全 文 ：第 24 卷　第 4 期
2003 年
青　海　医　学　院　学　报
JOU RNAL OF QINGHAI MEDICAL COLLEGE
Vol.24　No.4
2003
王永宁(1951～ ),男 ,汉族 ,河南籍 ,副教授
　
　
沙枣花中黄酮类化合物
对羟基自由基的清除研究
　
王永宁　石玉平　郭　珍
青海师范大学化学系(810008)
朱培艳
青海医学院中医系
摘　要　目的　自由基是造成人体过早衰老的主要原因之一 , 多数黄酮类化合物能清除自
由基 ,但沙枣花中黄酮类化合物的生物作用迄今未见报道。方法　本文根据 Fenton方法建立产
生羟基自由基的模型 ,采用分光光度法进行跟踪分析 ,利用沙枣花的提取液中的功能成分黄酮类
化合物对羟基自由基进行了清除试验研究 。结果　在 12.5μg/ml ～ 100μg/ml范围内 ,浓度与清
除效率呈正相关 。结论　结果表明 ,沙枣花中的黄酮类化合物对羟基自由基有着较好的清除效
率。
关键词　沙枣花　黄酮类化合物　羟基自由基　清除效率
中图分类号　O629　文献标识码　A
Studies on the Hydroxy-group Free radical Eliminated
by Flavonoids of Elaeagnus angustifolia L Flowrse
Wang Yongning1 Shi Yuping1 Guo Zhen1 Zhu Peiyan2
(1.Department of Chemist ry , Qinghai Normal University , Xining 810008 , China)
(2.Department of t raditional medicine ,Qinghai Medical Insti tute ,Xining 810008 ,China)
Abstract:Objective Free radical is one of the main reason of ageing.Many f lavonoids can eliminate free
radical.But the phy siological function of flavonids of the flowers of Elaeagnus angust ifolia L have not been re-
po rt up to now.Methods Based on the Fenton mondle of producing hydroxy g roup free radical , the analyses on
the track by visible absorptiometry have been done .That flavonoids compounds eliminate hydroxy g roup free
radical has been studied , based on ef fective constituents ext raction of the flowers of Elaeagnus angustifolia L.
Results The concentration in12.5μg/ml ～ 100μg/ml is related to elimination efficiency positi rely.Conclusion
The result show that the elimination ef ficiency of hydroxy-group free radical is bet ter.
Key words:the flowers of Elaeagnus angustifolia L;flavonoids;hydroxy g roup free radical;elimination
eff iciency
　　沙枣(Elaeagnus angustifolia L)与沙棘同属于
胡颓子科(Elacgnaceac)[ 1] , 常绿灌木 。沙枣花为沙
枣的花 ,呈银白色 ,下垂 ,花呈漏斗形 ,长 5 ～ 7mm 。
研究发现 ,沙枣花中含有一定量的黄酮类化合物 ,
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DOI :10.13452/j.cnki.jqmc.2003.04.036
大量的报道说明 ,黄酮类化合物的生理作用具有多
样性[ 2] ,黄酮类化合物在医学和食品工业上都具有
较好的应用价值 ,并得到了较为广泛的应用。黄酮
类化合物具有抗心肌缺氧 ,抗缺血 、抗心率失常 ,降
低血清胆固醇 ,抑制血小板集聚抗溃疡 、抗肿瘤 、抗
拒炎 、抗过敏 、抗衰老 、抗幅射 、抗病毒和增强免疫
力等作用 。是防治缺血性心脏病 、心绞痛 、慢性心
功能不全 、高血脂症和预防动脉粥硬化 、心机梗塞 、
脑血栓等病的纯天然药物 。
人体内可以产生氧和羟基自由基 ,已经证实 ,
这些自由基与人的病理(肿瘤 、炎症 、动脉粥样硬化
等)和生理(衰老)现象有密切关系 ,它是人体过早
衰老的主要原因之一 ,大多数的自由基具有较强的
氧化性 ,极少量的自由基也将对人体健康造成极大
的危害 。黄酮类化合物是具有酚羟基的一类还原
性的化合物 ,在复杂的生物化学反应过程中 ,由于
黄酮类化合物的自身氧化而使其具有较强的抗氧
化性[ 3] 。本文就沙枣花中黄酮类化合物对羟基自
由基的清除进行了研究 ,为沙枣花在药物的开发方
面提供一条途径 。现报告如下 。
1　实验研究方法
1.1　主要试剂和仪器
沙枣花(青海产)。亚硝酸钠(分析纯 ,北京化
工厂)。硝酸铝(分析纯 ,北京化工厂)。氢氧化钠
(分析纯 ,天津市化学试剂三厂)。芦丁(化学对照
品 ,中国药品生物制品检定所)。硫酸亚铁(分析
纯 ,天津市化学试剂三厂)。双氧水(分析纯 ,北京
化工厂)。水杨酸(分析纯 , 西安化学试剂厂)。
95%的食用酒精(青海省西宁酒厂)。
721S 型分光光度计 ,上海第三分析仪器厂 。
ZX-1A 型旋片式真空泵 ,沈阳教学仪器厂。501
型超级恒温槽 ,上海实验仪器厂 ,电子天平。
1.2　试验方法
1.2.1　溶液制备
芦丁标准溶液:首先在减压干燥箱中 ,将芦丁
对照品减压干燥至恒重 ,再在电子天平上准确称取
20mg ,用 95%的乙醇定溶于 100ml的容量瓶中 ,即
得芦丁标准溶液(0.2mg/ml)。5%的亚硝酸钠溶
液配制:称取分析纯的 NaNO27.5g ,用蒸馏水定溶
于 150m l的棕色容量瓶中 。10%的硝酸铝溶液配
制:称取分析纯的 Al(NO3)315g 用蒸馏水定溶于
150ml容量瓶中 。10%的氢氧化钠溶液配制:称取
分析纯的 NaOH50g ,用蒸馏水定溶于 500ml容量
瓶中 。30%乙醇溶液配制:用量筒准确量取 300ml
无水乙醇用蒸馏水定溶于 1000ml 的容量瓶中。
6mmol/ L水杨酸溶液的配制:称取分析纯的水杨酸
0.4144g 用蒸 馏水定溶于 500m l 容量 瓶中。
2mmol/L 硫酸亚铁溶液的配制:称取分析纯的 Fe-
SO40.2780g 用蒸馏水定溶于 500ml 容量瓶中。
6mmol/L 双氧水溶液的配制:移取分析纯的
H2O20.34ml用蒸馏水定溶于 500ml容量瓶中 。
1.2.2沙枣花中黄酮类化合物含量的测定方法
沙枣花中黄酮类化合物含量的测定方法 ,本试
验采用常规的以芦丁为标准物的分光光度法。准
确移取 1.0ml 、2.0ml 、3.0ml 、4.0ml 、5.0ml的芦丁
标准溶液 ,分别置于 25ml的比色管中 ,依次加入
30%的乙醇溶液定溶于 10ml , 然后加入 5%的
NaNO2溶液 , 5 分钟后加入 10%的 Al(NO3)3 溶
液 , 5分钟后加入 10%的 NaOH 溶液 , 10分钟后用
30%的乙醇溶液定溶于 25m l。于 510nm 处测量吸
光值 , 采用最小二乘法 , 得线性回归方程为 C=0.
08632+0.0005189 , 相关系数 R=0.9979。
取沙枣花提取液按上述方法进行分析 ,其浓度
为 0.6942 mg/ml , 即 694.2 μg/ml。
1.2.3　沙枣花中黄酮类化合物清除羟基自由基的
试验测定
1.2.3.1　清除羟基自由基的试验原理
根据 Fenton方法产生 OH·自由基的模型[ 4] ,
H2O2 与亚铁离子反应生成 OH·自由基 ,该反应为:
H2O2+Fe2+※OH-+OH·+Fe3+
自由基一般存活时间比较短而且具有较高活
性的特点 ,而水杨酸能有效地捕捉 OH·自由基且产
生有色产物 ,因此 ,若在该体系加入一定量的水杨
酸 ,将发生如下反应:
2OH +
COOH
OH
COOH
OH
OH +2H2O
(无色)　　　　　　　　(有色)
生成的有色产物在 510nm 处被较强地吸收。
这样 ,我们可以在一定反应时间后 ,测定吸光度值
(此值可作为 A0 值)。若在该体系中再加入黄酮类
化合物 ,由于黄酮类化合物具有清除 OH·自由基的
特点 ,从而降低甚至完全清除 OH·自由基 ,而使有
色物质的浓度极大降低 。在此条件下测定体系的
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吸光度值(此值可作为清除一定量的OH·自由基的
Ax 值),则即可用来测定黄酮类化合物对 OH·自由
基的清除效率。其清除效率可根据下式进行计算:
清除效率(%)=(A0 — A x)/A0×100%
1.2.3.2　A0 值的测定
在25ml的比色管中依次移取 5 ml 2mmol/L
硫酸亚铁溶液和 5ml的 6mmol/L 双氧水溶液 ,混
合均匀后用 6m mol/ L 水杨酸溶液定溶至刻度。在
36 ～ 37℃的恒温水中反应 15 分钟后在 721S 型分
光光度计上测其 A值 。此值即为 A0 值。
1.2.3.3　Ax 值的测定
在A0 值的测定体系中 ,加入 1ml一定浓度的
沙枣花的提取液 ,在 36℃～ 37℃的恒温水中反应
15分钟后在 721S 型分光光度计上测其 A 值 。此
值即为Ax 值。
2　结果与分析
2.1　测定数据及其处理
测定结果及数据处理见表:
　　表 黄酮类物质对 HO·的清除关系
提取液浓度
(μg/ml) A0 值 Ax 值 ■A 值
清除
百分率
694.2 0.59 0.095 0.495 83%
100 0.585 0.208 0.377 64%
50 0.59 0.218 0.372 63%
25 0.595 0.235 0.360 61%
12.5 0.595 0.240 0.355 59%
2.2　Ax 值的测定应注意的问题
2.2.1　空白溶液的校正
空白溶液的校正对采用分光光度法的测定是
非常重要的 ,在本试验中 ,A x 值的测定都建立在A0
值的测定基础之上 ,而在每次被测定体系中每种溶
液的移取都会产生一定的偏差而有不同的 A0 值 。
因此空白溶液的校正对 A0 、A x 值的测定都显得尤
为重要。而且 ,每次 A0 值的测定值对清除效率也
起着决定性的作用 。
2.2.2　提取液中色素对Ax 值测定的影响
由于加入的提取液未经处理 ,因此提取液中的
色素会影响高浓度提取液对 Ax 值的测定 ,这样会
影响测定结果 ,即降低了黄酮类化合物对 OH·自由
基的清除效率的测定值 。因此 ,在用 694.2 μg/ml
进行 Ax 值的测定时 ,对色素的影响进行了校正。
当然 ,将提取液中的色素除去应该是最好的选择 。
2.3　黄酮类化合物对 OH·自由基有较好的清除效
率
由表中数据可以看出 ,在 12.5 ～ 100μg/ml的
范围内 ,清除效率与黄酮类化合物的浓度呈线性关
系。在其他浓度条件下黄酮类化合物虽然对 OH·自
由基也有清除作用 ,但由于其他因素的存在 ,而不
存在线性关系 。
3　结论
沙枣花中含有的黄酮类化合物对 OH·自由基
的清除作用是比较明显的 ,结果也是好的 。沙枣花
中黄酮类化合物对羟基自由基的清除效率的数据 ,
将对黄酮类化合物的生物活性研究提供较有价值
的信息。
参考文献
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收稿 2003-08-01
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