全 文 ：TROPICAL FORESTRY VOL．42 NO．2 Jun．2014
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!林业研究
琼岛杨（Populus qiongdaoensis T. Hong et P.
Luo）别名假三角枫，杨柳科（Salicaceae）杨属（Popu－
lusL.）落叶乔木，高25～40m，胸径达0.7～1.74m，属
海南特有树种，是热带雨林杨属中的一个新种[1]。其
木材适作纸浆、木丝、人造丝、纤维板、胶合板等原
料，尤适作食品（蛋类、肉质）及衣服包装箱，也可供
建筑、制饮料筒、器具等。叶含挥发油0.25%，可作饲
料。琼岛杨喜生于山地针阔叶混交林或山地雨林中，
能形成小片单优林。目前仅见于海南岛白沙县智在
岭及昌江县霸王岭，为数甚少，属濒危树种[1～4]。琼
岛杨喜光、速生、根萌芽力强，常用种子繁殖，但种子
萌芽率、成活率极低。该文旨在开展琼岛杨愈伤组
织诱导和分化的初步研究，为这一濒危树种寻找新
的繁殖方式奠定基础。
1材料与方法
1.1实验材料
海南省林业科学研究所实验基地一年生种子
苗，选择生长健壮，无病斑病叶的枝条和叶片（图1）。
采集时间为夏季5～7月份晴天的上午9点～10点。
图1 琼岛杨
琼岛杨愈伤组织培养的初步研究
周双清，梁居红
（海南省林业科学研究所，海南海口571100）
摘要：该文以琼岛杨为研究对象，研究外植体、消毒方法，以及植物激素对琼岛杨愈伤组织的诱导、增殖和分化的
影响。研究结果表明：琼岛杨以叶片作为外植体，0.1%的升汞消毒 6min.，无菌水冲洗 5次比较理想。激素配比 6-BA
0.5mg/L+2-4D 1.0mg/L能更好地诱导和促进愈伤组织的生长，增值率达到了 80%，诱导的愈伤组织呈现翠绿色，颗粒
饱满；激素配比 6-BA 2.0mg/L+ IBA 0.5mg/L有利于愈伤组织分化出带绒毛的芽点。
关键词：愈伤组织；外植体；生长调节剂；诱导；增殖
中图分类号：Q813.1+2 文献标识码：B doi：10.3969/j.issn.1672-0938.2014.02.004
ApreliminarystudyofPopulusqiongdaoensisT.HongetP.Luocallusculture
ZhouShuangqing，LiangJuhong
（HainanInstituteofForestry,Haikou，Hainan571100China）
Abstract：Thearticlestudiestheeffect of theexplant, disinfection method, and phytohormoneon thecallusin-
duction,reproductionanddifferentiationofPopulusqiongdaoensisT.HongetP.Luo.Theresultsshowedthatit
wasabetterwayusingtheleafasexplantsterilizedby0.1% (w/v)aqueousmercuricchloridesolutionfor6min
withsterilewaterwashingfor5times.Thecombinationof6-BA0.5mg/Land2-4d1.0mg/Lwouldbebetter
to promote the growth of callus, and the induction rate of reproduction reached 80%. The induction of callus
presentedemeraldandstarlatine.Theratioofphytohormonesupplemented6-BA2.0mg/LwithIBA0.5mg/L
wasconducivetothecallusdifferentiateintobudpointswithfluff.
Keyword:Callus,Explant,Phytohormone,Induction,Reproduction
基金项目：海南省科学事业费项目（11-20409-0017）：高山琼岛杨引种迁地培育技术研究
作者简介：周双清（1978-），女，硕士研究生，研究方向：植物资源。E-mail：annizhou23@126.com

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2014 年 6 月 第 42 卷 第 2 期
22222222222222222222222222222222222222222222222
1.2实验方法
1.2.1外植体消毒方法的筛选
①挑选健康的茎尖和带芽茎段，自来水冲洗
10min.，将材料剪取茎尖及带一个茎节的茎段（1～
1.5cm左右），在无菌条件下，75%的酒精消毒30s，无
菌水冲洗2次，再用0.1%的升汞（添加1～2滴吐温
80）浸泡5min.、7min.、9min.，取出后用无菌水冲洗
5次，将已消毒的材料在无菌的环境下，切成0.2～
0.5cm的茎尖或带芽茎节接种到MS基本培养基上，
添加激素6-BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L，蔗糖30g/L，
卡拉胶8g/L，PVP0.5g/L上，pH5.8～6.0。每个时间
处理接种20瓶，每瓶接种1个茎节，培养20d后检
查其污染情况，筛选出最佳消毒时间。
②选取健壮新生枝条上的新生叶，将叶片表面
污物用自来水冲洗干净，用75%的酒精浸泡10s，无
菌水冲洗2次；再用0.1%的升汞（添加3～4滴吐温
80）消毒4min.、6min.、8min，再用无菌水冲洗5次，
将叶柄切成长约1cm条状，叶片切成0.5cm×0.5cm
的小块，接种到预先设计好的培养基：MS+蔗糖3%
+6-BA0.5mg/L+2-4D1.0mg/L）+30g/L 蔗糖 +8g/L 琼
脂。每个时间处理接种20每瓶接种三小块叶片，培
养20d后检查其污染情况，筛选出最佳消毒时间。
培养条件：温度 25±2℃，光照时间 / 暗时间
=14h/10，光照强度 2000Lx，培养 30d 后检查，观察
分析发茎段和叶片的发芽率和污染率。
1.2.2不同植物激素配比对愈伤组织诱导的影响
将无菌的琼岛杨叶片愈伤组织转接到12种不
同浓度的激素配比和添加蒸馏水的空白对照MS培
养基中，每个处理接种10个，培养条件如上，培养
30d后，观察分析激素配比对促进愈伤组织的生长
影响。
1.2.3芽诱导及分化
将琼岛杨质地松脆，色泽浅绿或淡黄的愈伤组
织接种到培养基（MS+ 蔗糖 3%+6-BA (1.0～3.0）
mg/L+IAA(0.1～0.5)mg/L）上，进行芽分化培养，30d
后统计其分化率及生长情况。
2结果与分析
2.1外植体消毒方法的筛选
分别将叶片和茎段作为外植体消毒后接种到培养基
中，培养7d、15d、30d后检查它们的污染率，分析最
佳的消毒方法和时间。通过实验我们发现，嫩叶较为
娇嫩，而太老的叶片不利于诱导，最好选取枝条中间
的叶片，在0.1%的升汞中滴加3～4滴吐温，消毒时
间最好控制在6min.，无菌水冲洗5次比较理想。同
时琼岛杨叶片作为外植体非常容易褐化，最好是消
毒处理完后立即接种。
茎段作为外植体，最好消毒时间控制在7min.
左右，消毒时间达到9min.的时候，由于消毒时间过
长，大部分接种的外植体会死亡。选择的带芽茎段不
能太老，最好是朝阳的枝上剪取，并且选择在晴朗的
上午进行取材为最佳。
2.2愈伤组织的诱导及增殖
由于茎段诱导出来的愈伤组织，经过2个月培
养后，逐渐干枯死亡，而叶诱导出来的愈伤组织饱
满、生长良好（图2和图3）。因此以叶诱导出来的愈
伤组织进行后期的实验。对比分析发现，6号激素配
比6-BA 0.5mg/L+2-4D 1.0mg/L能更好地促进愈伤
组织的生长，增殖率达到了80%，并且诱导的愈伤组
织呈现翠绿色，颗粒饱满(表1)。
表1 不同激素浓度配比对愈伤组织诱导增值率的影响
图2 茎节诱导的愈伤 图3 叶片诱导的愈伤图
林业研究

 6-B A m g/L 2-4D m g/L %  
1 0.1 0.5 1 7   
2 0.1 1 5 3   
3 0.1 2 6 7 
4 0.1 4 5 4 
5 0.5 0.5 4 8 
6 0.5 1 8 0 
7 0.5 2 7 7 
8 0.5 4 5 9 
9 1 0.5 6 5 !
10 1 1 2 7  
11 1 2 3 6  
12 1 4 2 3 
13 0 0 1 4  

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图4 转接2个月之后叶片的愈伤组织
2.3芽的诱导及分化
将叶片诱导出的愈伤组织在不同激素配比的培
养基上进行芽诱导分化实验。结果表明，培养30d
后观察发现，所有培养基上的愈伤组织仍未见芽点
出现，60d后4～8号培养基中才长出少量的带绒毛
或无绒毛的芽，但芽状物再过30d后又相继萎蔫死
亡。
图5 分化出带绒毛状芽 图6 分化出芽状物
表2 激素配比对芽诱导、分化的影响
3讨论
研究发现，琼岛杨的叶片和茎段外表皮的绒毛
很多，导致消毒困难，污染严重，通过多次试验结果，
表明取材时间以及外植体的种类及部位对外植体材
料消毒很关键，采集时间最好在天气晴朗过后3～
4d，夏季的5～7月份的晴天的上午9：00～10：00进
行取材。同时最好选取少污染的健康植株，绒毛少
且材料应老嫩适中。
以MS作为基本培养基上添加不同浓度的激素
配比，对琼岛杨的外植体愈伤组织的诱导率已及愈
伤组织的生长具有重要的影响。添加激素浓度不能
过大，对于琼岛杨这种木本植物的外植体愈伤组织
的诱导，添加6-BA 0.5mg/L+2-4D 1.0mg/L有利于
琼岛杨的诱导，同时也能促进愈伤组织的生长。
通过琼岛杨愈伤组织的芽分化培养实验表明，
激素配比6-BA 2.0mg/L+ IBA 0.5mg/L有利于愈伤
组织分化出带绒毛的芽点，而牙状物为何相继死亡
的原因，还有待进一步研究。
参考文献
[1]罗平，洪涛.海南热带雨林中杨属一新种.植物研究，1987，
3：67～69
[2]方振富.中国植物志.科学出版社，1984，20（2）：16～17
[3]符国瑷.海南植物区系一新发现 -琼岛杨.海南大学学报
（自然科学版），1988，6(4)：76～77
[4]杨远攸.海南岛的热带杨树种群生态.华南农业大学学报，
1989,10（1）：65～70

 6-BA mg/ L IBA m g/L %  
1 1.0 0.1 0 %  
2 1.0 0.3 0 %  
3 1.0 0.5 0 %  
4 2.0 0.1 20 % 
5 2.0 0.3 46 % 
6 2.0 0.5 78 % 
7 3.0 0.1 60 % 
8 3.0 0.3 53 % 
9 3.0 0.5 0 %  
10 0 0 0 %  

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