全 文 ：　基金项目:广西区科技攻关项目 ,桂科攻 0235022-1B;广西区回国人员科技基金项目 ,桂科回 0009004
作者介绍:朱华 ,男 ,广西南宁人 , 博士 ,广西中医学院教授 ,博士生导师
通讯联系人:肖建波
收稿日期: 2004-09-01
实验室与分析
拳卷地钱中芹菜素的测定
朱　华1 ,邹登峰1 ,黄海滨1 ,肖建波2 ,刘光田2
( 1.广西中医学院 ,广西 南宁　 530001; 2.中南大学化学化工学院 , 湖南 长沙　 410083)
　　摘　要:建立地钱中芹菜素含量的测定方法。 样品用 80%乙醇水溶液提取后 ,用以硅胶为固定相的固相萃取柱纯
化 ,洗去杂质后的流出液为反相高效液相色谱法测定用的供试液 ,克服了高杂质含量基质条件下液 -液萃取法存在的萃
取不完全的现象。 在 1. 60～ 12. 80 mg· L- 1范围内 ,芹菜素进样量与峰面积响应值呈良好的线性关系 , r= 0. 9995;回收
率为 98. 71% ～ 103. 20% , RSD为 1. 6% ( n= 5)。结果表明 ,该法简便快速 ,分析结果准确可靠 ,重复性好 ,可用于地钱
中芹菜素的质量测定。
　　关键词: 地钱 ;芹菜素 ;固相萃取 ;反相高效液相色谱法
　　中图分类号: R 284. 1　　　　　文献标识码: A　　　　　文章编号: 1671-9905( 2005) 02-0030-03
　　拳卷地钱 ( M archantia convoluta )为苔藓植物门
苔纲地钱科植物 ,广泛分布在西藏、广西、贵州等高寒
山区 [1 ]。 拳卷地钱的中医功用主要包括:清热利湿 ,解
毒敛疮以及主治湿热黄胆、疮痈肿毒、肝炎等 ,我国西
南山区民间使用拳卷地钱治疗肝炎已有数千年的历
史。国内外研究较多的是苔纲地钱科的代表植物地钱
( Ma rchantia po lymo rpha) ,国内外很少见有苔纲植物
拳卷地钱 ( M archantia convoluta )化学成分和生物活
性的研究报道 [2 ]。拳卷地钱全草含挥发油、萜类化合物
(以倍半萜为主 )、黄酮类化合物等有效成分 [3～ 6 ] , 黄
酮类化合物以芹菜素-7-O-β -D-葡萄糖醛酸甙、芹菜
素、槲皮素等为主 [3～ 5 ]。芹菜素的测定方法主要有分光
光度法和高效液相色谱法 ,大多采用液 - 液萃取作为
前处理手段和梯度洗脱高效液相色谱法测定 ,操作繁
琐 ,测定时间长 ,且样品萃取不完全 ,重现性较差。本研
究采用固相萃取法作为反相高效液相测定的前处理方
法 ,等梯度洗脱 ,外标法测定地钱中的芹菜素含量。 该
法简便快速 ,分析结果准确可靠 ,重复性好 ,结果令人
满意。
1　实验部分
1. 1　仪器、试剂和原料
　　 BT 8100高效液相色谱仪 ; BT8200 UV检测器 ;
756 MC紫外可见分光光度计 ;旋转蒸发仪。
　　乙醇、石油醚、乙酸乙酯等 (均为 AR级 ) ;硅胶
( AR级 ) ;甲醇和乙腈为色谱纯。芹菜素对照品由中国
药品生物制品鉴定所提供 ;药材地钱 ,广西中医学院提
供 ,经广西中医学院教授鉴定为拳卷地钱 ( Marchantia
convoluta. )。
1. 2　色谱条件
　　色谱柱为 Kromasil C18柱 ( 250× 4. 6 mm i. d, 5
μm);流动相为乙酸∶甲醇∶乙腈∶磷酸∶水= 10∶
200∶ 100∶ 10∶ 200( V /V) ;流速 0. 60 mL· min- 1 ,检
测波长 350 nm;柱温 25℃ ;进样量 6. 0μL(自动进
样 )。
1. 3　实验方法
1. 3. 1　对照品溶液的制备
　　精密称取芹菜素对照品 0. 0100 g ,置 250 mL容
量瓶中 ,加甲醇约 60 mL,微热溶解 ,冷却室温 ,加少量
冰醋酸 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,得质量浓度为
40. 00 mg· L- 1的对照品溶液。
1. 3. 2　供试品溶液的制备
　　取粉碎后的地钱干燥品约 20 g ,精密称定 , 80%
乙醇 100 mL 70℃下回流提取 0. 5 h ,重复 3次 ,过滤 ,
合并滤液 ,减压回收乙醇 ,蒸至干 ,加 20 mL甲醇溶
解 ,拌入处理后的硅胶 30 g ,水浴 60℃缓慢加热 ,挥发
第 34卷　第 2期
2005年 04月 　　　
化　工　技　术　与　开　发
Tech nolog y & Development of Chemical Indust ry
　　　V ol. 34　 No. 2
Apr. 2005
¥
去溶剂 ,蒸干 ,干法装于固相萃取小柱中 ,先用 100 mL
氯仿 -甲醇 ( 25∶ 12, V /V )混合液萃取 ,再用 100 mL
氯仿 -甲醇 ( 25∶ 20, V /V )混合液萃取 ,收集后者的萃
取液 ,减压蒸馏 ,浓缩至 50 mL即得地钱黄酮提取物
的供试品溶液。
2　结果与讨论
2. 1　线性关系校准曲线
　　取芹菜素对照品贮备液适量 ,用流动相稀释 ,制成
质量浓度分别为 1. 60、 3. 20、 6. 40、 8. 00、 9. 60和
12. 80 mg· L- 1对照品溶液 ,依次进样测定 ,以质量浓
度ρ( mg· L- 1 )为横坐标 ,峰面积响应 A( mV· s)为纵
坐标 ,线性拟合 ,得线性方程 A= 1. 013× 105ρ- 5. 448
× 104 , r= 0. 9995,表明在 1. 60～ 12. 80 mg· L- 1浓度
范围内 ,样品质量浓度与峰面积响应值呈良好的线性
关系。 校准曲线见图 1。
图 1　校准曲线
2. 2　精密度试验
　　取质量浓度为 6. 04 mg· L- 1的对照溶液 ,连续进
样 6次 ,测得峰面积响应值的 RSD为 1. 6% ( n= 5)。
对照品的 HPLC色谱图见图 2。
图 2　标准品色谱图
2. 3　稳定性试验
　　取质量浓度为 6. 40 mg· L- 1的对照品溶液在配
制的当天以及后 3 d内不同的时间进样测定 ,测得峰
面积响应值的 RSD为 1. 49% ( n= 5) ,表明对照品溶
液至少在 4 d内稳定。
2. 4　重复性试验
　　取样品 5份 ,每份约 5 g ,精密称定 ,分别按 1. 3. 2
方法制得供试品溶液 ,进样测定 ,计算得 5份样品的含
量平均值为 0. 57× 10- 2 ( w ) , RSD为 2. 98% ( n= 5)。
2. 5　回收率试验
　　取样品 5份 ,每份约 5 g ,精密称定 ,分别按 1. 3. 2
方法制得供试品溶液 ,取每份供试品溶液各 10 mL于
25 mL容量瓶中 ,各精密加入质量浓度为 3. 20 mg·
L- 1的对照品贮备液 5 mL,加流动相稀释至刻度 ,摇
匀 ;分别照 1. 3. 2方法制得回收试验用供试品溶液 ,进
样测定。 5份样品平行测定见表 1,测得平均回收率为
100. 66% , RSD为 1. 38% ( n= 5)。
表 1　回收试验结果 ( n= 5)
Sample
/m· g- 1
Original
/m0· μg- 1
Added
/mA· μg- 1
Found
/mA· μg- 1
Recov ery
/%
Av erage
/%
5. 0892 22. 90 16. 00 39. 88 102. 51
5. 1864 25. 40 16. 00 41. 42 100. 05
5. 1467 26. 20 16. 00 41. 71 98. 84 100. 66
5. 2810 24. 30 16. 00 39. 78 98. 71
5. 1023 24. 00 16. 00 41. 28 103. 20
2. 6　样品测定结果
　　取 1. 3. 2供试品溶液 5份 ,依 1. 2法进样测定 ,外
标法计算芹菜素含量 ,测定结果见表 2。供试品色谱图
见图 3。
图 3　样品色谱图
表 2　样品测定结果
序号 芹菜素含量 /% 平均值 /% RS
1 0. 0055
2 0. 0056
3 0. 0059 0. 0057 2. 9
4 0. 0058
5 0. 0058
2. 7　讨论
2. 7. 1　对照品的溶解
　　曾用不同溶剂进行试验 ,发现芹菜素对照品微溶
于冷的甲醇、乙醇、正丁醇 ,不溶于丙酮、水、乙醚和氯
仿。在热的甲醇 ( 50℃ )中溶解度较大 ,溶解后的溶液
显淡黄色 ,置于冰箱中放置 , 12 h内测定 ,芹菜素含量
31第 2期　　　　　　　　　　　　　朱华等:拳卷地钱中芹菜素的测定　　　　　　　　　　　　　　　　　
未见有明显改变 ,但放置 2 d后溶液变混浊 ,有芹菜素
晶体析出 ;芹菜素溶液直接放在室温下 3 d内芹菜素
含量未见有明显改变 , 4 d后测定芹菜素含量明显减
少 ;用甲醇溶解后马上加入少量冰醋酸使溶液呈酸性 ,
未见芹菜素固体析出 , 7 d内测定 ,未见芹菜素含量明
显改变。试验结果表明芹菜素在酸性条件下稳定 ,在碱
性条件下不稳定。本文采用甲醇作溶剂 ,微热使芹菜素
完全溶解 ,溶解后加少量冰醋酸 , 3 d后未见芹菜素固
体析出 , 7 d内亦未发现其含量发生改变。
2. 7. 2　地钱中黄酮类化合物的提取
　　本文用不同溶剂 (甲醇、乙醇、丙酮 )对地钱中的黄
酮类化合物进行提取研究。分别称取地钱样品 10 g ,在
60℃下 ,用不同浓度的甲醇、乙醇、丙酮提取 ,时间 1
h, 2次 ,分光光度法测定总黄酮含量 [ 4] ,结果见图 4。从
图 4可知相同时间下乙醇提取率最高 ,丙酮次之 ,甲醇
最差。 随溶剂浓度的增大乙醇对总黄酮提取率影响显
著。考虑到试验的的安全性 ,本研究选用乙醇水溶液为
提取溶剂 ,经过正交试验确定 70℃下回流提取 0. 5 h,
提取次数 3次 ,提取率达 1. 94% [7 ]。
图 4　不同溶剂对总黄酮的提取效果
2. 7. 3　固相萃取洗脱剂的选择
　　本文试验了不同配比的氯仿、甲醇溶液对芹菜素
萃取的影响。 配制比例为 25∶ 1, 25∶ 2…… 25∶ 25的
混合溶液 (氯仿∶甲醇 , V /V ) ,作萃取液 ,上固相萃取
柱萃取。萃取曲线见图 5。
　　从图 5可知 ,从配比为 25∶ 15的氯仿和甲醇萃取
液开始出现芹菜素 ,配比为 25∶ 15的氯仿和甲醇萃取
液基本将芹菜素完全洗脱下。故本文选择配比为 25∶
12(氯仿∶甲醇 V /V )的萃取液作为杂质的洗脱剂 ,去
除杂质 ;然后用配比为 25∶ 20(氯仿∶甲醇 , V /V )的
萃取液萃取出芹菜素 ,作为 HPLC的供试品溶液。
图 5　芹菜素萃取曲线
2. 7. 4　色谱分离
　　在拟定的色谱条件 (以多元混合溶剂为流动相 )
下 ,得到芹菜素标准品的色谱图 (图 2) ,以及地钱黄酮
制备液的色谱图 (图 3)。由图 3可见 ,地钱样品中芹菜
素与相邻组分的分离度 RS> 1. 5,达到基线分离 ,符合
定量分析之要求 ,且在此色谱条件下地钱中其它黄酮
类化合物分离度也较好 ,故本法确定的色谱条件也可
用于地钱中其它黄酮类化合物分析测定。
3　结论
　　以固相萃取法作为地钱中芹菜素反相高效液相色
谱测定中样品的分离纯化处理方法 ,不损失待测成分 ,
简便实用 ,可作为地钱中的芹菜素的质量控制方法。
参考文献:
[ 1 ]　中国科学院青藏高原综合科学考察队 .西藏苔藓植物志
[ M ].北京:科学出版社 , 1985. 553.
[ 2 ]　中华人民共和国科技部 .拳卷地钱的化学成分与药效研
究 .科技项目查新报告 ,编号: 200443Z1100032.
[3 ]　朱华 ,肖建波 ,邹登峰 ,等 .硅胶柱色谱 /RP-HPLC / LC-
ESI-M S分离纯化鉴定拳卷地钱中芹菜素 -7-O-β -D-葡萄
糖醛酸甙 [ J].天然产物研究与开发 , 2005, 17( 1): 38-41.
[ 4]　肖建波 ,朱华 ,钟世安 ,等 .反相高效液相色谱法用于拳卷
地钱中黄酮类化合物的分离与测定 [ J].分析试验室 ,
2005, 23( 3): 17-19.
[ 5]　曹慧 ,肖建波 ,周春山 ,等 .拳卷地钱中黄酮类化合物的含
量测定 [ J].中南药学 , 2005, 3( 1): 7-9.
[ 6]　曹慧 ,肖建波 ,周春山 ,等 .拳卷地钱不同提取部位的气相
色谱 -质谱分析比较和部分生物活性研究 [ J].质谱学报 ,
2005, 26( 1): 1-5.
[ 7 ]　朱华 ,肖建波 ,钟世安 ,等 .地钱总黄酮的提取研究 [ J].林
产化学与工业 , 2004, ( 2): 69-72. (下转第 43页 )
32　　　　　　　　　　　　　　　　化　工　技　术　与　开　发　　　　　　　　　　　　　第 34卷
　　 ( 4)保温 0. 5 h后解除真空 ,降温至 120℃ ,加入
混合溶剂 ,充分搅匀成透明液。
3　结果和讨论
3. 1　工艺控制条件
3. 1. 1　反应温度的影响
　　酯化反应中会生成水 ,通过升高温度尽快除去生
成水 ,对反应向生成物方向进行有利 ,但过高的温度和
过快的升温速率会使醇类随水一起逸出 ,破坏原醇酸
比 ,影响产品性能 ;同时过高的温度还会导致副反应发
生 ,使产品色泽加深 ,故反应时间控制在 1. 5 h内 ,分
馏器顶温不超过 120℃。
3. 1. 2　反应终点的确定
　　缩聚反应中随着真空度的提高 ,反应温度的上升 ,
体系粘度会越来越大直至产生爆聚 ,形成不溶不融物 ,
故应控制真空度和升温速率 ,每隔 20 min大气压降低
13. 3 kPa,温度升高 5℃ ,反应终点可以通过测定产物
粘度来确定 ,也可通过搅拌器电机电流表数值来确定。
3. 2　产品性能技术指标
　　试制产品经测试达到如表 2的技术指标。
3. 3　经济效益分析
　　以废弃聚酯瓶为原料取代对苯二甲酸二甲酯制聚
酯清漆 ,可降低原材料成本 ,每 t产物降低 60 0元左
表 2　试制产品技术指标
检测项目 技术指标 测试结果
干燥时间 /h 表干≤ 2 1. 5
实干≤ 18
附着力 /级 ≤ 2 16
硬度 (摆杆法 ) ≥ 0. 5 0. 65
冲击强度 /MPa 5 5
耐水性 /h 200 h无变化 合格
耐磨性 /g 100 r损耗 < 0. 03 0. 01
右。考虑到废料回收所增加的清理、粉碎所耗费的人
工、动力等成本 ,每 t产品销售成本比原销售的成本低
约 450元。
3. 4　结论
　　 ( 1) 以废聚酯饮料瓶为主要原料生产聚酯清漆 ,
其工艺是可行的 ,产品性能符合部颁标准 ,质量可靠。
　　 ( 2)该项目的研制成功既为废聚酯的再生利用找
到了新的途径 ,又为聚酯清漆提供了价廉的原料 ,降低
了生产成本 ,增加了经济效益。
　　 ( 3) 该项目具有工艺简单、操作便利、设备投资
少、经济效益好等特点 ,具有良好的社会、经济和环保
效益。
　　 ( 4)本产品尚有色泽较深 ,实干时间较长的缺点 ,
有待进一步改进。
Preparation of Polyurethane Paint with Crackated PET Bottles
WANG Min
( Liaoh e Chemical Indust ry Plant, Liao zhong 110200, China)
Abstract: Used waste PET bot tles as material , through the process of alcoholy sis, esteri fica tion, and
polycondensation, the po lyurethane paint was prepared.
Keywords: bot t le; po lyurethane paint; w aste uti lix ation
(上接第 32页 )
Determination of Apigenin in Marchantia Convoluta
Z HU Hua1 , ZOU Deng-feng1 , HUANG Hai-bin1 ,X IAO J ian-bo2 ,L IU Guang-t ian2
( 1. Guangxi Chinese Medicine Unive rsity , Nanning 530001, China;
2. Colleg e o f Chemistry and Chemical Engineering , Cent ral South Univ ersity, Chang sha 410083, China )
Abstract: A method fo r determination of apig enin in M archantia convoluta w as established. The sample w as
ex t racted by 80% ETOH, then the so lution w as purif ied through the so lid phase ex traction column with silica
g el as stationary phase. The liquid which w as eluted af ter the cart ridg e abso rbed apig enin to satura tion state
w as used as a test solution and measured by HPLC-UV. The propo sed method can overcome the draw back of
incomplete ex t raction o f apig eninfo r conventional liquid-liquid ex traction method. The linea r range of 1. 60～
12. 80 mg /L ( r= 0. 9995) , recoveries of 96. 93%～ 106. 12% and RSD of 1. 6% ( n= 5) fo r the method w ere
obtained. The method was proved to be simple, accurate, repea table, and could be used for the quali ty contro l of
apig enin in M archantia convoluta.
Keywords: marchantia convoluta; apigenin; solid phase ex t raction; HPLC
43第 2期　　　　　　　　　　　王　敏:废聚酯饮料瓶裂解制备聚酯清漆