全 文 ：收稿日期:2003-10-10
作者简介:孟繁浩(1965-),男(汉族), 山东诸城人 ,在读博士 ,教授级高级工程师;李发美(1947-), 女(汉族),江西
兴国人 ,教授 , 博士生导师 ,主要从事药物分析和化学研究 , Tel:(024)23843711-3361 , E-mail:fameili@163.com。
文章编号:1006-2858(2004)03-0201-04
HPLC法同时测定蛇床子中蛇床子素
和欧前胡素含量
孟繁浩 , 李遇伯 , 杨正毅 , 张丽娜 , 李发美
(沈阳药科大学药学院 ,辽宁 沈阳　110016)
摘要:目的 用高效液相色谱法同时测定中药蛇床子中蛇床子素和欧前胡素的含量。方法 采用
Kromasil C8(250 mm×4.6 mm , 5μm)为色谱柱 , 以甲醇-水(体积比 65∶35)为流动相的 HPLC 法 ,
检测波长为310 nm , 流速为0.8 mL·min-1 , 柱温为室温。结果 以醋酸氟轻松为内标 ,蛇床子素和
欧前胡素分别在 13 ～ 208 mg·L-1和 8 ～ 128 mg·L-1内 , 线性关系良好(r≥0.999 8);平均回收率
分别为 98.2%和 97.5%;RSD分别为 1.7%和 2.0%(n=9)。结论 本法简便快速 , 回收率及重现
性良好 ,适用于中药蛇床子中蛇床子素和欧前胡素的定量分析。
关键词:蛇床子;蛇床子素;欧前胡素;高效液相色谱法
中图分类号:R 917　　　文献标识码:A
　　蛇床子为伞形科植物蛇床(Cnidium mon-
nieri L.Cuss.)的干燥成熟果实 ,有散寒 、祛风 、燥
湿 、杀虫 、止痒之功能 ,用于湿痹腰痛 ,阴痒 ,带下 ,
阴道滴虫 , 湿疹 ,皮肤瘙痒 , 阳萎 ,宫冷不孕[ 1] 。
蛇床子果实中主要含蛇床子素(osthole)、欧前胡
素(imperato rin)等香豆素类成分[ 2 , 3] ,其结构式见
图1 。药理研究表明蛇床子具有抗心律失常作
用 ,扩张血管 、降低血压作用 ,免疫抑制作用和抗
骨质疏松作用等[ 4 ～ 7] 。蛇床子素软膏治疗婴儿
湿疹 ,起效快 、不良反应少[ 8] ,蛇床子素通过减少
NO 、IL-1 和 I L-6 的分泌而调节成骨细胞的功
能[ 9] 。此外蛇床子素还具有镇痛 、局部麻醉和免
疫等作用[ 10～ 12] ;欧前胡素具有消炎止痛和抗菌
等作用[ 13 , 14] 。《中华人国共和国药典》2000年版
一部采用薄层色谱荧光扫描法测定蛇床子药材中
蛇床子素的含量[ 1] ,有多篇文献采用 HPLC法测
定了蛇床子中蛇床子素的含量[ 15 ～ 17] ,孙文基等
采用荧光薄层扫描法和毛细管气相色谱法分别测
定了蛇床子中蛇床子素和欧前胡素的含量[ 18 ,19] ,
但采用 HPLC 法同时测定蛇床子中蛇床子素和
欧前胡素含量的未见文献报道。作者采用 HPLC
法 ,以醋酸氟轻松为内标 ,同时测定了蛇床子中 2
种活性成分蛇床子素和欧前胡素的含量 。实验结
果表明 ,本法简便易行 ,重现性好 ,色谱图见图 2。
　
Fig.1　Structures of osthole(A)and imperatorin(B)
1　仪器与试药
　　P200Ⅱ高效液相色谱仪 , UV200 Ⅱ紫外检测
器 ,Echrom98色谱工作站(大连依利特科学仪器
有限公司),蛇床子素 、欧前胡素和醋酸氟轻松对
照品(中国药品生物制品检定所),甲醇(色谱纯 ,
山东禹王实业总公司化工厂), 其他试剂(分析
纯),水(重蒸水),蛇床子药材(沈阳药科大学药用
第 21 卷 第 3 期
2 0 0 4 年 5 月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol.21 　No.3
May 2004 p.201
DOI :10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2004.03.012
植物教研室孙启时教授鉴定)。
　
Fig.2　HPLC chromatograms of standard substances(A), sample(B)and the sample with internal standards(IS)(C)
I S—F luocinonide;1— Imperatorin;2—Osthole
2　方法与结果
色谱条件:色谱柱为 Kromasil C8(250 mm×
4.6 mm ,5 μm);流动相为甲醇-水(体积比 65∶
35);流速0.8 mL·min-1;检测波长310 nm;柱温
为室温;进样量20 μL。理论板数按蛇床子素和欧
前胡素计算均大于3 000。
2.1　对照品溶液的制备
分别精密称取蛇床子素对照品26 mg ,欧前
胡素对照品16 mg ,置50 mL量瓶中 ,用甲醇溶解
并定容至刻度 ,摇匀得对照品溶液 ,备用 。
精密称取醋酸氟轻松对照品20 mg ,置25 mL
量瓶中 ,用甲醇溶解并定容至刻度 ,摇匀得内标溶
液 ,备用。
2.2　供试品溶液的制备
取蛇床子样品粉末约1 g ,精密称定 ,置于
50 mL量瓶中 ,加入 45%(φ)乙醇溶液20 mL ,超
声提取30 min。放冷至室温 ,离心 ,取上清液 ,同
法提取 2次 ,合并上清液 ,用 45%(φ)乙醇溶液定
容至50 mL ,摇匀 。精密量取提取液2.0 mL置于
10 mL量瓶中 ,加内标溶液1.0 mL ,用甲醇定容至
刻度 ,摇匀 , 0.45μm微孔滤膜过滤 ,取续滤液作
为供试品溶液。
2.3　线性关系考察
分别精密量取“2.1”条下对照品溶液 0.25 、
0.5 、1.0 、1.5 、2.0 、4.0 mL ,内标溶液1.0 mL ,置
10 mL量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,得系列质量
浓度的溶液 ,取续滤液按上述色谱条件进行测定 ,
以蛇床子素 、欧前胡素的峰面积与醋酸氟轻松的
峰面积比为纵坐标(Y),质量浓度(ρ)为横坐标进
行线性回归 , 得回归方程。蛇床子素:Y =
0.026 3ρ-0.016 8 , r=0.999 8 。欧 前胡 素:
Y =0.033 6ρ+0.008 9 , r=0.999 9。结果表明
蛇床子素和欧前胡素分别在 13 ～ 208 mg·L-1和
8 ～ 128 mg·L -1内呈良好的线性关系 。
2.4　稳定性实验
取“2.2”条下供试品溶液(蛇床子素和欧前胡
素的质量浓度分别为40 mg·L-1和24 mg·L-1),
于室温自然放置 ,按上述色谱条件 ,分别于 0 、2 、
6 、12 、24 h进样20 μL , 进行测定 , 蛇床子素的
RE=1.1%,欧前胡素的 RE=0.8%。结果表明
该溶液在24 h内稳定。
取“2.1”条下对照品溶液(蛇床子素和欧前胡
素的质量浓度分别为52 mg·L-1和32 mg·L-1),
按“ 2.2”条下方法超声处理 ,分别于 5 、15 、30和
45 min时进行测定 ,蛇床子素和欧前胡素的 RE
分别为 0.7%和 0.6%。结果表明蛇床子素和欧
前胡素在超声处理过程中稳定 。
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2.5　精密度实验
精密量取“2.1”条下的对照品溶液和内标溶液
适量 ,置于10 mL量瓶中 ,用甲醇分别制成蛇床子素
和欧前胡素质量浓度为104 mg·L-1和64 mg·L-1(高
浓度)、 52 mg·L-1 和 32 mg·L-1 (中 浓 度)及
26 mg·L-1和16 mg·L-1(低浓度)的溶液 ,按上述色
谱条件进行测定 ,连续进样 5次 ,按蛇床子素与内标
物的峰面积比计算 ,高 、中 、低浓度的 RSD分别为
1.4%、1.3%和 1.6%;按欧前胡素与内标物的峰面
积比计算 ,高 、中 、低浓度的RSD分别为1.1%、1.2%
和1.0%;结果表明精密度良好。
2.6　重现性实验
精密称取蛇床子粉末 5份 ,各1 g ,按“2.2”条
方法制备供试溶液 ,按上述色谱条件进行测定 ,以
蛇床子素的含量计算 RSD为 1.9%;以欧前胡素
的含量计算 RSD为 2.2%,结果表明方法的重现
性良好。
2.7　回收率实验
精密吸取对照品溶液适量 ,加到已知含量的
蛇床子药材中 ,按“2.2”条方法制备供试溶液 ,照
上述色谱条件进行测定 ,蛇床子素和欧前胡素的
加样回收率结果见表 1 ,蛇床子素的平均回收率
为98.2%, RSD=1.7%,欧前胡素的平均回收率
为 97.5%, RSD=2.0%。
Table 1　Results of recovery experiments(n=9)
Osthole
mAdded/ mg mFound/ mg Recovery/ %
Imperatorin
m Added/mg m Found/mg Recovery/ %
1 1.56 1.49 95.2 0.96 0.94 98.2
2 1.56 1.55 99.4 0.96 0.95 99.1
3 1.56 1.52 97.2 0.96 0.92 95.4
4 2.08 2.01 96.8 1.28 1.29 100.6
5 2.08 2.07 99.5 1.28 1.23 96.4
6 2.08 2.09 100.7 1.28 1.26 98.6
7 2.60 2.54 97.6 1.60 1.54 96.5
8 2.60 2.55 98.0 1.60 1.57 98.3
9 2.60 2.59 99.6 1.60 1.51 94.2
2.8　样品测定
按照上述方法对 10个不同产地蛇床子药材
中的蛇床子素和欧前胡素进行含量测定 ,结果见
表 2。
Table 2　The contents of osthole and imperatorin in Fruc-
tus Cnidii from different sources
Source wOsthole/ % w Imperatorin/ %
Nei Monggol 1.31 0.81
Zhejiang 1.22 0.83
Shaanxi 1.60 1.03
Gansu 1.38 0.66
Hebei 1.27 0.65
Jilin 0.98 0.53
Shandong 2.02 1.18
Liaoning 1.00 0.60
Henan 1.15 0.69
Shanx i 1.04 0.47
3　讨论
　　紫外扫描结果显示 ,蛇床子素在波长208 nm
和322 nm处有最大吸收峰 ,欧前胡素在219 nm 、
249 nm和302 nm处有最大吸收峰 ,为了同时对这
2种成分进行定量且不降低检测灵敏度 ,作者在
波长310 nm处进行检测 。
采用平行实验对回流法 、煎煮法和超声波法进
行了预实验比较 ,结果表明 ,以蛇床子素和欧前胡
素的含量计算 ,煎煮法的提取率低 ,回流法和超声
波法的提取率基本一致 ,鉴于超声波法简单省时 ,
故本实验采用超声波法。用正交试验考察了溶剂
浓度 、溶剂用量和提取时间对蛇床子素和欧前胡素
含量的影响 ,结果表明 ,最佳提取工艺为 45%(φ)
乙醇溶液20 mL ,超声提取30 min ,共 2次。
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Determination of the osthole and imperatorin in
Fructus Cnidii by RP-HPLC
M ENG Fan-hao , LI Yu-bo , YANG Zheng-yi , ZHANG Li-na , LI Fa-mei
(School of Pharmacy , Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang　110016 , China)
Abstract:Objective To develop a method fo r determination of osthole and imperatorin in Fructus Cnidii by
RP-HPLC.Methods Chromatography w as performed using a Kromasil C8(250 mm ×4.6 mm , 5μm)col-
umn w ith mobile phase of methanol-water(65∶35).The monitoring w avelength w as 310 nm.The flow rate
w as 0.8 mL·min-1 and the column temperature w as room temperature.fluocinonide w as served as an inter-
nal standard.Results A good linearity betw een peak area ratio of the common peak to the internal standard
and the concentration was found in the range of 13 ～ 208 mg·L-1 fo r osthole and 8 ～ 128 mg·L-1 fo r ost-
hole (r>0.999 8)and imperatorin(r>0.999 9), respectively .The average recoveries were 98.2%(n=
9 ,RSD=1.7%)and 97.5%(n =9 , RSD=2.0%)for osthole and imperatorin , respectively .Conclusion
The method is simple , rapid and w ith satisfactory recoveries and good reproducibilities.It can be used to
control the quality of Fructus Cnidii.
Key words:Fructus Cnidii;osthole;imperatorin;HPLC
204 　　　沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 21卷