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2013 年 8 月 2 日收稿
Content Determination of Tannins in Acer mono Maxim by Casein Method
BAO zhi － hua1 GAO Jian － ping2* GAOjiun － hua2
(InnerMongolia Business Vocational College，InnerMongolia Medical University，Hohhot 010059，China)
［Abstract］Objective:To establish a stable method for determining the Content Determinatio of Tannins in Acer mono Maxim by
Casein Method． Methods:The casein method was used to determine the content of tannins． The optimum conditions of determination
were using 30% methyl alcohol as extracting solvent ，refluxing 30 min，adopting 300 mg caseins，adding 1． 5%Na2CO3 and determi-
ning after 15min． Ｒesults:The selected method had a good linear dependence． The average recovery of tannic acid was 98． 92% ．
Conclusion:It is simple sensitive and reproducible to determine the content of tannins in Acer mono Maxim．
［Key words］Acer mono Maxim;Tannins;Content Determination
HPLC法测定蒙药蓍草中绿原酸含量
蔡 芳1 周雪梅2 白音夫1
(1．内蒙古自治区中医医院，内蒙古 呼和浩特 010020; 2．内蒙古自治区食品药品检验所，内蒙古 呼和浩特 010020)
摘 要:目的:建立蒙药蓍草中绿原酸含量测定方法。方法:采用 HPLC法测定，流动相:乙腈 － 0． 3%磷酸溶液(12:88) ;流
速:1mL·min －1;温度:30℃;检测波长:328nm;进样量 10μL。结果:绿原酸在 0． 7 ～ 14． 0μg·mL －1浓度范围内线性关系良
好，回归方程为:A =5452． 5 + 7008． 4 C，r = 0． 999。平均回收率 = 99． 85%，ＲSD = 2． 36%。结论:HPLC 法测定蓍草中绿原
酸，方法简单，回收率稳定，重现性好，可作为该药材含量测定和质量评价方法。
关键词:蓍草;绿原酸;含量测定
中图分类号:Ｒ291． 2 文献标识码:A 文章编号:1006 － 6810(2012)10 － 0065 － 02
蓍草(Achillea sibirica Ledeb)别名 一枝蒿、千锯草、锯
草、蜈蚣草等。蓍草含多种挥发性成，主要成分 β －蒎烯、
柠檬烯。蓍草蒙名图勒格其 －乌布斯，为蒙医药特色药材，
性味，苦、辛、性凉、锐。具有止痛消肿、活血祛瘀作用，可用
于关节肿胀、疖痈肿痛、风湿痹痛、肢体麻木、跌打损伤、肠
炎、头痛等症［1 － 3］。本文采用 HPLC 法测定蓍草中绿原酸
成分，旨在建立药材质量标准。
1 仪器、试剂与药材
1． 1 高效液相色谱仪 1100 型(美国安捷伦公司) ，NC －
2000 型色谱工作站(大连中北科学技术公司) ，IN － 180 型
柱温箱(上海英泰科技研究所) ，SH6150D 超生波清洗器
(上海昆山) ，电子天平(梅特勒)。
1． 2 试剂与药材:绿原酸由中国药品生物制品检定所提
供;乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。研究用蒙古
562013 年 10 月第 10 期 中国民族医药杂志
DOI:10.16041/j.cnki.cn15-1175.2013.10.048
山萝卜由呼和浩特药材站提供，批号 200806;测定样品于
2007 － 2011 年 9 月中旬采集内蒙不同山区，采集的样品及
时干燥，避光保存。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件:C18 色谱柱(4． 6 × 20mm，5μm)由中国科
学院兰州化学物理研究所色谱中心提供;流动相:乙腈 － 0．
3%磷酸溶液(12:88) ;流速:1mL·min －1;温度:30℃;检测
波长:328nm;进样量 10μL，在此条件下，样品中绿原酸与
其它组分有较好的分离，对照品与样品色谱图见图 1。
2． 2 标准曲线测定:精密称取干燥至恒重的绿原酸对照品
适量，置棕色量瓶中，甲醇溶解，配制成 1mL含 0． 028mg绿
原酸溶液，作为对照品溶液。分别精密量取绿原酸对照品
溶液 0． 25、0． 5、1、2、3、4、5mL，置于 10mL量瓶内，用甲醇稀
释至刻度，按上述色谱条件进行测定。结果，绿原酸在 0． 7
～ 14． 0μg·mL －1浓度范围内以峰面积(A)与对照品浓度
(C)进行回归，其线性关系良好。回归方程为:A = 5452 +
7008C，r = 0． 999。
2． 3 供试品溶液制备:精密称取蓍草药材 0． 1g，，置 50mL
具塞磨口瓶内，加甲醇 10mL，超声处理 30min ，放冷，滤过，
精密取续滤液 1mL，转移至 10mL棕色量瓶内 ，加甲醇至刻
度，摇匀，即得。
2． 4 方法的专属性:在拟定的色谱条件下，分别取对照品
溶液和供试品溶液进样测定，得到特征峰，与杂质分离良
好，无干扰。见图 1
图 1 样品 HPLC图谱
A － 对照品图谱;B －供试品图谱;a －绿原酸
2． 5 精密度试验:精密量取对照品溶液，连续测量 6 次，测
得对照品峰面积值，以峰面积计算绿原酸 ＲSD 为 0． 41%，
表明精密度良好。
2． 6 稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于 0、1、2、4、8、
12h进样，测得供试品绿原酸峰面积值，以峰面积值计算绿
原酸 ＲSD为 0． 80%。结果表明，供试品溶液在 12h 内稳
定。
2． 7 重现性试验:精密称取样品 6 份，每份约 0． 1g，按“供
试品溶液制备”项下操作，进样，测定，并计算质量分数，样
品中绿原酸含量为 3． 1%，ＲSD为 1． 10%。
2． 8 回收率试验:采用加样回收法。取已知质量分数的同
批样品 6 份，每份约 0． 1g，置 50mL 具塞磨口瓶内，加甲醇
10mL，超声处理 30min ，放冷，滤过，精密取续滤液 1mL，转
移至 10mL棕色量瓶内 ，加入标准品溶液 1mL(0． 028mg) ，
加甲醇至刻度，摇匀，即得。测定结果，平均回收率 = 99．
85%，ＲSD = 2． 36%。
表 1 回收率试验结果
含量 /mg 加入量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% ＲSD /%
0． 0332 0． 028 98． 2
0． 0321 0． 028 97． 8
0． 0312 0． 028 98． 7
0． 0305 0． 028 102． 1
0． 0284 0． 028 103． 5
0． 0293 0． 028 98． 8 99． 85 2． 36
2． 9 样品测定:精密称取不同产地蓍草药材，按“供试品
溶液制备”项下操作，测定并计算含量。结果见表 2
表 2 样品测定结果 n = 3
产地 含量 /g% ＲSD /%
锡盟辉腾梁 2． 64 0． 42
乌盟辉腾梁 3． 10 0． 65
乌盟凉城 2． 44 0． 71
乌盟四子王旗 2． 78 0． 43
3 讨 论
蒙药蓍草成分已有报道，其绿原酸(chlorogenic acid)
含量测定未见报道。绿原酸具有多种活性，是药品、保健品
原料。药材以绿原酸作为含量标准可基本确定药材品质和
疗效。
本文建立 HPLC法测定药材中绿原酸含量。色谱条件
采用流动相乙腈 －磷酸溶液、磷酸二氢钠缓冲液(PH2． 7)
－甲醇(70:30) ，均可获得分离良好的色谱峰，由于后者含
有无机盐类，不利仪器使用，故采用前者流动相。
采用 HPLC法建立蒙药蓍草绿原酸含量，该方法样品
预处理简单，回收率稳定，重现性好，可作为该药材含量测
定和质量评价方法，同时为建立蒙药材质量标准提供依据。
参考文献
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2013 年 7 月 12 日收稿
66 中国民族医药杂志 2013 年 10 月第 10 期