全 文 ：林业勘察设计 (福建 )2 0 3年第 2 期
花叶开唇兰组织培养快速繁殖的研究
陈自力
(福建省泉州市林业局 , 362 0( X〕)
摘要 对花叶开唇兰不 同部位材料最佳清毒时间 、 原球茎诱导的最佳材料部位及分化增殖培养基 、 最
佳生根培养基等进行了系统的研究及探讨 。 结果表明 : 叶片最宜消毒时间 8 一 g m in , 茎段最宜消毒时间 10
一 1 1m in ,形成浅米黄色原球茎的最佳部位为茎段 , 茎段 、 茎尖的原球茎诱导最佳培养基分别为 M S + 6 一
B A2
.
o m g
·
l
, 一 ’ + N AA o
.
o l m g
·
L
一 ’ + 蔗糖 2 5 9 · L 一 ’ 和 l 2/ M s + 6 一 BZA . o m g · L 一 ’ + N AOA . o l m g · L 一 ’ +
蔗糖 25 9 · L 一 ’ 。 原球茎增殖和分化的最佳培养基为 12/ M S + 6 一 B A I . s m g · L 一 ` + N AOA . 05 m g · L 一 ’ + 蔗
糖 30 9 · L 一 ’ 。 从经济角度看 , 生根培养基采用 12/ M S 添加 0 . 01 % 的活性炭为宜 。
关键词 花叶开唇兰 组织培养 快速繁殖 培养基 原球茎 生根率
花叶开唇兰 ( Aon ec t oc hi lo oxr bu gr hi i) 属兰科开唇兰属 ( A n二 t oc hi lus )t ’ 〕 ,原产我 国福建 、 广东 、 云南 、 四
川 、 台湾等省 ( 区 ) 。 该品种根状茎甸甸 , 叶卵状椭圆形 ,黑紫色有金黄色的脉纹 , 叶背紫红色 ,是十分珍贵
的小型观叶植物 。 与其同属的观叶品种统称宝石兰 ( J翻` el o cr h记 ) 。 此外 ,该品种也是名贵中草药 , 民间称
其为 “ 神药 ” 〔’ 〕 ,具有清热凉血 、祛风利湿 、强心 、 固肾 、利尿 、平肝 、 降血压等功效 , 主要用于治疗高血压 、糖
尿病及肿瘤等疑难病症 , 引起医药界的广泛重视 。 由于该植物自然生态条件独特 ,生长在密林阴湿处 ,生
长缓慢 ,加上鸟类嗜食 ,特别是近年来对其需求量猛增 , 产区人们过度采挖 ,使得野生资源 日渐枯竭 。 因
此 ,探索其组培快繁技术 ,建立工厂化繁育体系 ,对保护 、 开发和利用花叶开唇兰的种质资源 , 克服其自然
繁殖速度低下 ,满足市场日益增长的需求具有重要意义和应用推广价值 。
l 材料和方法
1
.
1 无菌材料的获得
材料来源于安溪白獭林场 ,采用刚展开的叶片 、茎尖 、茎段或葡甸节段 。 叶片或切取 I c m 长的茎段 ,
在自来水中将表面的灰土洗净后 , 采用 0 . 1% H酮 12 ,经过 6 一 7 m in 、 8 一 g m i n 、 10 一 1 1m i n 、 12 一 1 3m in 消毒
后 ,用无菌水冲洗 4 次 ,每次 2 一 3 m in 。 然后 ,将切 口切掉小许 ,保留生长点或节段长 3 一 s m m ,叶片 4 m m 、
4 m m 进行诱导培养〔’ , `〕 。
1
.
2 原球茎诱导
原球茎诱导采用 M s 、 12/ Ms 、 34/ M s 分别添加蔗糖 25 gm · L 一 ’ ,琼脂 7mg · L 一 ` , p SH . 6 , 6 一 B AZmg · L 一 ’ 、
N AA o
.
ol m g
·
L
一 ` ,培养温度 23 一 26 ℃ ,光照 30 一 s o h ,光照时间 or ~ 1h2 · d 一 ’氏 6】。
1
.
3 原球茎增殖与分化
选取诱导原球茎 ,在 12/ M S 培养基的基础上 ,采用 6 一 B A 、 N A A 4 种不同浓度配 比 ,共 16 种培养基进
行对比 。 蔗糖 3呢 · L 一 ` ,琼脂 , g · L 一 ` , p H S . 6 ,每个处理 5 个重复 。 培养条件 : 温度 24 士 1℃ ,光照 1 0 0 0
一 1 5 0 o lx ,光照时间 10 一 12 h · d 一 ’ ,培养时间 4 0 d 。
1
.
4 生根 与炼苗移栽管理
将分化的苗切成高度 1 . 5 一 2 . s m m ,分别放置于 3 种不同的生根培养基 l/ ZM S + A C I % 。 , 1 2/ M S + 土
豆汁 3 0 9 · I J ’ , l / Z M s + I B A I . o m g · L 一 ’ 中。 培养条件 : 光照 1 50 一 1 s o lx ,光照时间 12 h · d 一 ’ ,温度 2 2
土 l ℃ ,培养时问 4 0 d 。
2 结果与分析
2
.
1 无菌材料获得
不同外植体的最佳消毒时间存在差异 ,其中叶片最宜消毒时间为 8 一 g m in ,茎尖 、茎段最宜消毒时间
为 10 一 1 1 , n i ,飞 (表 l ) 。
林业勘察设计 (福建 ) 203 年第 2期
表 1 花叶开唇兰不同外植体不同消毒时间无菌材料获得对比
消毒时间 (而 ) n
取材部位
6 ~7 8一 9 1 0一 1 1 1 2一 13
4n,
,盈`JJ
, .1
22347
月10夕2月.. 11叶片
茎尖
茎段
l 6
l 2
13
2
.
2 原球茎的诱导
试验表明 ,不同部位的外植体 ,诱导原球茎的时间不同 (表 2 ) , 叶片需时最长 ,经过 3Od 的诱导 ,才能
在叶片上形成细小的浅米黄色原球茎 。 而茎尖和茎段诱导的时间则为 1d8 和 2 6 d ,所形成的原球茎粗壮 ,
浅黄色 。 不同外植体诱导产生原球茎的成功率差异显著 ,其中茎段达 67 . 53 % 以上 ,茎尖为 34 . 29 % ,叶片
为 3 . 75 % 。
表 2 花叶开唇兰不同外植体类型原球茎的诱导率
外植体 接种数 (个 ) 原球茎诱导率 ( % ) PL B产生时间 ( d)
301826叶片 3 . 75
34 29
67
.
53
0月IRà月产,
子
茎尖
茎段
试验表明 ,不同基本培养基浓度对诱导产生原球茎的效果不一样 (表 3 ) ,其中茎段原球茎的有利的诱
导基本培养基为处理 M S , 茎尖原球茎的有利的诱导基本培养基为处理 1/ 2 M S , 叶片原球茎的有利的诱导
基本培养基为处理 34/ M S 。 采用茎段可以获得最高原球茎诱导率 ,达到 % . 巧% , 叶片的诱导率最低 ,仅
为 12 . 0% , 而且只在处理 M S 培养基中 ,其原球茎的诱导率的提高仍有待于进一步研究 。
表 3 不同培养基诱导花叶开唇兰原球茎的效率
叶片 茎尖 茎段
)
一一jǎ1Xl一, .二n八j一``Un气ú(一O产月片尹O
基 本
培养基 接种数
(个 )
原球茎诱导率 接种数
(个 )
原球茎诱导率 原球茎诱导率
6
哎Jù62M S
l / ZM S
3 / 4 M S
接种数
(个 )
69
.
56
2 6
.
0 8
4
门Jj勺`自
2豁姗.0oō、J工了Ot32,`
2
.
3 原球茎的增殖与分化
原球茎增殖率与 6 一 B A 及 N A A 不同浓度的配比密切相关 (表 4 ) 。 随着 B A 的提高 ,原球茎增殖率有
所上升 ,但芽的分化率则表现为下降趋势 。 试验中发现 , 当 B A 浓度达到 2 . 5 时 ,还出现原球茎弱小等不
良现象 。 从表 5 、表 6 、表 7 分析得知 :不同浓度的 6 一 B A 、 N A A 对花叶开唇兰原球茎的增殖系数和芽分化
的影响有显著或极显著差异 , N A A 应选 0 . 05 、 B A 应选 1 . 0 或 2 . 5 。 但从原球茎的增殖率及分化生长情况
考虑 ,其合理的植物生长调节剂配比为 6 一 BAI . s m g · L 一 ` + NAOA . 05 m g · L 一 ’ 。
表 4 不同浓度的 6 一 B A 、 N AA 对花叶开唇兰原球茎的增殖系数的影响 ’
N AA / m g
·
L
一 l
B灯m g · L 一 l N AA
/ m g
·
L
一 ’
n n l n n气 0 _ 1 0 . 2
,连古卫0ù、ùO勺`0.盆02门、只0ù6矛b内、à,`4600ZQù门Jl月`ù4气úR
.…丹j4了0只ù,1月月JC22ù、ú64.…弓j4了ORé0咤曰rlù,1J.l2
注 : * 16 个处理 , 5 个重复 ,各处理间的差异 。
表 5不同浓度的激素对花叶开唇兰原球茎的增殖系数影响的方差分析
差异来源 平方和
5 6
.
0 9
自由度 均方 F值 F O仍 F o o -
N A A
B A
误差
0
.
4 1
0
.
2 9
2 1
.
97
0
.
4 1
0
.
0 3
60 7
.
63
.
4
.
15
.
8 9 6 6
.
9 9
8 6 6
.
9 9
总计 66.0 15 6
表 6不同浓度的 6一 B A、 N A A对花叶开唇兰芽分化的影响 ’
- -
~ ~ ~ .
. .
-一 ~ .一 ~ .一~ .一一~一~几 , 二 . , , 一 lBA/ m g 一 l N A A / m g · L 一 ’0 . 0 1 0 . 0 5 :o0768 925.851092474714.550 . 07 8 . 5712 . 109 . 4 04032817641.9or、à0ùté注 : , 16 个处理 , 5 个重复各处理间差异表 7 不同浓度的激素对花叶开唇兰芽分化影响的方差分析差异来源 平方和 自由度 均方44 3 . 9 853 . 636 . 9 4 F 值 FO 仍 OF . 。 ;gQù9N A AB A误差 16 33 1 . 9416() . 906 2 . 50 783 . 89 二7 . 7 2 . 86986总计 16 555 . 35 152 . 4 生根培养基
3 种不同培养基对花叶开唇兰原球茎的生根率分别为 10 % 、 % . 39 % 、 9 . 4 % , 诱导 时间分别为
30 d
、
35 d
、
2 6d( 表 8 ) 。 据观察 , 尽管诱导出根的时间先后不同 ,经 40 d 后全部生根 。 从经济角度出发 ,宜选
择 12/ M s + A c l % 。做为生根培养基 。
表 8 不同培养基对花叶开唇兰原球茎生根的影响
培养基 接种株数 植株生根率 ( % ) 根诱导时间( d)
3052660
门几é, ,ù凡ù
l / ZM S + AC%
。
1甩M s + 土豆汁 30 9 · L 一 ’
l / ZM S + I B A I
.
10
.
0
96
.
39
9
.
4
2
.
5 移栽
o m g
将已生根好的瓶苗 ,打开杯盖 ,经过 3 一 d5 炼苗 ,用摄子小心取出 ,洗去根部培养基 , 截除超过 3 c m 长
的部分根系 。 移栽于遮荫度 80 % 的阴棚 ,温室内气温 23 一 26 ℃ 。 温室内首先准备经高锰酸钾质量分数为
0
.
1% 溶液或 25 % 多菌灵 、 70 % 代森锰锌可湿性粉剂 80 一 1 仪旧倍溶液浇透消毒的基质 。 基质为泥炭土 :
珍珠岩 :椰糠 = :3 :1 1 ,每穴移植 1株 ,移栽后浇透水 ,覆盖薄膜保湿 。 每 3 d 喷 l 次多菌灵或代森锰锌药
液 , 每天打开薄膜通风 3 次 ,以防病害 。 经常喷雾 ,保持相对湿度 90 % 以上 。 如发现有病死植株 ,应及时
拔除。 35 d 后苗全部长出新根 , 种植成活率达 98 % 。 每星期喷药防病 1 次和用质量分数 2% 一 3% 复合肥
液或用 12/ MS 大量元素浇施 1 次 。 小苗经过 3 个月的生长 ,可上盆或下地种植 ,也可以做为商品苗出售 。
3 结论
3
.
1 花叶开唇兰不 同部位外植体的最佳消毒时间存在差异 ,其中叶片最宜消毒时间 8 一 g m in ,茎段最宜
消毒时 l’u l O 一 l l m in 。
3
.
2 诱导花叶开唇兰形成原球茎的最佳外植体为茎段 ,最佳诱导培养基为 M s + 6 一 B A2 . o m g · L 一 ’ +
N AOA
.
ol m g
·
L
一 ’ + 蔗糖 2 5 9 · L 一 ’ ,适宜的原球茎增殖和分化的培养基为 l/ Z M s + 6 一 BAI . s m g · L 一 ’ +
N A A ()
.
o s m g
·
L
一 ’ + 蔗糖 3 0 9 · L 一 ’ 。
林业勘察设计 (福建 ) 20 3年第 2期
3
.
3从经济角度看 ,生根培养基采用 l 2/ M S 添加 0 . 01 % 的活性炭为宜 。
参 考 文 献
中国科学院植物研究所主编 . 中国高等植物图鉴 (第五册 ) 〔M ] . 北京 : 中国科学出版社 , 2 0 2 . 66
钟岑生 . 金线莲的药用价值与开发〔J〕. 广西农业科学 , 1997 , ( 2 ) : 10 2
潭文澄 . 观赏植物组织培养技术〔M 〕. 北京 : 中国林业出版社 , 1991 . 84 一 14 1
沈惠娟 , 木本植物组织培养技术〔M 〕. 北京 : 中国农业科技出版社 , 19 92 . 3 一 46
陈正华 . 木本植物组织培养及其应用〔M 〕 . 北京 :高等教育出版社 , 19 86 . 307 一 308
陈正光 . 园艺植物离体培养学〔M 〕. 北京 : 中国农业出版社 , 19% . 80 一 86
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南平市马尾松种苗供应的现状与对策
张丽瑶
(福建省南平市林业局 , 35 X() 0 3 )
摘要 南平市是马尾松生长的适生区和优良种源区 , 随着造纸业和林产化工工业的不断发展 , 马尾松
的战略地位越来越突出。 但长期以来 , 南平市马尾松遗传育种水平不高 , 良种供需矛盾 突出 , 培育纸浆林
与高产脂林用种缺乏 , 严重影响 了工业原料林的定向培育 。 因此 , 解决马尾松 良种供应 ,提高马尾松种子
遗传质量 ,是南平 市林业种苗的重点工作之一 。
关键词 马尾松 选育 基地建设 对策
南平市地处福建北部 ,是我国南方主要林区 , 也是省内主要造纸基地 。 马尾松 ( iP n。
~
i in an a) 是
我国南方重要的工业用材树种 ,也是优质的制浆造纸原料 。 随着造纸业和林产化工工业的不断发展 ,马尾
松的战略地位越来越突出 ,今后相当长一段时期内仍是发展高效林业的主栽树种 。 因此 ,加快马尾松种子
遗传改良 ,提高良种水平 , 发展优质高产的马尾松工业原料林基地 ,对南平市林业发展具有十分重要的现
实意义 ,也是社会经济和林业事业发展的必然要求 。
1 马尾松良种生产现状
南平市是马尾松主产区 ,现有马尾松林面积 49 . 8 万 h时 , 占全市有林地面积的 25 . 5% 。 但长期以来 ,
南平市马尾松遗传育种水平不高 , 良种供需矛盾突出 ,培育纸浆林与高产脂林用种缺乏 ,严重影响了工业
原料林的定向培育 。
1
.
1 良种基地初具规模 ,但供需矛盾突出
南平市马尾松年度造林规模约 3 3 3 . 3h3 时 , 年需良种约 s o k g 。 全市现有马尾松初级种子 园
25
.
53 hm
“ ,基因库 6 . 6h7 扩 ,部省联营母树林基地 84 . h4 时 。 但由于种种原因 , 目前 良种产量极低 ,一般年
份总产量不足 50 k g 。 纸浆材良种空白 , 远远不能满足发展工业原料林的用种需要 。 用种主要靠外地调
人 ,供需矛盾十分突出 。
1
.
2 外地调种 ,潜在危险性大
盲目调种的种源和品质难以保证 , 可能导致生态灾害 , 如桐棉松造成大面积的松梢螟 、桃蛀螟为害 ;部
分两广种源易受低温冻害 ;周边省 、 区的松突园蚁 、松材线虫等为害严重 ,加大了调种的危险性 。
1
.
3 管理粗放 ,经营水平不高
长期以来 ,南平市林木良种选育和基地建设步伐缓慢 ,经营粗放 ,管理水平不高 ,投人不足 , 良种产量
低而不稳 。 此外 ,管理人员和技术人员的素质较低 , 队伍不稳 ,也制约了良种选育和基地建设事业的发展 。
2 发展马尾松良种的有利条件