.08 0.0001
X1 276.24 276.60 < 0.0001 11.93 16.82 0.0046
X2 129.93 130.10 < 0.0001 18.67 26.31 0.0014
X3 15.99 16.01 0.0052 45.27 63.80 < 0.0001
X1X2 12.25 12.27 0.0100 4.04 5.69 0.0484
X1X3 30.53 30.57 0.0009 0.86 1.21 0.3085
X2X3 18.84 18.86 0.0034 3.88 5.47 0.0519
X12 868.04 869.18 < 0.0001 14.00 19.73 0.0030
X22 430.43 430.99 < 0.0001 17.02 23.99 0.0018
X32 2247.41 2250.35 < 0.0001 48.91 68.93 < 0.0001
失拟项 1.60 2.94 0.1621 1.24 4.01 0.1066
R2 0.9984 0.9721
Adj R2 0.9964 0.9362
2.3.2 响应面分析与优化
根据模型绘制出交互因素响应面图如图 7。
从图 7A 曲面图可以看出，沿提取温度方向较液固比方向的曲面陡，等高线密集，说明
提取温度对香茶藨子叶片中总酚提取量的影响较液固比显著。从图 7B 曲面图可以看出，其
等高线趋向于椭圆形，且坡度最陡，说明提取温度和乙醇浓度的交互作用最为显著；从图
7C 曲面图可以看出，其等高线趋向于椭圆形，坡度较缓，说明液固比和乙醇浓度有较显著
的交互作用但弱于提取温度和乙醇浓度。
从图 7D 曲面图可以看出，其等高线趋向于椭圆形，坡度最陡，且由表 3 可知，X1X2
的 p 值小于 0.05，说明提取温度和液固比的交互作用最为显著；从图 7E 曲面图可以看出，
响应面最为平缓，其等高线也更趋向于圆形，且 X1X3 的 p 值大于 0.05，说明提取温度和乙
醇浓度的交互作用不显著；从图 7F 曲面图可以看出，其等高线趋向于椭圆形，坡度较缓，
且 X2X3 的 p 值大于 0.05，说明液固比和乙醇浓度的交互作用较不显著。
与 F 值大小比较得到的结果相符。


图 7 香茶藨子叶片中总酚（A-C）、总黄酮（D-F）提取量的响应面曲线图
Fig.7 Response surfaces for total phenolics (A-C)and total flavonoids (D-F) contents in the Leaf of Ribes
odoratum Wendl.
通过 Design-Expert.V8.0.6.1 软件对香茶藨子叶片中总酚、总黄酮的微波辅助提取工艺
条件进行优化，得到较优工艺参数为：提取温度 58.37 ℃，液固比 38.9∶1 mL/g, 乙醇浓度
57.32%,提取时间 15 min 和微波功率 600 W。在此条件下，总酚、总黄酮提取量的预测值为
99.38 mg/g、39.58 mg/g。为便于实际操作，在实际操作中将以上工艺参数修正为：提取温
度 58 ℃，液固比 39∶1 mL/g, 乙醇浓度 57%,提取时间 15 min 和微波功率 600 W。
2.3.3 模型验证 
为验证优化设计所得结果，将会在最优条件下进行验证性实验。提取香茶藨子叶片中总
酚、总黄酮的最优条件：提取温度 58 ℃，液固比 39∶1 mL/g, 乙醇浓度 57%,提取时间 15
min 和微波功率 600 W。在此优化条件下进行 3 次平行实验，取平均值，得到的香茶藨子叶
片中总酚、总黄酮的平均提取量分别为 99.89 mg/g 和 38.16 mg/g，与预测值相差很小，说明
该模型与实际拟合度良好，用于预测实验结果比较可靠，可用于香茶藨子叶片中总酚、总黄
酮提取工艺的优化。
2.4 香茶藨子叶片提取物的抗氧化活性测定
2.4.1 对 DPPH 自由基清除率的测定
由图 8 可以看出，微波法辅助提取香茶藨子叶片提取物对 DPPH 自由基有明显的清除
作用，在浓度 0.0125～0.8 mg/mL 的浓度范围内，香茶藨子叶片提取物清除 DPPH 自由基的
能力为 15.35%～89.09%，随着浓度的增加，其对 DPPH 自由基的清除能力增强，对 DPPH
自由基的清除率具量效关系。
           图 8 DPPH 自由基清除能力的测定
      Fig.8 The mensuration of DPPH radical scavening activity
Vc、微波辅助提取、超声辅助提取、索氏提取样品对 DPPH 自由基清除能力的 IC50 值
分别为 0.0339 mg/mL、0.0445 mg/mL、0.0562 mg/mL 和 0.0797 mg/mL。由此可见，三种提
取方法获得的提取物对 DPPH 自由基的清除能力分别为：Vc>微波提取物>超声提取物>索氏
提取物，微波辅助提取得到的提取物对 DPPH 自由基具有更好的清除效果。
2.4.2 FRAP 法测定总抗氧化能力 
采用 FRAP 法测定不同方法下得到的香茶藨子叶片提取物的抗氧化能力，结果如图 9
所示，抗氧化能力由高到低为：微波提取 >超声提取 >索氏提取。结果表明对于抗氧化活
性物质的提取，微波辅助提取效果最好，索氏提取效果最差。
 
      图 9 不同提取方法的抗氧化能力比较
    Fig.9 The comparation of antioxidant ability between different extraction method
3 结论
本实验分别运用微波提取、超声提取、索氏提取对香茶藨子叶片中酚及黄酮类化合物进
行提取，相较于其他两种方法，微波提取时间短且提取量高，因此微波提取法适于从香茶藨
子叶片中提取酚及黄酮类化合物，具有提取速度快，效率高，避免长时间高温接触而导致的
化合物降解等优点[21]。
通过响应面法优化微波提取香茶藨子叶片中总酚及总黄酮，得到最佳提取工艺条件为：
提取温度 58 ℃，液固比 39∶1 mL/g,乙醇浓度 57%,提取时间 15 min 和微波功率 600 W，
此条件下总酚及总黄酮的实际提取量分别为 99.89 mg/g 和 38.16 mg/g。微波提取得到的活性
物质较超声提取、索氏提取具有更好的 DPPH 自由基清除能力和 FRAP 抗氧化能力，本文
为香茶藨子叶片的开发利用提供了一定的理论依据。
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