全 文 ：·基础研究·
　　基金项目：山东省烟台市科学技术发展计划项目
（２００７１３９－１１）
狗舌草提取物对多发性骨髓瘤Ｕ２６６细胞周期的作用
青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院（２６４０００）
马智刚　王笑蕾　秦友平　黄葆华　初晓霞　范小莉　徐俊卿　张晓录
　　中药狗舌草在世界范围内广泛分布，除了具有解痉、抗
溃疡作用之外，对白血病细胞、恶性网状细胞肉瘤及皮肤癌
有较强的抑制作用。其化学成分为生物碱。此前对狗舌草
生物碱成分分析［１］，对狗舌草化学成分及其抗淋巴性白血
病效果进行试验［２］，证实狗舌草提取物诱导白血病Ｌ１２１０
细胞的凋亡［３］。本实验就狗舌草提取物对多发性骨髓瘤
Ｕ２６６细胞株细胞周期的作用进行研究。
１　材料与方法
１．１　材料
狗舌草提取物由烟台大学药学院提取并鉴定。称取
１００ｇ狗舌草粉，用１　０００ｍＬ体积分数为６０％乙醇在５６℃
温浸１２ｈ，过滤。滤液先减压回收乙醇，浓缩，加适量水，静
置４℃过夜，滤去叶绿素等沉淀物，再浓缩，冰冻干燥成粉
末，即成狗舌草提取物。用前配置成相应浓度溶液，经孔径
为０．２２μｍ的微孔滤膜过滤除菌，４℃保存
［３］。
１．２　方法
１．２．１　Ｕ２６６细胞培养：Ｕ２６６细胞（中国医学科学院血液
病研究所赠与）在含体积分数１０％胎牛血清、１００Ｕ／ｍＬ青
霉素和１００ｍｇ／Ｌ链霉素的ＲＰＭＩ　１６４０培养液中，３７℃，体
积分数５％ＣＯ２，饱和湿度条件下培养。选取对数生长期细
胞进行实验。
１．２．２　ＤＮＡ含量分析及细胞周期检测：设立５组（药物组
４组，对照组１组），每组狗舌草６０％乙醇提取物质量浓度
分别为１０，５，２．５和１．２５ｍｇ／Ｌ。药物与Ｕ２６６细胞共同培
养４８ｈ，每组收集１×１０６ 个细胞；体积分数７０％乙醇４℃固
定过夜；加入ＲＮＡ酶，３７℃水浴消化１５～３０ｍｉｎ；加入碘
化丙啶（ＰＩ），４℃存放１５ｍｉｎ以上；加入适量磷酸盐缓冲液
（ＰＢＳ），上流式细胞仪检测，重复实验３次。
１．３　统计学处理
各组数据以ｘ±ｓ表示，２组比较用ｔ检验。Ｐ＜０．０５
为差异有统计学意义。
２　结　　果
随着药物浓度的增加，Ｇ０／Ｇ１ 期细胞逐渐减少，高浓
度组（１０ｍｇ／Ｌ）Ｓ期，Ｇ２／Ｍ 期细胞增高，与对照组相比差
异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。随着药物浓度的增加，凋亡细
胞逐渐增多，与对照组相比差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），
见表１。
表１　各组细胞周期及细胞凋亡结果的比较（％）珚ｘ±ｓ）
组别 样本数 Ｇ０／Ｇ１期 Ｇ２／Ｍ期 Ｓ期 凋亡
对照组 ３　 ４９．７４±０．３４　 ４６．７０±０．５４　 １．８４±０．０３　 ２．０８±０．１５
药物浓度组 １．２５ｍｇ／Ｌ　　 ３　 ３４．１２±０．４９１） ５０．０５±１．１２　 ４．９８±０．５０１） １１．０１±０．５８１）
２．５ｍｇ／Ｌ　　 ３　 ３８．０６±０．６３１） ５１．２７±０．７１　 ４．０１±０．２２１） １６．７２±０．２９１）
５ｍｇ／Ｌ　　 ３　 ２７．４６±０．６１１） ５１．８４±０．７３１） ４．１６±０．１５１） ２１．１８±０．４０１）
１０ｍｇ／Ｌ　　 ３　 １５．９１±０．３２１） ５５．１１±０．２５１） ５．０４±０．１２１） ２３．９５±０．１５１）
　　１）与对照组比较Ｐ＜０．０５。
３　讨　　论
狗舌草属于菊科狗舌草属，含有双稠吡咯啶生物碱，
具有很强的抗癌特性。此前有学者分析狗舌草生物碱成分
分析［１］，对狗舌草化学成分及其抗淋巴性白血病效果进行
试验［２］，证实狗舌草提取物诱导白血病 Ｌ１２１０细胞的凋
亡［３］。
　　 狗舌草提取物Ｕ２６６细胞周期影响：从实验看，随着
药物浓度的增加，Ｇ０／Ｇ１ 期细胞逐渐减少，高浓度组 （１０
ｍｇ／Ｌ）Ｓ期、Ｇ２／Ｍ期细胞增高，与对照组相比差异有统
计学意义 （Ｐ＜０．０５）。随着药物浓度的增加，凋亡细胞逐
渐增多，与对照组相比差异有统计学意义。狗舌草提取物
改变Ｕ２６６细胞周期，可能的机制有２种：①动员细胞进入
周期，在Ｓ期、Ｇ２／Ｍ 期诱导细胞凋亡／杀伤细胞；②将细胞
阻滞在Ｓ期、Ｇ２／Ｍ 期。具体分子机制需进一步研究。本
实验说明狗舌草提取物杀伤肿瘤细胞Ｕ２６６细胞时，是通过
诱导凋亡途径，且部分存在剂量依赖关系。
参 考 文 献
［１］王建华，王跃虎，司红丽．狗舌草生物碱成分分析．西北农林科
技大学学报（自然科学版），２００４，３２（１）：９３－９５．
［２］孔庆波，陈进军，王建华 ．狗舌草化学成分及其抗淋巴性白血
病效果试验 ．中国农学通报，２００４，２０（４）：９－１１．
［３］陈进军，王建华 ．狗舌草提取物诱导Ｌ１２１０细胞的凋亡 ．畜牧
兽医学报，２００６，３７（３）：２９５－２９８．
（收稿日期：２０１２－０８－０３）
作者简介：马智刚，男，１９７３年１０月生，副主任医师，青岛大
学医学院附属烟台毓璜顶医院，２６４０００
·００１１· 山西医药杂志２０１２年１１月第４１卷第１１期上半月　Ｓｈａｎｘｉ　Ｍｅｄ　Ｊ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ　２０１２，Ｖｏｌ．４１，Ｎｏ．１１ｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ