全 文 ：收稿日期:2011-10-17; 修订日期:2012-02-28
基金项目:国家自然科学基金(No． 1101301)
作者简介:郭 艳(1985-) ，女(回族) ，新疆乌鲁木齐人，现为石河子大学
生命科学学院在读硕士研究生，硕士学位，主要从事药用植物有效成分研
究工作．
* 通讯作者简介:马 淼(1974-) ，男(回族) ，新疆焉耆人，现任石河子大
学生命科学学院教授，博士学位，主要从事药用植物资源的研究工作．
刺山柑果实抗炎活性部位
与致敏部位的分离
郭 艳，蒋雯雯，马 淼*
(石河子大学生命科学学院，新疆 石河子 832003)
摘要:目的 从刺山柑果实的 5 个化学部位中分离出抗炎活性部位以及致敏部位。方法 采用蛋清法所致的小鼠关节炎
模型以及局部皮肤过敏模型 2 个实验进行研究。结果 刺山柑果实 95%乙醇提取物的乙酸乙酯部位、甲醇部位及水部位
对小鼠踝关节肿胀抑制有显著的抗炎作用(P ＜ 0． 01) ，而氯仿部位、乙酸乙酯部位及水部位对小鼠皮肤均呈现不同程度
的致敏性。结论 乙酸乙酯部位具有显著的抗炎活性和中度致敏性，甲醇部位有显著的抗炎活性且无致敏性。
关键词:刺山柑; 果实; 致敏; 抗炎
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 06． 014
中图分类号:R284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2012)06-1348-02
The Anti － inflammatory Activity Fraction for Arthritis and Sensitization Fraction of Ca-
pers Fruit
GUO Yan，JIANG Wen － wen，MA Miao*
(College of Life Science，Shihezi University，Shihezi，Xinjiang 832003，China)
Abstract:Objective To search anti － inflammatory active fraction and sensitization fraction from 5 chemical fractions of Capparis
spinosa fruit．Methods Using model of albumen － induced arthritis and local skin allergic reactions in mice． Results Ethyl ace-
tate，methanol and water part of 95% ethanol extracts of Capers fruit have super anti － inflammatory effect (P ＜ 0． 01)on inhibi-
ting mice ankle swelling． In skin allergy test，chloroform，Ethyl acetate and water part showed different degrees of sensitization，
methanol showed no sensitization effect． Conclusion Ethyl acetate，methanol part of 95% ethanol extracts of Capers fruit have sig-
nificant anti － inflammatory effect and no sensitization effect．
Key words:Capparis spinosa L; Fruit; Sensitization; Anti － inflammatory
刺山柑 Capparis spinosa L．为白花菜科山柑属植物，多年生藤
本状半蔓生灌木，又名老鼠瓜、槌果藤，维吾尔名为开派、菠里科
果［1］，在我国新疆、西藏、甘肃等地区均有出产，其中新疆各沙区
分布较广，喜生于干旱有沙石的低山坡、沙地上，是荒漠地区具有
栽培价值的抗旱植物［2］。维吾尔族民间常用其鲜果捣碎外敷治
疗关节炎和肩周炎等疾病，是一种传统维吾尔药，具有祛风除湿、
止痛消肿的功效［3］。
国内外临床应用和实验室研究结果表明，刺山柑果实具有显
著的抗炎活性，对关节炎有很好的治疗效果［4，5］。然而，临床应
用显示其果实含有皮肤致敏因子，会引发过敏性皮炎［6］，因此，
严重制约了该药用植物在临床上的广泛应用。本文利用柱层析
技术对刺山柑果实 95%乙醇浸提部位进行分段分离，旨在使其
抗炎活性部位与皮肤致敏部位得以分离，为该药材的进一步开发
与利用提供科学依据。
1 材料与仪器
1． 1 动物 选取健康、皮肤无损伤的同龄白色雌性 KM 小鼠 80
只(未产未孕) ，体质量(26． 0 ± 3． 0)g，由石河子大学实验动物中
心提供。
1． 2 药材与试剂 刺山柑成熟果实采自新疆库尔勒，用中药粉碎
机对果实进行粉碎。2，4 － 二硝基氯代苯(DNCB) (批号:
0168B383，生物工程上海有限公司) ，吲哚美辛(Indometacin Tab-
lets) (国药准字:H14020549，批号:0912031，临汾奇林药业有限公
司) ，橄榄油，凡士林，硅胶(100 ～ 200 目，青岛海洋化工有限公
司) ，95%乙醇、石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、氮酮、硫化钠
等均为市售分析纯。
1． 3 仪器 BC － R 201 型旋转蒸发器(上海贝凯生物化工设备有
限公司) ，KQ －300E 超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司) ，
SHZ － D(Ш)型循环水式多用真空泵(巩义市予华仪器有限责任
公司) ，HH － S恒温水浴锅(金坛市医疗仪器厂) ，川制 01000101
号数显游标卡尺(成都成量工具集团有限公司) ，Bs423s 型电子
分析天平(Sartorius公司)。
2 方法与结果
2． 1 供试品溶液的制备
2． 1． 1 样品提取 称取果实粉末 200 g，用 1 200 ml 95%乙醇浸
泡 15 h，超声提取 1 h，静置 5 min，取上清液于水温 60℃旋转蒸发
得浸膏。残渣继续用 4 倍量 95%乙醇溶液超声提取 1 h 后进行
旋转蒸发，重复 3 次。将所得浸膏置于 40℃的鼓风干燥箱中干
燥 48 h，贮于 4℃冰箱保存。
2． 1． 2 样品分离 称取浸膏 40 g，80 ml甲醇溶液溶解，与 60 g硅
胶混匀，装柱硅胶 240 g。洗脱剂按极性依次选取石油醚、三氯甲
烷、乙酸乙酯、甲醇、水，依次选取 1 200 ml溶剂洗脱，洗脱液蒸发
浓缩，将所得浸膏置于 40℃的鼓风干燥箱中干燥 48 h，贮于 4℃
冰箱保存。
2． 1． 3 样品的配置 抗炎模型供试品配置，取各部位浸膏各 100
·8431·
时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 6 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL． 23 NO． 6
mg，加 6 μl氮酮、24 μl 橄榄油、20 μl 70%乙醇溶液混匀。过敏
模型供试品配置，致敏接触药物，取各部位浸膏各 100 mg，加橄
榄油 3 ml，氮酮 0． 3 ml，70%的乙醇溶液定容至 10 ml混匀。激发
接触药物，取各部位浸膏各 10 mg，加橄榄油 3 ml，氮酮 0． 3 ml，
70%的乙醇溶液定容至 10 ml混匀，阳性对照同上。
2． 2 急性关节炎模型的建立 将小鼠按体质量随机分为 8 组，每
组 5 只，用记号笔在右踝关节处画出标记线，并测其周长。注射
蛋清前 24 h在右踝关节处外敷药膏，每只小鼠给药 150 mg，连敷
24 h后采用在右踝关节部位注射蛋清法［7］诱导关节炎，30 min
后，测量右踝关节的周长，判断各组药物抗关节肿胀的作用。以
致炎前右踝关节周长为正常值，以致炎后与致炎前右踝关节的周
长之差为关节肿胀程度指标(结果见表 1)。
关节肿胀度 =致炎后关节周长 －致炎前关节周长;
关节肿胀率(%)=［(致炎后关节周长 －致炎前关节周长)
/致炎前关节周长］× 100%。
2． 3 局部皮肤过敏模型的建立 将小鼠按体质量随机分为 8 组，
每组 5 只，给药前 24 h，用 10%的硫化钠水溶液将小鼠背部脊柱
两侧脱毛，每侧面积约 2 cm × 2 cm，用温水轻轻擦拭干净，同时
检查褪毛区是否有损伤，剔除皮肤受损小鼠。实验设空白对照
组、阳性对照组和实验组，每组 5 只。阳性致敏物用 DNCB 配成
1%的致敏浓度和 0． 1%的激发浓度(用 70%的酒精配置)。
2． 3． 1 致敏接触 将小鼠按体质量随机分组，每组 5 只。各组分
别给受试物 0． 02 ml 涂在动物右侧脱毛区，用适宜的方法固定，
持续 6 h后用温水清洗干净。第 7 天和第 14 天，以同样的方法
重复 1 次。空白对照组(涂橄榄油)和阳性对照组用 1% DNCB，
方法同上。
2． 3． 2 激发接触 于末次给受试物致敏后第 14 天，将受试物
0． 02 ml涂于小鼠左侧脱毛区，阳性对照用 0． 1% DNCB，6 h后去
掉受试物，即刻观察，然后于 24，48，72 h再次观察皮肤的过敏反
应情况，按表 1(空白对照与阳性对照方法均同)评分［8］。
表 1 皮肤过敏反应评分标准(局部过敏)
皮肤反应 分值
红斑形成:
无红斑 0
轻度红斑，勉强可见 1
中度红斑，明显可见 2
重度红斑 3
紫红色红斑到轻度焦痂形成 4
水肿形成:
无水肿 0
轻度水肿，勉强可见 1
中度水肿，明显可见(边缘高出周围皮肤) 2
重度水肿，皮肤隆起 1 mm，轮廓清楚 3
严重水肿，皮肤隆起 1 mm以上或有水疱或溃烂 4
2． 4 结果判断 实验结果按皮肤反应评分标准评分后，根据试验
组与对照组小鼠皮肤反应的差别，判断受试物对皮肤过敏反应性
质。为了评价受试物的致敏强度，可按表 2 判断其致敏率。致敏
率的计算:将出现皮肤红斑或水肿(不论程度轻重)的动物例数
除以受试动物总数，即得致敏率。
反应平均值 =(红斑形成总分 +水肿形成总分)/实验动物
总数
3 结果
3． 1 95%乙醇提取物不同部位对急性炎症的影响 对新鲜鸡蛋
清诱发的小鼠踝关节肿胀以关节肿胀度和肿胀率进行评价，结果
(表 3)显示，与阴性对照组比较，阳性对照、醋酸乙酯部位、甲醇
部位、水部位组均存在显著差异(P ＜ 0． 01) ，其肿胀度均低于阴
性对照组。95%乙醇提取物、石油醚部位、氯仿部位组均无差异。
表 2 致敏率分类
致敏率(%) 反应强度
0 ～ 10 弱致敏度
11 ～ 30 轻度致敏性
31 ～ 60 中度致敏性
61 ～ 80 高度致敏性
81 ～ 100 极度致敏性
表 3 95%乙醇提取物不同部位对小鼠关节肿胀的影响(珋x ± s)
样品 每只剂量 m /mg 肿胀度 l /mm 肿胀率(%)
阴性对照 － 0． 344 ± 0． 147 3． 37
阳性对照 150 0． 106 ± 0． 088﹡﹡ 1． 03
95%乙醇提取物 150 0． 215 ± 0． 083 2． 05
石油醚部位 150 0． 335 ± 0． 153 3． 26
氯仿部位 150 0． 318 ± 0． 174 3． 11
醋酸乙酯部位 150 0． 102 ± 0． 099﹡﹡ 0． 95
甲醇部位 150 0． 120 ± 0． 036﹡﹡ 1． 15
水部位 150 0． 036 ± 0． 047﹡﹡ 0． 33
与阴性对照组比较，﹡ P ＜ 0． 05 ，﹡﹡P ＜ 0． 01;n = 5
3． 2 95% 乙醇提取物不同部位对小鼠皮肤致敏性比较 对
DNCB所致的小鼠局部皮肤过敏以反应平均值和致敏率进行评
价，结果(见表 4)显示，各组分别在 24，48，72 h时红斑、水肿情况
有变化，但无规律。与阴性对照组相比，95%乙醇提取物、石油醚
部位、甲醇部位组均无过敏反应，阳性对照、氯仿部位、醋酸乙酯
部位及水部位组则呈现不同程度的致敏性，对照表 2 可知，阳性
对照组所导致的小鼠皮肤过敏反应强度为极度致敏性，氯仿部
位组为轻度致敏性，醋酸乙酯部位组为中度致敏性，水部位组为
高度致敏性。
表 4 95%乙醇提取物不同部位对小鼠皮肤致敏性比较(珋x ± s)
样品
每只剂量
V /ml
反应平均值
24 h 48 h 72 h
致敏率(%)
24 h 48 h 72 h
阴性对照 － 0 0 0 0 0 0
阳性对照 0． 02 3． 2 3． 2 3 100 100 100
95%乙醇提取物 0． 02 0 0 0 0 0 0
石油醚部位 0． 02 0 0 0 0 0 0
氯仿部位 0． 02 0． 6 0． 8 0． 8 20 20 20
醋酸乙酯部位 0． 02 1 1 1． 2 40 40 40
甲醇部位 0． 02 0 0 0 0 0 0
水部位 0． 02 2． 2 1． 8 1． 8 80 80 80
n =5
4 讨论
类风湿性关节炎在我国有较高的患病率，在自身免疫性结缔
组织病中其患病率高居首位。民间常用刺山柑果实外敷治疗风
湿、类风湿性关节炎等疾病，受到了广大患者的青睐，然而刺山柑
果实用于外敷时会伴随有红斑、水肿等过敏症状产生，迫使其用
药时间限制在 5 ～ 10 min，在很大程度上降低了其治疗效果。
本实验研究针对刺山柑果实 95%乙醇总提取物及不同极性
分离部位进行了初步的抗炎、致敏活性筛选，结果表明，刺山柑果
实 95%乙醇提取物外敷治疗关节炎的有效活性部位与皮肤致敏
部位有所重叠，这说明刺山柑果实外敷治疗关节炎虽有较好的疗
效，但却同时存在红斑、水肿等副作用。与阳性对照组相比，刺山
柑果实醋酸乙酯部位、甲醇部位及水部位对小鼠踝关节肿胀抑制
均有显著的抗炎作用。其中乙酸乙酯部位所导致的小鼠皮肤过
敏反应强度为中度致敏性，甲醇部位无致敏性，水部位则呈现出
高度致敏性，综合考虑，认为刺山柑果实 95%乙醇提取物的醋酸
乙酯部位及甲醇部位为最佳有效部位。抗炎活性部位与致敏部
位的确定为目标化合物的分离、制备和疗效评价提供了一定的理
·9431·
LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL． 23 NO． 6 时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 6 期
论依据，也证明民间使用刺山柑果实治疗风湿是具有科学道理
的，建议对刺山柑果实醋酸乙酯部位和甲醇部位进一步分离并做
更深入的研究，以开发成新型的抗风湿药物。
参考文献:
［1］ 张立运，海 鹰．《新疆植被及其利用》专著中未曾记载的植物群落
类型 I．荒漠植物群落类型［J］．干旱区地理，2002，25(01) :84．
［2］ 新疆生物土壤沙漠研究所．新疆药用植物志，第 1 册［M］． 乌鲁木
齐:新疆人民出版社，1977:74．
［3］ 任解莉，张 玲．老鼠瓜单味外用治疗肩周炎 131 例［J］．世界今日
医学杂志，2000，1(6) :684．
［4］ Adams M，Berset C，Kessler M，et al． Medicinal herbs for the treatment
of rheumatic disorders － A survey of European herbals from the 16th and
17th century［J］． J of Ethnopharmacology，2009，121(3) :343．
［5］ Victor R，Esther R，Salvador C． Anti － inflammatory Activity of Some
Extracts from Plants used in the Traditional Medicine of North － African
Countries［J］． Phytotherapy Research，1996，10(5) :421．
［6］ 单文俊，丁玉庆，谢举锋．外用野西瓜致接触性皮炎 1 例［J］． 实用
医学杂志，2005，21(9) :982．
［7］ 程友斌，潘洪林． 金荞麦抗炎活性部位筛选研究［J］． 时珍国医国
药，2009，20(9) :2219．
［8］ 陈 奇．中药药理研究方法学［M］． 北京:人民卫生出版社，1996:
453．
收稿日期:2011-12-02; 修订日期:2012-03-06
基金项目:国家自然科学基金(No． 41076108) ;
河南大学科研启动经费(No． B2011037)
作者简介:郭秀春(1982-) ，女(汉族) ，山东德州人，现任河南大学药学院
讲师，博士学位，主要从事天然产物及药物研究工作．
* 通讯作者简介:郑 立(1976-) ，男(汉族) ，湖北武汉人，现任国家海洋
局第一海洋研究所副研究员，博士学位，主要从事海洋微生物天然产物研
究工作．
酰基高丝氨酸内酯类化合物诱导细菌
NJ6 － 3 － 1 抗菌物质代谢的研究
郭秀春1，2，郑 立2* ，王小如2
(1．河南大学药学院，河南 开封 475004; 2．国家海洋局第一海洋研究所生态中心，山东 青岛 266061)
摘要:目的 选择一株具有抗菌活性的海绵共栖细菌 NJ6 － 3 － 1 为实验菌株，考察其抗菌物质的代谢是否受到群体感应
诱导信号分子的调控。方法 利用细菌 NJ6 － 3 － 1 自身代谢的 3 种酰基高丝氨酸内酯类化合物(Acyl － homoserine lac-
tones，AHLs)作为自诱导物质，采用生物自显影和高效液相色谱技术，研究了低密度条件下的细菌 NJ6 － 3 － 1 与 3 种不同
AHLs共培养时的抗菌活性及抗菌物质代谢情况。结果 辛酰基高丝氨酸内酯(C8 － HSL)能诱导细菌 NJ6 － 3 － 1 在不产
生抗菌物质的低密度生长条件下代谢抗菌物质，并且能诱导细菌 NJ6 － 3 － 1 抗菌物质代谢产量显著增强。结论 细菌
NJ6 － 3 － 1 抗菌物质的代谢受到自诱导物 C8 － HSL的调控。
关键词:酰基高丝氨酸内酯类化合物; 群体感应; 自体诱导物; 抗菌活性
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 06． 015
中图分类号:Q785 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2012)06-1350-03
Antibacterial Compound Metabolism of Bacterium Pseudalteromonas sp． NJ6 － 3 － 1 In-
duced by Acyl － homoserine Lactones
GUO Xiu-Chun1，2，ZHENG Li2* ，WANG Xiao-Ru2
(1． Pharmacological College of Henan University，Kaifeng 475004，China;2． The First Institute of Oceanogra-
phy，SOA，Qingdao 266061，China)
Abstract:Objective In this study，a sponge associated marine bacterium Pseudoalteromonas piscicida NJ6 － 3 － 1 with remarka-
ble biological activities was chosen in a case study to investigate whether its antibacterial metabolites were regulated and induced
by quorum sensing autoinducer molecules．Methods To use three kinds of acyl － homoserine lactones of the metabolites of NJ6 －
3 － 1 as autoinducer molecules，we monitored the antibacterial activity and antibacterial substance metabolism of bacterium NJ6 －
3 － 1 with low cell density by TLC bioautography and high performance liquid chromatography (HPLC)when the species were co
－ cultured with these three kinds of acyl － homoserine lactones． Results N － octyl － homoserine lactone existing in the metabolites
of NJ6 － 3 － 1 could induce the production of antibacterial substance from marine bacteria NJ6 － 3 － 1 even under low cell density
conditions below the required threshold value，and could increase the metabolism of antibacterial production of bacterial NJ6 － 3 －
1． Conclusion The results as described above provide preliminary evidence to support the hypothesis that the metabolism of anti-
bacterial substance of NJ6 － 3 － 1 is controlled by autoinducer molecule of N － octyl － homoserine lactone．
Key words:N － acyl － homoserine lactone;Quorum sensing; Autoinducer; Antibacterial activity
细菌的群体感应(Quorum Sensing，QS) ，也称自诱导或阈值 敏感，是细菌根据种群密度大小进行胞内或胞间信息交流，协调
群体行为，并调控基因表达的一种机制。具有群体感应的细菌都
能够产生并释放一种被称为自诱导物质(autoinducer)的信号分
子。细菌利用这些信号分子在细胞间扩散，来感知自身和周围环
境中其他菌群的数量变化，当信号分子浓度达到一定阈值时就启
动菌体相关基因表达，调控相关生物学功能［1，2］。
酰基高丝氨酸内酯类化合物(Acyl － homoserine lactones，
AHLs)是革兰氏阴性(G －)细菌产生的一类用来调控其密度依赖
型基因表达的信号分子［3］。研究发现，多数细菌都靠分泌 AHLs
·0531·
时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 6 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL． 23 NO． 6