全 文 ：药　物　生　物　技　术
Pharmaceutical Biotechnology　2003 ,10(4):229 ～ 231
＊狗舌草黄酮类化合物对 3种肿瘤细胞的药物敏感试验
司红丽1 ,王建娜2 ,王跃虎1 ,王建华1
(1.西北农林科技大学动物科技学院 , 陕西 杨凌 712100;2.河南省南阳市第一人民医院 ,河南 南阳 473000)
摘　要　用MTT 法检测狗舌草黄酮类化合物对 3种不同肿瘤细胞的药物敏感试验表明 ,狗舌草黄酮类化合
的不同浓度均对肝癌细胞 Hep-G2不敏感;100μg ml时对肝癌细胞 HCC 为中度敏感;在 10μg ml和 100μg ml时对
淋巴性白血病细胞 L1210分别为中度敏感和高度敏感 , 且半数致死浓度(I C50)为 7.756μg ml。表明狗舌草黄酮类
化合物对 L1210有很强的抑制作用。
关键词　狗舌草;黄酮类化合物;MTT 还原法;L1210细胞;药物敏感试验
中图分类号:R965　　　文献标识码:A　　　文章编号:1005-8915(2003)04-0229-03
　　狗舌草(Tephroseris Kirilowii Turcz.Holub)为菊
科狗舌草属植物 ,也有人把它归为千里光属植物 ,
主要分布于我国东北 、华北和西北地区[ 1] 。味苦 ,
性微甘 、寒 。有小毒或无毒 ,有清热解毒 、利水的功
能 ,临床上用于治疗发热 、贫血 、出血 、肝脾和淋巴
结的肿大[ 2] 。狗舌草除具有解痉抗溃疡作用外 ,对
白血病细胞 、恶性网状细胞肉瘤及皮肤癌有较强的
抑制作用 ,其化学成分主要为生物碱 。陈进军[ 3]等
对狗舌草的化学成分进行了系统分析 ,证实狗舌草
主要含有生物碱和黄酮类化合物。本研究提取分离
狗舌草中的黄酮类化合物并就其对 3种肿瘤细胞
Hep-G2 ,HCC和 L1210细胞的药物敏感性进行研究。
1　材料与方法
1.1　实验材料
1.1.1　狗舌草　狗舌草于 1999 年 8 月采自陕西
省陇县关山牧场 ,经中科院西北植物研究所鉴定 。
阴干 ,粉碎 ,贮存于干燥阴凉处备用 。取狗舌草粉
末用工业甲醇浸泡得甲醇浸出液 ,回收甲醇得总浸
膏。浸膏用适量热水溶解 ,过滤除不溶物后得水溶
液 ,水相用石油醚萃取除去叶绿素等脂溶性杂质 ,
再用乙酸乙酯萃取 ,回收有机相溶剂得狗舌草黄酮
类化合物 。适量黄酮类化合用生理盐水溶解 , 0.22
μm 微孔滤膜过滤除菌 ,4℃保存备用。
1.1.2　细胞株　肝癌细胞 Hep-G2和 HCC ,淋巴性
白血病细胞L1210均由第四军医大学实验动物中心细
胞室提供 。用常规细胞培养方法复苏 、传代备用 。
1.2　试剂及仪器　
MTT(tetrazdium)(华美生物工程公司生产);
RPMI-1640(美国Hyclone生产);胎牛血清(伯安生
物工程有限公司);胰蛋白酶(伯奥生物科技公司);
DMSO(美国 Sigma公司);96孔培养板(美国Corning
公司);DG5031型酶联免疫检测仪(华东电子管厂);
SW-CJ-1F型净化工作台(苏州净化设备厂);CO2培
养箱(日本Sanyo公司);生物显微镜(日本 Olympus
光学工业株式会社);COIC 倒置显微镜(重庆光学
仪器厂);80-2型台式离心机(上海手术器械厂);其
他有冻存管 、载玻片 、手掀式计数器 、微量加样器 、血
细胞记数板 、液氮罐;25ml ,100ml细胞培养瓶等。
1.3　方　法
1.3.1　细胞培养[ 4] 　Hep-G2 、HCC 、L1210细胞均培
养于含 10%胎牛血清的 RPMI-1640完全培养液中 ,
置于 5%CO2 、37℃培养箱培养 ,隔天换液 。细胞长
满后HCC 、Hep-G 2用5.0 mg L胰蛋白酶消化传代;
L1210细胞直接离心传代 。取对数生长期细胞 ,将细
胞浓度调整为 1×104个 ml备用 。
1.3.2　MTT 比色测定[ 5] 　取对数生长期的细胞
229
收稿日期:2003-01-08
基金项目:中国杨凌农业高科技示范区专项基金 1999KG13
作者简介:司红丽 ,女 , 1978年生,山东淄博人 ,硕士研究生 ,从事动物营养代谢性与中毒性疾病的研究。
　 通讯联系人:王建华教授 ,男 , 1948年生 ,西北农林科技大学动物科技学院临床兽医组 , 712100;Tel:029-7092595 , 1399187598 , Email:jh-
wang1948@sina.com
1×104个 ml ,接种于 96孔板中 ,每孔 200μl ,37℃、
5%CO2下培养 。24 h 后分别加入不同浓度的狗舌
草黄酮类化合物 ,使最终浓度分别为 0.01 ,0.1 , 1 ,
10 ,100μg ml ,各组设 6个平行孔 ,对照组为生理盐
水 ,设 6个平行孔。于 37℃、5%CO2培养箱中孵育
48 h。实验终止前加入新鲜配制的 5 g L MTT 液 20
μl ,混匀 ,再继续培养 4 h。弃去上清液 ,每孔加 200
μl DMSO ,充分振匀溶解 MTT 沉淀物 ,10 min后测
定每孔490 nm下的吸光值(A),按下式求出生长抑
制率(Inhibit rate , IR):
生长抑制率(%)=(1-用药组 A值 对照组 A
值)×100%
(IR>70%为高度敏感 , IR>50%为中度敏
感 , IR<50%为不敏感 。)
2　结　果
MTT法检测狗舌草黄酮类化合物对 3种肿瘤
细胞的药物敏感试验结果见表 1.
Tab 1　Effects of drug sensitive test of the flavonoids compound
from Tephroseris Kirilowii on three tumor cells by MTT reduction
method.
Flavonoids from
Tephroseris
kirilowii(μg ml)
Inhibit rate
of HCC(%)
Inhibit rate of
Hep-G2(%)
Inhibit rate of
L1210(%)
　　　0.01 29.51±0.68 21.77±0.60 18.62±1.62
0.1 31.93±1.06 22.15±1.27 31.47±1.08
1 33.01±0.71 26.97±1.50 31.71±1.01
10 44.96±1.34 29.48±1.93 58.85±2.39
100 54.84±0.32 30.87±2.44 70.49±2.27
不同浓度狗舌草黄酮类化合物对 Hep-G2的生
长抑制率(IR)最小 ,均小于 50%为不敏感 。100
μg ml 狗舌草黄酮类化合物对 HCC 的生长抑制率
(IR)为54.84%,为中度敏感 ,其余不同浓度均为不
敏感。10μg ml和 100 μg ml的狗舌草黄酮类化合
物对淋巴性白血病细胞 L1210的生长抑制率(IR)分
别为中度敏感和高度敏感 , 且与同浓度作用的
Hep-G2及HCC 相比差异极显著(P<0.001)。狗舌
草黄酮类化合物对 3种肿瘤细胞的 IR均随浓度升
高而增高 ,说明生长抑制率和浓度正相关。其中对
淋巴性白血病细胞 L1210的 IR增加最明显 ,半数致
死浓度 IC50为 7.756 μg ml。说明狗舌草黄酮类化
合物对 L1210有一定抑制作用。
3　讨　论
MTT 实验结果表明 ,狗舌草黄酮类化合物对
L1210细胞具有较强的体外杀伤能力 ,其半数致死浓
度(IC50)为7.756μg ml ,符合 IC50<10μg ml被认为
有研究价值的要求。这与临床上应用狗舌草对白
血病细胞抑制作用 、体外美蓝法筛选狗舌草对白血
病 L615细胞有抑制作用 、细胞呼吸器法筛选证明
狗舌草对白血病有较为明显的抑制作用相符合 。
据文献报道MTT 法用于体外药物敏感试验时 ,MTT
的作用时间以 4 ～ 6 h 为最佳 ,而本试验作用时间
为4 h 。细胞接种浓度以 0.5×104 ～ 1×104个 ml
为最佳 ,本试验为 1×104个 ml。接种浓度太高细
胞增殖较快 ,从而使抑制率下降 ,即细胞接种浓度
与抑制率呈反比 。由于肿瘤细胞的生物学特性不
同 ,应用不同的接种浓度[ 5] 。
由于现有抗癌 、化疗药物的毒副作用较大 ,因
此 ,寻找高效低毒 、抗瘤谱广 、综合性能又好的植物
来源的抗癌药是现在研究的重点 。特别是近年来
对黄酮类化合物的抗肿瘤活性研究逐步深入 ,表明
它不仅有抗癌作用 ,而且是一些致癌剂 、促癌物的
抑制物 ,特别是含有多羟基或多烷基取代的黄酮类
化合物具有细胞毒和抗肿瘤活性[ 6 ～ 10] 。而本次试
验表明 ,狗舌草黄酮类化合物能抑制白血病 L1210细
胞生长 ,具有一定细胞毒作用 ,且抑制作用与浓度
呈相关。提示狗舌草可以作为一种抗癌药物加以
开发利用 。
参 考 文 献
[ 1] 　付坤俊主编.黄土高原植物志[ M] .北京:科技文献出版社 ,
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[ 2] 　李扬汉主编.中国杂草志[ M] .北京:中国农业出版社 , 1998 ,
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[ 3] 　陈进军.狗舌草提取物对 L1210细胞的作用及毒性研究[ D] .
西北农林科技大学 2001届博士学位论文.
[ 4] 　司徒镇强 ,吴军正 ,主编.细胞培养[ M] .西安:世界图书出版
公司 , 1996.
[ 5] 　周建军 ,乐秀芳 , 韩家娴 ,等.影响MTT 方法测定结果的一些
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[ 6] 　毛雪石 ,徐世平.黄酮类化合物的抗肿瘤活性[ J] .国外医学
一药学分册 , 1995 , 22(2):92.
[ 7] 　Mori A , Nishinoc , Enoki N , et al.Cytotoxicity of plant flavonoids
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[ 8] 　Bibby MC , Double JA.Flavone acetic acid:form laboratory to clinic
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Nat Prod , 1990, 53(1):23.
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tein-tyrosine kinase inhibitory activities of flavonoid analogues [ J] .J
Med chem ,1991 , 34(2):798.
Study of Flavonoids Compound from Tephroseris Kirilowii on Three Tu-
mor Cells by the Drug Sensitive Test
SI Hong-li1 , WANG Jian-na2 ,WANG Yue-hu1 ,WANG Jian-hua1
(1.College of Animal Science and Technology , Northwest Sci-Tech University of Agriculture and Forest-
ry , Yangling 712100 , China;2.The First of People Hospital , Nanyang 473000 , China)
Abstract　The drug sensitive test was determined by MTT reduction method to study the flavonoids compound from
TephroserisKirilowii on three tumor cells.The results showed that the different concentration of flavonoids compound is
low sensitive to liver-cancer Hep-G 2 cell.At the concentration of 10μg ml is medial sensitive to liver-cancer HCC cell.
At the concentration of 10μg ml and 100μg ml is medial and high sensitive to leukemia L1210cell respectively.And the
half of inhibit rates(IC50)of flavonoids compound on leukemia L1210 is 7.756μg ml.These results suggest that the fla-
vonoids compound from Tephroseris Kirilowii is high related to the anti-tumor activity.
Key words　Tephroseris Kirilowii , Flavonoids compound , MTT reduction method , L1210cell , Drug sensitive test
·信　息·
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