全 文 ：收稿日期:2012 － 03 － 21．
基金项目:中泰青年学术交流基金项目( 农业部专项)．
作者简介:黄建民(1980 － ) ，男，农艺师，主要从事花卉的研究．
匙唇兰次生培养研究
黄建民，向极钎，覃大吉，曾凡忠，李红英，邹迎春
(1．恩施清江生物工程有限公司，湖北 恩施 445000;
2．湖北省农业科技创新中心鄂西综合实验站，湖北 恩施 445000;
3．湖北省恩施州农业科学院，湖北 恩施 445000)
摘要:研究了匙唇兰的类原生质体次生培养．建立了其原球茎次生培养的可行性方法，选择营养液中细胞分裂素与
生长素的种类与含量．匙唇兰幼苗的侧芽与顶芽在改良 MS(1949) 培养基中离体培养6 到 10 周即可形成类原生质
体．检测不同的细胞分裂素与生长素配比对匙唇兰原球茎次生培养的效果．用 Minitab14． 12 统计分析软件做方差
分析．其结果表明，细胞分裂素 6 － BA与生长素 NAA双因素的效应以及交互效应都显著．细胞分裂素 6 － BA有利
于原球茎的次生扩繁与增殖，生长素 NAA刺激生根，有利于幼苗的形成．新鲜椰乳对原球茎的增殖以及幼苗生根
都有特殊的良好效果，其对照试验结果明显优于其它没有添加新鲜椰乳的配方．最佳增殖配方是细胞分裂素 6 －
BA2． 0 mg·L －1和生长素 NAA0． 5 mg·L －1 ．诱导幼苗形成的最佳配方是细胞分裂素 6 － BA 2． 0 mg·L －1和 NAA
1． 0 mg·L －1 ．
关键词:匙唇兰;组织培养;次生培养;原球茎;增殖
中图分类号:S681． 9 文献标志码:A 文章编号:1008 － 8423(2012)02 － 0150 － 03
A Study on Subculturing of Schoenorchis fragrans
HUANG Jian － min，XIANG Ji － qian，QIN Da － ji，ZENG Fan － zhong，
LI Hong － ying，ZOU Ying － chun
(1． Enshi Qingjiang Bio － Engineering Co．，Ltd．，Enshi 445000，China;
2． West Comprehensive Experiment Station of Hubei Provincial Agriculture S＆T Innovation Center，Enshi 445000，China;
3． Enshi Autonomous Prefecture Academy of Agricultural Sciences，Enshi 445000，China)
Abstract:The subculturing of protocorm like bodies (plbs)on Schoenorchis fragrans was studies． An a-
vailable method of plbs subculturing would be found to benefit the whole process of Schoenorchis fragrans
tissue culture，confirm the possible concentrations of cytokinin and auxin for the plbs subculturing，Cyto-
kinin 6 － Benzyladenine (6 － BA)and Auxin Napthalene Acetic Acid (NAA)was required in the nutri-
ent medium． Stimulated multiple shoot formation． On MS medium (1949) ，the axillary buds and apical
buds obtained from the young shoots of Schoenorchis fragrans formed plbs in 6 to 10 weeks． This experi-
ment also would carry out to test the efficiency of different concentrations of cytokinin (6 － BA and NAA)
on plbs subculturing of tissue culture in Schoenorchis fragrans． The best treatment is the concentrations of
cytokinin 6 － BA 2． 0 mg·L －1 and NAA 0． 5 mg·L －1 ． 6 － BA has the benefit for plbs multiplication，
and NAA was good at young seedling formation． Coconut milk has special effect on plbs multiplication
and young seeding formation． For plbs multiplication，the best concentration of cytokinin is 6 － BA 2． 0
mg·L －1 and NAA 0． 5 mg·L －1 ． For young seedling formation，the best concentration of cytokinin is
that 6 － BA 2． 0 mg·L －1，and NAA 1． 0 mg·L －1 ． Minitab14． 12 statistical analysis software was used
for ANOVA． The results indicated that the main effects and interactions effects of both factors (NAA and
6 － BA)on plbs multiplication were all significant．
Key words:Schoenorchis fagrans;tissue culture;subculturing;plbs;multiplication
匙唇兰是一种来自于东印度、缅甸及泰国的重要的观赏兰花，在亚洲有近十个品种． Samuel Parish 和
Heinrich Gustav Reichenbach在 1874 年在《植物期刊》(Journal of Botany) 上首次将它描述为Saccolabium fra-
第 30 卷第 2 期 湖北民族学院学报( 自然科学版) Vol． 30 No． 2
2012 年 6 月 Journal of Hubei University for Nationalities(Natural Science Edition) Jun． 2012
grans． 1963 年 Gunnar Seidenfaden和 Tem Smitinand在泰国将它更正为匙唇兰［1 － 2］．
匙唇兰是一种迷你型兰花．茎长大约 1 ～ 3 cm，具有两列深颜色且厚的叶片，每片叶大约 2 ～ 3 cm长，1 cm
宽．花序约 2 cm长，生长有 15 ～ 25 朵紧密的小花，具有香味，花并不会完全开放，一般宽 2 mm长 5 mm．花瓣
基部近白色，外部淡粉红色．淡粉红色唇瓣基部长有一大团单一的半球型的硬结组织．其深厚的稠密的根紧
紧地扎在基质中．它是一种热带植物，所以不需要保持太高的湿度．苔藓和蕨类植物生产在其根的周围，它能
忍受较干燥一点的环境［3 － 5］．
1 材料与方法
1． 1 原球茎来源
原材料来源于泰国农业大学 Rapee中心兰花园，花梗顶芽与侧花在 MS 培养基 24℃条件下培养 6 ～ 10
星期．
1． 2 培养基与培养方法
用改良 MS培养基( 见表1) 并附加糖，琼脂以及不同浓度水平的细胞分裂素6 － BA 和生长素 NAA． 6 － BA
有 4个水平，分别是 0，0． 5，1． 0，2． 0 mg·L －1;NAA有 3个水平，分别是 0，0． 5，1． 0 mg·L －1( 见表2)．
表 1 改良 MS培养基各成分含量
Tab． 1 Component of improved MS medium
成分 含量 /(g·l － 1)
硝酸钾 0． 5250
磷酸钙 0． 2500
硫酸铵 0． 5000
pH 5． 8000
硫酸镁 0． 2500
硫酸锰 0． 0075
硫酸铁 0． 0280
糖 10． 0000
琼脂 5． 5000
活性炭 0． 2000
表 2 各处理及细胞分裂素与生长素含量
Tab． 2 Content of auxin and cytokinin of different treatment
处理号
NAA/
(mg·L －1)
6 － BA /
(mg·L －1)
1 0． 0 0． 0
2 0． 5 0． 0
3 1． 0 0． 0
4 0． 0 0． 5
5 0． 5 0． 5
6 1． 0 0． 5
7 0． 0 1． 0
8 0． 5 1． 0
9 1． 0 1． 0
10 0． 0 2． 0
11 0． 5 2． 0
12 1． 0 2． 0
13 新鲜椰乳汁 150 ml /L
1． 3 培养条件
温度:(23 ± 2 )℃，光照:1 500 － 2 000 Lux，湿度:80% ～90% ．
2 结果
1) 不同浓度的细胞分裂素(6 － BA) 与生长素(NAA) 配比下原球茎的体积增长率 ( 见表3) ;
2) 不同浓度的细胞分裂素(6 － BA) 与生长素(NAA) 配比下原球茎的芽诱导率( 见表4) ;
3) 附加有新鲜椰乳汁与没有附加新鲜椰乳汁的培养基的原球茎的体积增长率与芽诱导率( 见表5) ;
4) 图表来自于Minitab14． 12 统计分析软件( 表6，图 1 ～ 3)．
表 3 不同浓度的生长素与细胞分裂素
配比下原球茎的体积增长率
Tab． 3 The rate of plbs multiplication
on different lever of auxin / cytokinin
NAA/
(mg·L －1)
6 － BA /(mg·L －1)
0 0． 5 1 2
0． 0 23． 8 49． 4 43． 5 41． 6
0． 5 41． 4 24． 6 44． 3 50． 4
1． 0 40． 8 41． 7 16． 4 49． 1
表 4 不同浓度的生长素与细胞
分裂素配比下原球茎的芽诱导率
Tab． 4 The rate of buds forming
on different lever of auxin /cytokinin
NAA/
(mg·L －1)
6 － BA /(mg·L －1)
0 0． 5 1 2
0． 0 40． 6 44． 8 44． 7 48． 2
0． 5 43． 6 42． 5 47． 9 55． 2
1． 0 42． 8 42． 5 46． 4 47． 4
表 5 附加有新鲜椰乳汁与没有
附加新鲜椰乳汁的培养基的原
球茎的体积增长率与芽诱导率
Tab． 5 The effects of coconut
milk on plbs multiplication
and buds forming
处理 体积增长率 /%芽诱导率 /%
未附有椰汁 23． 8 40． 6
添加有椰汁 49． 1 50． 5
本文获得匙唇兰原球茎增殖的可行性方法．完备了完整的匙唇兰组织培养．为了实现匙唇兰的原球茎增
151第 2 期 黄建民等:匙唇兰次生培养研究
殖，得到了适宜的细胞分裂素和生长素种类和含量．本文也阐述了不同含量的细胞分裂素 6 － BA 和生长素
NAA在匙唇兰原球茎增殖过程中的作用．第 9 号培养基是最佳的培养基配方，其含量是 6 － BA2． 0 mg·L －1
和 NAA0． 5 mg·L －1 ．新鲜的椰乳对于匙唇兰的原球茎的次生培养有特殊的作用，相对于细胞分裂素与生长
素而言，更能促进原球茎的增殖与细茎的形成．用 Minitab14． 12 统计分析软件进行方差分析．结果( 见图2)
表明，两个因素，细胞分裂素 6 － BA和生长素 NAA的效应与交互效应都显著［6 － 7］．
表 6 方差分析表
Tab． 6 Analysis of variance
Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Source DF Seq SS Adj SS Adj MS
6 － BA 2 4381． 4 4381． 4 2190． 7 46． 48 0． 000 Error 27 1272． 5 1272． 5 47． 1
NAA 2 762． 0 762． 0 381． 0 8． 08 0． 002 Total 35 12849． 0
6 － BA* NAA 4 6433． 1 6433． 1 1608． 3 34． 12 0． 000
R － S = 6． 86509，R － Sq = 90． 10%，Sq(adj)= 87． 16%
图 1 原球茎增殖图
Fig． 1 Residual plots for PLBs multiplocation
图 2 原球茎增殖交互影响图
Fig． 2 Interaction plot (data means)
for plbs multiplication
图 3 原球茎增殖效果图
Fig． 3 Main effects plot for the rate of plbs multiplication
3 结论
1) 添加6 － BA有利于原球茎的增殖，
添加 NAA有利于芽的诱导形成;
2) 新鲜椰乳汁对于原球茎的增殖与
芽的诱导具有强列的刺激作用;
3) 对于原球茎的增殖，最佳细胞分裂
素与生长素含量是细胞分裂素 6 － BA 为
2. 0 mg · L －1 和生长素 NAA 为 0． 5
mg·L －1;
4) 对于芽的诱导，最佳细胞分裂素与
生长素含量是细胞分裂素 6 － BA 为 2． 0
mg·L －1和生长素 NAA为 1． 0 mg·L －1;
5)6 － BA和 NAA具有交互效应抑制原球茎的增殖;
6) 分析结果表明，两个因素(6 － BA和 NAA) 效应显著;
7) 细胞分裂素6 － BA比生长素 NAA有利于芽的增殖，但是
生长素 NAA比细胞分裂素 6 － BA更有利于芽的诱导．
参考文献:
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