全 文 ：　　　　　　　　　　世界中西医结合杂志 2011年第 6卷第 4期　WorldJournalofIntegratedTraditionalandWesternMedicine　 2011, Vol.6, No.4
·实验研究·
作者单位:青岛大学医学院附属海慈医院 ,山东 青岛 266033
通讯作者:侯芳霖, Email:hfanglin@yahoo.com.cn
明日叶查尔酮对荷瘤小鼠抗氧化能力
影响作用的研究
侯芳霖　钟进义　张燕
【摘要】　目的　研究明日叶查尔酮(AC)对荷 H22肝癌小鼠细胞抗氧化能力的影响。方法　将
50只荷 H22肝癌小鼠随机分为肿瘤对照组 、环磷酰胺组 、明日叶查尔酮高 、中 、低剂量组共五组 , 每组
10只。 AC低 、中 、高剂量组每日分别灌胃给予 8、16、 32 mg· kg-1明日叶查尔酮 ,肿瘤对照组给予生
理盐水 ,环磷酰胺(CTX)组隔日腹腔注射 20mg· kg-1的 CTX。第 11天处死小鼠 , 取瘤组织检测各组
小鼠血清脂质过氧化物(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶水平(GSH-Px)、总抗
氧化能力(T-AOC)等指标 ,用 MTT法检测各组小鼠肿瘤细胞增殖活性。结果　AC各剂量组尤其是
中 、高剂量组能够显著提高小鼠细胞的抗氧化能力 , 与肿瘤对照组比较 ,差异均有统计学意义(P<
0.01);肿瘤对照组肝癌细胞增殖活性为(1.135±0.032)U· mL-1 , AC高剂量组为(0.716±0.018)U
· mL-1 ,两者比较 ,差异有统计学意义(P<0.05)。结论　明日叶查尔酮能增强荷 H22肝癌小鼠细
胞的抗氧化能力 ,抑制肿瘤细胞增殖活性。
【关键词】　明日叶查尔酮;肝癌;抗氧化;细胞增殖活性
ResearchofAshitabaChalconeontheAntioxidantEffectin
Tumor-BearingMice
HOUFang-lin, ZHONGJin-yi, ZHANGYan
(HaiciHospitalAffiliatedtoMedicalColegeofQingdaoUniversity, QingdaoShandong266033)
【Abstract】　Objective　Tostudytheimpactsofashitabachalcone(AC)oncelantioxidantcapacity
inH22 hepatoma-bearingmice.Methods　50 H22 hepatoma-bearingmicewererandomlydividedinto
fivegroups:atumorcontrolgroup, acytoxan(CTX)group, anAChigh-dosegroup, anACmiddle-dose
groupandanAClow-dosegroup, 10 ratsineachone.InAClow-dose, middle-doseandhigh-dose
groups, ACof8, 16, 32 mg/kgwasadministeredbygastricinfusionseparatelyeveryday.Intumorcontrol
group, physicalsalinewasgiven.InCTXgroup, CTXwasadministeredwithintraperitonealinjection, 20mg/kg
onceeverytwodays.Onthe11thday, althemiceweresacrificedandtumortissuewascolectedforthede-
terminationofserumlipidperoxide(MDA), superoxide(SOD), glutathioneperoxidase(GSH-Px), totalan-
tioxidantcapacity(T-AOC)levels, etc.MTTassaywasadoptedtodeterminetheproliferationactivityof
tumorcelinmiceofeachgroup.Results　OfACgroups, theantioxidanteffectofcelinmiceweresignifi-
cantlyimprovedinACmiddle-doseandAChigh-dosegroups, indicatingsignificantstatisticaldifference
(P<0.01).Thehepatomacellproliferationactivitywas(1.135±0.032)U/mLintumorcontrolgroupand
was(0.716±0.018)U/mLinAChigh-dosegroup, presentingsignificantstatisticaldiferenceincompari-
son(P<0.05).Conclusion　Ashitabachalconecanenhancetheantioxidantcapacityandinhibittheprolif-
erativeactivityoftumorcelinH22hepatoma-bearingmice.
【Keywords】　AshitabaChalcone;Hepatoma;Anti-oxidation;CelProliferationActivity
　　查尔酮(Chalcone)是许多中草药的重要成分。
查尔酮类化合物广泛存在于甘草 、红花等多种中草
药的天然有机化合物中 ,是植物体内合成黄酮的前
体 ,一种重要的植物色素 ,其基本骨架结构为 1, 3-
二苯基丙烯酮[ 1] 。研究证明 [ 2] ,查尔酮类化合物在
抗肿瘤 、提高机体免疫力 、抗氧化 、延缓衰老等方面
具有多种生物学活性。明日叶(Ashitaba)是一种野
生芹科植物 ,原产于日本八丈诸岛 ,因其生命力顽
强 ,今日摘叶明日可发新芽 ,故称明日叶 [ 3] 。明日
叶查尔酮是一种天然黄酮类化合物 ,本文主要从明
日叶查尔酮化合物引发肿瘤细胞方面研究其抗肿
·288·DOI :10.13935/j.cnki.sjzx.2011.04.031
世界中西医结合杂志 2011年第 6卷第 4期　WorldJournalofIntegratedTraditionalandWesternMedicine　 2011, Vol.6, No.4　　　　　　　　　　
瘤 、抗氧化的功效 。细胞凋亡与肿瘤的发生发展有
非常密切的关系 ,细胞凋亡减少是肿瘤发生发展的
重要因素 [ 4] 。本实验通过饲以 H22肝癌荷瘤小鼠
不同剂量的明日叶查尔酮(AshitabaChalcone, AC),
采用菲啉比色法检测各组小鼠血清抗氧化能力的
指标 ,用 MTT法检测各组小鼠肿瘤细胞增殖活性 ,
观察 AC的抗氧化作用。
材料和方法
一 、实验材料
1.实验动物:H22肝癌荷瘤种鼠雄性 ,由山东省
实验动物中心提供 , 动物合格证号:SCXK(鲁 )
20090001。清洁级健康昆明种小鼠 50只 (雌雄各
半), 6 ～ 8周龄 ,体重 18 ～ 20 g,由山东鲁抗医药实
验中心提供 , 动物合格证号:SCXK(鲁)20090007。
小鼠实验前于本实验室适应性喂养 7d。
2.实验样品:明日叶查尔酮由本实验室制备 ,经
紫外分光光度法测定其纯度 >90%。查耳酮标准品
购于美国 SIGMA公司 ,纯度 >99%。
3.试剂与仪器:RPM1640培养基 、胎牛血清 、四
甲基偶氮唑蓝(MTT)均购自美国 GIBCO公司;环磷
酰胺(10013021)购于江苏恒瑞医药股份有限公司;
脂质过氧化物(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷
胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)
等制备的血清 ,采用南京建成生物工程研究所提供
的检测试剂盒进行检测 , 批号分别为 20091214、
20091214、20091007、20100118。 5% CO2培养箱 ,日
本三洋电器有限公司出品;TDL-5离心机 ,上海安
亭科学仪器厂出品;瑞典产 RosysAnthos2010型双
波长酶标仪;日本产 OlympusXDS-1B型倒置显微
镜;电子天平 ,山海天平仪器厂产品 。
二 、实验方法
1.肿瘤接种:无菌抽取 H22肝癌小鼠腹水 ,镜
下调节肿瘤细胞密度至 1×107 /mL,制成细胞悬液
于小鼠右前肢腋窝处皮下接种 ,每只 0.2 mL。
2.动物分组与处理:肿瘤细胞接种后次日 ,将
50只小鼠随机分为肿瘤对照组 、环磷酰胺组和明日
叶查尔酮低 、中 、高剂量组 ,每组 10只 ,雌雄各半。 3
个 AC剂量组分别经口灌胃给予明日叶查尔酮 8、
16、32 mg· kg-1 ,连续 10 d。肿瘤对照组同样方法
给予生理盐水 ,环磷酰胺组隔日腹腔注射 CTX20
mg·kg-1。于第 11天全部小鼠眼球采血处死 ,取
瘤组织待检。
3.血清总抗氧化能力 (T-AOC)、MDA、SOD、
GSH-Px指标的测定:T-AOC检测采用菲啉比色
法 , MDA检测采用硫代巴比妥比色法 , SOD检测采
用黄嘌呤氧化酶法 , GSH-Px检测采用还原法 。
4.瘤细胞增殖活性测定:将瘤组织剪碎研磨 ,经
过滤 、离心后制成瘤细胞悬液 。调节细胞密度为 1
×106 /mL,接种于 96孔培养板 ,每孔 100 μL,置于
5% CO2培养箱中 37 ℃培养 16 h。用 MTT法测定
各孔吸光度 ,各组肿瘤细胞增殖活性用平均吸光度
(A值)表示 ,并按公式:抑制率 =(肿瘤对照组 A值
-实验组 A值)/肿瘤对照组 A值 ×100%,计算 AC
各剂量组对小鼠肝癌细胞增殖活性的抑制率。
三 、统计学处理
采用 SPSS17.0统计软件 ,计量资料做单因素方
差分析 ,以 P<0.05为差异有统计学意义 。
结　　果
1.各组小鼠血清 SOD、MDA和 GSH-Px含量
测定:结果见表 1。
表 1　各组小鼠血清总 SOD活力和 GSH及MDA含量(x±s)
组　别 n SOD(U·mL-1) GSH-Px(mg· L-1)MDA(nmol· mL-1)
肿瘤对照组 10 105.46±7.98 3.89±1.12 9.51±0.85
环磷酰胺组 10 146.12±5.90 10.01±1.42 9.39±0.77
AC低剂量组 10 113.29±6.28ab 5.28±1.53ab 10.02±0.73
AC中剂量组 10 153.72±4.94a 16.12±1.74a 7.87±0.69a
AC高剂量组 10 173.37±4.68ab 29.83±1.65ab 6.12±0.81ab
　　注:与肿瘤对照组比较 , aP<0.01;与 AC中剂量组比较 , bP<
0.05
由表 1可见 , AC各剂量组的小鼠血清总 SOD
活力与 GSH-Px含量随着 AC剂量的增加而呈上
升趋势 ,而 MDA含量则随着 AC剂量的增加而降
低 ,各组间比较 ,差异均有统计学意义(P<0.05)。
2.各组小鼠组清 T-AOC水平:肿瘤对照组和
AC高剂量组小鼠的 T-AOC水平分别为(10.76±
1.02)U· mL-1和(15.88±1.13)U·mL-1。经统计
学分析 , 两组间比较 , 差异有统计学意义 (P<
0.05)。结果见图 1。
图 1　各组小鼠血清 T-AOC水平比较
3.各组细胞增殖活性测定:AC高 、中剂量组肿
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瘤细胞增殖活性以吸光度表示分别为 0.716 ±
0.018和 0.834±0.027 ,均较肿瘤对照组显著降低
(P<0.05)。结果见表 2。
表 2　各组小鼠癌细胞增殖活性(x±s)
组　别 n 吸光度 A值 抑制率(%)
肿瘤对照组 10 1.135±0.032 -
环磷酰胺组 10 0.679±0.056a 40.18
AC低剂量组 10 1.106±0.038b 2.56b
AC中剂量组 10 0.834±0.027a 26.52
AC高剂量组 10 0.716±0.018ab 36.92b
　　注:与肿瘤对照组比较, aP<0.05;与 AC中剂量组比较 , bP<
0.05
讨　　论
明日叶查尔酮属黄酮类化合物 ,是明日叶的主
要功效成分 ,其化学结构为 1, 3-二苯基丙烯酮 ,是
植物体内合成黄酮的前体 ,以它为母体的天然化合
物广泛存在于植物界中 。有研究证明 [ 5-6] ,从甘草
中提取的查尔酮具有抗肿瘤 、抗氧化等功效 , 本实
验探讨了从明日叶中提取的查尔酮对小鼠肝癌细
胞的影响作用 。
氧自由基能攻击生命大分子 ,造成细胞氧化损
伤 、脂质过氧化以及功能改变[ 7-8] 。 SOD和 GSH-
Px是机体内两种重要的抗氧化酶 ,对机体的氧化与
抗氧化平衡起着至关重要的作用 , SOD能清除超氧
阴离子自由基(O2 -·)保护细胞免受损伤 。 GSH-
Px能特异性催化还原型谷胱甘肽(GSH)对过氧化
氢的还原反应 ,保护细胞膜结构和功能的完整。本
实验研究发现 ,干预组大鼠血清总 SOD活力和 GSH
含量明显高于对照组。
MDA是脂质过氧化反应链式终止阶段产生的
小分子产物;脂质过氧化物(LOOH)形成的环状过
氧化物可断裂形成烯醛 、丙二醛 ,其含量可以间接
反应自由基的产生情况和机体组织细胞的脂质过
氧化程度 [ 9] 。脂质过氧化越活跃 ,则生产的 MDA
越多 。本实验中高 、中剂量组小鼠血清中 MDA的
含量较肿瘤对照组和低剂量组显著降低 ,且差异有
统计学意义(P<0.05);而环磷酰胺组和高剂量组
T-AOC水平则明显高于对照组和低剂量组 ,说明
明日叶查尔酮可对抗小鼠体内氧化 /抗氧化平衡失
调 ,降低小鼠组织器官的氧化损伤 ,增强小鼠机体
的抗氧化能力 ,使自由基对脂质的氧化作用减弱 ,
提示明日叶查尔酮能增强 H22肝癌荷瘤种小鼠细
胞的抗氧化能力 。
细胞增殖活性是反映细胞生理状态的基础性
指标[ 10] 。 MTT法是检测细胞增殖活性最常用的方
法 ,其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶
还原外源性 MTT为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒
(Formazan)并沉积在细胞中 ,结晶生成量与细胞的
代谢活性密切相关[ 11] ,当细胞受损或死亡时 ,该反
应可降低或消失 ,提示细胞增殖活性下降 。本实验
结果显示 , AC中 、高剂量组肿瘤细胞增殖活性明显
低于肿瘤对照组和低剂量组 ,说明 AC对 H22肝癌
细胞增殖有一定的抑制作用。本项结果也与上述
抗氧化指标的测定结果相吻合。
综合本次实验结果可以认为 ,明日叶查耳酮具
有增强 H22肝癌小鼠的抗氧化能力 、抑制肿瘤细胞
增殖的作用 。
参　考　文　献
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(收稿日期:2011-01-15)
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