全 文 ：收稿日期:2010-11-15; 修订日期:2011-06-31
基金项目:教育部春晖计划项目(No． Z2008 － 1 － 75014) ;
国家自然科学基金地区项目(No． 21062015)
作者简介:张振华(1986-) ，男(汉族) ，山西临汾人，现任为宁夏医科大学
在读硕士研究生，学士学位，主要从事天然产物化学研究工作．
* 通讯作者简介:王 妍(1958-) ，女(汉族) ，陕西西安人，现任宁夏医科
大学教授，学士学位，主要从事天然产物化学研究工作．
DPPH法测定沙枣花水提物各组分清除自由基的研究
张振华1，解宁湘2，王基云1，黄晓会1，王培香1，王 妍1*
(1．宁夏医科大学，宁夏 银川 750004; 2．宁夏医科大学附属医院，宁夏 银川 750004 )
摘要:目的 通过 DPPH法测定沙枣花水提物各组分的清除自由基的能力。方法 将沙枣花水提物依次用石油醚，醋酸乙
酯，正丁醇进行萃取，各组分都配置成相当于原药材 100 mg /ml的溶液，通过 DPPH法测定各组分的清除自由基的能力，
并计算各组分的 IC50。结果 萃取后的水层清除自由基的能力最强，IC50为 1． 634 mg /ml，其次是正丁醇层(IC50为 2．
46mg /ml) ，乙酸乙酯层(IC50为 6． 172 5 mg /ml)和石油醚层(IC50为 12． 562 2 mg /ml)。结论 沙枣花水提物各组分对 DP-
PH·均具有一定清除作用，具有体外抗氧化性，可作为有效的天然自由基清除剂，具有很大的开发利用前景。
关键词:沙枣花; DPPH·
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2011． 11． 058
中图分类号:R284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2011)11-2703-02
Scavenging Activity against DPPH Free Radicals by Water － extracted Extraction of
Flower of Elaeagnus Angustifolia
ZHANG Zhen-hua1，XIE Ning-xiang2，WANG Ji-yun1，HUANG Xiao-hui1，WANG Pei-xiang1，WANG Yan1*
(1． Ningxia Medical University，Yinchuan 750004，China;2． The Affiliated Hospital of Ningxia Medical Uni-
versity，Yinchuan 750004，China)
Abstract:Objective To study the scavenging activity against DPPH by water － extracted components of flower of Elaeagnus an-
gustifolia ．Methods The extract was abstracted by ligroin ，acetidin and n － butanol in turn ，then prepare 100mg /ml solution of
different extracted parts ，measure the scavenging ability against DPPH· and calculate IC50 ． Results Water layer after extraction
showed the strongest antioxidative activity，IC50 was 1． 634 mg /ml，followed by n － butanol layer (IC50 = 2． 46 mg /ml) ，ethyl ac-
etate (IC50 = 6． 172 5 mg /ml)and petroleum ether layer (IC 50 = 12． 562 2 mg /ml)． Conclusion Different parts of angustifolia
flower water extract have certain scavenging activity against DPPH· and antioxidative activity in vitro． The herb can be used as ef-
fective natural free radical scavenger．
Key words:Flower of Elaeagnus angustifolia; DPPH·
沙枣花为胡颓子科植物沙枣 Elaeagnus angustifolia L．的花，
主产于西北地区。宁夏沙枣树抗旱耐碱，具有很强的生命力，也
是宁夏防风固沙的重要植物。每年 5 ～ 6 月，淡黄色的小花朵释
放出浓郁的芳香气味，深受人们喜爱。椐《宁夏中药志》记载，沙
枣花主要含山萘酚、花白素、脂肪油和少量挥发油，具有止咳平喘
的功能，可用于治疗慢性气管炎［1］。我们前期已经利用 CO2 超
临界法对沙枣花进行了提取，并应用 DPPH法测定其萃取物各组
分的清除自由基的能力［2］;但通过超临界提取法得到的提取物
较少，清除作用较低，且费用很高。因此，本课题组利用传统的水
提法再次对沙枣花进行提取，并依次用石油醚，醋酸乙酯，正丁醇
对总提取物进行萃取，通过 DPPH法测定水提物各组分的清除自
由基的能力，为我们进一步的筛选活性部位和提取方法提供依
据。
1 仪器与材料
721 分光光度计(北京瑞利分析仪器公司) ;电子分析天平，
分液漏斗，1，1 二苯基 － 2 －苦肼基自由基(DPPH·) (日本东京
化成工业株式会社) ，无水甲醇(天津天江) ，旋转蒸发仪，回流提
取装置。沙枣花采自宁夏银川地区，采回后立即在 － 20 ℃冷冻
保鲜。
2 方法
2． 1 沙枣花提取方法 取 100g新鲜冻存的沙枣花，粉碎，置于圆
底烧瓶中，加入 500 ml蒸馏水，加热煮沸回流 2 h，抽虑，滤液保
存备用，反复提取 4 次，合并滤液，真空蒸发至 100 ml，即得到相
当于原药材 1 mg /ml的水提液。
2． 2 各组分的制备 将 100ml 的水提液倒置分液漏斗中，加入
100 ml石油醚，充分振荡，放置分层后，得到下层水液，同法反复
萃取置萃取液的颜色清淡时为止，合并石油醚萃取液，浓缩至干，
用 100 ml的蒸馏水溶解，即得到相当于原药材 1 g /ml 的石油醚
层的水溶液。
经石油醚萃取后的水液中，加入 100 ml醋酸乙酯，同上萃取
方法，最后得到相当于原药材 1 g /ml的醋酸乙酯层的水溶液。
经醋酸乙酯萃取后的水液中，加入 100 ml正丁醇，同上萃取
方法，最后得到相当于原药材 1 g /ml的正丁醇层的水溶液。
保留萃取后的水液，加蒸馏水置 100 ml，得到相当于原药材
1 g /ml的萃后水液。
观察各组分溶液的颜色，除了醋酸乙酯层水液的颜色较浅
外，其他各溶液较浓，颜色都较深，测定吸光度时影响测定结果，
故将从每个组分溶液中量取 10 ml置 100 ml容量瓶中，加蒸馏水
至刻度，即得到相当于原药材 100 mg /ml的各组分水液。
2． 3 测定方法和清除率的计算 对 DPPH·自由基清除方法的
测定参阅 Brand － William(1995)［4］。分别取以上制备不同组分
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL． 22 NO． 11 时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 11 期
溶液各 20，40，60，80，100 μl，量取相应体积的浓度为 1． 01 × 10 －1
mol /L的 DPPH·溶液至 4 ml。立即混匀，用比色皿，在 515 nm
波长处进行测定，在一定时间间隔内测定吸光度，直到读数稳定。
通过公式:来计算自由基抑制率。
清除率(%)=［1 － A1 /A0］× 100%
式中 A0 为未加式样的 DPPH·在 515 nm处的吸光度，A1 为
抗氧化性物质与 DPPH·反应后的 515 nm处的吸光度。
2． 4 清除 50%自由基时样品浓度(IC50)的计算
［5］ 将加入体积
与其自由基清除率进行线性回归，得线性回归方程，再由该方程
计算清除 50%自由基时所需的样品浓度，即 IC50值。
3 结果
3． 1 DPPH·标准曲线的制作 准确称取［DPPH·］2． 5 mg，用
甲醇定容到 100 ml，配制成质量浓度为 2． 5 × 10 －2 mg /ml 的标准
溶液，置冰箱中备用(现用现配)。分别取 0，2，4，6，8，10 ml标准
溶液，用甲醇定容至 10 ml，最终质量浓度分别为 0，5，10，15，20，
25 μg /ml。测定上述标准溶液在 515 nm 波长处的吸光度，制作
标准曲线(见图 1)。
图 1 DPPH·标准曲线
3． 2 测定结果 按上述方法，取以上制备不同组分溶液各 20，
40，60，80，100 μl，其清除［DPPH·］的作用结果见图 2。
图 2 沙枣花水提取物各组分对 DPPH的清除率
由图 2 可以看出，各组分对 DPPH·都具有一定的清除活
性。随着各组分加入量，即浓度的增加，其对 DPPH·的清除能
力增加，呈现明显的剂量效应关系。萃后水层的清除 DPPH·的
能力最强，正丁醇层与其相比相差不大，并都远远大于醋酸乙酯
层和石油醚层的清除能力。各组分的线性回归方程分别为萃后
水层:Y =0． 056 09X + 31． 669 ，IC50 = 32． 68 μl，相当于 1． 63mg /
ml原药材;正丁醇层:Y = 0． 633 X + 18． 854 ，IC50 = 49． 2 μl，相
当于2 ． 46mg / ml原药材;醋酸乙酯层:Y = 0 ． 2873X + 0 ． 759，
IC50 = 171． 39 μl，相当于 8． 57 mg /ml 原药材;石油醚层:Y = 0．
1914 X + 1． 912 ，IC50 = 251． 24 μl，相当于 12． 56 mg /ml原药材。
图 3 不同浓度的醋酸乙酯层清除 DPPH·的比对
由于观察各组分溶液的颜色，除了醋酸乙酯层水液的颜色较
浅外，其他各溶液较浓，颜色都较深，故将相当于原药材 1 g /ml
的醋酸乙酯层进行了清除 DPPH·的能力的实验，从图 3 可以看
出，1 g /ml的醋酸乙酯层组分对自由基的清除率随着浓度的增
加，清除率明显增加，且将近达到 100%，清除率明显高于 100
mg /ml的溶液，说明其对 DPPH·的清除能力与溶液浓度呈现明
显的量效关系;并说明醋酸乙酯层中同样含有清除自由基的成
分，与其他组分相比，只是相对含量较低。
4 讨论
本文采用 DPPH·法对沙枣花的水提取物的各组分体外抗
氧化活性进行了较为全面的研究，从试验结果可以看出，各组分
均有不同程度的清除作用，萃后水层的清除率能力最强，但是由
于萃后水层部分在以后的分离处理较为困难，而正丁醇部分的清
除能力和其差不多，故对于以后的抗氧化活性成分的筛选将着重
于正丁醇部分的分离。
同时，本文对沙枣花水提物的各组分清除 DPPH·进行了定
量研究，确定了各组分清除 50%自由基时的样品浓度，为以后沙
枣花在抗氧化剂的应用上提供了基本依据。
与前期的超临界萃取法提取物的清除 DPPH·的能力相比，
水提法得到的各组分的清除率明显较高，所以应用传统的水提法
来获取沙枣花中的抗氧化活性成分，既经济，又有效。
参考文献:
［1］ 邢世瑞． 宁夏中药志，上卷［M］ ． 银川:宁夏人民出版社，1990:
674．
［2］ 张振华，愈 维，王基云． 沙枣花超临界 CO2 萃取物清除自由基的
研究［J］ ． 时珍国医国药 ，2010，21(6) :1335．
［3］ 李婕姝，贾冬英，姚 开，等． 荸荠皮多糖体外清除自由基活性的
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［4］ Brand － Williams W，Cuvelier ME，Berset C·Use of a free radical
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1995，28(1) :25．
［5］ 孙 涛，付雪艳，张 蓓． DPPH法测定沙棘籽原花青素清除自由基
的能力［J］ ． 宁夏医科大学学报，2009，1:0026．
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