全 文 ：食品与发酵工业 FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIES
122 2013 Vol. 39 No. 8 (Total 308)
明日叶的茎与叶主要抗氧化成分含量及抗氧化性比较*
郭晓青1，2，吴金鸿1，刘畅1，李建清1，王正武1，杨科峰3
1(上海交通大学农业与生物学院，陆伯勋食品安全研究中心，上海，200240)
2(贵阳护理职业学院，贵州 贵阳，550081) 3(上海交通大学医学院，上海，200240)
摘 要 以明日叶茎杆与叶子为研究对象，在测定其乙醇提取物总酚酸及总黄酮含量的基础上，以芦丁为阳性
对照，测定其乙醇提取物总抗氧化能力，铁离子还原 / 抗氧化力，以及对超氧阴离子自由基、羟基自由基、DPPH
有机自由基的清除作用，并对茎杆与叶子乙醇提取物进行抗氧化活性比较。结果表明:叶乙醇提取物总酚酸和
总黄酮的含量分别是茎乙醇提取物的 2. 2 倍和 5. 2 倍。在总黄酮质量浓度相同的条件下，叶乙醇提取物和茎乙
醇提取物的抗氧化活性均与其总黄酮质量浓度呈正相关，且叶乙醇提取物的抗氧化性大于茎乙醇提取物。与芦
丁相比较，芦丁对羟基自由基的清除能力大于叶乙醇提取物，其他抗氧化活性均小于叶乙醇提取物而大于茎乙
醇提取物。结果表明，明日叶的叶乙醇提取物可以作为一种新型有效的天然抗氧化物质进行开发利用。
关键词 明日叶，总酚酸，总黄酮，抗氧化活性，清除率
第一作者:学士，副教授(吴金鸿副研究员为通讯作者，E-mail:
wujinhong@ sjtu. edu. cn)。
* 国家自然科学基金青年科学基金项目(31000814;31000800);上海交
通大学医工交叉项目(YG2011MS64);国家自然科学基金面上项目
(31171642);科技部农业成果转化项目(2011GB2C000008);上海市
科学技术委员会项目(11495801600;1052NM06700)
收稿日期:2013 － 05 － 21，改回日期:2013 － 07 － 11
明日叶(Angelica keiskei Koidzumi)原产于日本八
丈岛，属伞形科当归 2 年生或多年生草本植物，岛上
居民多食用明日叶，均很长寿，因此又名长寿菜、八丈
芹、海峰人参等［1 － 2］。明日叶含多种天然活性物
质［3 － 6］，营养丰富均衡，作为一种药食兼用的蔬菜备
受关注，现今在韩国、台湾以及我国海南、云南、山东
等地已广泛种植。近年来的一些研究报道表明，明日
叶富含黄酮类物质，具有增强免疫力、防癌抗癌、降血
脂、抗糖尿病、抗炎消炎等功效［7 － 9］。目前国内明日
叶总黄酮提取工艺和检测方法已有文献报道［10 － 11］，
对明日叶不同组织部位如茎杆与叶子抗氧化活性组
分含量测定分析以及抗氧化性比较研究鲜有报道。
本实验测定明日叶茎和叶乙醇浸提物主要抗氧化成
分总酚酸和总黄酮的含量，并分析了其抗氧化活性。
1 材料与方法
1. 1 材料与试剂
明日叶(上海交通大学农业与生物学院种植实
验基地)。
T-AOC测定试剂盒、抗超氧阴离子自由基及产
生超氧阴离子自由基测试盒(南京建成生物工程研
究所) ;原儿茶酸(上海源叶生物科技有限公司) ;福
林酚试剂(海荔达生物科技有限公司) ;芦丁标准品
(纯度 ＞ 98%，上海融禾医药科技有限公司) ;无水乙
醇、Al(NO3)3、NaNO2、NaOH、NaHCO3、FeSO4 等，均
为分析纯。
1. 2 仪器与设备
RT-25 粉碎机(北京兴时利和科技发展有限公
司) ;DK-S26 电热恒温水浴锅(上海精宏实验设备有
限公司) ;EPPENDOF 5810R 离心机(上海肯强仪器
有限公司) ;DU 800 uv /vis 分光光度计(美国 Beck-
man Coulter公司) ;旋转蒸发器(上海青浦沪西仪器
厂) ;FD-1A-50 冷冻干燥机(北京博医康实验仪器公
司)。
1. 3 实验方法
1. 3. 1 明日叶茎与叶乙醇提取物的制备
明日叶用水洗净，置于 － 20℃冷冻 24 h，然后冷
冻干燥 22 h，得到脱水明日叶。将脱水明日叶茎杆和
叶子分开，分别制备乙醇提取物。明日叶茎和叶分别
采用超低温液氮粉碎的方法粉碎，并过 100 目筛，得
到干燥粉末。按质量体积比 1 ∶ 10(g∶ mL)将干燥粉
与体积分数为 65%的乙醇溶液混合，45℃水浴加热
15 min浸提，浸提液在 4℃，8 000 r /min离心 20 min，
取上清液置于圆底烧瓶中，在 42℃、0. 1 MPa 下进行
旋转蒸馏去除乙醇，剩余浸提液冷冻干燥，得到茎和
叶乙醇提取物粉末(抗氧化活性分析样品，简称样
品)。
1. 3. 2 明日叶茎和叶乙醇提取物中抗氧化活性组分
的含量测定
DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.2013.08.003
生产与科研经验
2013年第 39卷第 8期(总第 308期) 123
1. 3. 2. 1 总酚酸含量测定
总酚酸含量测定采用 Folin-Ciocalteu 法［12］。原
儿茶酸标准曲线制作:准确秤取原儿茶酸 10mg，用体
积分数为 95%乙醇溶解，配成 200 μg /mL 原儿茶酸
标准液。准确取原儿茶酸标准液 0. 5，1. 0，1. 5，2. 0，
2. 5，3. 0，3. 5，4. 0，4. 5，5. 0 mL 分别置于 25 mL 容量
瓶中，用乙醇稀释定容。将 1. 5 mL 福林试剂分别加
到 1 mL以上不同浓度原儿茶酸溶液中，混匀静置 5
min，然后加 3 mL Na2CO3溶液(10 g /100 mL) ，混匀，
在 50℃的水浴中加热 5min，室温下避光静置 2 h，以
试剂空白作参比，在 760 nm 波长下测定吸光度 A。
以原儿茶酸质量浓度 c(μg /mL)为横坐标，吸光度值
A为纵坐标，绘制标准曲线，得标准曲线回归方程 A
= 0. 0983c，R2 = 0. 993 2。
总酚酸含量测定:取 5 mg 样品，用体积分数
65%乙醇溶解，定量转移至 50 mL 容量瓶，配成 100
μg /mL待测液备用。取 1 mL待测液，按标准曲线建
立的方法测定吸光度 A，根据(1)式求出样品液总酚
酸含量。
总酚酸含量 / ( μg·μL －1 ) =
c × V1 × V2
m × 106 × 1. 00
× 100 ( 1)
式中:c 为标准曲线回归方程计算出的总酚酸质
量浓度 (μg /mL) ;1. 00 为加入待测液体积(mL) ;V1
总酚酸测定反应体系总体积(mL) ;V2为待测液总体
积(mL) ;m为样品质量(g)。
1. 3. 2. 2 总黄酮含量测定
总黄酮含量测定采用硝酸铝-亚硝酸钠比色
法［13］。芦丁标准曲线绘制［14］:准确取芦丁标准溶液
(0. 2 mg /mL)0. 00、0. 20、0. 40、0. 60、1. 00、1. 20 mL，
分别置于 10 mL容量瓶中，加入质量分数 5% NaNO2
0. 4 mL，摇匀，放置 6 min，再加入质量分数 10%
Al(NO3)30. 4 mL，摇匀，放置 6 min，再加入质量分数
5%NaOH 4 mL，加水至刻度，摇匀，放置 15 min，以试
剂空白作为参比，在 510 nm处测定吸光度 Y，以芦丁
质量浓度 X(mg /mL)为横坐标，吸光度 Y为纵坐标绘
制标准曲线，得到芦丁吸光度与浓度的标准曲线回归
方程 Y = 6. 755 8X － 0. 003 6，R2 = 0. 994 2。
总黄酮含量测定:取 0. 01g 样品，用体积分数
65%乙醇溶解，定量转移至 10mL 容量瓶，配成 1mg /
mL待测液备用。取 1mL待测液液，按标准曲线建立
的方法测定吸光度，计算样品液总黄酮含量。
总黄酮含量 /% =
c1 × Va × Vb
m × 103 × 1. 00
× 100 ( 2)
式中:c1为样品的总黄酮质量浓度(mg /mL) ;Va
显色反应总体积(mL) ;Vb为样品待测液体积(mL) ;
1. 00 为显色反应加入样品溶液体积(mL) ;m 为样品
质量(g)。
1. 3. 3 总抗氧化能力测定［15］
取 10 g明日叶的叶片乙醇浸提物粉，用体积分
数 65%乙醇溶解，配成 250 mL 溶液，测定其吸光度
为 2. 901，根据芦丁标准曲线回归方程换算叶样液总
黄酮质量浓度为 4. 27 mg /mL。取 15 g 明日叶的茎
乙醇浸提物粉，同样方法配成 100 mL溶液，测得其吸
光度为 2. 110，茎样液总黄酮质量浓度为 3. 17 mg /
mL。将上述 2 种样液准确稀释为 0. 1、0. 3、0. 5、1. 0、
1. 5、2. 0、2. 5 mg /mL 不同浓度溶液，以芦丁为对照
样，采用总抗氧化能力(T-AOC)测定试剂盒法测定样
品总抗氧化能力。抗氧化物质能使 Fe3 + 还原成
Fe2 +，后者可与菲啉类物质形成稳定的络合物，通过
比色可测出抗氧化能力的大小。具体操作参照南京
建成生物工程研究所提供的总抗氧化能力(T-AOC)
测定试剂盒说明书。
单位定义:在 37℃时，每分钟每毫升被测液使反
应体系的吸光度(OD)值每增加 0. 01 时，为 1 个总抗
氧化能力单位(U /mL)。根据(3)式求出样品总抗氧
化能力。
总抗氧化能力 / ( U·mL －1 ) =测定 OD －对照 OD0. 01 × 30 ×
反应液总量
取样量
×样本测试前稀释倍数 ( 3)
1. 3. 4 铁离子还原法( FRAP) 测定抗氧化活性［16 － 17］
FRAP 工作液配制(现用现配) :用 300 mmol /L
pH 3. 6 的醋酸盐缓冲液，10 mmol /L TPTZ 溶液(40
mmol /L HCl配制) ，20 mmol /L FeCl3·6H20 溶液按
10∶ 1∶ 1 体积比配制而成。
FeSO4标准曲线的绘制:分别取浓度为 0、0. 2、
0. 4、0. 6、0. 8 和 1. 0 mmol /L的 FeSO4溶液各 0. 5mL，
加入 4. 5 mL FRAP 工作液，混匀后，37℃水浴反应
10min，超纯水调零，在 593 nm处测定其吸光度，以浓
度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。样品
的抗氧化活性(FRAP值)以达到相同吸光度所需 Fe-
SO4的毫摩尔数表示。
样品抗氧化活性的测定:将叶、茎 2 种样液准确
稀释为 0. 01、0. 05、0. 1、0. 2、0. 4、0. 5 mg /mL溶液，用
绘制 FeSO4标准曲线同样方法测定不同浓度样品吸
光度，应用标准曲线换算出 FRAP 值。芦丁为对照
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样。
1. 3. 5 超氧阴离子的清除能力测定
模拟机体中黄嘌呤与黄嘌呤氧化酶反应系统，产
生超氧阴离子自由基 O2
－·，加入电子传递物质及
gress氏显色剂，使反应体系呈现紫红色。将叶、茎 2
种样液准确稀释为 0. 1、0. 3、0. 5、0. 8、1. 0 mg /mL 溶
液，以芦丁为对照样，采用抗超氧阴离子自由基及产
生超氧阴离子自由基测定试剂盒测定法测定吸光度，
根据(4)式求出样品超氧阴离子的清除能力。具体
操作参照南京建成生物工程研究所提供的抗超氧阴
离子自由基及产生超氧阴离子自由基测定试剂盒说
明书。
在反应系统中，每升样液在 37℃反应 40 min 所
抑制的超氧阴离子自由基相当于 1 mg 的 Vc 所抑制
的超氧阴离子自由基的变化值为 1 个活力单位(U /
L)。
抗超氧阴离子活力 / ( U·L －1 ) =
对照管 OD值 －测定管 OD值
对照管 OD －标准管 OD
×
标准浓度( 0. 15 mg /mL) × 1 000 mL ×
样本测试前稀释倍数 ( 4)
1. 3. 6 DPPH自由基的清除能力测定［15］
取 2 mL 0. 01、0. 02、0. 03、0. 04、0. 05 mg /mL 不
同浓度样液，分别加入 2 mL 0. 04 mg /mL的 DPPH溶
液，混合均匀，暗处放置 30min，在波长 517 nm 处测
其吸光度为 Ai，取 2 mL 上述浓度的样液，各加入 2
mL无水乙醇，相同条件下测其吸光度为 Aj，2 mL 无
水乙醇与 2 mL 0. 04 mg /mL的 DPPH溶液混合均匀，
相同条件下测其吸光度为 AC。根据(5)式求出样品
DPPH自由基的清除能力。
抑制率 /% = 1 －
Ai － Aj
Ac × 100 ( 5)
其中:Ai，加抗氧剂时 DPPH 溶液的吸光度;Aj，
样液在测定波长时的吸光度;Ac，未加抗氧剂时 DP-
PH 溶液的吸光度。
1. 3. 7 羟基自由基的清除能力测定［15，18］
取 2 mL 0. 1、0. 2、0. 5、0. 8、1. 0 mg /mL不同浓度
样液，各加入 2 mL 2 mmol /L 的 FeSO4溶液、2 mL 6
mmol /L H2O2，静置 10 min，再加 2 mL 6 mmol /L水杨
酸混匀，37℃水浴反应 20 min，510 nm处测其吸光度
为 Ai。同样方法，双蒸水代替水杨酸测得吸光度为
Aj，双蒸水代替样液测得吸光度为 Ac。据(6)式求出
样品对羟基自由基的清除能力。
E(·OH)/% = 1 －
Ai － Aj
Ac × 100 (6)
2 结果与分析
2. 1 明日叶茎与叶乙醇提取物抗氧化成分含量分析
现已证明很多疾病的发生与发展与自由基对组
织细胞的损坏有密切的关系。植物来源的酚酸类化
合物和黄酮类化合物都具有良好的抗氧化性［19 － 20］。
由表 1 可知，明日叶茎和叶乙醇提取物总酚酸含量和
总黄酮含量都比较高，但叶子中含量更高，其总酚酸
含量和总黄酮含量分别是茎的 2. 2 倍和 5. 2 倍。
表 1 明日叶茎与叶乙醇提取物总酚酸和总黄酮含量
Table 1 Contents of total phennolic and total flavonoids
of leaves and stem ethanol extracts from
Angelica keiskei Koidzmi
明日叶部位 总酚酸含量 /% 总黄酮含量 /%
叶 12. 36 ± 0. 18 10. 18 ± 0. 23
茎 5. 59 ± 0. 021 1. 96 ± 0. 018
2. 2 明日叶茎与叶乙醇提取物总抗氧化能力分析
由图 1 可知，明日叶茎与叶乙醇提取物总抗氧化
能力较强，均强于具有抗氧化活性的标准物质芦丁。
总黄酮含量与总抗氧化能力呈正相关，并在叶和茎乙
醇提取物总黄酮质量浓度相同的条件下，叶的总抗氧
化性大于茎。黄酮结构复杂，种类繁多，不同结构黄
酮抗氧化能力也不同。明日叶叶所含的总黄酮种类
和茎可能不完全相同，所以在总黄酮质量浓度相同条
件下，两者抗氧化性有所不同。
图 1 明日叶茎与叶乙醇提取物的总抗氧化能力
Fig. 1 Total antioxidant activities of ethanol extracts of
leaves and stem from Angelica keiskei Koidzmi
2. 3 明日叶茎与叶乙醇提取物铁离子还原 / 抗氧化
力分析
FRAP法测定抗氧化活性的原理是:TPTZ(Fe3 + -
三吡啶三吖嗪)可被样品中的还原物质还原为二价
生产与科研经验
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铁形式，呈现出蓝色，并在 590nm 处具有最大吸收
峰。根据吸光度大小计算抗氧化活性强弱。
按 1. 3. 4 方法得到标准品 FeSO4标准曲线的回
归方程为:Y = 2. 010 9x + 0. 113 6(R2 = 0. 988 3)。
明日叶茎与叶乙醇提取物 FRAP值见图 2。由图 2 可
知，FRAP 值与明日叶茎、叶乙醇浸提物总黄酮质量
浓度成正相关。在总黄酮质量浓度相同的情况下，明
日叶叶乙醇提取物抗氧化性强于茎乙醇提取物。与
芦丁相比，抗氧化性能力大小顺序为明日叶叶乙醇提
取物 ＞芦丁 ＞明日叶茎乙醇提取物。
图 2 明日叶茎与叶乙醇提取物的 FRAP值
Fig. 2 FRAP value of ethanol extracts of leaves and
stemfrom Angelica keiskei Koidzmi
2. 4 明日叶茎与叶乙醇提取物清除超氧阴离子能力
分析
自由基是指独立带有不成对价电子的原子、分
子、离子或化学基团。生物体内常见的自由基是氧自
由基，其中超阴离子氧自由基 O2
－·形成最早，黄酮
对不同的氧自由基的作用机理不同，对 O2
－·的作用
机理是阻止自由基的引发［20］。由图 3 可知，明日叶
茎与叶乙醇提取物有较强清除超氧阴离子能力，其总
黄酮质量浓度与清除 O2
－·的清除率成正相关。在
总黄酮含量相同的情况下，明日叶叶乙醇提取物清除
率大于茎乙醇提取物。与芦丁相比，清除率大小顺序
为明日叶叶乙醇提取物 ＞芦丁 ＞明日叶茎乙醇提取
物。
2. 5 明日叶茎与叶乙醇提取物清除羟基自由基能力
分析
羟基自由基是氧自由基中危害最大的，黄酮对羟
基自由基的作用机理与对 O2
－·的作用机理不一样，
它是与金属离子螯合阻止羟基自由基生成［20］。由图
4 可知，明日叶茎与叶乙醇提取物有较强清除羟基自
由基能力，其总黄酮质量浓度与清除羟基自由基的清
除率成正相关。总黄酮浓度相同的条件下，叶乙醇提
取物对羟基自由基清除率大于茎乙醇提取物。与芦
图 3 明日叶茎与叶乙醇提取物对超氧阴离子
自由基的清除作用
Fig. 3 Scavenging action of ethanol extracts of leaves
and stem from Angelica keiskei Koidzmi
against superoxide anion free radicals
丁相比，清除率大小顺序为芦丁 ＞明日叶叶乙醇提取
物 ＞明日叶茎乙醇提取物。
图 4 明日叶茎与叶乙醇提取物对羟基自由基的清除作用
Fig. 4 Scavenging action of ethanol extracts of leaves
and stem form Angelica keiskei Koidzmi
against hydroxyl free radicals
2. 6 明日叶茎与叶乙醇提取物清除 DPPH 自由基
能力分析
DPPH是一种稳定的有机自由基，其乙醇溶液呈
紫色，在 517 nm 处有最大吸收峰。当 DPPH 溶液中
加入自由基清除剂时，孤对电子被配对，颜色由紫色
变向黄色，吸光度发生变化。吸光度变化程度与清除
自由基能力呈定量关系，所以可用分光光度法进行定
量测定。由图 5 可知，明日叶茎与叶乙醇提取物对
DPPH自由基清除能力较强，总黄酮质量浓度相同的
条件下，叶乙醇提取物对 DPPH·清除率大于茎乙醇
提取物，与芦丁相比较，清除率大小顺序为明日叶叶
乙醇提取物 ＞芦丁 ＞明日叶茎乙醇提取物。
3 结论
(1)明日叶的叶、茎乙醇提取物总酚酸和总黄酮
含量分别为 12. 36%、5. 59%和 10. 18%、1. 96%，结
食品与发酵工业 FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIES
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图 5 明日叶茎与叶乙醇提取物对 DPPH·
的清除作用
Fig. 5 Scavenging action of ethanol extracts of leaves
and stem form Angelica keiskei Koidzmi
against DPPH free radicals
果说明明日叶叶子组织部分比其茎杆部分含有更高
的植物抗氧化活性物质。
(2)明日叶的叶乙醇提取物和茎乙醇提取物的
抗氧化活性均与其总黄酮质量浓度呈正相关，在总黄
酮质量浓度相同的条件下，叶乙醇提取物的抗氧化性
大于茎乙醇提取物，与芦丁相比，除了清除羟基自由
基能力芦丁强于明日叶叶，其余方面的抗氧化性明日
叶的叶乙醇提取物要强于芦丁，这个研究结果表明作
为抗氧化产品开发，明日叶叶乙醇提取物更具有开发
利用价值。
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生产与科研经验
2013年第 39卷第 8期(总第 308期) 127
Comparison of antioxidant content and oxidation resistance of
stems and leaves from Angelica keiskei Koidzmi
GUO Xiao-qing1，2，WU Jin-hong1，LIU Chang1，LI Jian-qing1，
WANG Zheng-wu1，YANG Ke-feng3
1(School of Agriculture and Biology，BorLuh Food Safety Center，Shanghai Jiao Tong University，Shanghai 200240，China)
2(Guiyang Nursing Vocational College，Guiyang 550081，China)
3(College of Biological Science and Technology，Fuzhou University，Fuzhou 350108，China)
ABSTRACT The contents of total phenols and total flavonoids of stem and leaf ethanol extracts from Angelica keiskei
Koidzmi was determined. Taken Rutin as the positive control，total antioxidant capacity，iron ion reduction / antioxi-
dant capacity were investigated，the scavenging capability against superoxide anion free radicals，hydroxyl free radi-
cals and DPPH free radicals were determined. The different antioxidant activities between stem ethanol extracts and
leaf ethanol extracts were evaluated. Results indicated that total phenols and total flavonoids in leaves ethanol extracts
were respectively 2. 2 folds and 5. 2 folds of stem ethanol extracts. Under the same conditions，the concentration of to-
tal flavonoids，antioxidant activities of the ethanol extracts of leaves and stems were positive correlated with the mass
concentration of total flavonoids. The antioxidant activities of leaves ethanol extracts were significantly higher than
stem ethanol extracts. Compared with rutin，scavenging capability of rutin against hydroxyl free radicals were greater
than leaves ethanol extracts，but other antioxidation activities of rutin were lower than the leaves ethanol extracts and
higher than the stem ethanol extracts. Results showed that leaf ethanol extracts from Angelica keiskei Koidzmi can be
used as a natural antioxidant for development and utilization in the future.
Key words Angelica keiskei Koidzmi，total phenols，total flavonoids，antioxidant activity，scavenging rate
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