全 文 ： 2010, Vol. 31, No. 18 食品科学 ※分析检测252
可见分光光度法测定刺山柑花蕾中总黄酮含量
姜秀娟 1 ,2，唐金成 2，白红进 1,2,*
(1.新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室，新疆 阿拉尔 843300；
2.塔里木大学生命科学学院，新疆 阿拉尔 843300)
摘 要：通过不同方法提取刺山柑花蕾中总黄酮，以芦丁为标准品，NaNO3-Al(NO3)3-NaOH体系显色，可见分
光光度法测定其含量，检测波长为 500nm。结果表明，甲醇回流法提取效果最好，在 0～32mg/L(r=0.9997)范围内
线性关系良好，平均加标回收率为 100.3%，RSD=0.98%(n=6)，测得样品中总黄酮平均含量为 1.13%。该法操作
简便、结果准确，可用于总黄酮的含量测定。
关键词：刺山柑花蕾；总黄酮；分光光度法；含量测定
Visible Spectrophotometric Determination of Total Flavonoids in Capparis spinosa L. Buds
JIANG Xiu-juan1,2，TANG Jin-cheng2，BAI Hong-jin1,2,*
(1. Key Laboratory of Protection and Utilization of Biological Resource in Tarim Basin of Xinjiang Production and Construction Corps,
Alar 843300, China；2. College of Life Science, Tarim University, Alar 843300, China)
Abstract ：Different extraction methods were coupled with visible spectrophotometry to develop a simple and accurate method
for quantifying total flavonoids in Capparis spinosa L. buds. The detection wavelength was set at 500 nm. Rutin was used as the
standard sample and NaNO3, Al(NO3)3 and NaOH was used to compose the coloration system. Results indicated that the methanol
reflux method exhibited the highest extraction rate for total flavonoids. A good linear relationship was observed in the range of 0
to 32 mg/L (r = 0.9997) and average recovery rate was 100.3% with a relative standard deviation of 0.98% (n=6). The average
content of total flavonoids in the samples from Kuche county, Xinjiang autonomous region was 1.13%.
Key words：Capparis spinosa L. buds；total flavonoids；spectrophotometry；determination
中图分类号：O657.32 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2010)18-0252-03
收稿日期：2009-11-03
基金项目：新疆生产建设兵团科学技术局政策引导项目(2006YD29)；
塔里木盆地生物资源保护利用兵团重点实验室开放项目(BR0609)
作者简介：姜秀娟(1983—)，女，硕士研究生，研究方向为天然产物化学。E-mial：jxjuan2010@126.com
*通信作者：白红进(1967 —)，男，教授，硕士，研究方向为天然产物化学。E-mail：bh j67@163.com
刺山柑(Capparis spinosa L.)为白花菜科山柑属植
物，又名老鼠瓜、野西瓜、槌果藤等。主要分布于
亚洲西部、欧洲、北美和大洋洲。在我国主产于西北
干旱地区，尤其是新疆各沙漠地区。刺山柑最早报道
于《新疆中草药》，是一种常用的民族药物[ 1 - 2 ]，其次
还是优良的固沙植物[3]。据国外文献报道，在地中海地
区，刺山柑花蕾被腌制食用，腌制的花蕾以它独特的
香味作为调味品在凉拌菜、面食、肉类及酱汁等中长
期使用[ 4- 6 ]；用甲醇法提取低温冻干的刺山柑花蕾，在
体外的炎症过程中对软骨细胞有保护作用，认为与提取
物中含有的黄酮类化合物有关，它具有明显的抗炎、
抗氧化作用，其保护作用明显优于常用的消炎药[ 7 - 8 ]。
在新疆，刺山柑果实作为一种抗风湿药物在民间广泛
应用[ 3 , 9]，而其花蕾作为食品的应用开发还处于起步阶
段[ 1 0 ]，为进一步开发利用该植物资源，本实验研究新
疆南疆产刺山柑花蕾中总黄酮的提取方法并对其含量进
行测定，为深入研究其化学成分和药理活性提供一定
的科学依据。
1 材料与方法
1.1 材料、试剂与仪器
刺山柑花蕾于 2008年 5月采于新疆库车县，样品经
阴干，粉碎，密封冷藏保存备用。
甲醇、三氯化铝、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化
钠(均为国产分析纯)；芦丁对照品 德国Dr.Ehrenstorfer
有限公司。
Cary100紫外 -可见分光光度计 澳大利亚瓦里安公
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司；SK3200H超声波清洗器 上海科导超声仪器公司；
ZP-200振荡器 江苏太仓市实验设备厂；RE-50B水浴
锅 上海申生科技有限公司。
1.2 方法
1.2.1 黄酮类化合物的定性鉴别
通过颜色反应和纸层析的方法来鉴别黄酮类化合物[11]。
1.2.2 总黄酮含量的测定
利用NaNO3-Al(NO3)3-NaOH比色法测定试液中总黄
酮的含量。
1.2.2.1 标准溶液的制备
精密称取 1 2 0℃干燥至质量恒定的芦丁标准品
10mg，置于 100mL容量瓶中，加甲醇 50mL，超声溶
解，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得芦丁标准品，其
质量浓度为 0.1mg/mL。
1.2.2.2 供试品溶液的制备
方法一(超声波提取法)：精密称取刺山柑花蕾粉末
1.000g于 100mL具塞三角瓶中，加甲醇 30mL，超声提
取 30min，滤过，残渣再加入 30mL甲醇超声提取30min，
滤过，合并滤液，定容于 100mL的容量瓶中。平行提
取 3 次。
方法二(热回流提取法)：精密称取刺山柑花蕾粉末
1.000g于圆底烧瓶中，加甲醇 30mL，回流提取 1h，滤
过，残渣再加入 30mL甲醇回流提取 1h，滤过，合并
滤液，定容于 100 mL 的容量瓶中。平行提取 3 次。
方法三(振荡浸提法)：精密称取刺山柑花蕾粉末
1.000g于 100mL具塞三角瓶中，加甲醇 30mL，振摇提
取 30min，滤过，残渣再加入 30mL甲醇振摇提取30min，
滤过，合并滤液，定容于 100mL的容量瓶中。平行提
取 3 次。
根据含量比较结果，选择总黄酮含量高的进行提取
测定精密度、稳定性、重现性、回收率及含量。
1.2.2.3 吸收波长的确定
放置 6min；加质量分数为 4%氢氧化钠溶液 10mL，再
加水至刻度，摇匀，放置 15min。以相应试剂为空白，
在 420～700nm波长范围内扫描光谱，同上操作得同条
件下芦丁对照品光谱图。经比较，该法显示供试品与
芦丁标准品在波长 500nm处有相同的最大吸收，故选用
本法来显色。其最大吸收波长为 500nm(图 1)。
1.2.2.4 标准曲线的绘制[12]
精密吸取 1.2.2.1节中芦丁标准品溶液 0、1.0、2.0、
3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0mL分别置于 25mL容量
瓶中，加甲醇补到 10mL，按 1.2.2.3节方法操作，以第
1份溶液为空白，在 500nm波长处测定吸光度，以吸光
度( A )为纵坐标、浓度( C )为横坐标，绘制标准曲线，
得回归方程：A = 0 . 0 1 8 2 5 C + 0 . 0 0 4 9 3，r=0 .9997，
RSD=0.49%。表明样品检测浓度在 0～32mg/L的范围内
与吸光度线性关系良好。
1.2.2.5 精密度实验
精密吸取 1.2.2.1节中芦丁标准品溶液 0.5mL，置于
25mL容量瓶中，共 6份，按 1.2.2.3节操作，分别测定
吸光度。
1.2.2.6 稳定性实验
精密吸取1.2.2.2节方法二中样品溶液2mL，按 1.2.2.3
节操作，每隔 10 mi n 测定 1 次吸光度，共测 6 次。
1.2.2.7 重现性实验
精密称取一定质量的样品粉末，按 1.2.2.2节方法二
中方法制备成供试品溶液 6 份，分别从中精密吸取
2mL，按 1.2.2.3节操作，测定吸光度。
1.2.2.8 回收率实验
精确称取已知含量的样品 0.500g，平行 6 份，再
分别精确加入芦丁标准品溶液(1 .04mg/mL)0.5、1.0、
1.5、2.0、2.5、3.0mL，按 1.2.2.2节方法二中方法制
备成供试品溶液，分别从中精密吸取 2mL，按 1.2.2.3节
操作，测定吸光度，计算回收率。
1.2.2.9 样品含量测定
精确吸取 1.2.2.2节方法二中样品溶液 2.0mL，共 3
份，分别置于 25mL容量瓶中，按 1.2.2.3节操作，测
定吸光度。
2 结果与分析
2.1 总黄酮的定性鉴别
2.1.1 显色反应结果
精密量取方法一中的供试品溶液6mL置于25mL量瓶
中。加质量分数为 5 % 亚硝酸钠溶液 l m L，混匀，放
置 6min；加质量分数为 10%硝酸铝溶液 1mL，摇匀，
显色反应 紫外光 浓氨水 盐酸 -镁粉 氢氧化钠溶液
现象 灰褐色荧光斑点 紫外光下黄褐色荧光斑点 泡沫呈紫红色 深黄色
表 1 显色反应结果
Table 1 Results of color reaction
图 1 芦丁和样品的扫描光谱
Fig.1 Scanning spectra of rutin and samples
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
芦丁
吸
光
度
波长 /nm
450 500 550 600 650 700
样品
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由表 1 可知，样品液中含有黄酮类化合物。
2.1.2 纸层析
取样品溶液 10μL点在滤纸上，用 V(正丁醇):V(冰
醋酸):V(水)=4:1:5为展开剂，上行展开 5h，取出晾干。
喷 1 % 氯化铝乙醇溶液，吹干。紫外灯下观察，有黄
色荧光斑点。结果表明，样品液中含有黄酮类化合物。
定性检测表明刺山柑花蕾中含有黄酮类化合物，这
与文献报道的刺山柑花蕾中含有山奈黄素和槲皮素等黄
酮类化合物相一致[7 ,13-14]。
2.2 不同提取方法的考察
样品处理号 1 2 3 平均值 RSD/%
超声处理 7.9 8.1 8.0 8.0 1.25
热回流提取 9.3 8.7 9.1 9.0 3.42
振荡浸提 7.4 7.3 7.2 7.3 1.37
表 2 不同提取方法的总黄酮含量
Table 2 Contents of total flavonoids in methanol extracts from
Capparis spinosa L. buds prepared by different extraction methods
mg/L
样品号 1 2 3 4 5 6 平均值 RSD/%
标准品吸光度 0.0712 0.0719 0.0700 0.0722 0.0716 0.0711 0.0713 1.09
表 3 精密度实验
Table 3 Precision test
样品号 1 2 3 4 5 6 平均值 RSD/%
样品吸光度 0.1666 0.1643 0.1679 0.1653 0.1653 0.1624 0.1653 1.14
表 4 稳定性实验
Table 4 Stability test
样品号 1 2 3 4 5 6 平均值 RSD/%
样品吸光度 0.1656 0.1738 0.1717 0.1598 0.1680 0.1628 0.1670 3.17
表 5 重现性实验
Table 5 Reproducibility test
样品号 样品中黄酮总量 /mg 芦丁加入量 /mg 实际测得值 /mg 回收率 /%
1 1.708 0.52 2.236 101.6
2 1.708 1.04 2.756 100.8
3 1.708 1.56 3.285 101.1
4 1.708 2.08 3.771 99.2
5 1.708 2.60 4.295 99.5
6 1.708 3.12 4.819 99.7
表 6 回收率实验
Table 6 Spike recovery test
样品号 1 2 3 平均值 RSD/%
总黄酮含量 /% 1.16 1.10 1.14 1.13 2.73
表 7 样品含量测定结果
Table 7 Determination results of real samples
由表 2可知，热回流提取法总黄酮含量明显高于超
声和振摇，故采用热回流提取法。与传统的热回流相
比，虽然超声提取法和振摇提取法具有提取时间短、无
需加热等优点，但对刺山柑花蕾中总黄酮的提取率不高，
这可能与花蕾中含有的黄酮类化合物的种类与结构有关。
2.3 精密度实验
由表 3可知，6个平行测定结果的相对标准偏差为
1.09%，说明用该方法测定标准溶液中芦丁的含量精密
度较好。
2.4 稳定性实验
由表 4可知，样品显色后在 60min内的吸光度相对
标准偏差为 1.14%，说明热回流法提取的样品液稳定性
较好。
2.5 重现性实验
3.17%，说明热回流法提取的试液重现性良好。
2.6 回收率实验
由表6可知，6个回收率实验结果的平均值为 100.3%，
相对标准偏差为 0.98%，说明热回流法提取的总黄酮回
收率高。
2.7 样品中总黄酮含量的测定
由表 7可知，采用热回流法提取的总黄酮平均含量
为 1.13%，说明其花蕾中总黄酮含量较高。
3 结 论
本实验以芦丁为标准品，建立了刺山柑花蕾中总黄
酮的含量测定方法。该方法具有线性范围宽、灵敏度
高、操作简单、结果准确等优点。
参 考 文 献 ：
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