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藏药蚤缀质量标准研究



全 文 :收稿日期:2014-08-03; 修订日期:2015-01-22
基金项目:药典委员会项目
《中国药典》2015 版蚤缀质量标准制定(No. M29)
作者简介:王德江(1989-),男(汉族),四川苍溪人,成都中医药大学硕士
研究生,主要从事中药化学与药物分析研究工作.
* 通讯作者简介:罗维早(1962-),男(汉族),重庆人,重庆市中药研究院
药化所研究员,博士学位,主要从事中药化学及新剂型方向的研究工作.
藏药蚤缀质量标准研究
王德江1,2,阳 勇2,舒 抒2,王 欣2,覃 瑶2,3,罗维早2*
(1.成都中医药大学,四川 成都 610072;
2.重庆市中药研究院,重庆 400065; 3.太极集团有限公司,重庆 401147)
摘要:目的 拟定藏药材蚤缀的质量标准。方法 参考《中国药典》2010 年版方法,对藏药蚤缀的质量控制方法进行研究,
包括性状鉴别、显微鉴别、薄层色谱鉴别、水分检查、总灰分检查和浸出物检查。结果 性状及显微鉴别特征典型;薄层色
谱操作简便,结果准确、可靠,重现性好;根据多批蚤缀测定结果,拟定水分及灰分的限度。结论 研究拟定的质量标准方
法准确、可靠、专属性强,可应用于蚤缀的质量控制。
关键词:蚤缀; 藏药; 质量标准
DOI标识:doi:10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2015. 06. 032
中图分类号:R291. 408 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)06-1364-02
藏药蚤缀来源于石竹科蚤缀属植物甘肃蚤缀 Arenaria kan-
suensis Maxim.及卵瓣蚤缀 Arenaria kansuensis Maxim. var. ovatipe-
tata Tsui.密生蚤缀 A. densisima Wall. ex Edgew. et Hook. f.、垫状
蚤缀 A. pulvtinata Edgew. et Hook. f. 等的全草,生于海拔 3800 ~
5300m 的高山草垫和砾石带,主要分布于我国青海、西藏、甘肃、
四川以及云南等地,藏药名为阿仲嘎保,藏语义为“采天地之灵
气日月之精华的人间仙草”。夏季采挖,除去泥沙,干燥。具退
热,止咳之功,临床用于治疗各种肺病、淋巴结核、黄疸、风湿、肾
结石以及筋骨疼痛等[1 ~ 6]。关于“蚤缀”的质量标准,《中国药
典》(2010 年版)未收载;《部颁标准·藏药分册》在“蚤缀”名下
收载其基原仅为甘肃蚤缀 Arenaria kansuensis Maxim 和卵瓣蚤缀
A. kansuensis Maxim. var. ovatipetata Tsui.的全草。在上述标准中,
除有【性状】【鉴别】【性味】【功能与主治】【用法与用量】和【贮
藏】外,缺乏作为现代药品质量标准标志的活性【含量】及【检查】
项等的规定,标准极不完善[7]。本研究针对蚤缀基源广,质量标
准不完善的情况,于西藏,青海,甘肃,四川等地采集多批样品进
行质量标准研究,完善蚤缀质量标准中的性状,鉴别及检查项,更
为科学合理地利用蚤缀药材资源奠定基础。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 KQ5200 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公
司);BS224S型电子天平(万分之一,德国赛多利斯公司);偏光
显微镜(Leica DM2500P),万象素彩色 CCD(Leica DFC450 500),
Leica LAS V4. 2 软件系统;CS101 - 2EBN 电热恒温鼓风干燥箱
(重庆市永生实验仪器厂);8 - 10 型箱式电阻炉(中国沈阳市节
能电炉厂);薄层色谱成像仪(CAMAG TLC Visualizer 瑞士步琪有
限公司);ZF - 20D 暗箱式紫外分析仪(巩义市予华仪器有限责
任公司)、HH -4 型数显恒温水浴锅(金坛市华欧实验仪器厂)。
1. 2 试药 甘油醋酸试剂、水合氯醛试剂(按《中国药典》2010 版
附录配制);其余试剂均为分析纯(重庆川东化工(集团)有限公
司化学试剂厂);纯化水;硅胶 G高效薄层板(青岛谱科分离材料
有限公司);11 批蚤缀药材信息详见表 1。
表 1 蚤缀药材样品信息
编号 名称 来源 批号 采集地 采集时间
1 蚤缀 团状福禄草 12 - zz - 01 那曲 2013-08
2 蚤缀 垫状雪灵芝 12 - zz - 02 当雄县 2013-08
3 蚤缀 甘肃雪灵芝 3 奇正藏药(甘肃) 2013-11
4 蚤缀 甘肃雪灵芝 4 奇正藏药(甘肃) 2013-11
5 蚤缀 密生福禄草 5 四川成都荷花池药材市场 2013-10
6 蚤缀 密生福禄草 6 四川成都荷花池药材市场 2013-10
7 蚤缀 密生福禄草 7 四川成都荷花池药材市场 2013-12
8 蚤缀 密生福禄草 8 四川成都荷花池药材市场 2013-12
9 蚤缀 藓状雪灵芝 20130814 西藏 2013-08
10 蚤缀 藓状雪灵芝 20130810 西藏巴青县城郊 2013-08
11 蚤缀 甘肃雪灵芝 20140501 奇正藏药(甘肃) 2014-05
2 方法与结果
2. 1 性状 本品呈垫状半圆球形,直径 8 ~ 15cm,高 4 ~ 7cm。主
根圆柱形,长 10 ~ 20cm,灰棕色,质脆,易折断,断面黄白色,木质
部浅黄色。根上端为垫状半球形的叶及茎丛,叶钻形至线形,基
部膜质抱茎。气微,味淡。
2. 2 鉴别
2. 2. 1 显微鉴别 本品粉末黄棕色或淡棕色。置显微镜下观察,
厚壁表皮细胞长条形、类长方形或不规则形,壁链珠状增厚,直径
14 ~ 35 μm,长 54 ~ 280 μm。草酸钙簇晶直径 12 ~ 51 μm。螺纹
导管,直径 4 ~ 19 μm。花粉粒黄色,近球形或长圆形,直径 19 ~
38 μm,具散生萌发孔数个,外壁有颗粒状雕纹。见图 1。
1.厚壁表皮细胞;2.草酸钙簇晶;3.螺纹导管;4.花粉粒
图 1 蚤缀显微鉴别图
2. 2. 2 薄层色谱鉴别 取本品粉末 1g,加乙酸乙酯 10ml,超声处
理 30min,滤过,滤液作为供试品溶液。另取蚤缀对照药材 1g,同
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时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 6 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2015 VOL. 26 NO. 6
法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010 版一部
附录Ⅵ B)试验,吸取上述两种溶液各 10μl,分别点于同一硅胶 G
高效薄层板上,以环己烷 -乙酸乙酯(8∶ 2)为展开剂,展开,取
出,晾干,置紫外灯(365nm)下检视,供试品色谱中,在与对照药
材色谱相应的位置上,显相同颜色的淡蓝色荧光斑点。见图 2。
(研究以 4 号药材作为对照药材)。
样品从左至右依次为:4、1、2、3、5、6、7、8、9、10、11、4(样品序号)
图 2 样品薄层色谱图
2. 3 检查
2. 3. 1 水分 按照《中华人民共和国药典》2010 年版一部附录 IX
H“水分测定法”第一法测定,11 批蚤缀药材水分值为 9. 10% ~
15. 14%,平均值为 12. 63%,取均值上浮 20%值为 15. 16%。综
合分析,确定蚤缀药材中水分含量不得超过 16. 0%。详见表 2。
表 2 蚤缀药材水分测定结果(珋x ± s)
编号 名称 来源 批号 水分平均值 /%
1 蚤缀 那曲 12 - zz - 01 11. 21 ± 0. 19
2 蚤缀 当雄县 12 - zz - 02 13. 64 ± 0. 12
3 蚤缀 奇正藏药厂(甘肃) 3 14. 61 ± 0. 13
4 蚤缀 奇正藏药厂(甘肃) 4 13. 59 ± 0. 13
5 蚤缀 成都荷花池药材市场 5 12. 12 ± 0. 47
6 蚤缀 成都荷花池药材市场 6 13. 40 ± 0. 13
7 蚤缀 成都荷花池药材市场 7 13. 62 ± 0. 08
8 蚤缀 成都荷花池药材市场 8 13. 40 ± 0. 08
9 蚤缀 西藏 20130814 15. 14 ± 0. 20
10 蚤缀 西藏巴青县城郊 20130810 9. 10 ± 0. 40
11 蚤缀 奇正藏药厂(甘肃) 20140501 9. 13 ± 0. 04
n =3
2. 3. 2 总灰分 按照《中国药典》2010 年版一部附录 IX K“灰分
测定法”第一法测定,11 批蚤缀药材灰分值为 4. 16% ~ 32. 15%,
舍去离群值后,平均值为 9. 78%,因蚤缀以全草入药,其贴近地
面生长,泥沙含量较高,故取均值上浮 50%值为14. 67%。综合
分析,确定蚤缀药材中总灰分含量不得超过 15. 0%。见表 3。
表 3 蚤缀总灰分测定结果(珋x ± s)
编号 名称 来源 批号 总灰分平均值 /%
1 蚤缀 那曲 12 - zz - 01 9. 49 ± 0. 35
2 蚤缀 当雄县 12 - zz - 02 14. 41 ± 0. 19
3 蚤缀 奇正藏药厂(甘肃) 3 13. 38 ± 0. 42
4 蚤缀 奇正藏药厂(甘肃) 4 13. 08 ± 0. 94
5 蚤缀 成都荷花池药材市场 5 11. 83 ± 0. 38
6 蚤缀 成都荷花池药材市场 6 5. 39 ± 0. 07
7 蚤缀 成都荷花池药材市场 7 5. 19 ± 0. 14
8 蚤缀 成都荷花池药材市场 8 4. 16 ± 0. 15
9 蚤缀 西藏 20130814 25. 45 ± 0. 44
10 蚤缀 西藏巴青县城郊 20130810 32. 15 ± 0. 63
11 蚤缀 奇正藏药厂(甘肃) 20140501 11. 11 ± 0. 27
n =3
2. 4 浸出物 本实验前期从全部蚤缀样品中筛选了一个共有成
分并确定为苜蓿素,故以苜蓿素的含量及浸出率为指标,进行了
浸出溶剂及浸出方法的考察。按照《中国药典》2010 年版一部附
录 XA“浸出物测定法”测定。取蚤缀 4 号药材约 2. 0 g,精密称定
五份。置五个 250ml 的锥形瓶中,分别精密量取 100ml 的水、
25%、50%、75%、95%的乙醇,照《中国药典》2010 版一部(附录
ⅩA)浸出物测定法项下的热浸法进行测定,得浸出率及苜蓿素
含量。见表 4。
表 4 不同溶剂对蚤缀浸出结果 %
浸出溶剂 苜蓿素含量 浸出率
水 0. 002 5. 55
25%乙醇 0. 010 2. 82
50%乙醇 0. 043 3. 81
75%以纯 0. 050 2. 92
95%乙醇 0. 045 0. 60
由表 4 看出,以水作溶剂浸出率最高为 5. 55%,而苜蓿素含
量最低为 0. 002%。以 75%乙醇作溶剂浸出率为 2. 92%,苜蓿素
含量为 0. 05%,总体浸出率均较低,不适宜制定标准。故再以
75%乙醇作溶剂,对比冷浸及热浸两种浸提方法。详见表 5。
表 5 不同浸出方法对蚤缀浸出结果 %
浸出溶剂 苜蓿素含量 浸出率
热浸 0. 050 2. 92
冷浸 0. 046 0. 44
由表 5 看出,热浸所得苜蓿素含量及浸出率均比冷浸高,总
体浸出率仍然较低。考虑到可能不同药材对浸出率影响较大,故
再随机选择 1、3 号药材分别以水、75% 乙醇作溶剂热浸。见
表 6。
表 6 不同溶剂对蚤缀不同药材浸出结果
药材编号
浸出率 /%
水 75%乙醇
1 3. 43 2. 39
3 3. 29 1. 65
由表 6 看出,所得浸出率最高为 3. 34%,仍然较低。
因较低浸出率在操作中引起误差较大,以及本品水分灰分的
影响较大,难以准确控制浸出率,故暂不拟定浸出物检查。
3 讨论
蚤缀收载于《四部医典》《秘诀遗补》《晶珠本草》《藏药志》
《中国民族药志》《全国中草药汇编》《中药大辞典》《中华人民共
和国卫生部药品标准·藏药第一册》(1995 年版)中。基源植物
较广,《部颁标准·藏药分册》在“蚤缀”名下收载了甘肃蚤缀
Arenaria kansuensis Maxim.和卵瓣蚤缀 Arenaria kansuensis Maxim.
var. ovatipetata Tsui.的全草。《新修晶珠本草》除记载了甘肃蚤缀
A. kansuensis Maxim和卵瓣蚤缀 A. kansuensis Maxim. var. ovatipeta-
ta Tsui.外,还记载了青藏蚤缀 A. roborowskii Maxim.、澜沧江蚤缀
A. langcangensis L. H. Zhou.、密生蚤缀 A. densisima Wall. ex
Edgew. et Hook. f.、垫状蚤缀 A. pulvtinata Edgew. et Hook. f.、西藏
蚤缀 A. oreophia Hook. f. ex Edgew. ef Hook. f.、尖瓣蚤缀 A. kan-
suensis Maxim. var. acropetala Y. W. Tsui et L. H. Zhou.、丽江蚤缀
A. lichiangensis W. W. Smith.、海子山蚤缀 A. haityeshansis Y. W.
Tsui、藓状蚤缀 A. bryophylla Femald.、团状蚤缀 A. polytrichoides
Edegew. Ex Edgew. et Hook. f.的全草。在本次质量标准起草研究
过程中,研究者通过在西藏,青海,甘肃,四川等地采集和购买等
途径共计搜集到蚤缀样本 11 个,其中甘肃蚤缀 3 个,密生蚤缀 4
个,藓状蚤缀 2 个,团状蚤缀 1 个,垫状蚤缀 1 个,具体信息见表
1。而在采集和购买过程中均未搜集到卵瓣蚤缀,说明该基源的
蚤缀产量少,来源有限。本质量标准的拟定是为了保证具有广泛
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2015 VOL. 26 NO. 6 时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 6 期
来源的药用蚤缀的质量,故其来源列入来源较广的甘肃蚤缀,密
生蚤缀,藓状蚤缀等 5 种基源。
蚤缀暂无市售对照药材,实验中根据各检测项综合考察选取
了 4 号药材作为对照药材,并对其进行了稳定性的考察。
蚤缀主要含有多糖、木质素、甾类、生物碱类和黄酮类化合
物。蚤缀的化学成分研究报道比较少,其中主要报道苜蓿素、苜
蓿素 - 7 - O - β - D葡萄糖苷、苜蓿素 - 4'- O - β -愈创木基甘
油基酯和异牡荆素、异金雀花素、白杨黄酮、木犀草素、芹菜素等
黄酮类;酚酸类阿魏酸、咖啡酸、对羟基肉桂酸也有报道[1 - 6]。在
研究中,我们也分离得到了其共有成分苜蓿素,但因目前尚无苜
蓿素的对照品,故暂未将含量测定项订入标准。
参考文献:
[1] 彭宝珠,张宇红.蚤缀(Arenaria)属植物近 10 年文献综述[J].青海
医学院学报,1992,13(1):46.
[2] 成 丽,伍贤学,董 浩,等. 蚤缀属植物中的三萜皂苷化学成分
[J].中草药,2004,35(9):1076.
[3] 雷 宁,杜树山,李 林,等,藏药甘肃蚤缀的化学成分研究 I[J].
中国中药杂志,2007,32(10):918.
[4] 李 明,伍贤学,成 丽.藏药雪灵芝研究进展[J].中草药,2007,
38(11):附 1 -附 3.
[5] 雷 宁,张文生,杜树山,等.蚤缀属植物的种群分布、化学及药理
研究进展[J].中国中医药信息杂志,2004,11(10):929.
[6] 雷 宁,杜树山,欧阳捷,等. PR - HPLC 法测定甘肃蚤缀中苜蓿
素、苜蓿素 - 4'- O - β愈创木 基甘油基酯、异牡荆素、异金雀花素
和苜蓿素 - 7 - O - β - D -葡萄糖苷[J]. 中草药,2009,40(10):
1653.
[7] WS3 - BC - 0074 - 95,中华人民共和国卫生部药品标准·藏药,第
一册[S]. C1 - 74.
收稿日期:2014-09-05; 修订日期:2015-01-27
基金项目:广东省科技厅科技计划(粤科规划字[2013]137 - 154);
广东省中医院科研项目(粤财工[2011]381 - 2);
广东省中医院科研项目(粤财工[2013]173 - 3);
广东省中医院中医药科技专项(YK20BB1N13)
作者简介:陈其城(1986-),男(汉族),广东汕头人,广东省中医医院研究
实习员,硕士学位,主要从事围手术期中医药应用研究工作.
* 通讯作者简介:陈志强(1957-),男(汉族),广东郁南人,广东省中医医
院教授,主任医师,学士学位,主要从事围手术期中医药应用研究工作.
大腹皮对犬胃肠运动的影响
陈其城1,曹立幸1,庞凤舜1,叶 飞1,刘万鹏1,蒋 志1,陈志强1* ,周 吕2
(1.广东省中医医院,广东 广州 510120; 2.中国医学科学院基础医学研究所,北京 100005)
摘要:目的 探讨大腹皮煎液对犬胃肠运动的影响及其作用机制。方法 12 只比格犬进行慢性实验,在胃窦、十二指肠、
空肠、回肠和结肠浆膜分别植入应力传感器记录清醒犬胃肠运动,安装胃瘘以供从胃灌入药物。结果 ①当给予 30g·
15kg -1·200ml -1大腹皮煎液时,与给药前对照相比较,胃窦、十二指肠、空肠、回肠和结肠收缩波总数分别增加(106. 34 ±
37. 41)%,(88. 62 ± 26. 18)%,(81. 95 ± 26. 02)%,(95. 93 ± 31. 66)%和(53. 32 ± 20. 71)% (均 P < 0. 01) ,振幅指数分
别增加(133. 76 ± 38. 46)%,(158. 42 ± 37. 95)%,(143. 84 ± 29. 72)%,(96. 37 ± 31. 28)% 和(60. 79 ± 22. 90)%(均 P
< 0. 01)。②大腹皮煎液呈剂量 -效应关系。③阿托品可完全阻断大腹皮的促动力作用,六烃季铵则部分阻断大腹皮的
促动力作用。结论 大腹皮对胃窦、十二指肠、空肠、回肠和结肠的运动均有明显促进作用,其促动力作用可能通过迷走
神经和肠神经系统的胆碱能神经途径介导。
关键词:大腹皮; 胃肠动力; 阿托品; 六烃季铵
DOI标识:doi:10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2015. 06. 033
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)06-1366-03
胃肠动力是消化系统最重要的生理功能之一。许多常见的
消化道疾病如胃食管反流、功能性消化不良、慢性便秘、胃肠术后
肠麻痹、肠粘连及肠梗阻等都与胃肠动力障碍有关[1]。《本草从
新》载大腹皮泻下气,通行水,辛泻肺,温和脾,下气宽胸,行水同
大小肠。临床治疗证实,大腹皮是常用理气中药,用于治疗便秘
等胃肠动力障碍性疾病[2]。有报导[3]大腹皮对犬鼠肠传输有促
进作用,但对胃肠各部分动力是否有作用仍不清楚。本研究通过
大腹皮煎液对比格犬全胃肠道运动的作用观察并初步探讨其作
用机制,为临床对大腹皮促胃肠动力的应用提供科学基础。
1 材料与方法
1. 1 动物 健康毕格犬(Beagle)6 只,雄性,12 月龄,体重(15. 0
± 1. 0)kg。由广州医药研究总院有限公司实验动物研究开发中
心提供。
1. 2 试剂 丙泊酚注射液为四川国瑞药业有限责任公司产品,大
腹皮为广东康美药业股份有限公司产品,阿托品、六烃季铵为美
国 sigma产品。
1. 3 造模过程 术前 2 周训练犬,使之适应实验室环境。术前静
脉注射丙泊酚 5mg·kg -1基础麻醉。术中:静脉灌流丙泊酚 10 ~
20mg·kg -1·h -1,维持麻醉。在无菌条件下完成下列手术:①
腹部安装胃瘘管手术:沿腹部正中线切开腹壁,长约 8 ~ 10cm。
在贲门下 4cm 胃体部前壁,距大弯边缘约 2cm 处安装一个不锈
钢胃瘘管(内孔径 2cm ×高 4cm ×底盘直径 3. 5cm),在选好的位
置上作二道荷包缝合,用刀在荷包口缝合内圈沿长轴作一全层切
口直达胃内,瘘管旋转入胃腔内,分别扎紧二道荷包缝线。在腹
壁正中切口左缘旁开约 2cm 处皮肤作一切口,将瘘管安置在腹
壁上,以备实验时中药汤剂灌胃使用。②胃肠应力传感器植入
术:全部犬用 5 个高灵敏度应力传感器分别缝在胃窦(幽门上
2cm)、十二指肠(幽门下 5cm)、空肠(Treitz 韧带下 1cm)、回肠
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时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 6 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2015 VOL. 26 NO. 6